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ADAM33在IL-4刺激的人气道平滑肌细胞中对NF-κB和TGF-β1表达的影响
目的 探讨解整合素-基质金属蛋白酶33(ADAM33)在白介素-4(IL-4)刺激的人气道平滑肌细胞(HASMCs)中对NF-κB和TGF-β1表达的影响,为进一步完善哮喘的发病机制提供理论基础.方法 以50μg/L的IL-4刺激HASMCs,以未刺激细胞组为对照,24h后实时荧光定量PCR法和Western blot法检测ADAM33的表达;设计并合成ADAM33-siRNA,IL-4刺激24h后瞬时转染ADAM33-siRNA,实时荧光定量PCR法和Western blot法检测抑制率;并且检测TGF-β1、NF-κB mRNA和蛋白的表达情况.结果 50 μg/L的IL-4较对照组明显促进了HASMCs中ADAM33的表达(P<0.05),在mRNA水平表达量增加约4.36倍,蛋白水平增加约3.3倍;ADAM33-siRNA-575明显抑制了ADAM33在HASMCs中的表达;干扰组、阴性对照组和空白对照组TGF-β1 mRNA的相对表达量分别为0.602±0.024、1.01±0.176和1.239 ±0.171,NF-κB mRNA的表达量分别为0.54±0.08、1.014±0.21和1.049±0.378;TGF-β1蛋白的表达量分别为0.227±0.016、0.7 ±0.048和0.715±0.025,NF-κB蛋白的表达量分别为0.335±0.048、0.922±0.04和0.943±0.046.干扰组TGF-β1、NF-κB不论是在mRNA水平,还是在蛋白水平,均明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05).结论 ADAM33可能是IL-4调节人气道平滑肌细胞NF-κB/TGF-β1信号通路中的一个关键信号分子,有望成为防治哮喘的重要靶点.
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rHSG基因调控COPD大鼠气道成纤维细胞增殖凋亡
目的 采用脂质体介导携带大鼠增殖抑制基因(rHSG)的真核表达载体,转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,为干预COPD的气道成纤维细胞增殖,打下基因治疗基础.方法 构建真核表达载体pEGFP-N1,对重组质粒pEGFP-rHSG进行鉴定并测序;采用阳离子脂质体将重组质粒pEGFP-rHSG转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,分别感染24和48 h及3、5和7d后,用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测rHSG mRNA的不同时段表达水平,MTT、流式细胞仪检测转染后成纤维细胞增殖及凋亡.结果 证实重组质粒pEGFP-rHSG构建成功.转染24 h,rHSG mRNA表达量开始增加,7d达到高峰,各转染组间rHSG mRNA表达差异显著(P<0.05);转染48 h后rHSG基因转染组成纤维细胞的增殖抑制明显低于未转染组成纤维细胞(P<0.05);转染后48 h凋亡开始,与模型对照组相比,随着时间延长,凋亡逐渐增加,7d时凋亡率达大(P<0.05).结论 外源性rHSG基因介导,能够使气道成纤维细胞的增殖受到抑制并诱导其凋亡.
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气道内高压力促进3种气道重塑相关因子的表达
目的探讨机械通气情况下气道内不同压力水平对气道重塑相关因子表达的影响.方法手术室经全麻行机械通气的42例慢性阻塞性肺疾病(COPD)作为COPD组和33例无基础肺疾病患者作为对照组.机械通气根据吸气峰压(PIP)水平又分为高、中、低压力组(分别为24、22和20 cmH2O),呼气末正压均为5 cmH2O.机械通气前及3 h后收集支气管肺泡灌洗液(BALF). 酶联免疫吸附法和Western blot法检测BALF中气道重塑相关因子成纤维生长因子2(FGF-2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平.结果1)机械通气前COPD组BALF 中的FGF-2、TGF-β1和MMP-9蛋白水平明显高于对照组(P<0.01).2)机械通气后对照组在高压力刺激下FGF-2、TGF-β1和MMP-9表达水平升高(P<0.05);而COPD组压力刺激下上述3种蛋白表达升高更明显(P<0.05),且高压力组>中及低压力组(P<0.05).3)相关性分析显示,COPD组BALF中FGF-2、TGF-β1、MMP-9表达水平与气道压力成正相关(P<0.01).结论机械通气时气道内的持续高压力可能通过作用于气道上皮细胞内压力敏感通道进而提高气道重塑因子FGF-2、TGF-β1、MMP-9的表达水平,COPD患者尤为显著.
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尾加压素Ⅱ在慢性阻塞性肺病大鼠中的变化
目的 探讨尾加压素Ⅱ(U-Ⅱ)在慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠中的变化.方法 SD雄性大鼠随机分为慢支组、COPD 组、戒烟组和对照组.用放免法测定血浆、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织匀浆中U-Ⅱ含量,测定肺功能并观察气道病理改变.结果 各组血浆U-Ⅱ含量无明显变化;BALF中U-Ⅱ含量显著高于各组血浆含量的1.7、2.2、4.7和4.9倍(均P<0.01).慢支组、COPD组、戒烟组BALF中U-Ⅱ含量分别较对照组升高50%、225%和225%(均P<0.01).肺组织匀浆U-Ⅱ含量亦显著高于对照组(均P<0.05).BALF中U-Ⅱ含量与BALF中性粒细胞数呈正相关(P<0.01);与气道炎细胞浸润、气道壁平滑肌增生、气道纤维结缔组织增生病理评分均呈正相关(均P<0.01);与呼气峰流速成负相关(P<0.01).结论 U-Ⅱ可能参与COPD气道重塑的发病.
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布地奈德降低哮喘小鼠肺中去整合素-金属蛋白酶33表达
去整合素-金属蛋白酶33(a disintegrin and metalloproteinase,ADAM33)与哮喘气道的损伤修复有着密切的关系.布地奈德(budesonide,BUD)是临床治疗哮喘应用较广泛的糖皮质激素,其能否通过干预ADAM33的表达来干预哮喘气道重塑,目前相关的报道较少.本研究观察BUD干预对慢性哮喘小鼠模型中肺组织ADAM33表达水平的影响,探讨其对小鼠哮喘气道重塑的干预作用.
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地塞米松下调哮喘大鼠肺组织bFGF的表达
支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞和细胞组分参与的慢性炎症性疾病,反复炎症刺激导致气道高反应和气道重塑,目前认为气道重塑是难治性哮喘及哮喘气道不可逆损伤的主要原因.
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尿激酶抑制哮喘小鼠气道重塑
气道重塑是慢性哮喘的病理特征之一,是导致不可逆性气流阻塞及持续性非特异性气道高反应性的主要原因.尿激酶是组织纤溶酶原激活剂,国内外许多研究将其应用于肺等器官纤维化的治疗,但在哮喘气道重塑中的作用尚无报道.
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哮喘大鼠肺内JNK磷酸化水平的动态变化
气道重塑在哮喘病程中的重要性已被逐渐认识.丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号传导途径是参与哮喘发病机制的一条重要信号通路,我们前期研究发现,细胞外信号调节激酶(external signal regulatedkinase,ERK)磷酸化是哮喘气道炎症和重塑的重要因素[1],C-JUN氨基末端激酶(C-JUNN-terminal kinase,JNK)是MAPK家族的另一重要成员.
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三氧化二砷减轻支气管哮喘小鼠气道重塑及基质金属蛋白酶-9表达
气道重塑是支气管哮喘的典型特征之一,主要因气道壁结构的改变,形成不可逆的气流阻塞和持续性气道高反应,导致肺功能下降,故预防和逆转哮喘的气道重塑具有重要意义.
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地塞米松抑制哮喘模型大鼠肺组织血管内皮生长因子表达
哮喘是一种由多种细胞和细胞组分参与的慢性气道炎症性疾病,反复炎症刺激可导致气道高反应性和气道重塑,气道细胞合成和分泌的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)参与了哮喘气道重塑过程,但对哮喘急性发作期VEGF的变化及影响因素的研究却鲜见报道.本实验研究VEGF蛋白和mRNA在哮喘急性模型中的表达并观察地塞米松干预的影响.
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缬沙坦对小鼠支气管哮喘气道重塑的干预作用
道重塑是支气管哮喘除气道慢性炎症之外的另一个重要特征.它不仅导致不可逆性的气流阻塞,还影响平喘药物的疗效,从而加重气道高反应性和肺功能低下.我们曾经报道TGF-β1和CTGF参与哮喘气道重塑的发生,并在哮喘气道重塑的发病机制中起重要的作用[1].
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TGF-β抑制剂SB-431542对支气管哮喘小鼠气道重塑的干预作用
目前认为气道重塑是除气道慢性炎性反应之外哮喘的另一个重要特征.气道重塑不仅导致不可逆性的气流阻塞而增加气道阻力、加重气道高反应性,进而导致严重的肺功能低下.目前治疗和预防哮喘的有效药物是糖皮质激素,它虽然能抑制炎性反应、减轻症状,但不能逆转已形成的气道结构改变,即使是早期给药也仅能部分抑制气道重塑过程.其主要原因是激素对上皮细胞TGF-β1,EGFR等的过表达无明显作用或作用很弱有关.TGF-β1和CTGF是参与哮喘气道重塑的发生,并在哮喘气道重塑的发病机理中起重要作用的细胞因子[1].
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上皮-间质转化在慢性呼吸系统疾病中的作用
上皮-间质转化(EMT)是指分化成熟的上皮细胞在各种刺激下转变成为具有间质表型细胞的生物学过程,与组织胚胎发育、器官纤维化、肿瘤转移密切相关.上皮细胞作为呼吸系统主要的屏障之一,接受着各种刺激的影响,其修复与损伤参与了众多呼吸系统疾病的发病过程.本文就上皮-间质转化机制在慢性呼吸系统疾病研究中的进展作一综述.
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三种脂质体法转染试剂转染原代大鼠气道平滑肌细胞效果的比较
气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)是呼吸道的重要组成部分之一,受气道内各类免疫细胞所释放的细胞因子和炎性介质的调节产生相应的收缩,其自身也能够分泌细胞因子、趋化因子、生长因子、黏附分子和基质金属蛋白酶等,参与气道炎症、气道高反应性与气道重塑的发生发展,是研究哮喘、COPD 等气道呼吸性疾病细胞分子机制的重要载体[1]。国内外研究中使用的 ASMCs 大多从活组织(比如动物气管、支气管和活检样品等)中分离并原代培养获得,这比细胞系更能准确地模拟来源组织在体内环境的特异性特征。
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TLR4/PI3K信号相关分子在气道上皮细胞诱导的哮喘气道平滑肌细胞迁移功能中的作用
目的 探讨TLR4、PI3K和NF-kB在气道上皮细胞诱导的哮喘气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)迁移中的作用.方法 细胞消化法培养原代哮喘ASMCs,TNF-α刺激上皮细胞系RTE细胞收集细胞培养上清液,ELISA检测上清液中IL-8和RANTES的含量,以TLR4抗体、渥曼青霉素(Wortmannin)、二硫代氨基吡咯烷(PDTC)作为工具药,改良Boyden趋化小室检测其在上皮细胞诱导的哮喘ASMCs跨膜迁移中的作用.结果 各TNF-α组RTE培养上清液中IL-8和RANTE水平均显著增高(P<0.01),20 ng/ml组较其他组显著增高(P<0.01).各哮喘组ASMCs的跨膜迁移数较正常组均显著增加(P<0.01),各处理组哮喘ASMCs的跨膜迁移数亦较哮喘组明显增加(P<0.01),TNF-α+TLR4抗体组、TNF-α +Wortmannin组和TNF-α+Wortmannin+PDTC组哮喘ASMCs跨膜迁移数较TNF-α组明显减少(P<0.01);TNF-α+Wortmannin +PDTC组ASMCs跨膜迁移数亦低于Wortmannin组(P<0.05).结论 TLR4/PI3K信号相关分子参与哮喘气道上皮细胞诱导的ASMCs跨膜迁移,可能是哮喘气道重塑的机制之一.
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唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素9(Siglec-9):重症哮喘潜在的治疗靶点
免疫球蛋白样凝集素家族是免疫球蛋白超家族的重要一员,其与聚糖结构的化合物结合能够影响免疫应答。其中,唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素( sialic acid-binding immunoglobulin-type lectins , Siglecs )家族是免疫球蛋白样凝集素家族的经典代表。尤其,Siglec-9是特异性表达于中性粒细胞表面的唾液酸聚糖蛋白受体,可能与中性粒细胞的凋亡、自噬、募集和浸润等作用有关[1-4]。支气管哮喘(哮喘)显著的临床特征包括气道炎症、气道高反应性和气道重塑。难治性哮喘(重症哮喘)虽然仅占哮喘患者的5%,但其急诊就医率和住院率分别为轻、中度哮喘的15倍和20倍,是导致哮喘治疗费用骤增的重要原因[5]。现公认,气道中性粒细胞大量募集和浸润是重症哮喘典型的病理生理特征之一。愈来愈多的研究表明,Siglec-9很有可能是一种治疗中性粒细胞增多型重症哮喘的新靶点。本文将就中性粒细胞诱导重症哮喘的发生机制以及Siglec-9调节中性粒细胞凋亡、自噬和募集的作用作一综述。
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沙美特罗氟替卡松对急性加重期COPD患者骨代谢以及气道重塑的影响分析
目的 探讨沙美特罗氟替卡松对急性加重期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者骨代谢及气道重塑的影响.方法 对2013年1月至2015年1月住院治疗的急性加重期COPD患者130例进行回顾性研究,分为两组:观察组(常规治疗基础上加用沙美特罗氟替卡松)和对照组(常规治疗).测定并比较两组患者血清碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)、钙与肌酐比值(Ca/Cr)、甲状旁腺素(PTH)、睾酮(T)、BODE指数、基质金属蛋白酶9(MMP-9)以及炎症转化生长因子β(TGF-β)和血清肿瘤坏死因子α(TNF-α).结果 观察组与对照组Ca/Cr、PTH、T在治疗前后比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗前两组患者骨形成指标ALP、BGP比较差异无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后ALP、BGP含量显著高于其治疗前和对照组治疗后ALP、BGP含量(P<0.05).对照组BODE指数各单项FEV1%、6MWD、MMRC得分及BODE指数治疗前后差异均无统计学意义(P>0.05);观察组治疗前后BMI指标差异无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后FEV1%、6MWD显著高于治疗前,MMRC、BODE指数显著低于治疗前(P<0.05);观察组治疗后FEV1%、6MWD、BMI显著高于对照组治疗后,MMRC、BODE指数显著低于对照组治疗后(P<0.05).观察组治疗后TGF-β、TNF-α、MMP-9指标显著低于对照组(P<0.05);对照组治疗前后MMP-9指标无显著差异(P>0.05),观察组和对照组患者治疗后TGF-β、TNF-α指标以及观察组治疗前MMP-9指标显著低于治疗前(P<0.05).结论 应用沙美特罗氟替卡松治疗急性加重期COPD患者易出现骨质疏松,需适当控制血药浓度,补充钙、磷元素,对气道炎症有较好的作用,能够有效改善患者气道重塑,并能够有效影响患者预后,值得推广应用.
关键词: 急性加重期慢性阻塞性肺疾病 沙美特罗氟替卡松 骨代谢 气道重塑 -
布地奈德联合1,25-二羟维生素 D3对支气管哮喘儿童血清 MMP -9和 IL -10的影响
目的:探讨1,25-二羟维生素 D3辅助布地奈德对支气管哮喘儿童血清中基质金属蛋白酶9(MMP -9)和白细胞介素10(IL -10)的影响。方法102例支气管哮喘患儿随机分为两组,分别给予单纯布地奈德(布地奈德组, n =51)和布地奈德联合1,25-二羟维生素 D3(布地奈德加1,25-二羟维生素 D3组,n =51)两种方法进行治疗。另选同期51例健康体检儿童为对照组。比较两治疗组临床疗效及三组儿童血清 MMP -9和 IL -10水平。结果布地奈德加1,25-二羟维生素 D3组有效率明显高于布地奈德组,差异有统计学意义( P ﹤0.05)。两治疗组 IL -10水平均明显低于对照组( P ﹤0.05),MMP -9水平明显高于对照组( P ﹤0.05)。结论1,25-二羟维生素 D3联合布地奈德治疗哮喘较单纯布地奈德更为有效;1,25-二羟维生素 D3联合布地奈德更有效地提高了布地奈德促 IL -10分泌的能力,降低 MMP -9的活性;此方法从抗炎和改善气道重塑两个方面有效地治疗了儿童支气管哮喘。
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药物干预对哮喘气道重塑中MMP-9表达的影响研究进展
支气管哮喘(哮喘)是一种慢性气道炎症性疾病,多种细胞因子和炎性介质是其病理生理过程的始动和维持因素。气道重塑是哮喘的重要病理特征,至今具体发生机制尚不明确。气道重塑是主要由于呼吸道上皮层的损伤引起的结构性改变,是引起哮喘临床症状和肺功能下降的主要原因,涉及多种细胞和分子[1]。本研究概述了哮喘气道重塑发生与基质金属蛋白酶-9( MMP-9)表达的关系,总结多种中药、西药干预哮喘动物模型后气道重塑中 MMP -9的表达情况,以进一步了解MMP-9影响气道重塑的作用机制所在,为将来的研究提供更合理的思路和方法,从而对哮喘气道重塑在微观层面提供更有效的治疗手段。
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A2BR与慢性阻塞性肺疾病及特发性肺间质纤维化的相关研究进展
慢性阻塞性肺疾病(COPD)和特发性肺间质纤维化(IPF)都属于慢性呼吸系统疾病,两者既是独立又是可以同时并存的疾病.两者的发病机制尚不明确,可能与炎症、气道重塑、组织的损伤与修复等有关系,在临床中,我们发现这两种疾病的发病率越来越高,严重影响肺功能,使患者的生活质量受到了极大的损害,并且加重了患者的经济负担和精神负担.