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尿毒症患者输血发生高钾血症原因及护理
高钾血症是尿毒症的危险合并症.笔者发现1例尿毒症患者输入红细胞悬液库血后发生严重高钾血症不良反应.针对临床上出现的这一病例,笔者对保存期为零周、1周、2周、3周、4周、5周的红细胞悬液标本进行红细胞内ATP水平、上清液K+、Na+浓度测定.提出输血时护理人员应注意的问题,现报告如下.
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高效液相色谱法测定豆浆中人工合成色素
高效液相色谱法(HPLC)测定豆浆中人工合成色素的含量。样品中加入亚铁氰化钾和乙酸锌除去蛋白质,取上清液过活化后的聚酰胺柱,洗涤、解吸、纯化后测定。采用Kromasil 100 C18(150 mm×4.6 mm×5 um)色谱柱,流动相为0.02 mol/L乙酸铵-甲醇,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长254 nm,进样量为10μL。结果表明:柠檬黄在进样量4 ng~200 ng(Y=14.72x+0.038,r=1.0000)范围内呈良好的线性、胭脂红在进样量4 ng~200 ng (Y=17.60x+0.0071,r=1.0000)范围内呈良好的线性、日落黄在进样量4 ng~200 ng(Y=10.72x+0.0038,r=1.0000)范围内呈良好的线性,柠檬黄、日落黄、胭脂红平均加样回收率为88.2%、87.8%、87.9%。试验用于食品中多种合成色素的检测,很好地满足食品检验机构。
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2-10 SiO2刺激PAM上清液对Ⅰ型肺上皮细胞的增殖效应
目的探讨二氧化硅(SiO2)刺激肺巨噬细胞(PAM)上清液在Ⅰ型肺上皮细胞损伤中的作用.方法分别用体积分数为5%和10%不同剂量的SiO2刺激大鼠(SD)肺泡PAM上清液作用于貂肺上皮细胞(CCL-64),采用四唑盐(MTT)比色法测定其增殖效应.结果在0、50、100、200、500μg/m1SiO2浓度范围,5%SiO2刺激的PAM上清液引起细胞增殖,500 μg/m1剂量组(0.30±0.02)与对照组(0.26±0.04)差异有显著性,并存在剂量-效应关系(r=0.975,P<0.01).10%SiO2刺激PAM的上清液表现为细胞损伤作用,50 μg/m1剂量组(0.21±0.04)与对照组吸光度值差异有显著性.结论随着作用剂量的增加,SiO2刺激PAM分泌活性物质将加重Ⅰ型肺上皮细胞的损伤,促进矽肺纤维化的进程.
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红外线加热法检测痰抗酸杆菌的观察
材料与方法 1.红外线消毒柜,中山市小松电器有限公司生产.2.标本来源:由本院门诊或住院确诊的为浸润型肺结核初治及复治病人留取.3.方法:(1)嘱病人留取清晨咳痰3~5ml,如痰量太少,可收集当晚至次日清晨咳出的全部痰液.(2)在痰标本中加入等量20g/L NaOH溶液,用竹签搅拌,防止痰液粘附在痰杯上,倒入有盖搪瓷杯内,将标本放入消毒柜内,控制温度在100℃-110℃之间15分钟,取出待冷却.(3)将标本全部倒入一次性塑料管中,平衡后放入离心机内离心3000转/分10分钟.倾去全部上清液,取沉淀物涂片冷染色镜检.(4)镜检与报告方式按1995年中国防痨协会制定的<结核病诊断细菌学检验规程>进行.
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血站物品表面HBsAg、HIV、HCV、梅毒污染调查
为了解血站物品表面经血传染病原体污染情况,于2005年我们对血站使用的全自动加样仪样台、酶标仪键盘、血液混合仪、试管架、高频热合机、离心机孔、称血仪、发血工作台面、离心机杯、血库冰箱、采血车等,用浸有无菌生理盐水的棉拭子涂抹采样10 cm2,将采样后的棉拭头剪入盛有2 ml无菌生理盐水的试管中.经振荡后,检测HBsAg、抗-HIV、抗-HCV、梅毒抗体.检测方法是将标本经离心(3000 r/min)3 min,取上清液1 ml,再离心(15000 r/min)10 min,取沉淀液用ELISA法检测.
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对卫生用品细菌污染检测中有关问题的商榷
1洗脱样品上细菌的用液量现行方法为:"称取10 g样品,剪碎后加入到100ml无菌蒸馏水中,振打80次或用混匀器充分混匀,取上清液作菌落记数."在操作中,经常遇到吸水性很强的样品,所加用于洗脱样品上细菌的蒸馏水,大部分被吸入样品中,需用无菌吸管将洗液从样品中挤出后,再吸取该液作活菌记数,并时常出现绒毛浆堵塞无菌吸管的情况,检测结果误差较大.
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广州地区1998~2000年儿童流行性感冒病毒监测
在1998年1月至2000年12月对我院门诊临床怀疑为病毒性上呼吸道感染的儿童1 693例进行流行性感冒(流感)病毒检测.每周采集约10份门诊患儿咽分泌物,接种到MDCK细胞上.放入33℃温箱培养72 h,上清液进行血凝试验.将血凝试验阳性的标本用A/武汉/359/95(H3N2)、A/京防/53/97(H1N1)、B/京防/184/93病毒鸡抗血清进行加敏血凝抑制试验鉴定(由国家流感中心鉴定).
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气相色谱法测定大鼠血浆中氰戊菊酯的动力学研究
本研究采用气相色谱法测定大鼠血浆中氰戊菊酯的浓度变化,以便从不同角度阐明氰戊菊酯在动物体内的代谢规律。 一、材料与方法 1.动物及其处理:体重200~250 g 的SD大鼠48只,由江苏省实验动物中心提供,适应饲养环境1周后,按体重随机分成12个时间组,每组4只,雌雄各半。实验前大鼠自由饮水,禁食12 h。将氰戊菊酯用色拉油配成11 mg/ml浓度,按55 mg/kg剂量给大鼠灌胃,分别在灌胃后0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、6.00、8.00、16.00、20.00、24.00、32.00 h经大鼠眼眶静脉丛取血约5 ml。血液收集于肝素化试管中,离心(3 000 r/min)10 min后分离血浆,于-30 ℃保存备用。 2.药品和试剂:氰戊菊酯标准品,含量为98.4%,由上海中西药业股份有限公司提供;80%氰戊菊酯原药,由江苏省激素研究所提供,所用分析试剂均为AR级。 3.仪器和气相色谱条件:日本岛津GC14B气相色谱仪;3%SE-30玻璃柱2 m×2 mm,硅烷化101担体;电子捕获检测器;温控:柱温250℃,气化温度280℃,检测器温度310℃;载气:高纯度氮气,流速60 ml/mim;进样量2 μl。 4.血药浓度测定方法:取血浆2.0 ml于具塞试管中,加入环己烷2 ml,振摇2 min后离心8 min,提取上清液;再在此血浆试管中加入环己烷2 ml,振摇2 min,离心后再提取上清液,将2次提取的上清液合并在同1个小试管中,用氮气吹干,然后用0.2 ml环己烷溶解小试管壁四周的提取物,作气相色谱法测定[1]。5.数据处理:用3P87药物动力学程序在计算机上进行模型选择,根据F检验和AIC值选择房室数和权重,并据此计算相应的动力学参数。
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三宝风湿液治疗顽固风湿性骨关节病
我院自1994~1997年采用自制三宝风湿液治疗顽固风湿性骨关节病159例,取得很好疗效,现报道如下。 1 临床资料 本组159例中男92例,女67例;均为病程1年以上,经多方中西治疗无效者。 2 治疗方法 方药组成:炙川乌1kg,炙草乌1kg,附子1kg,两头尖1kg,马钱子1kg,雷公藤1kg,青风藤1kg,闹羊花1kg,洋金花0.25kg,麻黄1kg,秦艽1kg,徐长卿1kg,防己1kg,肉桂1kg,金钱蛇50条,白花蛇1kg,全蝎1kg,蜂房1kg,蜈蚣200条,地龙1kg,土虫1kg,蟾酥0.05kg,三七2kg,丹参1kg,川芎1kg,红花1kg,没药1kg,当归1kg,血竭0.5kg,白术1kg,苍术1kg,刺五加1kg,木瓜1kg,羌活1kg,独活1kg,白芷1kg,天麻1kg,巴戟1kg,杜仲1kg,续断1kg,蛇床子1kg,年健1kg,山萸肉1kg,仙灵脾1kg,甘草1kg,蜂蜜3kg。配制方法:将上药(除蜂蜜)粉碎过40目筛,置入50°~60°白酒150kg中浸泡15天,再取上清液75kg加入蜂蜜3kg静置沉淀7天,再取上清液60kg静置沉淀8天,分装入250ml消毒瓶内密封备用。用药方法:所有患者都服用三宝风湿液,每次25ml,每日两次饭后服用,30天为一疗程。治疗期间不加用其它内服、外用的一切药物、针灸或按摩及理疗。
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胰岛α细胞培养上清液对INS-1细胞胰岛素释放与合成的影响
在培养的INS-1细胞中,分别加入不同比例的胰岛α细胞培养上清液(以下简称上清液),在不同浓度葡萄糖的刺激下,分别孵育不同时间,用放射免疫法测定INS-1细胞培养基中的胰岛素含量.在20MMol/L葡萄糖浓度下,不同刺激时间,不同浓度的上清液刺激INS-1细胞分泌的胰岛素显著高于0%上清液(以下简称对照组,P<0.05或0.01).在0、1.85MMol/L葡萄糖刺激时,不同浓度的上清液对INS-1细胞的胰岛素分泌无明显作用,而在5.6、16.7和50MMol/L葡萄糖刺激时,不同浓度的上清液刺激INS-1细胞分泌的胰岛素显著高于对照组(P<0.05或0.01).RT-PCR结果显示,在16.7MMol/L葡萄糖刺激4、12和24h后,30%上清液对INS-1细胞胰岛素mRNA水平均无明显影响.提示胰岛α细胞培养上清液对糖刺激的INS-1细胞的胰岛素分泌有促进作用,但不影响胰岛素的生物合成.
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病毒上清液促进体外培养INS-1细胞系胰岛素分泌
信号传导与转录激活因子(signal transducer and activitor of transcrrption,STATs)是一类通过酪氨酸磷酸化激活的转录因子家族.STAT5是这一家族的重要成员,有STAT5A和STAT5B两种异构体,两者具有高度同源性,它们可以在接受生长激素、催乳素、干扰素以及促红细胞生成素等多种激素或细胞因子刺激后,通过酪氨酸磷酸化偶联形成二聚体,获得进入细胞核的能力,影响目的基因的转录,从而广泛参与细胞的增殖和分化,调节细胞的凋亡.
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2.148思密达吸附胆汁中总胆红素和总胆汁酸的初步研究
目的初步研究体外条件下思密达在不同pH值和浓度下对胆汁中胆汁酸和胆红素吸附作用.方法留取PTCD患者引流的胆汁经稀释成不同浓度,分别滴定至pH值为1、3、5、7,加入150mg/mL思密达后充分混匀,离心,取上清液,滴定至pH值为7,测定思密达对总胆红素和总胆汁酸的吸附量,并计算吸附率.
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固定、漂浮和洗涤后标本中隐孢子虫的检测
临床上检测隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,C.p.)常用方法有金胺-酚染色法、改良抗酸染色法和沙黄美蓝染色法[1],其中常用的是改良抗酸染色法.但近年随着分子生物学技术的飞速发展,科研工作中经常需要采用经过滤、固定并经蔗糖漂浮法浓集、蒸馏水洗涤后的C.p.标本[2-4].标本有些购自外地,有些虽采自本地,但因保存时间太久,实验者常难以肯定标本中是否还存在C.p.卵囊,抑或已破坏.尤当漂浮后,尽管在Sheather′s蔗糖液中可以加入石炭酸复红染色镜检[2],但对经验不足者仍很难辨别是否C.p.卵囊已浓集成功.漂浮后上清液如经多次洗涤,沉渣中就更难确定是否还有C.p.卵囊,致下一步实验盲然.以下介绍一种检测固定、漂浮和洗涤后标本中是否确有C.p.卵囊的方法.
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系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞IL-17表达的初步观察
目前IL-17的研究已发现,其在一些自身免疫性疾病如移植肾排斥反应、类风湿性关节炎、多发性硬化、支气管哮喘等存在表达、分泌的异常,但在系统性红斑狼疮(SLE)患者中,其表达、分泌是否存在异常,目前国内、外尚未见研究报告〔1〕。本研究通过测定SLE患者血清、无刺激或加不同刺激培养外周血单个核细胞(PBMC)上清液IL-17蛋白水平和其PBMC内IL-17 mRNA水平的表达量,以了解SLE患者PBMC表达、分泌IL-17有无异常及其与SLE疾病活动性的关系。
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胸腹腔积液上清液中游离核酸检测方法的建立
胸腹腔积液是恶性肿瘤的常见体征之一.目前临床确诊恶件胸腹腔积液主要靠细胞学检测,但是细胞学诊断仅能确诊约50%~70%的恶性胸腹腔积液的性质和来源,联合活检能够提高其7%~13%的诊断水平[1-3].胸腹腔积液游离肿瘤标志虽然能够在一定程度上提高良恶性胸腹腔积液诊断准确率及敏感性[4-5],但是仍有待新的简便有效,且非侵入性的检测方法的建立.20世纪70年代,Leon等[6]发现肿瘤患者血清游离DNA浓度高于健康人,提示游离核酸有作为肿瘤诊断的价值.本研究中,我们采用荧光定量(FQ)-PCR建立了一种简单的胸腹腔积液游离核酸[包括DNA、mRNA及microRNA]检测方法,以寻找新的诊断与鉴别诊断良恶性胸腹腔积液的肿瘤指标.
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大鼠肝部分切除术后肝窦内皮细胞对肝细胞增生的影响
目的:探讨大鼠肝部分切除术后肝窦血管内皮细胞(LSEC)对再生肝细胞增生的影响.方法:建立Wistar大鼠70%的肝切除模型和肝窦血管内皮细胞、肝细胞分离与培养方法,在术后不同的时相点分离残肝的肝细胞和肝窦血管内皮细胞,进行培养.实验分组:肝部分切除组(PO)和假手术组(SO);肝细胞培养分两组:A组(肝细胞)、B组(肝细胞+LSEC上清液),利用放射免疫法测定肝细胞DNA合成率、免疫组化方法测定肝细胞PCNA表达指数的变化.结果:在术后的6、24 h,B组的肝细胞的PCNA表达指数较A组显著升高(5.9±0.1 vs 8.9±0.1 P<0.05;38.6±2.6 vs 58.0±3.9 P<0.01).而且B组肝细胞的DNA合成量较A组显著升高(226±18 vs 8.9±0.1 P<0.05;38.6±2.6vs 58.0±3.9 P<0.01).结论:体外实验证实肝部分切除术后肝窦内皮细胞上清可以促进肝细胞的增生,促进肝细胞的DNA合成,增强再生肝细胞增生活性.
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大鼠肠巨噬细胞TNFα表达及复方大承气汤的影响
目的:探讨体外培养的肠巨噬细胞分泌TNFα的规律及地塞米松、TNFα单克隆抗体及复方大承气汤对LPS诱导的肠巨噬细胞TNFα产生的影响.方法:体外分离培养大鼠肠巨噬细胞.设对照组、脂多糖组、地塞米松处理组、TNFα单抗处理组和复方大承气汤处理组.每组分别在3 h,6 h,12 h和24 h取上清液,用放免法检测TNFα浓度.并分别收集肠巨噬细胞,提取RNA,采用RT-PCR法相对定量TNFαmRNA.结果:肠巨噬细胞经脂多糖(LPS)诱导后,各时相TNFα分泌及TNFmRNA表达均明显增加;地塞米松、TNFα单克隆抗体及复方大承气汤处理后,各时相TNFα分泌都较脂多糖(LPS)诱导组显著下降,各处理组TNFα mRNA表达在3h时与脂多糖(LPS)诱导组比较无明显差异,6h、12h、24 h,地塞米松、复方大承气汤处理组显著降低,而TNFα单克隆抗体处理组无明显差异.结论:LPS是肠巨噬细胞分泌TNFα的有效激活剂,地塞米松、复方大承气汤能从蛋白质及核酸水平抑制TNFα的产生,而TNFα单克隆抗体只能从蛋白质水平抑制TNFα的产生.
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乙型肝炎患者外周血单个核细胞分泌IFN-γ的实验研究
目的:探讨外周血单个核细胞(PBMC)分泌γ干扰素(IFN-γ)水平在曼性乙型肝炎发生、发展中的意义.方法:采用ELISA法测定20名正常人和44例HBV感染者的PBMC经植物血凝素(PHA)刺激前后IFN-γ在上清液中的表达水平.结果:正常及患者组PBMC上清液中IFN-γ低水平的活性表达;经PHA刺激后其活性明显升高(对照组23.7±12.7升高至117.2±64.7 pe/mL,n=20,t=10.41,P<0.01;轻度组24.6±9.3升高至57.4±27.1 pg/mL,n=21,t=4.92,P<0.01;中度组30.1±15.5升高至81.6±42.2 pg/mL,n=15,t=4.45,P<0.01;重度组35.6±17.9升高至114.5±49.3 pg/mL,n=8,t=4.26,P<0.01),但患者组IFN-γ水平显著低于正常对照组(177.2±64.7vs57.4±29.1、81.6±42.2、114.5±49.3 pg/mL,t值分别为7.50、5.28和2.77,P<0.01);患者组IFN-γ与血清HBV-DNA水平呈明显负相关(γ-0.49,P<0.01).结论:乙型肝炎慢性化以及高复制状态可能与PBMC分泌IFN-γ性降低有关.
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反义IGF-Ⅰ寡核苷酸转染对人肝癌细胞生长的抑制作用
目的:利用反义核酸技术,研究体外胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)反义寡核苷酸转染对肝癌细胞增生、分化及凋亡的影响,探讨寡核苷酸转染治疗肝癌的可行性.方法:合成针对IGF-Ⅰ的寡核苷酸片段,利用脂质体包裹反义IGF-Ⅰ寡核苷酸片段瞬时转染人肝癌细胞系BEL-7402细胞,MTT法检测细胞增生;放免法检测培养细胞上清中AFP,CEA的分泌量;免疫组化法检测转染细胞AFP,PCNA表达的变化;采用末端标记(Tunel)法检测细胞凋亡的变化.结果:MTF法检测转染反义IGF-Ⅰ寡核苷酸的人肝癌细胞系BEL-7402A值由0.44±0.09下降为0.30±0.07(P<0.01),上清液AFP和CEA水平分别由12.5±2.2 μg/L和6.8±2.3μg/L下降为2.5±0.3μg/L和2.2±1.5μg/L(P<0.01,P<0.05),凋亡阳性细胞数由16.4±2.3%增加至23.1±3.7%(P<0.05).结论:反义IGF-Ⅰ寡核苷酸转染人肝癌细胞系BEL-7402细胞可以降低细胞增生,减少细胞去分化并诱导肝癌细胞凋亡.
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幽门螺杆菌对体外原代培养的人胆囊上皮细胞损伤作用
目的:探讨幽门螺杆菌(Hpylori)在体外对人胆囊上皮细胞(HGBEC)的损伤作用.方法:采用液体增菌及人胆囊上皮细胞原代培养研究Hpylori对HGBEC的损伤作用.结果:从Hpylori的生长曲线可知观察其他因素对HGBEC的影响在细胞生长旺盛期即培养的2-6 d为合适,Hpylori增菌上清液及菌体破碎液对培养的HGBEC形态学及上清酶学指标ALP(33.84±6.00 vs 27.01±4.67,P<0.05),LDH(168.37±20.84 vs 55.51±17.17,P<0.01),GGT(42.01±6.18 vs 25.34±4.33 P<0.01)有明显影响.结论:Hpylori增菌上清液及菌体破碎液对培养的HGBEC有明显损伤作用.