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银杏叶提取物对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响
目的:观察银杏叶提取物对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19细胞凋亡的影响并初步探讨可能机制.方法:体外培养ARPE-19细胞株,分为正常组(5.5 mmol·L-葡萄糖),高糖组(30 mmol·L-葡萄糖),银杏叶提取物组(30mmo1·L-1葡萄糖+12.5,25,50,100 mg·L-1银杏叶提取物).噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;流式细胞术测定细胞凋亡率;采用实时荧光定量PCR (Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Westem blot)测定B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原-2(Bcl-2),白血病/淋巴瘤相关抗原相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关因子(Fas),Fas受体(FasL)mRNA和蛋白的表达.Western blot检测c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化及核JNK表达变化.结果:高糖组吸光度A明显低于正常组(P＜0.05),12.5,25,50,100 mg·L-1银杏叶提取物组比高糖组A明显升高(P＜0.05);高糖组细胞凋亡率明显高于正常组,12.5,25,50,100 mg·L-1银杏叶提取物组比高糖组细胞凋亡率明显降低(P＜0.05);与正常组比较,高糖组Bax和Caspase-3,Fas和FasL表达升高(P＜0.05),12.5,25,50,100 mg·L-1银杏叶提取物组能降低Bax和Caspase-3的表达,升高Bcl-2表达水平,降低Fas和FasL表达(P＜0.05);与正常组比较,高糖组JNK磷酸化及核JNK蛋白水平升高(P＜0.05),12.5,25,50,100 mg·L-1银杏叶提取物降低JNK磷酸化及核JNK表达(P＜0.05).结论:银杏叶提取物能通过JNK通路,抑制细胞凋亡,改善糖尿病视网膜病变.
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AngⅡ诱导大鼠心肌细胞肥大过程中分泌型卷曲相关蛋白5表达上调
目的 探讨分泌型卷曲相关蛋白5(sFRP5)在大鼠心肌细胞肥大中表达的机制.方法 体外培养乳鼠心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ10-6 mmol/L,48 h)诱导心肌细胞肥大.应用替米沙坦和Y27632分别阻断血管紧张素1型受体(AT1R)及Rho/Rho激酶(Rho/ROCK)信号通路;PD98059、SB203580及SP600125分别阻断p38 MAPK、ERK1/2及JNK通路;RT-PCR检测sFRP5的表达;Western blot检测sFRP5、ROCK1、ROCK2、总MYPT1、p-MYPT1表达.结果 AngⅡ诱导的心肌细胞肥大致sFRP5表达上调(P<0.05),Y27632下调sFRP5的表达(P<0.05);替米沙坦下调ROCK1的表达(P<0.05);SP600125明显降低sFRP5表达的增加(P<0.05).结论 在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大过程中,主要通过Rho/ROCK1/JNK通路上调sFRP5的表达.
关键词： 分泌型卷曲相关蛋白5 血管紧张素Ⅱ 心肌细胞 肥大 JNK通路 -
JNK信号传导通路在胆汁淤积性肝损伤机制中的作用
胆汁淤积性肝损伤是严重影响人类肝脏健康的慢性疾病,病因复杂.JNK信号通路在细胞分化、细胞凋亡、应激反应及多种疾病的发生与发展中起到重要的作用.近些年来发现c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在各种肝损伤的分子机制中均起到重要作用,且在胆汁淤积导致的肝损伤机制中也有参与.本文简述了JNK通路结构及功能,并对JNK通路在胆汁淤积性肝损伤中的作用、影响因素及研究进展进行了总结与分析.
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RASSF6逆转肾癌786-O细胞对干扰素-α抵抗的研究
目的 干扰素是晚期肾癌的常用治疗药物,但多数患者终对干扰素产生耐药导致治疗失败.本研究探讨RAS结构相关蛋白(ras association domain-containing protein 6,RASSF6)调控肾癌细胞对干扰素-α敏感性的影响及分子机制.方法 利用慢病毒建立稳定过表达RASSF6的786-O细胞(786-O-RF6)及其空白对照细胞(786-O-Vec),利用MTS法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,通过免疫印迹法检测Bax蛋白表达水平及JNK通路核心激酶磷酸化水平.结果 过表达RASSF6减少786-O细胞存活率,1×105 IU/L IFN:786-O-Vec组存活率为(87.7±4.8)％,786-O-RF6组为(60.3±15.5)％,P=0.042;2×105 IU/L IFN:786-O-Vec组细胞存活率为(81.4±6.0)％,786-O-RF6组为(50.4±11.0)％,P=0.023).786-O细胞中过表达RASSF6增加细胞凋亡,过表达RASSF6细胞凋亡率为(57.3±15.6)％,对照组为(14.8±2.1)％,P=0.01.过表达RASSF6增加凋亡因子Bax表达及JNK磷酸化水平.结论 过表达RASSF6逆转肾癌细胞对干扰素-α的抵抗,提示RASSF6通过激活JNK/SAPK通路增加干扰素-α引起的凋亡,抑制细胞存活.
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氧化苦参碱抑制炎症因子改善高脂喂养ApoE-/-小鼠胰岛素抵抗
目的:探讨氧化苦参碱对高脂诱导胰岛素抵抗小鼠肝脏炎症因子表达的影响,及对c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路的作用.方法:ApoE-/-小鼠高脂喂养16周,随机数字表法分为4组,即模型组、氧化苦参碱25,50和100 mg·kg-1组,C57BL/6J小鼠设为对照组,每组10只.连续灌胃(ig)给药8周.给药结束,进行小鼠葡萄糖耐量实验,并测定血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、脂肪酸(FFA)和胰岛素(FINS)含量.实时荧光定量PCR (QRT-PCR)和免疫印迹分析(Western blot)检测肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)表达水平,Western blot检测肝组织JNK及磷酸化水平.结果:氧化苦参碱能不同程度降低FBG,TG,TC,FFA,改善胰岛素抵抗;与模型组比较,氧化苦参碱25 mg· kg-组IL-6表达水平降低,氧化苦参碱50和100 mg·kg-1组TNF-α,IL-6,IL-1β和p-JNK/JNK水平均明显降低.结论:氧化苦参碱能改善高脂诱导小鼠的胰岛素抵抗,与抑制JNK通路抑制肝脏炎症因子表达有关.
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JNK通路参与曲古抑菌素A诱导的胰腺癌PANC-1细胞凋亡
目的 研究JNK通路在曲古抑菌素A(TSA)诱导人胰腺癌PANC-1细胞凋亡过程中的激活情况,并探讨其机制.方法 PANC-1细胞经TSA 1.0 μmol· L-1与JNK抑制剂(SP600125)20μmol·L-1单独或联合处理24 h后,分别用CCK-8法和Hoechst33258染色法检测对PANC-1细胞的生长和细胞凋亡的作用;荧光定量PCR检测c-Jun,c-fos,Elk1,bax和bcl-2 mRNA表达;Western蛋白质印迹法检测p-c-Jun、p-JNK、bax、活性胱天蛋白酶8、bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白表达.结果 CCK-8结果显示,TSA单独处理,PANC-1细胞的存活率随着TSA浓度的增加而降低,并具有一定的量效关系(r=0.9564,P＜0.05).TSA+ SP600125组细胞存活率较TSA单独处理明显增加(P＜0.05).Hoechst33258染色显示,正常对照组、TSA组和TSA+ SP600125组凋亡率分别为(1.8±0.4)％,(6.2±1.4)％和(3.9±0.9)％,组间差异具有明显的统计学意义(P＜0.05,24 h).与TSA组比较,TSA+SP600125组促凋亡基因bax以及JNK通路相关基因c-Jun和c-fos mRNA表达明显降低,Elk1 mRNA表达降低,差异显著(P＜0.05);而抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达明显升高(P＜0.05).TSA作用PANC-1细胞1h后激活JNK通路的相关蛋白c-Jun和JNK,并在2h达到高峰.与TSA组比较,TSA+ SP600125组bax及活性胱天蛋白酶8蛋白的表达明显降低(P＜0.05),bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白的表达明显升高(P＜0.05).结论 激活JNK通路是TSA诱导PANC细胞凋亡的重要机制之一,可能是通过影响线粒体凋亡途径发挥作用.
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PPARγ激动剂通过激活JNK通路促进海马神经元轴突的生长
目的 初步探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)激动剂对体外培养海马神经元轴突生长的作用及其机制.方法 通过向原代培养的胎鼠海马神经元中加入PPARγ激动剂曲格列酮(TGZ)及其抑制剂GW-9662 (GW)以及JNK特异性抑制剂SP 600125 (SP),以研究PPARγ激动剂对海马神经元轴突生长的作用,以及JNK通路的活化在此过程中的作用.结果 TGZ活化PPARγ后能明显促进海马神经元轴突的延长(P＜0.05).PPARr拮抗剂GW消除了TGZ的促轴突生长作用.PPARγ活化后激活了JNK通路,且JNK特异性抑制剂SP能明显阻断TGZ的促轴突生长作用(P＜0.05),表明TGZ诱导的促轴突生长作用依赖JNK通路的激活.结论 PPARr激动剂能促进海马神经元轴突的生长,且此作用依赖JNK通路的激活.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 曲格列酮 JNK通路 轴突生长 -
六味地黄丸对椎间盘体外退变模型髓核细胞MAPK信号级联的影响
背景:JNKs和p38作为丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族中重要的成员,对细胞增殖、分化、转化及凋亡起着至关重要的作用.目的:观察六味地黄丸对兔椎间盘体外退变模型髓核细胞MAPK信号级联的影响.方法:将100个带终板软骨的椎间盘随机分为空白对照组、肿瘤坏死因子α组、p38-JNK/SAPK阻断组、六味地黄丸组、肿瘤坏死因子α+含六味地黄丸组,每组20个.肿瘤坏死因子α组培养液中含10 mg/L肿瘤坏死因子α2μL;p38-JNK/SAPK阻断组培养液中含p38MAPK特异性阻断剂SB203580,JNK特异性阻断剂SP600125各20μmol/L 10μL,10 mg/L肿瘤坏死因子α2μL;六味地黄丸组培养液中含体积分数为10%六味地黄丸血清;肿瘤坏死因子α+六味地黄丸组培养液中含10 mg/L肿瘤坏死因子α2μL,体积分数为10%六味地黄丸血清,分别于培养的第2,4,8,14天收集标本待测.结果与结论:RT-PCR、Western Blot检测显示,随着培养时间的延长,髓核细胞JNK及P38通路的mRNA含量、蛋白表达量明显逐步升高,而含六味地黄丸血清可以延缓这一进程,提示六味地黄丸可以通过一定程度阻滞JNK及P38通路的信号表达,延缓椎间盘退变进程,起到保护椎间盘的作用.
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周期性张应力下人牙周膜成纤维细胞结缔组织生长因子的表达
背景：前期研究发现，周期性张应力在一定时间内可以诱导人牙周膜成纤维细胞增殖。目的：观察周期性张应力对人牙周膜成纤维细胞表达结缔组织生长因子的影响；明确JNK、p38MAPK、PI3K信号通路在周期性张应力诱导人牙周膜成纤维细胞表达结缔组织生长因子过程中的作用。方法：采用多通道细胞牵张应力加载系统对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别给予周期性张应力刺激1，6，12，24 h，并以未加力组为对照组。对加力12 h的细胞分别添加JNK、p38MAPK、PI3K信号通路特异性抑制剂预处理，并与未加抑制剂的细胞作对比。应用ELISA法检测培养细胞分泌到上清液中的结缔组织生长因子蛋白；应用荧光定量PCR技术检测细胞结缔组织生长因子mRNA的表达。结果与结论：加载周期性张应力组与对照组相比较，1 h人牙周膜成纤维细胞表达结缔组织生长因子开始增强、6 h表达明显增强，12 h达高峰值、24 h表达开始下降。加入JNK信号通路特异性抑制剂后，人牙周膜成纤维细胞表达结缔组织生长因子出现下降；而加入p38MAPK信号通路和PI3K信号通路的特异性抑制剂后结缔组织生长因子表达未发生明显改变。提示在一定时间范围内，周期性张应力引起结缔组织生长因子 mRNA 与蛋白水平的表达与时间呈依赖性升高；其后随着时间的延长，结缔组织生长因子的表达则开始下降。周期性张应力通过 JNK 通路的介导调控人牙周膜成纤维细胞结缔组织生长因子的表达。
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异泽兰黄素抑制瘢痕组织成纤维细胞增殖的机制
目的 探讨异泽兰黄素对瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响及机制.方法 应用MTT法检测异泽兰黄素对瘢痕组织成纤维细胞活力的影响,流式细胞仪检测异泽兰黄素对瘢痕组织成纤维细胞中活性氧(ROS)的生成及细胞凋亡的影响,Western印迹法检测异泽兰黄素对细胞内JNK和Bcl2磷酸化的影响.结果 2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μg/ml异泽兰黄素作用细胞24 h后,细胞活力呈浓度依赖性降低.ROS抑制剂(NAC)预处理细胞1 h能显著抑制异泽兰黄素对细胞活力的抑制作用.10.0μg/ml异泽兰黄素作用细胞24 h能促进细胞ROS生成和细胞凋亡,细胞凋亡率为(47.20±1.60)%,与正常对照组相比具有显著统计学差异;促进JNK磷酸化水平和Bcl2表达水平,JNK磷酸化水平为(3.12±0.25)倍,Bcl2磷酸化水平为(2.84±0.22)倍,与正常对照组相比具有显著性差异.JNK磷酸化抑制剂和NAC均能显著抑制异泽兰黄素诱导的细胞凋亡和JNK的磷酸化.结论 异泽兰黄素可诱导瘢痕组织成纤维细胞ROS的产生,通过激活JNK/Bcl2通路诱导细胞凋亡,从而抑制成千维细胞的增殖活性.
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JNK被抑制后LPS对皮肤成纤维细胞增殖的作用机制
目的 抑制JNK通路后,分析LPS对皮肤成纤维细胞的作用.方法 用400 ng/mL JNK磷酸化激动剂Anisomycin和20 ng/ mL脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)同时作用于皮肤成纤维细胞,并设LPS单独作用组,MTT法检测作用0、24、48和72 h时的细胞生长率,Western blot法检测作用0、20、40、60 min时,细胞中ERK、JNK和P38的磷酸化情况.结果 Anisomycin和LPS同时作用皮肤成纤维细胞24 h开始,细胞生长率明显高于对应的LPS单独作用组(P＜0.05);磷酸化ERK、JNK、P38的表达未发生变化,而LPS单独作用细胞20和40 min,磷酸化JNK的表达逐渐降低(P＜0.05).结论 在LPS作用于皮肤成纤维细胞过程中,是通过JNK途径刺激皮肤成纤维细胞产生炎性反应,为进一步研究LPS作用于皮肤成纤维细胞的发病机制奠定了基础.
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JNK信号通路对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质iNOS表达的影响
目的:研究JNK在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的调控作用,探讨PD黑质多巴胺(DA)能神经元变性失活的可能机制.方法:采用神经毒素MPTP制备亚急性PD小鼠模型,健康雄性C57BL/6N小鼠随机分为模型组、JNK抑制剂组和对照组,采用行为学观察、免疫组织化学和免疫印迹法,观察模型小鼠行为学变化及中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、 iNOS和磷酸化c-Jun(p-c-Jun)的表达变化;观察给予JNK通路特异性抑制剂SP600125对上述变化的影响.结果:与对照组相比,模型小鼠出现典型PD样症状.中脑黑质区TH阳性神经元下降约65%,中脑黑质TH表达水平显著降低约75%;黑质区iNOS和p-c-Jun阳性细胞明显增加,且p-c-Jun特异性表达于细胞核,中脑黑质iNOS与p-c-Jun表达水平明显升高.经SP600125处理后,模型小鼠PD样症状减轻,与对照组比较,TH阳性细胞数和TH表达水平仅下降约15%和25%,与模型组比较,黑质区iNOS与p-c-Jun阳性细胞减少,且p-c-Jun仅表达于胞质,中脑黑质iNOS与p-c-Jun表达水平明显下降.结论:JNK通路在MPTP诱导的亚急性PD小鼠黑质iNOS表达中可能起重要的调控作用;JNK通路特异性抑制剂SP600125可能对帕金森病小鼠具有一定的神经保护作用.
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激动ALDH2对抗糖尿病大鼠肝脏损伤的机制探讨
目的：观察激动线粒体乙醛脱氢酶2(aldehyde dehy-drogenase 2,ALDH2)对糖尿病大鼠肝脏损伤的保护机制,并分析JNK在其中的作用。方法健康♂ SD大鼠30只,随机分成3组：正常对照组、糖尿病组、糖尿病+线粒体乙醛脱氢酶2激动剂乙醇组。造模8周后测定空腹血糖和糖化血红蛋白水平,检测血清谷丙转氨酶(AST)、谷草转氨酶(ALT)的变化,HE染色观察肝脏病理结构改变,测定肝脏组织ALDH2、JNK、p-JNK蛋白的表达。结果与正常对照组比较,糖尿病组大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白水平明显升高,血清AST、ALT水平升高,病理切片显示,肝小叶结构异常,肝细胞边界不清,细胞索排列紊乱,细胞肿胀,大量炎症细胞浸润,肝脏组织ALDH2蛋白表达降低,p-JNK、JNK蛋白表达增加,p-JNK/JNK比值增加。乙醇干预组与糖尿病组相比,大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白水平无明显降低,血清AST、ALT水平降低,病理改变减轻,肝脏ALDH2蛋白表达增加, p-JNK、JNK蛋白表达降低,p-JNK/JNK比值降低。结论增加ALDH2的表达,可能通过抑制JNK的表达,减轻糖尿病对肝脏的损伤。
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TGF-β1/Smad信号转导通路对肾间质纤维化的影响
肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病进展为终末期肾衰竭的共同通路,以肾间质中细胞及胶原成分集聚增多、伴有肾小管萎缩或扩张、变形及肾小管和间质毛细血管的丧失为特征[1].近年的研究发现,TGF-β1/Smad信号转导通路在肾纤维化的发生、发展中起重要作用[2].为此,本研究就TGF-β1/Smad 信号转导通路对肾间质纤维化的影响作一综述.
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海洋深层水与褐藻糖胶联合用药对IR-HepG2细胞氧化应激水平的影响
目的 探讨海洋深层水(deep-sea water,DSW)与褐藻糖胶(fucoidan,FPS)联合用药对胰岛素抵抗(insulin resistance,IR) HepG2细胞内氧化应激水平的影响.方法 制备FPS和硬度为1 000的DSW,并对其理化性质进行分析.采用MTT法检测DSW与FPS联合用药对HepG2细胞增殖的影响,确定与DSW联合用药的FPS浓度.高浓度葡萄糖(30 mmol·L-1)诱导建立IR-HepG2细胞模型,同对给予DSW与不同浓度FPS的联合用药,药物孵育24 h后,测定肝糖输出量和糖原含量,并以二者为指标确定DSW与FPS的佳联用剂量;然后对胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)进行测定,并采用Western blot对C-Jun氨基端激酶(c-jun NH2-terminal kinase,JNK)蛋白的表达及磷酸化程度进行检测,观察DSW与FPS对IR-HepG2氧化应激的影响.结果 DSW与50 mg·L-1以内的FPS联合用药不会对细胞增殖产生影响,可以剂量依赖性地降低肝糖输出量,提高糖原水平,其中以DSW与50 mg·L-1 FPS的联用效果好,而且其联用效果显著优于单用同剂量的DSW或FPS;DSW与50mg· L-1 FPS联用可以显著降低MDA和ROS的水平,提高GSH-Px和SOD的活性,并显著降低JNK的磷酸化程度.结论 DSW与FPS联合用药可降低IR-HepG2细胞内的氧化应激水平,其佳联用剂量为50 mg·L-1,其保护作用可能与激活抗氧化酶、抑制脂质过氧化反应及抑制JNK通路有关.
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热化疗对Raji细胞生长、JNK通路及热休克蛋白70表达的影响
目的:观察热化疗对淋巴瘤Raji细胞生长的影响及其可能机制.方法:Raji细胞随机分为单纯化疗组(采用3.00 mg/L阿霉素处理细胞)、单纯热疗组(采用43℃加热处理细胞)、热化疗组(采用43℃加热联合阿霉素处理细胞)和对照组(细胞不作任何处理).应用MTT法检测各组细胞增殖率的变化,采用Western Blot检测磷酸化JNK(p-JNK)和热休克蛋白70(HSP70)的表达.结果:对照组、单纯化疗组、单纯热疗组及热化疗组细胞增殖率分别为(100.00 ± 0.00)96、(66.19 ± 2.67)%、(63.44 4 ± 2.43)%和(58.93 ± 3.66)%,p-JNK的表达量分别为(0.45 ± 0.05)、(0.49 ± 0.04)、(0.48 ± 0.03)和(0.67 4 ± 0.13),HSP70的表达量分别为(0.55 ± 0.09)、(1.06 ±0.84)、(8.23 ± 2.12)和(6.46 ± 2.22),化疗(a)和热疗(b)及热化疗(a × b)均对以上指标有影响(Fa分别为83.294、17.586和25.176,Fb分别为62.351、14.411和18.553,F(a×b),分别为94.178,25.153和32.189,P均<0.05).结论:热化疗联合可抑制Raji细胞增殖,这种抑制作用可能是通过激活JNK信号转导通路或部分抑制HSP70蛋白的表达完成的.
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三七皂苷R1抑制JNK通路减轻H2O2诱导心肌细胞损伤的作用
目的 观察三七皂苷R1 (R1)对过氧化氢(H2O2)诱导心肌细胞损伤的保护作用及与JNK通路的关系.方法 分离原代培养的乳鼠心肌细胞,加入H2O2构建心肌损伤模型,以不同质量浓度R1(25,50,100 μmol·L-1)及JNK通路抑制剂SP600125作用心肌细胞,MTT法测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡;试剂盒测丙二醛(MDA)含量及过氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot测心肌细胞中p-JNK、Bax、Bcl-2蛋白相对表达.结果 与对照组相比,H2O2能显著降低心肌细胞活力,增加心肌细胞凋亡率,增加心肌细胞内MDA含量,降低SOD活性,上调心肌细胞内p-JNK、Bax蛋白表达并减少Bcl-2蛋白表达(P＜0.05);与模型组比,R1及SP600125均能显著提高心肌细胞活力,降低心肌细胞凋亡率,减少心肌细胞内MDA含量,提高SOD活性,降低心肌细胞内p-JNK、Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P＜0.05).结论 R1可显著减轻H2 02诱导的心肌细胞损伤,其机制与抑制JNK通路的激活有关.
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丁苯酞对帕金森病细胞模型JNK通路死亡受体途径相关凋亡因子的影响
目的 探讨丁苯酞对帕金森病(PD)细胞模型JNK通路死亡受体途径相关凋亡因子p-JNK、Fas、FasL的作用.方法 体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP+诱导的SH-SYSY细胞PD模型.分为正常对照组(细胞正常培养,不加任何药物干预),MPP+组(培养的细胞中加入1 mmol·L-1 MPP+),丁苯酞+ MPP+组(培养的细胞中加入10μmol· L-1丁苯酞作用3h后,再加入1 mmol·L-1MPP+),SP600125+ MPP+组(培养细胞中加入10 μmol·L-1 JNK抑制药SP600125作用3h后再加入1 mmol.L-1MPP+).应用噻唑蓝(MTT)法检测MpP+诱导的SH-SY5Y细胞增殖能力;Annexin-V/PI流式细胞术检测细胞凋亡率;倒置相差显微镜观察细胞形态的变化;Western blotting印迹法检测相关凋亡蛋白p-JNK、Fas、FasL的表达.结果 与正常对照组细胞存活率(100.00±0.00)％比较,MPP+组细胞存活率降低,仅为(49.30±2.07)％(P＜0.05),丁苯酞+MPP+组和SP600125+ MPP+组细胞存活率高于MPP+组,存活率分别为(71.9±2.10)％和(76.4±2.80)％(P＜0.05);与正常对照组细胞凋亡率(10.63±2.07)％比较,MPP+组细胞凋亡率升高,为(32.27±2.26)％,差异有统计学意义(P＜0.05);与MPP+组比较,丁苯酞+MPP+组和SP600125+ MPP+组细胞凋亡率下降,细胞凋亡率分别为(21.13±3.63)％和(19.15±2.63)％,差异有统计学意义(P＜0.05).与MPP+组比较,丁苯酞+MPP+组和SP600125+ MPP+组凋亡因子p-JNK、Fas、FasL蛋白的表达量下降(P＜0.05).结论 丁苯酞对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有一定抑制作用,其机制可能是通过调节JNK通路死亡受体途径上p-JNK、Fas、FasL的表达,抑制细胞凋亡发生来实现.
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RASSF1A逆转鼻咽癌细胞对顺铂的抵抗
目的 分析肿瘤抑制基因Ras相关区域家族1A(RASSF1A)表达对鼻咽癌顺铂耐药的影响以及调控的分子机制.方法 首先利用免疫印迹法检测RASSF1A蛋白表达;利用慢病毒转染法在低表达RASSF1A的S18细胞中过表达RASSF1A,观察转染细胞在不同顺铂浓度处理下细胞的存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,后通过免疫印迹法检测JNK通路核心激酶磷酸化水平.结果 相对于顺铂敏感的S26细胞,耐受顺铂的S18细胞RASSF1A蛋白表达水平低.与对照组细胞相比,在S18细胞中过表达 RASSF1A明显降低细胞在顺铂处理后的存活率[2 μmol/L 顺铂,(77.2 ± 6.1)% vs.(89.9 ± 3.2)%,P=0.03;4 μmol/L顺铂,(60.3 ± 3.2)% vs.(80.2 ± 6.7)%,P=0.02].过表达RASSF1A的S18细胞凋亡显著增加[(32.4 ± 7.2)% vs.(17.8 ± 4.9)%,P=0.04].机制分析证明过表达RASSF1A在鼻咽癌细胞中增加JNK磷酸化水平.结论 过表达RASSF1A逆转鼻咽癌细胞S18对顺铂的抵抗,机制研究提示RASSF1A通过激活JNK/SAPK通路增加顺铂诱导的细胞凋亡,抑制细胞存活.
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硫化氢通过调控JNK通路对抗高糖诱导的心肌细胞氧化应激损伤
目的 研究JNK通路在高糖诱导的心肌细胞损伤中的作用及硫化氢是否通过调控JNK通路保护心肌细胞对抗高糖引起的损伤.方法 应用高浓度葡萄糖处理H9c2心肌细胞以建立高糖损伤的细胞模型.应用CCK-8比色法测定细胞存活率,DCFH-DA染色荧光显微镜照相测定细胞内活性氧水平,Rh123染色荧光显微镜照相测定线粒体膜电位,Western blot测定JNK蛋白的表达.结果 高浓度葡萄糖对H9c2心肌细胞具有明显的损伤作用,表现为细胞存活率降低,活性氧生成增多和线粒体膜电位丢失,并能促进心肌细胞内磷酸化JNK的表达；N-乙酰-半胱氨酸和JNK抑制剂SP600125预处理30 min均能阻断高浓度葡萄糖引起的细胞毒性；400 μmol/L NaHS预处理30 min,不仅能抑制高糖引起的心肌细胞损伤,使细胞存活率升高、活性氧生成减少以及线粒体膜电位丢失减少,还能抑制高糖对心肌细胞磷酸化JNK表达的上调作用.结论 活性氧和JNK通路介导高糖引起的H9c2心肌细胞损伤；硫化氢可通过抑制氧化应激和JNK通路保护心肌细胞对抗高糖引起的损伤.
