中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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力学因素对细胞自噬的影响
背景:心肌肥大、椎间盘退行性疾病等疾病的发生与其组织细胞所处力学环境密切相关,而自噬在这些疾病的发病过程起到重要作用.目的:综述力学因素对不同组织细胞自噬的影响及其涉及的分子机制,为自噬的研究及相关疾病的预防治疗提供参考作用.方法:检索2000至2016年Web of Science和PubMed数据库中关于力学因素对细胞自噬影响的文献,英文检索词为"autophagy,mechanical",进行系统的归纳总结和分析,排除内容相关性差或重复文献,终得到52篇文献.结果与结论:①力学因素对心肌细胞、内皮细胞、软骨细胞、骨骼肌细胞等多种细胞的自噬产生影响,细胞自噬是细胞应对刺激的一种自我保护性反应,在受到生理水平的力学刺激时,细胞上调自噬水平,维持细胞的稳态、功能以及存活;②力学因素可能通过PI3K-AKT-mTOR、氧自由基、AKT-FoxO等通路引起细胞自噬,具体机制有待进一步研究.
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共培养系统在软骨组织工程中的应用和发展
背景:近年来大量的研究证明,共培养应用到软骨组织工程中能够成功构建具有更好生物学特性的组织工程软骨.目的:通过对共培养概念的提出及共培养系统中种子细胞来源、细胞混合比率、共培养空间模式及生物材料各方面分别进行整理和深入阐述,归纳分析各因素对组织工程软骨生物学特性的效应,展望未来共培养系统在组织工程软骨研究中的发展方向.方法:第一作者检索1976年1月至2016年5月PubMed数据库、Web of Science数据库和中国知网中的相关文献,检索关键词为"Co-culture,Co-culture systems;articular cartilage,chondrocytes,mesenchymal stem cells;tissue engineering,articular cartilage tissue engineering;共培养,共培养系统;关节软骨,软骨细胞,间充质干细胞;组织工程,软骨组织工程".后纳入文献共计60篇,中文1篇,英文59篇.结果与结论:①共培养强调了细胞处理过程中生物微环境的重要性,即在体外为细胞生长提供物理-化学-生物三位一体的刺激因素;②在软骨组织工程中,共培养很好地维持了软骨细胞的活性和天然细胞表型,能够诱导具有多项分化潜能的间充质干细胞分化成软骨.另外,为软骨组织工程软骨细胞的来源受限问题和骨软骨复合伤的治疗带来新的途径;③但是共培养中细胞间相互作用的具体机制仍然有待进一步研究,从而为优化共培养系统培养条件提供有力依据,以更好地应用到软骨组织工程中构建优良的组织工程软骨组织.
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骨关节炎临床表现特点及沉默信息调节因子1在其发病中的作用
背景:研究发现一些功能性基因的功能变化是引发骨关节炎的调控环节,而年龄可能是其中的关键因素之一.目的:对近年来骨关节炎中的临床现表现特点及沉默信息调节因子1在骨关节炎发生发展中的研究进展做一概述.方法:计算机检索中国期刊全文数据库、PubMed、SpringerLink、Elsevier ScienceDirect数据库,检索时间1987年1月至2016年1月,检索词分别为"骨关节炎;沉默信息调节因子1;软骨"和"Osteoarthritis,Cartilage,Silent information regulation 1".对纳入符合标准的83条文献进行分析.结果与结论:研究表明,在多种信号通路中去乙酰化修饰调控大量细胞因子的表达和生物学功能,继而影响骨关节炎的发生和发展.沉默信息调节因子1具有调节机体代谢,抑制细胞凋亡,修复DNA损伤,延缓衰老,抵抗应激反应等重要作用,同时在表观遗传学修饰、基因沉默和信号转导调节中发挥着重要的生物学功能,因此沉默信息调节因子1与各种年龄相关的疾病有关,如骨关节炎、骨质疏松症、糖尿病和阿尔茨海默症等.沉默信息调节因子1有望成为开发治疗骨关节炎药物的重要靶点,甚至可能在骨关节炎不成熟的阶段,逆转机械应力导致的软骨功能损伤.
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高校组织工程学实验室及实验技术与流程的安全管理
背景:组织工程学是一门综合性的高技术交叉学科,实验安全涉及范围广,伴随实验室安全事故的增加,高校组织工程学实验的安全管理已成为全球面临的重要公共卫生问题.目的:增强中国高校组织工程学安全管理措施,完善实验室安全管理体系.方法:检索PubMed数据库、Elseveir数据库、万方数据库和中国全文期刊数据库,1995年1月至2017年1月与组织工程实验过程中的生物安全、危险物品安全、废弃物安全、医疗信息安全、仪器操作安全、人体工程力学安全相关的文献,对组织工程实验室管理现状进行分析讨论.结果与结论:依据组织工程学实验技术特点和安全管理内容,分析国内组织工程学实验室安全管理体系现状及潜在问题,并结合中美实验室管理方式的差异,进一步针对性的提出组织工程学实验室安全改进措施:强化实验技术安全培训,提高实验人员的安全意识,建立实验室准入制度,完善安全设备设施,规范实验安全手册,成立专门的安全管理委员会监督执行实验室安全管理.通过设立全面系统的实验管理规范,保证高校组织工程学实验的安全运行,促进学科快速健康发展.
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网络医学的架构及其研究进展
背景:网络医学研究领域包含各种各样构造方法不同、结构各异且应用广泛而多样的网络,缺乏一种架构把它们组织起来,并且缺乏各类网络具体应用的阐述及新研究进展.目的:组织各种医学网络到一个层次架构,并归纳总结这些网络的研究进展.方法:检索CNKI和PubMed数据库1999至2016年有关网络医学的文献,中文检索关键词为"疾病,网络,蛋白质相互作用网络,代谢网络,基因调控,药物",英文检索关键词为"disease network,protein interaction network,metabolic network,gene regulatory".结合文献研究,搭建网络医学的层次架构,论述网络医学的主要研究内容,阐述医学网络的模块性质、构建方法、完善程度及应用进展,并预测各种网络的未来研究趋势.结果与结论:网络医学的架构由分子相互作用网络层、疾病网络层和药物网络层组成.分子相互作用网络层中,蛋白质相互作用网络、代谢网络和基因调控网络的构建都遵循低等生物→哺乳动物→人类的从低级生物到高级生物的顺序,并均已绘制人类细胞系统的对应网络,但还处在不断完善中,新的网络不断被构建.疾病网络层中利用单个元素对疾病聚类已经形成多个疾病网络,未来可以考虑使用新元素进行疾病聚类,也可以考虑利用组合多个元素进行疾病聚类.药物网络层的网络较少,原因是目前药理学是以蛋白质为中心的,构成网络的因素只有药物和蛋白质这2种因素.
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佐剂性关节炎模型兔成纤维样滑膜细胞的培养
背景:目前研究者多采用酶消化法从类风湿性患者和佐剂性关节炎大鼠的滑膜组织中分离培养成纤维样滑膜细胞,采用组织块贴壁法体外培养佐剂性关节炎兔成纤维样滑膜细胞较少见.目的:建立佐剂性关节炎兔成纤维样滑膜细胞的培养方法并观察细胞的生物学特性.方法:采用多点多次注射佐剂的方法制备佐剂性关节炎兔动物模型,取膝关节滑膜组织,用组织块贴壁法分离培养成纤维样滑膜细胞,观察细胞形态特征.采用CCK-8法检测细胞增殖情况,并用免疫荧光法检测波形蛋白的表达.结果与结论:倒置显微镜观察原代培养的关节炎兔滑膜细胞形态均为长梭状纤维样,符合成纤维样滑膜细胞的生长特征,且表达波形蛋白的细胞达98%.说明采用组织块贴壁法成功分离培养了佐剂性关节炎兔成纤维样滑膜细胞.
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建立纤维环穿刺法椎间盘退变模型
背景:目前虽然纤维环穿刺法构建椎间盘退变模型的相关研究报道较多,但缺乏相对完整的影像、病理学以及细胞外基质改变(蛋白多糖含量)的系统对比性研究.所以经腹膜外入路暴露椎间隙纤维穿刺法造模的影像、病理学以及细胞外基质改变是否与人类椎间盘退变类似需进一步探讨.目的:验证采用纤维环穿刺法建立椎间盘退变模型的可行性.方法:将30只新西兰大白兔随机分为2组,每组15只.纤维环穿刺组在经腹膜外入路暴露L1,2,L2,3,L3,4椎间隙后,采用16号针头穿刺;而假手术组只做切开不做穿刺.于造模术后4,8,16周2组均随机抽取5只行MRI检查后,以空气栓塞法处死兔并切取椎间盘髓核组织,苏木精-伊红染色检查组织学变化,Safranin O染色观察髓核蛋白多糖水平改变.结果与结论:①MRI提示:纤维环穿刺组T2WI相椎间盘信号自造模术后开始降低,且随着术后时间延长T2WI相椎间盘信号降低越明显,于术后4周较假手术组有明显改变,术后16周明显;假手术组术后各时间段改变不明显;②苏木精-伊红染色显示:纤维环穿刺组造模术后软骨样细胞减少,纤维样细胞增多且所占比例增大,细胞外纤维排列紊乱,于第4周较假手术组有明显改变,于第16周明显;假手术组术后各时间段改变不明显;③Safranin O染色(髓核蛋白多糖水平):纤维环穿刺组组织着色于造模术后开始变浅,随着术后时间延长着色变浅越明显,于术后4周较假手术组有明显改变,术后16周明显;④结果提示:纤维环穿刺法建立的椎间盘退变模型影像学表现及病理表现与人类椎间盘退变近似,提示纤维环穿刺法是建立椎间盘退变模型的可靠方法.
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构建腰椎三维图像模型兔的特点分析
背景:兔腰椎形态结构特点对腰椎动物实验研究起着重要的作用,但目前缺少兔腰椎形态结构相关的研究.目的:构建兔腰椎三维图像模型,观察其腰椎的形态结构特点,为腰椎动物实验研究提供解剖形态学依据.方法:用西门子64排螺旋CT扫描20只新西兰大白兔,获得140节腰椎扫描资料,构建兔腰椎三维图像模型,测量L1-7椎体的形态学参数,观察腰椎的内外部解剖结构及不同节段的变化特点.结果与结论:①新西兰大白兔腰椎各解剖形态学指标变化:兔L1-7节段椎体高度呈现"两头小中间大"趋势,在L7节段小,其高度仅为(1.12±0.18)cm;L1节段椎体横径小,为(1.03±0.15)cm,L1-7节段各椎体纵径的节段性变化较小;L1-6节段椎管横径和纵径均逐渐增大,L7节段时突然变小;椎弓宽度在L1-7节段逐渐增大,但变化平稳;椎弓根高度在L1-5节段平稳变化,L6-7节段开始突然变小,与其他节段相差甚大,到L7节段时小,仅为(0.58±0.11)cm;棘突宽度和长度在L1-6节段平稳增大,在L7节段变小;横突长度在L1-3节段逐渐增大,L3-6节段较平稳,L6-7节段显著变小;横突夹角在L1-6节段差异度小,但在L7节段显著增大,为(58±2)°.②结果证实:新西兰大白兔腰椎形态学测量可以观察到腰椎的内外部解剖结构及不同节段的形态变化特点,为腰椎动物实验研究提供详细的解剖形态学参数资料.
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高脂饲料配合链脲佐菌素诱导2型糖尿病模型大鼠的椎间盘形态
背景:高脂饲料配合低剂量链脲佐菌素诱导大鼠2型糖尿病模型是目前常用的2型糖尿病动物模型,目前尚无此模型对椎间盘结构影响的相关报道.椎体终板硬化是造成椎间盘退变的重要因素之一.目的:评估高脂饲料配合低剂量链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型是否适用于2型糖尿病相关椎间盘退变研究.方法:32只3月龄雌性SPF级SD大鼠随机分为4组,即假手术组、双侧卵巢切除组、糖尿病组、双侧卵巢切除+糖尿病组,每组8只.分别进行双侧卵巢切除术和/或高脂饲料配合低剂量链脲佐菌素处理.监测各组大鼠体质量、血糖及糖耐量,链脲佐菌素处理后8周检测骨密度后处死动物,取L5-6节段脱钙后正中矢状位切片行VG染色并进行椎间盘退变评分,分析椎间盘高度和终板厚度.结果与结论:①糖尿病组和双侧卵巢切除+糖尿病组大鼠空腹血糖、随机血糖分别显著高于假手术组和双侧卵巢切除组(P<0.05),糖尿病组和双侧卵巢切除+糖尿病组大鼠胰岛素敏感性分别显著低于假手术组和双侧卵巢切除组(P<0.05);②双侧卵巢切除组L4-L6椎体骨密度显著低于假手术组(P<0.05),糖尿病组和双侧卵巢切除+糖尿病组L5-L6椎体骨密度均显著低于假手术组(P<0.05);③双侧卵巢切除组和双侧卵巢切除+糖尿病组L5-L6椎间盘退变评分分别显著高于假手术组和糖尿病组(P<0.05);双侧卵巢切除+糖尿病组表现与双侧卵巢切除组相仿,可见髓核细胞软骨化生及黏液变性,其评分结果显著高于假手术组和糖尿病组(P均<0.05),但与双侧卵巢切除组相比差异未见显著性意义;④与假手术组相比,双侧卵巢切除组和双侧卵巢切除+糖尿病组椎间盘高度明显降低(P<0.05);4组间终板厚度差异无显著性意义;⑤综上所述,虽然高脂饲料配合低剂量链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型具备糖尿病特征表现,但未观察到其间盘组织较正常大鼠有显著改变,可能不适于2型糖尿病相关椎间盘退变研究.
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张力载荷诱导下兔椎间盘退变体内模型的建立及意义
背景:异常应力被认为是导致椎间盘退变的重要因素.随着对椎间盘退变发生机制研究的不断深入,建立一种理想的力学相关性椎间盘退变体内动物模型具有重要的实践意义.目的:建立兔椎间盘体内模型,施以持续的张力载荷,探究其对椎间盘退变的影响.方法:25只6月龄新西兰大白兔随机分为3组,空白对照组5只,假加力组10只,加力组10只.空白对照组不作任何处理,于实验第1天手术获取L4/5椎间盘;加力组和假加力组均固定椎间盘加力器,加力组施以L4/5椎间盘1 MPa(10 kg/cm2)轴向牵张力,假加力组仅固定加力器但不加力,2组分别在14,28 d手术获取椎间盘.X射线观察L4/5椎间隙高度变化和邻近骨质改变;苏木精-伊红染色观察椎间盘组织形态学变化;NBT染色观察椎间盘细胞存活状态;RT-PCR检测各时间点椎间盘组织中蛋白聚糖、Ⅱ型胶原和SOX9 mRNA表达变化.结果与结论:①假加力组各时间点与空白对照组相比,X射线表现、苏木精-伊红染色、细胞存活状态和蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX9 mRNA表达差异均无显著性意义;②与空白对照组相比发现,加力组随着张力载荷时间的延长,L4/5椎间隙逐渐变窄,关节面毛糙,上下椎体前缘骨质增生呈唇状改变;椎间盘细胞分布不均匀、紊乱;髓核脱水缩小,纤维环排列混乱,脊索细胞空泡状组织趋于消失;蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX9表达显著下调;③结果提示,成功建立了兔椎间盘体内模型,并在此模型基础上阐明持续张力载荷可直接导致椎间盘退变.
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六味地黄丸对椎间盘体外退变模型髓核细胞MAPK信号级联的影响
背景:JNKs和p38作为丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族中重要的成员,对细胞增殖、分化、转化及凋亡起着至关重要的作用.目的:观察六味地黄丸对兔椎间盘体外退变模型髓核细胞MAPK信号级联的影响.方法:将100个带终板软骨的椎间盘随机分为空白对照组、肿瘤坏死因子α组、p38-JNK/SAPK阻断组、六味地黄丸组、肿瘤坏死因子α+含六味地黄丸组,每组20个.肿瘤坏死因子α组培养液中含10 mg/L肿瘤坏死因子α2μL;p38-JNK/SAPK阻断组培养液中含p38MAPK特异性阻断剂SB203580,JNK特异性阻断剂SP600125各20μmol/L 10μL,10 mg/L肿瘤坏死因子α2μL;六味地黄丸组培养液中含体积分数为10%六味地黄丸血清;肿瘤坏死因子α+六味地黄丸组培养液中含10 mg/L肿瘤坏死因子α2μL,体积分数为10%六味地黄丸血清,分别于培养的第2,4,8,14天收集标本待测.结果与结论:RT-PCR、Western Blot检测显示,随着培养时间的延长,髓核细胞JNK及P38通路的mRNA含量、蛋白表达量明显逐步升高,而含六味地黄丸血清可以延缓这一进程,提示六味地黄丸可以通过一定程度阻滞JNK及P38通路的信号表达,延缓椎间盘退变进程,起到保护椎间盘的作用.
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胰岛素抵抗慢性移植肾失功大鼠模型的建立及分析
背景:慢性移植肾失功的主要病因迄今尚不明确,胰岛素抵抗可能构成其病因之一,然而当前尚缺乏相关动物模型及实验探讨二者的关联.目的:建立胰岛素抵抗慢性移植肾失功大鼠模型,探讨胰岛素抵抗对移植肾肾功能、尿蛋白及病理学改变的影响.方法:在以F344及Lewis大鼠作为供受体的慢性移植肾失功模型基础上予单纯高脂饲料喂养诱发胰岛素抵抗,分别于肾移植术后8,12,16周测定胰岛素抵抗慢性移植肾失功组、慢性移植肾失功组、单肾切除对照组血胰岛素、血糖、血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白,计算胰岛素抵抗指数.同时行口服葡萄糖耐量及胰岛素耐量试验,分别计算血糖-时间曲线下面积,根据3组不同时间点胰岛素抵抗指数、口服葡萄糖耐量及胰岛素耐量试验血糖-时间曲线下面积的差异评估胰岛素抵抗慢性移植肾失功模型建成情况及稳定性.比较胰岛素抵抗慢性移植肾失功组与慢性移植肾失功组血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白的组间差异及不同时间点的差异,于16周行肾脏病理学观察,根据Banff总评分比较3组肾脏病变程度的差异.结果与结论:①术后8,12,16周胰岛素抵抗慢性移植肾失功组胰岛素抵抗指数、口服葡萄糖耐量及胰岛素耐量试验血糖-时间曲线下面积均大于慢性移植肾失功组及对照组,且随观察时间延长无显著改变,血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白均小于慢性移植肾失功组,亦随观察时间延长无显著改变;②胰岛素抵抗慢性移植肾失功组及慢性移植肾失功组均见肾小球及小管基底膜轻度增厚、间质纤维化及动脉内膜轻度增生等改变,但未见2组肾脏病变程度的显著差异;③上述结果提示,使用单纯高脂饲料喂养慢性移植肾失功大鼠8周可构建稳定的胰岛素抵抗慢性移植肾失功模型,胰岛素抵抗可能影响移植肾肾功能及尿蛋白水平,其潜在机制可能涉及胰岛素抵抗环境下肾小球的高滤过及肾小管对尿蛋白的超负荷重吸收.
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晚期糖基化终末产物可通过调节V-ATPase a3与CIC-7影响破骨细胞的泌酸功能
背景:晚期糖基化终末产物对破骨细胞骨吸收功能的影响存在争议,作者的前期研究表明晚期糖基化终末产物作用于破骨细胞前体可显著抑制骨吸收功能,但关于其对破骨细胞泌酸功能的影响尚不明晰.目的:探究晚期糖基化终末产物对破骨细胞泌酸功能的影响及其机制.方法:以15μg/L的RANKL对破骨细胞前体RAW 264.7进行定向诱导(正常组),实验组中另加入50-400 mg/L不等的晚期糖基化终末产物及对照用牛血清白蛋白(100 mg/L).通过骨吸收实验验证晚期糖基化终末产物对骨吸收的抑制效应,并以吖啶橙染色观察晚期糖基化终末产物对破骨细胞泌酸功能的影响;进一步检测质子泵V-ATPase a3及氯离子通道CIC-7的表达情况,分析晚期糖基化终末产物影响破骨细胞泌酸的相关机制.结果与结论:①晚期糖基化终末产物组的骨吸收面积较正常组显著减少(P<0.05);②吖啶橙染色显示晚期糖基化终末产物组的红色荧光(620 nm)强度较正常组显著减少(P<0.05),抑制程度随着刺激浓度的增高而加重;③免疫细胞化学染色、蛋白质免疫印迹及PCR发现,晚期糖基化终末产物组的V-ATPase a3及CIC-7表达量均较正常组显著下降(P<0.05);④综上结果表明,晚期糖基化终末产物作用于破骨细胞前体可显著抑制破骨细胞的泌酸功能,其机制可能与晚期糖基化终末产物抑制了质子泵V-ATPase a3及氯离子通道CIC-7的表达相关.
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胰岛素样生长因子1受体基因rs2229765多态性与绝经后妇女骨质疏松的相关性
背景:胰岛素样生长因子1在骨细胞功能及骨代谢的调节中发挥重要作用.目前为止,胰岛素样生长因子1受体基因多态性与绝经后骨质疏松的相关性尚未见报道.目的:探讨胰岛素样生长因子1受体基因rs2229765单核苷酸多态性与绝经后妇女骨质疏松的相关性.方法:应用PCR-RFLP技术测定甘肃地区218例绝经后骨质疏松患者及270例骨量正常绝经妇女的胰岛素样生长因子1受体基因rs2229765多态性位点基因型.采用双能X射线吸收骨密度仪检测受试者腰椎、股骨颈以及前臂骨密度.应用ELISA测定血清胰岛素样生长因子1.结果与结论:①rs2229765多态性AA基因型(29%vs.17%,P=0.001)及等位基因A(51%vs.40%,P=0.000)在绝经后骨质疏松组中的分布频率显著高于骨量正常组;②与rs2229765基因型GG相比,基因型AA显著增加骨质疏松患病风险(OR=2.12,95%CI:1.27-3.54,P=0.004);③血清胰岛素样生长因子1分析结果显示,骨质疏松组中rs2229765 AA基因型(P=0.007)及GA基因型(P=0.016)妇女血清胰岛素样生长因子1水平显著低于GG基因型;④结果表明,胰岛素样生长因子1受体基因rs2229765多态性与绝经后妇女骨质疏松具有相关性,并可能改变血清胰岛素样生长因子1水平.
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酶消化法联合组织块法培养大鼠原代成骨细胞
背景:获取高纯度、高活性的成骨细胞是进行骨代谢研究的基础.目的:探索一种简便、高效的原代成骨细胞培养方法.方法:将新生24 h内的SD大鼠,分离获取颅骨的顶骨和额骨,预先采取胰酶和胶原酶消化,再进行组织块培养的方法提取成骨细胞.通过倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞形态,细胞计数绘制细胞生长曲线,采用碱性磷酸酶BCIP/NBT染色和茜素红矿化结节染色进行成骨细胞鉴定.结果与结论:①细胞形态呈长梭形、三角形、不规则多边形,有两至三个细胞突起;②透射电镜下线粒体和内质网在成骨细胞中非常丰富,并且有较多细胞突起,呈现出典型成骨细胞特点;③细胞刚接种时生长缓慢,3 d后增殖加快,第7天达高峰;④碱性磷酸酶BCIP/NBT染色显著阳性,茜素红钙结节染色橘红色;⑤采用酶消化法联合组织块法提取的细胞具有典型的成骨细胞特征和功能,是一种理想的原代成骨细胞分离培养方法.
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缺氧培养下M2型巨噬细胞上清液及杜仲总黄酮对成骨细胞生物行为学的影响
背景:含成骨细胞成分的组织工程材料在骨科领域广泛应用,如何提高成骨细胞对缺氧条件的耐受能力,改善缺氧条件下成骨细胞的生物学行为,是组织工程的重要研究目标.目的:探究M2型巨噬细胞上清液和杜仲总黄酮对缺氧环境培养下的成骨细胞生物学行为的影响,为组织工程研究提供基础.方法:复苏MC3T3?E1细胞,分离、诱导及培养M2型巨噬细胞提取上清液,分别为空白对照组、M2型巨噬细胞上清液组、杜仲总黄酮组及M2型巨噬细胞上清液联合杜仲总黄酮组.空白对照组细胞不进行干预.M2型巨噬细胞上清液组、杜仲总黄酮组及M2型巨噬细胞上清液联合杜仲总黄酮组分别加入M2型巨噬细胞上清液和/或100 mg/L杜仲总黄酮.结果与结论:M2型巨噬细胞上清液组、杜仲总黄酮组及M2型巨噬细胞上清液联合杜仲总黄酮组细胞活性明显高于对照组,且M2型巨噬细胞上清液联合杜仲总黄酮组S期和G2/M期细胞百分比显著高于对照组.M2型巨噬细胞上清液联合杜仲总黄酮组Runx2蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、碱性磷酸酶相对mRNA水平、碱性磷酸酶相对活性以及矿化钙离子相对浓度均显著高于其他各组.提示M2型巨噬细胞上清液联合杜仲总黄酮能够促进缺氧条件下成骨细胞的增殖和分化,维持成骨细胞正常矿化功能和成骨作用,提高成骨细胞对缺氧条件的耐受能力.
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急性损伤后开始训练时间对髌骨髌腱结合部愈合的影响
背景:髌骨髌腱结合部损伤在运动训练中十分常见且复发率较高,及时合理的恢复训练对保持竞技状态有利,而不恰当的恢复训练则有可能加重损伤.目的:从组织形态学、生长因子、胶原蛋白表达量及肌张力等角度,探讨伤后休息不同天数恢复训练对骨腱结合部愈合质量的影响.方法:40只新西兰大白兔被随机分为:空白对照组,针刺后分别休息24,48,72,96,120 h开始恢复训练组.除空白对照组外,其余各组于髌腱止点处进行针刺损伤造模后采用已建立的循环载荷训练模型,进行4周低强度训练后处死取材,行组织学苏木精-伊红、番红及免疫组织化学染色;每次训练后利用Myoton-3肌肉功能分析仪采集肌张力,肌肉硬度数据;Metamorph图形处理软件对各组纤维软骨带厚度、细胞密度,血管内皮生长因子、胶原阳性染色细胞密度进行定量计算.结果与结论:①与空白对照组相比,各伤后训练组在呈现出不同程度的组织形态改变,包括胶原排列紊乱,细胞密度降低,黏多糖蛋白增多,出现"涨潮"现象等;②针刺后24 h与针刺后120 h组纤维软骨带厚度比空白对照组显著增厚(P<0.05);③针刺后24 h组与针刺后48 h组的Ⅰ型胶原与Ⅲ型胶原比例显著低于空白对照组(P<0.05),72 h组高;④针刺后48 h,针刺后72 h与针刺后96 h组的血管内皮生长因子表达量相较于空白对照组显著增高(P<0.05);⑤肌张力与胶原比例(r=-0.538;P<0.01)及软骨细胞密度(r=-0.570;P<0.01)呈负相关关系,而肌肉硬度则与血管内皮生长因子表达量呈正相关关系(r=0.613;P<0.01);⑥结果说明,急性损伤后不同开始恢复训练时间会对髌骨髌腱结合部的愈合造成明显的差异,伤后休息72 h开始训练是为合理的选择;研究证实了肌张力及肌肉硬度会对细胞密度,胶原合成及生长因子表达存在相关性,此指标测量方便且无创,可应用在伤后训练及预防损伤复发等方面,指导运动员及普通人科学运动.
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阿糖胞苷在大鼠皮质神经元细胞培养中的适宜介入时间
背景:由于中枢神经系统疾病研究需求,实验室常用有毒性的阿糖胞苷获得纯度较高的神经元细胞,然而阿糖胞苷的介入时间鲜见研究.目的:验证终浓度为10μmol/L阿糖胞苷在大鼠皮质神经元原代细胞培养中的适宜介入时间.方法:采用神经元专用培养基Neurobasal+B27进行大脑皮质组织原代神经元培养,分别于接种细胞后12,24,36,48 h加入终浓度为10μmol/L阿糖胞苷.每48 h半量换液.于7 d后倒置的显微镜下观察神经元形态;采用免疫细胞化学的方法对神经元特异性烯醇化酶进行免疫化学染色,鉴定神经元细胞的纯度和成熟度;计算机多功能图像分析系统对所有神经元特异性烯醇化酶阳性细胞进行形态学计量分析.结果与结论:①接种细胞后24 h加入阿糖胞苷,神经元纯度在90%以上,分化成熟神经元细胞占比89.00%,神经元细胞胞体面积大,突触长,胞质透亮,核大而明显,细胞体周围折光性强,立体感强,突起三四个,具有三四级分叉,形成良好的网络结构,非神经元细胞较少,神经元纯度及细胞状态佳;②结果表明,阿糖胞苷介入培养过程越早,神经元细胞纯度越高,但阿糖胞苷对神经元细胞分化成熟的影响也会越明显;采用neurolbasal培养基,于接种细胞后24 h加入阿糖胞苷,可以获得理想纯度,成熟度较好,生长状态较好的大脑皮质神经元.
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高效Pdx1/insulin双报告基因载体的构建及其初步应用
背景:胰岛细胞移植是治疗1型糖尿病有效的方法之一,然而移植细胞来源短缺限制了其临床应用.多能干细胞有望成为胰岛细胞移植的理想种子细胞,但其向胰岛β细胞分化是一个复杂的过程.目的:构建高效Pdx1/insulin双报告基因载体,探讨其实时监测诱导多能干细胞向胰岛β细胞分化中关键性基因表达的可行性.方法:首先在pTiger载体上引入嘌呤霉素抗性,然后以646 bp的小鼠Ins1启动子替换了原来载体上410 bp的小鼠Ins1启动子,获得高效Pdx1/insulin双报告基因载体.后,将载体导入INS-1细胞和诱导多能干细胞,验证其功能.结果与结论:①实验成功构建了高效Pdx1/insulin双报告基因载体;②在INS-1细胞中验证了载体获得嘌呤霉素抗性,提高了insulin表达效率,并在INS-1细胞中检测到Pdx1和insulin的表达;③实验初步证明了Pdx1/insulin双报告基因能够有效监测细胞分化过程中Pdx1和insulin基因的表达.
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软骨细胞膜片的成软骨性能
背景:基于温敏培养皿的细胞膜片技术在组织工程研究中受到越来越多的关注,但是温敏培养皿价格高昂,有必要研究替代方法.目的:应用普通培养皿进行细胞膜片培养,并分析软骨细胞膜片的成软骨性能.方法:取1例鼻中隔偏曲患者手术切除的鼻中隔软骨消化提取原代软骨细胞,扩增培养.取第3代细胞在体外密集培养,使之分泌细胞外基质,形成单层细胞膜片;另取第2代软骨细胞,叠加接种于单层细胞膜片上,使其贴覆生长,形成双层细胞膜片.应用细胞刮刀收获细胞膜片,研究其性状,进一步在体外培养、植入裸鼠体内构建出人工软骨块.结果与结论:①单层细胞膜片和双层细胞膜片均形成质软的凝胶样结构,大体观察两者无明显区别;②新刮起的细胞膜片具有良好的可流动性和成胶性;植入裸鼠体内培育8周之后,均形成成熟的软骨块;③组织学观察见细胞膜片是由成层排列的软骨细胞和细胞外基质组成的薄片,在体外培养过程中即有糖胺聚糖和Ⅱ型胶原的初步表达,植入体内8周之后形成的软骨呈现为成熟的软骨组织;④生化定量检测结果表明,DNA含量高于天然鼻中隔软骨,而糖胺聚糖和羟基脯氨酸含量与天然软骨差异无显著性意义;⑤结果提示,应用普通培养皿可成功构建并获取细胞膜片,细胞膜片呈现良好的成软骨性能.
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硫辛酸干预坐骨神经缺血再灌注损伤后的电生理变化
背景:硫辛酸具有由硫、碳原子所构成的封闭环状结构,具有强大的抗氧化能力,现已被广泛用于氧化应激、糖尿病性白内障、糖尿病多发性神经病及心血管损伤等糖尿病并发症等疾病的预防和治疗.目的:探究硫辛酸在周围神经缺血再灌注损伤中对周围神经功能的保护作用.方法:建立家兔周围神经缺血再灌注损伤模型,依据是否进行再灌注分为处理组与未处理组(不进行再灌注处理),处理组依据缺血时间1,3,6 h和再灌注前是否使用硫辛酸,于每个时间点又分别分为实验组与对照组,电镜观察各组实验动物坐骨神经超微结构的变化,并使用诱发电位仪检测坐骨神经电生理指标的变化.结果与结论:①随着缺血时间延长,轴突内空泡逐渐增多,轴突发生萎缩,轴突内微丝结构发生聚集并出现了明显的沃勒变性,而髓鞘则出现了增厚紊乱以及溶解现象.超微结构的破坏在缺血6h时为严重,沃勒变性及髓鞘溶解现象明显增加.对比实验组与对照组,硫辛酸的应用减少坐骨神经轴突中空泡数量,减轻了轴突的萎缩、沃勒变性以及脱髓鞘现象的产生;②随着缺血时间延长,各组实验动物坐骨神经的潜伏期显著增加,而波幅显著降低.潜伏期在缺血6h达到大值,而波幅在缺血6h达到了小值.对比未使用硫辛酸的对照组,实验组坐骨神经潜伏期明显下降而波幅明显增加;③结果说明,硫辛酸能够改善缺血再灌注造成的周围神经功能损伤.
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自体游离硬颚黏膜重建眼睑的效果观察
背景:临床显示自体硬腭黏膜对睑板结膜有较好的替代作用.目的:分析自体游离硬颚黏膜用于眼睑重建的临床效果.方法:纳入180例(180眼)眼睑缺损患者,其中男122例,女58例,年龄10-68岁,均进行自体硬颚黏膜移植修复治疗,眼睑软组织缺损部位采用皮瓣进行修复,治疗后随访观察患者情况及硬腭黏膜情况.结果与结论:所有患者均随访6个月以上.①治疗后3个月内,患者硬腭黏膜移植区及结膜囊内产生黏性分泌物,在使用抗生素滴眼液后得到减轻或消失;②硬腭黏膜移植片在随访的1年内全部存活,未发生感染或脱落情况,移植片与接受区域之间已有血管长入并局部已与原有组织血管吻合,未发生排斥反应;③132例患者自体硬腭黏膜移植片发生不同程度收缩,但眼部正常功能未受到影响;④住院期间眼部疼痛等不适症状已有明显减轻,创面未见感染或愈合不良的情况发生;⑤随访期间,8例发生轻度下睑外翻,3例轻度眼睑闭合不全,其余患者眼睑闭合情况及眼睑开闭功能均未见明显异常;⑥除了8例眼球缺失患者,其余患者双眼眼睑的长度差及高度差均在2 mm内;⑦结果表明,自体硬腭黏膜重建眼睑效果良好,具有较好的相容性.
