首页 > 文献资料
-
rDNA-ITS序列分析鉴定皮肤癣菌的应用评价
目的:探讨对核糖体RNA(ribosomal RNA,rDNA)内转录间隔区(internal transcribed space,ITS)的基因扩增测序技术在皮肤癣菌鉴定中的应用价值.方法:从39株临床收集的皮肤癣菌临床标本和经培养后的标本中分别提取DNA,应用通用引物ITS1和ITS4进行PCR扩增和基因测序,测序结果在NCBI的基因库中查询,通过BLAST工具比对分析进行rDNA-ITS序列分析分子鉴定.同时根据形态特征、生长特性以及生理生化指标对经培养后的标本进行表型鉴定,并与分子鉴定结果相比较.结果:两组标本均成功扩增到ITS靶基因,经测序分析,临床标本和经培养后标本rDNA-ITS序列分析结果一致,与表型鉴定结果相吻合.结论:直接从临床标本中提取致病菌DNA并进行ITS基因序列扩增和测序分析可快速、有效鉴定皮肤癣菌.
-
MPB64免疫胶体金检测法在分枝杆菌菌种鉴定中的应用
目的：评价MPB64免疫胶体金快速检测法在分枝杆菌菌种鉴定中的应用价值。方法以PCR扩增测序法为“金标准”，对MPB64免疫胶体金法和传统PNB／TCH法对2种分枝杆菌标准菌株和418株临床分枝杆菌分离株的菌种鉴定能力作比较。结果胶体金法、PNB／TCH法与PCR测序法结果一致率分别是95．93％和87．08％，胶体金法鉴定结核分枝杆菌敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别88．41％、99．64％、99．19％和94．58％，而PNB／TCH法为62．32％、99．29％、97．72％和84．24％。胶体金法15 min即可作出鉴定结果，较传统的PNB／TCH法提前了28 d，比测序法提前3 d。结论与PNB／TCH法相比，MPB64免疫胶体金法在分枝杆菌菌种鉴定中，具有较高的特异度和灵敏度，且方法简便、快速，适合基层推广应用。
-
致泻性大肠埃希菌检测及耐药性分析
目前国际上将致泻性大肠埃希菌分为五类:产毒性大肠埃希菌(ETEC)、致泻性大肠埃希菌(EPEC)、侵入性大肠埃希菌(EIEC)、出血性大肠埃希菌(EHEC)和粘附聚集性大肠埃希菌(EAEC)[1,2].为了解致泻性大肠埃希菌检测率及耐药性,对本院1998年6月至2001年6月就诊的腹泻病人采集大便标本进行细菌学检测及药敏分析,现报道如下.材料与方法1 标本来源本院1998年6月至2001年6月就诊腹泻病人1848例大便.2 试剂及诊断血清培养基及药敏纸片购自浙江省军区后勤部卫生防疫所;志贺菌、沙门菌及致泻性大肠埃希菌诊断血清购自成都生物制品研究所,菌种鉴定板购自威自达医疗有限公司,以上试剂均在有效期内使用.
-
114株结核分枝杆菌耐药性分析
目的：了解宁波市北仑区涂阳肺结核患者结核分枝杆菌的耐药情况，为肺结核的耐药筛查及防控工作提供依据。方法对2012—2014年北仑区获得的114株结核分枝杆菌进行异烟肼（INH）、利福平（RFP）、链霉素（SM）及乙胺丁醇（EMB）4种药物的耐药性测定。结果114株结核分枝杆菌中，90株（78.95％）对INH、RFP、SM和 EMB 4种抗结核药全部敏感；24株耐药，耐药率为21.05％。其中初治耐药15例，耐药率为15.31％；复治耐药9例，耐药率为56.25％。复治耐药率高于初治耐药率（P ＜0.05）。至少同时对 INH 和 RFP耐药11例，耐多药率为9.65％；其中初治耐多药率为6.12％，低于复治耐多药率的31.25％（P ＜0.05）。结论北仑区肺结核耐药情况与以往监测结果相比，并未发生实质性变化，复治患者仍是北仑区耐药肺结核的高危人群。
-
浙江丽水地区非结核分枝杆菌菌种鉴定及耐药性分析
目的 探讨丽水地区非结核分枝杆菌(NTM)菌种分布特点及其耐药情况,为临床诊疗提供参考.方法 收集2013年1月至2015年12月丽水地区分枝杆菌培养阳性的菌株,用PNB/TCH生长试验初步鉴定菌种,利用基因芯片对分离的NTM作进一步菌种鉴定;对鉴定为NTM的菌株采用比例法进行6种药物敏感性试验.结果 共分离鉴定分枝杆菌属671株,其中NTM 81株(12.07%).NTM共检出9个菌种,以胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌和龟-脓分枝杆菌为主,占比分别为59.26%、16.05%和9.88%.NTM耐药率总体较高,特别是龟-脓分枝杆菌和戈登分枝杆菌对6种药物全部耐药.结论 NTM的耐药率高,根据药敏制定合理的治疗方案是治疗成功的关键.
-
基层医院脑外伤后气管插管痰液培养和药敏试验的价值
随着经济和交通的发展,脑外伤的患者在基层县医院越来越多.脑外伤引起中枢神经系统损伤,造成咳痰困难,常行气管切开术,极易造成下呼吸道感染,院内获得性下呼吸道感染在院内感染中占据主要地位,死亡率占20%～50%.为控制院内获得性下呼吸道的发病率及其死亡率,本院收集此类标本187例,对其进行细菌培养、菌种鉴定和药敏试验,对其结果进行分析,希望借此为临床治疗提供一定帮助.
-
101例细菌性乳腺炎患者的临床病原分析
[目的]分析乳腺炎患者的细菌分布及感染状况,为临床用药提供有效的参考价值.[方法]留取乳腺的开放性脓液和封闭脓肿标本,增菌后移种于血平板和麦康凯平板,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定仪进行菌种的鉴定和药物敏感性测定.[结果]101例细菌培养阳性的标本中G球菌90株,厌氧菌5株,G杆菌4株,G-杆菌2株.G-球菌中以葡萄球菌属细菌为主,其中金黄色葡萄球菌分离多占61株.金黄色葡萄球菌中40%产β内酰胺酶,对青霉素的耐药率为91%.MRSA检出率为20%,凝固酶阴性葡萄球菌中100%产β-内酰胺酶,对苯唑西林的耐药率为80.6%.[结论]乳腺炎患者以G-球菌检出率高,尤其以金黄色葡萄球菌为多,对青霉素有较高的耐药性.对利奈唑烷、万古霉素、替考拉宁全部敏感.
-
血清降钙素原对血流感染患者病原菌的鉴别诊断价值
目的：研究血清降钙素原( PCT)在血流感染患者病原菌鉴定中的临床价值。方法采用回顾性分析的方法,对335例血培养阳性血流感染患者的血清PCT检测结果进行分析。结果335例血培养结果阳性的血流感染患者中,革兰阴性菌144例,占42．99%(144/335)；革兰阳性菌159例,占47．46%(159/335)；真菌32例,占9．55%(32/335)。不同菌株间PCT检测结果分别为6．52(0．98~35．3)ng/ml,1．83(0．49~8．6)ng/ml和2．08(0．45~13．1)ng/ml；经Mann-Whitney U检验,革兰阴性菌组与其他两组间差异均具有显著性,(U=356,U=581,P<0．05)。使用受试者工作曲线对PCT在革兰阴性菌鉴别中的检测效能进行分析,临界值为3．15 ng/ml 时, ROC 曲线下面积为0．77；此时鉴定革兰阴性菌的灵敏度为71．2%,特异度为69．1%,准确指数40．30%。结论定量检测PCT可作为鉴别血流感染患者革兰阴性菌和革兰阳性菌感染的辅助诊断手段。
-
探讨荧光定量PCR在结核菌检测中的应用
目的 探讨荧光定量PER技术在检测临床标本中结核分枝杆菌的应用价值.方法 通过荧光定量PCR技术鉴定350株临床分离株,进行结核分枝杆菌的菌种鉴定和定量分析,同时进行抗酸染色和培养法.结果 荧光定量PCR、染色和培养法阳性检出率分别为38.8%(128/330),21.8%(72/330),29.7%(98/330),提高阳性检出率(涂阴)16.97%(56/330),菌种鉴定特异性实验符合率为100%.结论 荧光定量PER技术是一种快速、敏感、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法.
-
110株结核分枝杆菌二线药敏结果分析
目的 了解2007年至2010年胜利油田结核分枝杆菌菌株对二线结核药的耐药状况,初步探讨本地耐多药(MDR-TB)及广泛耐药(XDR-TB)结核病发病情况.方法 运用药物敏感检测和调查相结合,收集2007年2月至2010年8月结核病患者痰标本进行分离培养和菌种鉴定,同时对4种一线药物及4种二线药物应用比例法进行耐药性检测.结果 在所分离的110株耐药结核分枝杆菌中,MDR-TB 14例,其中XDR-TB6例,耐LFX占17.3%,耐AK、PAS、CM分别为:6.4%、5.5%、1.8%,对二线药物的耐药顺位依次LFX>AK>PAS>CM.结论 胜利油田结核病患者二线药物耐药情况严重.
-
肺结核痰菌结果分析
目的观察340例肺结核病人痰菌情况、抗结核药物敏感试验结果及分枝杆菌菌种鉴定结果.方法选择2004年9月～2005年2月长沙市中心医院胸科中心住院340例肺结核病人,均做痰涂片找抗酸杆菌、痰分枝杆菌培养,痰分枝杆菌培养阳性后部分病例行抗结核药物敏感试验及分枝杆菌菌种鉴定.结果在整个肺结核病人中痰菌阳性率为52.6%,抗结核药物敏感试验提示耐单一抗痨药物为26.9%,耐多重抗痨药物为15.4%.菌种鉴定中人型结核杆菌为87.8%,牛型结核杆菌为9.6%,非结核分枝杆菌为2.6%.结论肺结核病人痰菌检查对临床诊断及指导治疗有重要意义.
-
革兰氏阴性杆菌超广谱β内酰胺酶检测与耐药分析
随着广谱抗生素在临床普遍作用,尤其是近年来三代头孢的广泛使用,使革兰氏阴性杆菌产生了ESBLs,此酶能水解所有的青霉素类.一、二、三代头孢类和部分四代头孢菌素以及单环氨曲南类,给临床治疗带来了很大困难.因此,ESBLs的检测对于指导临床用药,控制院内感染,具有重要的意义[1].本文对我院从临床痰培养分离的218例菌种,进行了菌种鉴定和ESBLs的检测及耐药性结果进行了统计分析.现报告如下:
-
非结核分枝杆菌肺病28例临床分析
目的 研究非结核分枝杆菌肺病的症状、X线表现、药敏,来制定个体化的治疗方案.方法 选择我院2011年4~10月期间抗结核治疗效果不佳病例45例中经菌种鉴定为NTM肺病28例进行临床分析.结果 该病好发于中老年人,既往合并慢性肺部疾病者多见,临床症状和X线表现与肺结核高度相似,药敏结果对制定治疗方案意义重大.结论 对用一线抗结核药物正规强化治疗效果不佳的肺结核病例,除应考虑耐多药的情况外,也应考虑有患NTM肺病的可能,应及时进行菌种鉴定.
-
基因芯片杂交技术在肺结核诊治中的应用
目的 探讨基因芯片杂交技术在肺结核诊治中的应用价值.方法 运用分枝杆菌菌种鉴定基因芯片检测系统.对结核杆菌阳性的标本进一步做异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素四种常用抗结核药物的耐药突变基因检测.结果 对基因芯片杂交法检测结核分枝杆菌阳性的29份痰标本做了异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素四种常用抗结核药物的耐药突变基因检测.有18份痰标本检出非结核分枝杆菌.结论 采用基因芯片杂交法查痰结核杆菌,阳性率明显高于传统的痰涂片,与培养法相比较,当天可出结果,极大地缩短了痰培养法的时间.同时可对目前国内发病率较高的10种分枝杆菌进行菌种鉴定,并可对利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇这四种一线抗结核药的耐药基因(rpoB、katG、inhA、rpsL、embB)的多种突变进行检测性.此方法 检测快速、准确、特异、敏感,为肺结核的有效诊治提供了重要的技术手段和可靠依据.
-
福建省临床分离非结核分枝杆菌菌种分布研究
目的：分析我院临床分离非结核分枝杆菌（NTM）菌株，探讨福建省NTM临床分离率和菌种分布情况。方法对我院2009－2012年临床分离6362株分枝杆菌进行结核分枝杆菌复合群（MTBC）与NTM鉴别，对鉴定为NTM菌株应用hsp65‐和rpoB‐PCR‐RFLP进行菌种鉴定。结果6362株临床分离分枝杆菌共鉴别出649株NTM。鉴别出的649株NTM菌株，经hsp65‐和rpoB‐PCR‐RFLP鉴定，菌种分布达24个种，其中菌株数量前3位菌种为：胞内分枝杆菌（M．intracellulare）302株（46．5％），鸟分枝杆菌（M．avium）138株（21．3％），脓肿分枝杆菌（M．abscessus）81株（12．5％）。结论2009－2012年福建省NTM临床分离率占分枝杆菌培养阳性菌株的10．2％，NTM种类多，以鸟‐胞内分枝杆菌复合群（MAC）为福建省NTM的主要流行菌种，占总数的67．8％。
-
一株马鼻疽诺卡菌临床分离株的鉴定
目的 应用基因测序分析进行诺卡菌(Nocardia farcinica)鉴定.方法 将临床分离菌株BJ7菌株与诺卡菌标准参照菌株AY756551和结核分枝杆菌H37Rv接种L-J、PNB/TCH鉴别培养基.用生长良好的培养物提取全基因组DNA.设计引物,对rpoB、16S rDNA基因片段进行PCR扩增,对其PCR产物进行测序和网上同源性比对.结果 PNB/TCH鉴别培养基鉴定BJ7为非结核分枝杆菌,进化树中BJ7 16S rDNA序列亲缘关系与诺卡菌标准参照菌株AY756551比较相近,且16S rDNA和rpoB DNA序列与马鼻疽诺卡菌同源性极高,分别达到100%和99%.结论 从结核病患者分离的菌株BJ7为马鼻疽诺卡菌.DNA测序分析能够快速、简便、准确地鉴定诺卡菌.
-
DNA芯片鉴定分枝杆菌的研究
目的 评价DNA芯片技术鉴定分枝杆菌菌种的应用价值,为临床实际应用提供科学依据.方法 收集以BACTEC MGIT 960从结核病患者分离到的分枝杆菌阳性培养物,以传统分枝杆菌菌种鉴定方法为对照,应用DNA芯片技术进行菌种鉴定.结果 两种方法鉴定结果一致和基本一致共112株,吻合率为83.6%(112/134),包括胞内分枝杆菌50株,龟分枝杆菌14株,结核分枝杆菌14株,戈登分枝杆菌9株,鸟分枝杆菌7株,偶然分枝杆菌7株,堪、瘰、胃和猿分枝杆菌6株,土分枝杆菌和海分枝杆菌各1株;未分类NTM3株.应用DNA芯片未能分类的17株分枝杆菌中,传统方法分别鉴定为戈登分枝杆菌5株、胞内分枝杆菌3株、龟分枝杆菌2株、蟾分枝杆菌、耻垢分枝杆菌和浅黄分枝杆菌各1株,未分类NTM 4株.结论 用DNA芯片检测技术,可以简便、快速、灵敏、特异地将大多数分枝杆菌鉴定到种,但有待进一步完善.
-
2株胞内分枝杆菌临床分离株的鉴定
目的 联合应用多种分子生物学技术进行分枝杆菌菌种鉴定.方法 从经PNB、TCH鉴别培养基鉴定为结核分枝杆菌的临床分离菌株285株中选取6株,其中包括oxyR-ahpC基因间隔区检测时PCR产物分子量异常的2株和另外随机选择的PCR产物分子量正常者4株,采用H37Rv、鸟分枝杆菌95001和胞内分支杆菌95002做对照,PCR扩增oxyR-ahpC基因间隔区,对其产物进行测序和网上同源性(H37Rv、U18263、U71061)比对.同时,采用多位点PCR扩增和hsp65 PCR-限制性酶切片段长度多态性分析,从而判定分枝杆菌菌种类型.结果 经PNB、TCH鉴别培养基鉴定初步判定为结核分枝杆菌的285株临床分离株中2株临床菌株oxyR-ahpC基因间隔区PCR产物大小约为1 000bp,DNA序列与胞内分枝杆菌同源性极高,达99%,而与同片段序列结核分枝杆菌H37Rv的差异大,同源性为84%.多位点PCR指纹显示为非分枝结核杆菌,hsp65 PCR-RLFP/RFLP指纹与95002一致.结论 2株oxyR-ahpC基因间隔区PCR产物分子量异常的经PNB、TCH鉴别培养基鉴定为结核分枝杆菌的临床分离株确定为胞内分枝杆菌.多种分子生物学技术联合应用能够快速、简便、更准确地鉴定分枝杆菌菌种.
-
福建省肺非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定
目的 对2005-2011年间,福建省福州市胸科医院分离获得的非结核分枝杆菌临床菌株进行菌种鉴定.方法 分别使用传统鉴别培养基法和多位点PCR、hsp65-PRA与rpoB-PRA,以及hsp65、rpoB、16s rRNA和ITS基因测序等分子生物学方法,对全部菌株进行菌种鉴定.结果 450株被初步鉴定为非结核分枝杆菌的临床分离菌株中,有45株被鉴定为结核分枝杆菌,其余405株被鉴定为23种不同的非结核分枝杆菌和1株支气管戈登菌.结论 在该地区有多种非结核分枝杆菌传播和流行,其中,6种非结核分枝杆菌和支气管戈登菌为在福建省内首次发现.
-
多位点PCR用于安徽391株分枝杆菌临床分离株的快速鉴定
目的 评价多位点PCR用于分枝杆菌临床分离株快速鉴定效果.方法 收集从临床结核病患者分离到的抗酸染色阳性的培养物,经PNB/TCH鉴别培养基进行培养鉴定后,采用聚合酶链反应(PCR)对16SrRNA、Rv0577、IS1561、Rvl510、Rv1970、Rv3877/8和Rv3120基因位点进行扩增,鉴定至种,再经rpoB-PRA、hsp65和rpoB基因测序进行验证.结果 共对391株分枝杆菌临床分离株应用多位点PCR进行了鉴定,结果显示结核分枝杆菌378株,非洲分枝杆菌I型6株,非结核分枝杆菌7株.7株非结核分枝杆菌分别为鸟分枝杆菌1株,马赛分枝杆菌2株,胞内分枝杆菌4株.而PNB/TCH鉴别培养基培养鉴定结果为结核分枝杆菌复合群385株,非结核分枝杆菌6株.多位点PCR结果与rpoB-PRA,hsp65和rpoB基因测序结果一致.结论 多位点PCR技术鉴定分枝杆菌菌种结果准确可靠,且具有简便和快速等优点,有较大的分子流行病学应用价值,且对于临床诊断和治疗都具有重要意义.
