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胞内分枝杆菌临床分离株耐药谱及基因型特征研究
目的 分析我国胞内分枝杆菌临床分离株的耐药谱及基因型特征,为治疗胞内分枝杆菌感染性疾病提供科学依据.方法 纳入2013—2015年北京胸科医院150株胞内分枝杆菌临床分离株,采用微孔板Alamar Blue法测定胞内分枝杆菌对15种药物的低抑菌浓度(MIC),以确定其药物的敏感度;对16 个可变数目串联重复序列( VNTR)位点进行 PCR 扩增和产物电泳分析,使用BioNumerics软件对菌株进行聚类分析,以确定其基因型特征.使用SPSS 19.0软件对结果进行统计分析,应用χ2检验分析不同组间耐药率的差别.结果 药敏试验结果显示,克拉霉素(97.3%,146/150)、莫西沙星(94.0%,141/150)和阿米卡星(90.0%,135/150)对胞内分枝杆菌具有较好的抗菌活性; 75.3%(113/150)、64.0%(96/150)、52.7%(79/150)和8.7%(13/150)的菌株对利福平、利奈唑胺、卷曲霉素和乙胺丁醇敏感;3种注射类抗结核药物的MIC50与MIC90值为:阿米卡星4和16 mg/L,链霉素4和16 mg/L,卷曲霉素8和16 mg/L;5种氟喹诺酮类药物的MIC50与MIC90值为:莫西沙星0.5和2 mg/L,环丙沙星1和8 mg/L,左氧氟沙星1和8 mg/L,安妥沙星2和16 mg/L,氧氟沙星2和16 mg/L.采用16位点VNTR方法对胞内分枝杆菌进行基因分型,150株胞内分枝杆菌共分为21个簇,121种基因型,总Hunter-Gaston指数为0.997.结论 克拉霉素、莫西沙星和阿米卡星在体外对胞内分枝杆菌具有较好的抗菌活性;16位点VNTR方法对胞内分枝杆菌临床分离株的分辨率较高;胞内分枝杆菌的耐药谱与菌株是否成簇并无明显相关性.
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结核重症监护室中胞内分枝杆菌肺病与脓肿分枝杆菌肺病的临床特征比较分析
目的 分析结核重症监护室(ICU)中胞内分枝杆菌肺病与脓肿分枝杆菌肺病患者的临床特征,为临床诊治提供依据.方法 回顾性分析2012年1月至2017年5月杭州市红十字会结核ICU收治的非结核分枝杆菌肺病( NTM)患者74例的临床资料.其中脓肿分枝杆菌肺病患者54例,胞内分枝杆菌肺病患者16例,鸟分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌肺病患者各2例.对胞内分枝杆菌及脓肿分枝杆菌肺病复合群感染重症患者的临床特征、影像学表现、治疗与预后等情况进行分析.采用SPSS 21.0软件对数据进行分析.采用GraphPad Prism V5.01进行生存曲线分析.结果 74例NTM肺病患者中,脓肿分枝杆菌感染率为72.87%(54/74),胞内分枝杆菌的感染率为21.62%(16/74).胞内分枝杆菌肺病患者的年龄和入住 ICU 时间明显低于脓肿分枝杆菌肺病患者( t ＝－2.729和－6.150,P＜0.05或＜0.01),但两组性别分布、APACHE Ⅱ评分比较,差异均无统计学意义(P值均＞0.05).在基础疾病方面,胞内分枝杆菌肺病患者慢性阻塞性肺疾病(COPD)的比例明显低于脓肿分枝杆菌肺病患者(χ2＝3.902,P＜0.05),而支气管扩张比例明显多于脓肿分枝杆菌肺病患者(χ2＝23.888,P＜0.01).在合并症方面,脓肿分枝杆菌肺病患者合并脑卒中后遗症、帕金森症等中枢神经系统疾病(χ2＝14.872,P＜0.01)及糖尿病(χ2＝3.902,P＜0.05)的比例显著高于胞内分枝杆菌肺病患者,而合并咯血的比例明显低于胞内分枝杆菌肺病患者(χ2＝9.717,P＜0.01).胞内分枝杆菌肺病患者入住ICU主要原因为呼吸衰竭(93.75%)和感染性休克(6.25%),而脓肿分枝杆菌肺病患者为呼吸衰竭(90.74%)、心衰竭(11.11%)和肾衰竭(1.85%),两组患者入住ICU原因比较,差异均无统计学意义(P值均＞0.05).胞内分枝杆菌肺病组患者在机械通气前分离出NTM的比例明显高于脓肿分枝杆菌肺病组患者(χ2＝30.366,P＜0.01).在影像学方面,胞内分枝杆菌肺病组支气管扩张比例明显高于脓肿分枝杆菌肺病组(χ2＝23.888,P＜0.01).两组患者28 d病死率比较,差异无统计学意义(χ2＝3.244,P＞0.05),而胞内分枝杆菌肺病组患者120 d内生存率明显高于脓肿分枝杆菌肺病组患者(χ2＝12.780,P＜0.01).结论 当重症患者痰抗酸染色阳性时,须考虑NTM肺病可能.对于长期机械通气的重症患者须首先考虑脓肿分枝杆菌感染.
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播散性胞内分枝杆菌病一例
患者男,59岁,因"胸背部疼痛1年,纳差、发热20 d",拟"药物不良反应"于2017年8月28日收治于杭州市红十字会医院.患者1年前无明显诱因出现胸背部疼痛不适,活动受限,症状起初轻微,未引起重视,未救治.后上述症状逐渐加重,于2017年7月25日至浙江大学医学院附属第二医院(滨江院区)就诊,胸椎CT示:胸11-12椎体形态稍楔形变,后缘突向椎管,椎体内多发骨质破坏,椎间隙变窄,周围见片状软组织密度影,边尚清.
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RNA恒温扩增联合熔解曲线分析鉴定胞内分枝杆菌的应用研究
目的 建立RNA恒温扩增联合熔解曲线分析技术(RIARD-MCA)鉴定胞内分枝杆菌的方法,评估其应用效果.方法 以胞内分枝杆菌的16S rRNA的特异序列为检测靶标设计RNA探针和带有T7启动子的逆转录扩增引物,42 ℃恒温扩增实时检测后进行熔解曲线分析,对21种分枝杆菌标准株、5种非分枝杆菌和229株分枝杆菌临床分离株进行鉴别检测;同时以16S rRNA及hsp65基因PCR测序结果为金标准对照.结果 RIARD-MCA在21种分枝杆菌标准株及5种非分枝杆菌检测中只有胞内分枝杆菌阳性,其他阴性,与测序结果一致;在分枝杆菌临床分离株检测中,鉴定胞内分枝杆菌63株,其余为非胞内分枝杆菌,PCR测序为胞内分枝杆菌63株,其余166株为非胞内分枝杆菌,其灵敏度为100%(63/63),特异度为100%(166/166).结论 RIARD-MCA鉴定胞内分枝杆菌具有较高的灵敏度、特异度和准确性,且检测快速,有望作为一种新的胞内分枝杆菌临床分离株鉴定方法.
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2株胞内分枝杆菌临床分离株的鉴定
目的 联合应用多种分子生物学技术进行分枝杆菌菌种鉴定.方法 从经PNB、TCH鉴别培养基鉴定为结核分枝杆菌的临床分离菌株285株中选取6株,其中包括oxyR-ahpC基因间隔区检测时PCR产物分子量异常的2株和另外随机选择的PCR产物分子量正常者4株,采用H37Rv、鸟分枝杆菌95001和胞内分支杆菌95002做对照,PCR扩增oxyR-ahpC基因间隔区,对其产物进行测序和网上同源性(H37Rv、U18263、U71061)比对.同时,采用多位点PCR扩增和hsp65 PCR-限制性酶切片段长度多态性分析,从而判定分枝杆菌菌种类型.结果 经PNB、TCH鉴别培养基鉴定初步判定为结核分枝杆菌的285株临床分离株中2株临床菌株oxyR-ahpC基因间隔区PCR产物大小约为1 000bp,DNA序列与胞内分枝杆菌同源性极高,达99%,而与同片段序列结核分枝杆菌H37Rv的差异大,同源性为84%.多位点PCR指纹显示为非分枝结核杆菌,hsp65 PCR-RLFP/RFLP指纹与95002一致.结论 2株oxyR-ahpC基因间隔区PCR产物分子量异常的经PNB、TCH鉴别培养基鉴定为结核分枝杆菌的临床分离株确定为胞内分枝杆菌.多种分子生物学技术联合应用能够快速、简便、更准确地鉴定分枝杆菌菌种.
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表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术在结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌差异蛋白分析中的应用
目的 对比分析结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌菌体蛋白、分泌蛋白指纹图谱,评价表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术在结核病快速诊断中的价值.方法 结核分枝杆菌和胞内分枝杆菌标准菌株经BACTEC960仪培养30 d,灭活菌株,离心沉淀物提取菌体蛋白,上清液提取分泌蛋白.利用SELDI-TOF-MS进行蛋白质/多肽谱分析.结果 结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌菌体蛋白指纹图谱存在差异,有33个差异蛋白峰;结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌分泌蛋白指纹图谱存在差异,有51个差异蛋白峰;结核分枝杆菌有其特征性蛋白峰.结论 结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌菌体蛋白、分泌蛋白指纹图谱有明显的差异蛋白峰,应用SELDI-TOF-MS技术可以早期、快速、简便地诊断结核病.
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探讨胞内分枝杆菌型NTM肺病的临床与MSCT表现
目的 探讨胞内分枝杆菌非结核分枝杆菌(NTM)肺病的临床特点与CT征象.方法 回顾性分析37例经临床确诊的胞内分枝杆菌型NTM肺病患者的CT资料与电子病历,并对其临床及影像学表现进行分析.结果 37例患者常见的临床症状为咳嗽咳痰,其次为咯血和活动后气促,约1/3患者原有继发型肺结核病史,1/3伴有慢性基础性肺病.常见的CT表现为小叶中心结节即树芽征(97.3％),其次为支气管扩张(73.0％)、斑片状实变灶(54.1％)和纤维条索灶(43.2％),较少见的征象为厚壁空洞,仅见2个厚壁空洞病灶,且均位于右上肺.在合并支气管扩张患者中,右中叶和左舌叶出现支气管扩张的概率高,分别达到56.8％和51.4％.纵隔和肺门淋巴结肿大和胸腔积液并不常见.结论 胞内分枝杆菌型NTM肺病约1/3伴有慢性基础性肺病,主要CT表现为树芽征、支气管扩张、实变、结节和薄壁空洞,且支气管扩张好发于右中叶和左舌叶.
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胞内分枝杆菌HSP65基因克隆、分析及其原核表达的研究
目的 克隆胞内分枝杆菌HSP 65基因,对其进行生物信息学分析与原核表达.方法 应用巢式PCR克隆胞内分枝杆菌HSP 65基因,利用在线分析软件对其进行生物信息学分析.构建原核表达载体pET 15b-HSP 65并进行诱导表达.结果 胞内分枝杆菌HSP 65基因完整ORF基因全长1 626 bp,编码541个氨基酸.HSP 65蛋白为酸性、亲水性蛋白质,亚细胞定位主要存在于细胞质,蛋白二级结构以α-螺旋、无规则卷曲及β-折叠为主.使用同源建模法预测了HSP 65基因编码蛋白三维立体结构.试验构建pET 15b-HSP 65原核表达载体并成功表达.结论 成功克隆胞内分枝杆菌HSP 65基因,并对HSP 65蛋白进行了生物信息学分析及原核表达.
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肾移植患者胞内分枝杆菌感染的分子诊断
目的 探讨肾移植患者非结核分枝杆菌(NTM)病临床特点及分子诊断.方法 回顾性分析2011年4月1例皮肤软组织NTM感染的肾移植患者的临床特点,并以其病变组织DNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增hsp65基因和rpoB基因序列,测序比对鉴定其NTM菌种.结合文献复习NTM病及分析分子生物学技术在移植患者NTM感染诊断中的作用.结果 该肾移植患者系皮肤软组织胞内分枝杆菌感染,临床特点与结核病极其相似,难以进行鉴别诊断.PCR扩增、测序的结果显示hsp65产物和rpoB产物序列与胞内分枝杆菌GeneBank中FJ643456.1及CP003324.1序列100％一致.结论 NTM病的临床表现与结核病相似,分子生物学方法鉴定菌种对移植患者胞内分枝杆菌病的诊断有帮助.
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胞内分枝杆菌肺病的CT表现
目的 探讨胞内分枝杆菌肺病的CT特点.方法 收集在本院经临床确诊的37例胞内分枝杆菌肺病患者,回顾性分析其影像学表现.结果 胞内分枝杆菌肺病主要的CT征象为小叶中心结节(97.3%)、支气管扩张(73.0%)和肺斑片状病灶(54.1%),其次为纤维条索灶(43.2%)、≥1 cm结节灶(35.1%)、薄壁空洞(29.7%),而厚壁空洞和胸腔积液却不常见.较为特征性的CT征象为发生于右中叶和(或)左舌叶支气管扩张伴周围小叶中心结节.结论 胞内分枝杆菌肺病的CT表现具有一定的特征性,CT检查对该病的诊断具有重要价值.
