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丝素蛋白膜上褐藻糖胶的固定化及其体外抗凝血性能
以戊二醛为交联剂,将褐藻糖胶固定在NH3等离子体处理的丝素膜的表面上.用FTIR、Uv分析了褐藻糖胶的结构;采用XPS分析了丝素膜表面元素;采用部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(Pr)和凝血酶时间(TT)对其体外抗凝血活性作了初步的评价.丝素膜表面固定褐藻糖胶后,抗凝血性有了一定的提高.经稳定性测试,固定的褐藻糖胶仍具有一定的抗凝血性.
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褐藻糖胶对照射大鼠免疫功能和淋巴细胞凋亡影响
目的研究不同剂量褐藻糖胶对受γ射线照射大鼠免疫功能影响的作用机理.方法不同剂量褐藻糖胶经口给予实验组大鼠,连续给药10 d后行一次性60Coγ射线照射,18 h后测定各组大鼠体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫相关指标,并测定大鼠脾淋巴细胞凋亡率.结果100mg/kg褐藻糖胶即能显著提高照射后大鼠T、B淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素含量,增强大鼠迟发性超敏反应,抑制照射后脾淋巴细胞凋亡,并呈现剂量-效应关系,与阳性对照组比较差异有非常显著性(P＜0.01).结论褐藻糖胶是一种抗照射免疫调节剂,对照射后大鼠的免疫系统具有恢复作用,其抗照射作用与抑制淋巴细胞凋亡有关.
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褐藻糖胶对照射大鼠淋巴细胞凋亡及相关基因表达影响
目的研究褐藻糖胶(fucoidan)对照射诱导的大鼠脾淋巴细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法通过灌胃方式给予Wistar大鼠不同剂量的褐藻糖胶,连续给药10 d后行一次性9.0 Gy60Coγ射线照射;采用TUNEL、流式细胞术等观察大鼠淋巴细胞凋亡的变化,用免疫组织化学法检测其Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果照射结束18 h后大鼠脾淋巴细胞凋亡明显增加,脾淋巴细胞Bcl-2/Bax蛋白比值显著下降.一定剂量的褐藻糖胶对照射诱导的大鼠脾淋巴细胞凋亡和Bcl-2/Bax比值下降具有显著的拮抗作用,且呈明显的剂量-效应关系.结论褐藻糖胶对照射诱导的大鼠脾淋巴细胞凋亡具有显著的抑制作用,其机理与调节脾淋巴细胞Bcl-2和Bax蛋白表达有关.
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褐藻糖胶对60Co-γ射线照射引起的人外周血淋巴细胞微核率的影响
目的 本研究通过60Co-γ射线体外照射人外周血淋巴细胞观察微核率,研究褐藻糖胶的辐射防护作用.方法 抽取4名从未接触过有害化学物质的健康男性志愿者的静脉血,按常规微量血培养方法体外培养外周血淋巴细胞以及微核细胞.实验分为对照组、照射组及加药组(照射前lh、照射后1h加入20、40、80、160、320μg/ml褐藻糖胶).观察3组淋巴细胞的微核变化.结果 2Gy照射剂量下,照射组和对照组相比,微核率有显著性差异；照射前1h、照射后1h加入20、40 μg/ml褐藻糖胶对淋巴细胞的微核率无显著性差异,加入80、160、320 μg/ml褐藻糖胶均可显著降低淋巴细胞的微核率.结论 褐藻糖胶对0Co-γ射线的辐射有防护作用,且该作用与给药剂量有关.
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褐藻糖胶对60CO-γ射线照射小鼠造血系统的辐射防护作用研究
目的 观察褐藻糖胶对60Co-γ射线照射小鼠体内造血系统的辐射防护作用.方法 以BALB/c小鼠进行体内照射,一次性全身照射前腹腔注射给予褐藻糖胶3d,测定脾指数、脾脏内部结构以及内源性脾结节数(7.5 Gy)、骨髓有核细胞计数(6.0 Gy)、外周血象(5.5 Gy).结果 小鼠体内造血系统实验显示7.5 Gy 60Co-γ照射后,各给药照射组的脾指数及内源性脾结节数明显较对照组增多,中剂量照射组的脾脏大小以及脾脏内部组织结构均比对照组有显著的差别；6.0 Gy60Co-γ照射后,小鼠骨髓有核细胞数较正常对照组相比差异非常显著(P＜0.01),各给药照射组与照射对照组比较,均高于照射对照组(P ＜0.05或P＜0.01)；5.5 Gy60Co-γ照射后30d,小鼠外周血象测定中各给药照射组白细胞数明显高于对照组(P＜0.01),而外周血红细胞、血红蛋白和血小板无明显影响.结论 褐藻糖胶对60Co-γ射线照射引起的小鼠造血系统损伤有保护作用.
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褐藻糖胶对乳腺肿瘤大鼠肠道屏障损伤的保护作用
目的 探讨褐藻糖胶(fucoidan)对二甲基苯蒽(7,12-dimethylbenz (a) anthracene,DMBA)诱发的乳腺肿瘤大鼠肠道屏障损伤的保护作用.方法 60只雌性SD大鼠按体质量随机分为正常对照组(CN)、模型组(M)、低(F1)和高剂量(F2)褐藻糖胶干预组.M组及F1、F2组,大鼠右侧臀部皮下一次性注射100 mg/kg DMBA建立乳腺癌模型,观察各组大鼠乳腺癌发生率及抑瘤率;HE染色观察大鼠空肠粘膜病理学改变;酶联免疫吸附实验(EHSA)检测血浆中D-乳酸(D-LA)和二胺氧化酶(DAO)水平;Western Blot法检测大鼠肠道紧密连接蛋白occludin及ZO-1表达.结果 与模型组比较,F1、F2组大鼠肿瘤潜伏期均延长,肿瘤发生率和平均瘤重量降低(均p＜0.05);抑瘤率分别达到34.5％和49.2％;M组大鼠肠壁受损,绒毛裸露且结构丧失,绒毛高度和隐窝深度降低,经褐藻糖胶干预后,小肠绒毛逐渐恢复栅栏样结构,其绒毛结构接近于CN组;与M组比较,F2组D-LA的浓度显著降低(P＜0.05),F1、F2组DAO的浓度均显著降低(均P＜0.05),F1、F2组occludin及ZO-1的表达均显著升高(P＜0.05).结论 褐藻糖胶对大鼠乳腺肿瘤生长具有一定抑制作用,其作用机制可能修复乳腺癌大鼠受损的肠黏膜屏障相关.
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海藻海蒿子褐藻糖胶的分离与组成分析
目的 以海藻海蒿子为原料制备褐藻糖胶,并对不同的提取、分离方法进行比较,对多糖的组成和结构进行初步分析.方法 海蒿子脱脂干粉分别经水提取和酸提取以获得粗多糖,粗多糖分别经乙醇沉淀法和CaCl2沉淀法进行纯化.选取多糖组分F4用Q-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-200凝胶柱进行分级分离,高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)鉴定纯度及相对分子质量,气相色谱分析多糖的中性单糖组成.结果 F4经分级分离得到3个级分:P1、P2和P3.P1、P2和P3均为均一组分,相对分子质量分别为:494 400、61 500和167 600;P1由岩藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖构成,摩尔百分比43.4:33.3:6.2:4.3:12.8;P2由岩藻糖、木糖、甘露糖和半乳糖构成,摩尔百分比44.4:15.1:23.8:16.7;P3由岩藻糖、木糖和半乳糖构成,摩尔百分比68.9:3.7:27.4.结论 P1、P2和P3的单糖含量均以岩藻糖为主,但其他单糖组成有较大差别.
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海带多糖药理作用研究进展
海带多糖是海带中主要的生物活性成分,具有多方面的药理活性,如抗血栓、调血脂、降血糖、改善血流变及循环、抗肿瘤、抗辐射、免疫调节、抗氧化、抗突变、抗疲劳、抗炎及保护肝脏等作用,综述了近年来对海带多糖的药理作用研究进展.
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褐藻糖胶对多发性骨髓瘤细胞株 RPMI8226中W nt／β－catenin 通路的影响研究
目的：探讨褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡过程中Wnt／β－catenin通路的变化。方法应用褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞株RPM18226的凋亡，观察多发性骨髓瘤细胞株经10，25，50，100μg／mL浓度褐藻糖胶分别作用24，48，72 h后细胞增殖抑制率。将细胞分为3组：空白组不予药物干预，褐藻糖胶组给予25μg／mL褐藻糖胶培养， Wnt通道抑制剂（ DKK－1）组给予DKK－1培养。用AnnexinV－FITC／PI双染法检测3组RPMI822细胞凋亡率，通过Western blot方法检测3组β－catenin与c－myc蛋白表达情况。结果随褐藻糖胶浓度的增高和作用时间的延长，细胞增殖抑制率明显增高（P均＜0．05）。褐藻糖胶组细胞凋亡率明显高于空白组；褐藻糖胶组和DKK－1组β－catenin 和 c－myc 蛋白表达水平均明显低于空白组（P均＜0．05），褐藻糖胶组与 DKK－1组比较差异无统计学意义（P均＞0．05）。结论褐藻糖胶能够诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226发生凋亡，与DKK－1作用相当，并且褐藻糖胶能够有效抑制多发性骨髓瘤细胞株中Wnt／β－catenin通路的活化状态，为有效治疗多发性骨髓瘤患者提供了理论依据。
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褐藻多糖硫酸酯生物学活性及肾脏保护作用机制研究进展
褐藻多糖硫酸酯(sulfated fucan,FPS)是目前研究多的非哺乳动物来源的具有生物学活性的硫酸化多糖,主要存在于藻类和棘皮动物中[1].褐藻多糖硫酸酯(FPS)又称岩藻聚糖、岩藻聚糖硫酸酯、褐藻糖胶,是从褐藻中提取的一类硫酸多糖,主要位于褐藻的细胞壁基质中,占褐藻细胞壁干重的40%以上,是藻体维持体内湿度、防止体表干燥和保护其免受损伤的一种成分,为褐藻利用光能所必需.
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几种天然产物对高尿酸血症大鼠血清尿酸水平的影响初探
目的:探讨几种天然产物对高尿酸血症大鼠血清尿酸水平及尿酸排泄的影响.方法:对wistar大鼠灌胃氧嗪酸钾和酵母膏,制作高尿酸血症大鼠动物模型.灌胃给药褐藻糖胶、柠檬酸钾和东哥阿里提取物,2周后采血并进行代谢实验,检测血清尿酸、尿素氮,24小时尿液体积、pH值、尿酸浓度及总量,分析三种活性物质对机体尿酸水平、尿酸排泄、肾脏功能的影响.结果:三种物质均可显著降低高尿酸血症模型大鼠的血清尿酸水平,其中东哥阿里提取物组的24小时排泄尿酸总量较模型组显著降低,褐藻糖胶对实验大鼠的血清尿素氮水平升高有抑制作用.结论:三种活性物质对高尿酸血症大鼠血清尿酸浓度有降低作用,其中褐藻糖胶对肾脏功能有保护作用,从而保证尿酸的顺利排泄,而东哥阿里在降低血尿酸水平的同时,24小时尿液中排泄的尿酸总量也显著低于模型对照组,其机制可能与抑制尿酸生成有关.
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硫酸钡-比浊法测定褐藻糖胶中硫酸根的含量
目的 运用硫酸钡比浊法测定日高昆布中褐藻糖胶硫酸根的含量.方法 采用硫酸钡比浊法,通过分光光度计检测到大吸收波长为360 nm;在此波长下测定褐藻糖胶中硫酸根的含量.结果 硫酸根在60-120μg范围内线性关系良好(r2 =0.9909),测得褐藻糖胶中硫酸根的含量为(20.52±0.57)％；方法学符合测定要求.结论 该方法简单、准确、快速、灵敏度较高,适用于海藻多糖硫酸根含量的测定.
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褐藻糖胶通过抑制Wnt/β-catenin通路诱导多发性骨髓瘤细胞PRMI8226凋亡
目的 探讨褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞PRMI8226凋亡时Wnt/β-catenin通路的变化.方法 褐藻糖胶不同浓度(25、50、100、200、400 μg·mL-1)分别作用于PRMI8226细胞24、48、72 h,采用MTT法检测PRMI8226细胞增殖情况并求得半数抑制浓度(IC50);以1/2 IC50浓度的褐藻糖胶作用于PRMI8226细胞72 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率.将细胞分为空白对照组、Wnt通路抑制剂(DKK-1)组(100 ng·mL-1)及褐藻糖胶(25 μg· mL-1)组,采用Western blot检测β-catenin、c-myc、bax及caspase 3蛋白表达水平.结果 褐藻糖胶对PRMI8226细胞增殖抑制作用呈时间-剂量依赖性增强.PRMI8226细胞经褐藻糖胶25 μg· mL-1处理72 h后,其凋亡率(12.22％)明显高于对照组(4.82％)(P＜0.05).Western blot结果显示,与空白对照组比较,两组β-catenin和c-myc表达水平均有显著差异(P＜0.05),褐藻糖胶组β-catenin和c-myc表达水平与DKK-1组比较无显著差异(P＞0.05);褐藻糖胶组caspase3和bax蛋白表达水平较DKK-1组增加(P＜0.05),两组与空白对照组比较表达亦增加,均有显著差异(P＜0.05).结论 褐藻糖胶通过抑制Wnt/β-catenin通路的活化,能诱导多发性骨髓瘤PRMI8226细胞凋亡.
关键词： 褐藻糖胶 多发性骨髓瘤 细胞凋亡 Wnt/β-catenin通路 -
褐藻糖胶对U266细胞自噬、迁移及侵袭的影响
目的· 探讨褐藻糖胶对多发性骨髓瘤U266细胞自噬、迁移及侵袭的影响.方法· 褐藻糖胶处理细胞后,透射电子显微镜(TEM)观察细胞自噬小体,Transwell小室观察细胞迁移及侵袭能力,Western blotting测定LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、P62、MMP9、CXCR4、p-AKT/T-AKT、p-mTOR/T-mTOR蛋白表达,ELISA法检测细胞培养液中MMP9含量.结果·①TEM观察发现,褐藻糖胶处理组自噬小体增加.②褐藻糖胶可降低U266细胞迁移及侵袭能力,并呈现出剂量依赖性,氯喹可阻断该抑制作用.③Western blotting结果显示,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1及MMP9蛋白表达随褐藻糖胶浓度增加而增加,P62、CXCR4、p-AKT/T-AKT及p-mTOR/T-mTOR蛋白表达随褐藻糖胶浓度增加而降低.④ELISA结果显示,褐藻糖胶处理组细胞培养液中MMP9的含量下降.结论·褐藻糖胶可诱导多发性骨髓瘤U266细胞自噬,抑制该细胞的迁移、侵袭能力.
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褐藻糖胶抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制
目的:探讨褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的相关机制.方法:采用MTT法测定不同浓度褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用,计算细胞生长抑制率;将0、10、100、500μg/md的褐藻糖胶作用于HepG2细胞,48 h后光镜观察细胞形态改变,用Hoechst染色法和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;Western blot检测cyclinD1和拓扑异构酶Ⅱα(topoisomerase Ⅱα,TopoⅡα)表达的改变.结果:褐藻糖胶具有抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用,呈剂量依赖性.不同浓度褐藻糖胶作用HepG2细胞后,500 μg/ml组较其他浓度组光镜下和Hoechst 33258染色均呈现较明显细胞形态改变,100 μg/ml和500μg/ml组均检测出DNA梯形条带.褐藻糖胶也能降低细胞增殖生物标志蛋白cyclinD1和TopoⅡα的蛋白表达.结论:褐藻糖胶抑制人肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与褐藻糖胶抑制细胞增殖的生物标志蛋白cyclinD1和TopoⅡα表达有关.
关键词： 褐藻糖胶 人肝癌细胞HepG2 凋亡 CyclinD1 TOPOⅡα -
海带褐藻糖胶的复合酶法与热水法提取比较研究
目的 对复合酶法与热水法提取海带褐藻糖胶的效率和提取物结构进行比较.方法 分别采用复合酶法与热水法提取海带褐藻糖胶;环境扫描电镜(ESEM)比较两种方法对海带细胞壁组织显微结构的影响;采用高效液相色谱(HPLC)分析两种方法提取物的单糖组成.结果 复合酶能温和高效地破碎海带的胞壁组织结构,使褐藻糖胶快速溶出,复合酶法与传统热水法比较有更高的褐藻糖胶得率和一次提取率,分别达2.36 %±0.15 %(以海带干重计)和84.89 %.结论 复合酶法提取海带褐藻糖胶效率较高,所制备的褐藻糖胶甘露糖和硫酸根含量较高.
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褐藻糖胶的生物活性研究进展
褐藻糖胶是褐藻的主要活性成分,对褐藻糖胶在生物活性方面的研究进展作了综述.
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海洋深层水与褐藻糖胶联合用药对IR-HepG2细胞氧化应激水平的影响
目的 探讨海洋深层水(deep-sea water,DSW)与褐藻糖胶(fucoidan,FPS)联合用药对胰岛素抵抗(insulin resistance,IR) HepG2细胞内氧化应激水平的影响.方法 制备FPS和硬度为1 000的DSW,并对其理化性质进行分析.采用MTT法检测DSW与FPS联合用药对HepG2细胞增殖的影响,确定与DSW联合用药的FPS浓度.高浓度葡萄糖(30 mmol·L-1)诱导建立IR-HepG2细胞模型,同对给予DSW与不同浓度FPS的联合用药,药物孵育24 h后,测定肝糖输出量和糖原含量,并以二者为指标确定DSW与FPS的佳联用剂量;然后对胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)进行测定,并采用Western blot对C-Jun氨基端激酶(c-jun NH2-terminal kinase,JNK)蛋白的表达及磷酸化程度进行检测,观察DSW与FPS对IR-HepG2氧化应激的影响.结果 DSW与50 mg·L-1以内的FPS联合用药不会对细胞增殖产生影响,可以剂量依赖性地降低肝糖输出量,提高糖原水平,其中以DSW与50 mg·L-1 FPS的联用效果好,而且其联用效果显著优于单用同剂量的DSW或FPS;DSW与50mg· L-1 FPS联用可以显著降低MDA和ROS的水平,提高GSH-Px和SOD的活性,并显著降低JNK的磷酸化程度.结论 DSW与FPS联合用药可降低IR-HepG2细胞内的氧化应激水平,其佳联用剂量为50 mg·L-1,其保护作用可能与激活抗氧化酶、抑制脂质过氧化反应及抑制JNK通路有关.
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不同生长期养殖萱藻(Scytosiphon lomentarius)中褐藻胶和褐藻糖胶的结构分析
目的 提取分离不同生长期养殖萱藻的褐藻胶和褐藻糖胶,分析其结构,明确生长期对褐藻胶与褐藻糖胶产率及结构的影响.方法 分别以生长期为45、60和75 d大连海域养殖的萱藻为材料,经过80℃2％Na2 CO3水溶液提取,稀HC1沉淀获得不同生长期萱藻褐藻胶SLA5A、SL60A和SL75A,以及褐藻糖胶SL45F、SL60F和SL75F,并通过红外光谱、高效液相色谱、凝胶渗透色谱-多角激光光散射仪联用和核磁共振氢谱等技术对多糖的红外光谱特性、单糖组成、分子量及褐藻胶的精细结构等进行了比较分析.结果 不同生长期养殖萱藻褐藻胶与褐藻糖胶的产率及结构存在明显的差异,生长期从45 d到75 d,褐藻胶产率由12.1％(SL45A)提高到22.5％ (SL75A),褐藻糖胶产率由1.8％ (SL4SF)提高到5.8％ (SL75F).两类多糖的分子量均随生长期延长而降低.褐藻胶的细微结构也发生明显的变化,G/M比从2.88 (SL45A)下降到1.50(SL75A),褐藻糖胶的单糖组成中葡萄糖比例随生长期延长增加,岩藻糖比例则随生长期延长而降低.结论 生长期对养殖萱藻褐藻胶与褐藻糖胶的产率、单糖组成、分子量和精细结构均有显著的影响,选择合适的采收时间对养殖萱藻多糖的结构有非常重要的影响.
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不同提取方法对褐藻糖胶理化性质的影响
目的 比较不同提取方法对褐藻糖胶理化性质的影响.方法 分别采用稀盐酸法和氯化钙从6种褐藻粗多糖中获得12种褐藻糖胶(Fucoidan),并进一步对其理化性质进行分析和比较.采用高效液相色谱法(HPLC)测定其单糖组成,离子色谱法(IC)测定其硫酸基含量,Folin-酚法测定其粗蛋白含量,高效凝胶渗透色谱与多角度激光散射仪联用法(HPGPC-MALLS)测定其绝对分子量.结果 稀盐酸法提取褐藻糖胶的得率显著高于氯化钙法,但所得褐藻糖胶的硫酸基含量和绝对分子量都明显降低.结论 稀盐酸法提取褐藻糖胶造成糖链断裂及硫酸基脱落,破坏褐藻糖胶的结构,因此采用氯化钙法更适合褐藻糖胶的提取.
