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rHSG基因调控COPD大鼠气道成纤维细胞增殖凋亡
目的 采用脂质体介导携带大鼠增殖抑制基因(rHSG)的真核表达载体,转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,为干预COPD的气道成纤维细胞增殖,打下基因治疗基础.方法 构建真核表达载体pEGFP-N1,对重组质粒pEGFP-rHSG进行鉴定并测序;采用阳离子脂质体将重组质粒pEGFP-rHSG转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,分别感染24和48 h及3、5和7d后,用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测rHSG mRNA的不同时段表达水平,MTT、流式细胞仪检测转染后成纤维细胞增殖及凋亡.结果 证实重组质粒pEGFP-rHSG构建成功.转染24 h,rHSG mRNA表达量开始增加,7d达到高峰,各转染组间rHSG mRNA表达差异显著(P＜0.05);转染48 h后rHSG基因转染组成纤维细胞的增殖抑制明显低于未转染组成纤维细胞(P＜0.05);转染后48 h凋亡开始,与模型对照组相比,随着时间延长,凋亡逐渐增加,7d时凋亡率达大(P＜0.05).结论 外源性rHSG基因介导,能够使气道成纤维细胞的增殖受到抑制并诱导其凋亡.
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IL-22对人气道细胞的作用
目的 探讨IL-22对人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞的生理学作用.方法 用实时定量PCR 检测气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞哮喘血清刺激前后IL-22R1 mRNA表达的变化.不同浓度的IL-22(10 ng/ml,100 ng/ml,1 000 ng/ml)刺激气道上皮细胞、气道平滑肌细胞和气道成纤维细胞后,用MTT法检测细胞的增殖,用流式细胞技术(FACS)检测细胞的凋亡和坏死.结果 哮喘血清刺激后气道上皮细胞IL-22R1 mRNA表达降至正常对照组的9%,气道平滑肌细胞IL-22R1 mRNA表达升高至正常对照组的345倍,而气道成纤维细胞IL-22R1 mRNA表达无明显变化.高剂量(1 000 ng/ml)的IL-22刺激气道上皮细胞和气道成纤维细胞12、24 h可显著降低细胞增殖(P<0.05,P<0.01).三种不同浓度的IL-22刺激气道上皮细胞24 h后均导致细胞凋亡显著下降(P<0.05),低浓度的IL-22(10 ng/ml)导致细胞坏死增加(P<0.01).不同浓度的IL-22刺激气道平滑肌细胞后,细胞凋亡和坏死无显著性变化.中、高浓度IL-22(100 ng/ml,1 000 ng/ml)刺激气道成纤维细胞后,细胞坏死率显著下降(P<0.05).结论 IL-22在支气管哮喘中对气道上皮的作用具有双重性,并与支气管哮喘的病程相关;而对气道平滑肌细胞的作用则可能与浓度及病程相关.支气管哮喘后续阶段,IL-22对气道成纤维细胞作用轻微.
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大鼠气道成纤维细胞的分离、培养及鉴定
目的:体外分离、培养、纯化大鼠气道成纤维细胞,并对其进行鉴定,为进一步气道成纤维细胞的相关研究提供物质基础.方法:处死SD大鼠,在无菌条件下切开胸腔,取出气道,刮去气管内膜上皮及气管外组织,将气道剪成小组织块行贴壁培养,用抗波形蛋白对其进行鉴定.结果:成功分离、培养出SD大鼠气道成纤维细胞,通过鉴定得出所培养的细胞为成纤维细胞.结论:成功分离、培养出大鼠气道成纤维细胞,为进一步深入研究气道成纤维细胞的功能奠定了基础.
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rHSG基因对COPD大鼠气道成纤维细胞增殖凋亡的调控
目的:研究外源性大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道成纤维细胞增殖的影响.方法:采用阳离子脂质体将重组质粒pEGFP-rHSG转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,分别感染24、48 h及3、5d和7d后,用实时荧光定量PCR(Real time-PCR)检测rHSGmRNA的不同时段表达水平,MTT、流式细胞仪检测转染后成纤维细胞增殖及凋亡.结果:转染24 h,rHSGmRNA表达量开始增加,高峰在7d时,各转染组间rHSG mRNA表达差别满足(P＜0.05);转染48 h后rHSG基因转染组成纤维细胞的增殖抑制明显低于未转染组(P＜0.05);转染后48 h凋亡开始,与对照组相比,随着时间延长,凋亡逐渐增加,7d时凋亡率达大(P＜0.05).结论:外源性rHSG基因能够抑制气道成纤维细胞增殖诱导其凋亡.
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五味子和芍药醇提取物对气道成纤维细胞增殖的影响
目的 探讨芍药和五味子醇提取物对人成纤维细胞增殖活性的影响.方法 采用渗滤提取法制备芍药和五味子醇提取液,分别用0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、1.25 g/ml醇提取物刺激人胚肺成纤维细胞72 h,观察醇提取物对人胚肺成纤维细胞形态、增殖活性、细胞周期的影响.结果 不同浓度醇提取物均可抑制成纤维细胞增殖,但无明确的量效关系;醇提取物浓度达到0.0625g/ml时,不仅能抑制人胚肺成纤维细胞增殖,且可将细胞阻滞于G0/G1期,减少进入DNA合成期的细胞.结论 芍药和五味子醇提取物可有效抑制人胚肺成纤维细胞增殖,且0.0625g/ml可能为适宜浓度.
