虫草菌酸性胞外多糖的抗氧化作用

目的:研究虫草菌酸性胞外多糖(EPS-A)的抗氧化作用.方法:体外建立大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞氧化损伤模型,测定EPS-A对细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响;采用小鼠移植性肝癌模型,测定不同剂量EPS-A对荷瘤小鼠肝、脑和血清中MDA水平及SOD活力的影响.结果:EPS-A显著提高体外培养细胞的抗H_2O_2氧化能力;能逆转因移植肿瘤而引起的小鼠组织中MDA的升高和SOD的降低,同时显著抑制肿瘤生长.结论:EPS-A具有显著的抗氧化能力.

测定土茯苓中二氢黄酮醇类含量的UPLC法和HPLC法的建立与比较

目的:建立与比较土茯苓中二氢黄酮醇类成分的两种含量测定方法,为完善土茯苓的质量标准奠定基础.方法:分别用超高效液相色谱(UPLC)和高效液相色谱(HPLC)对来自15个不同产地的土茯苓中4种二氢黄酮醇类成分进行含量测定,并比较两种方法的分离时间、线性、灵敏度、精密度、重复性、加样回收率和样品测定结果.结果:与HPLC法比较,UPLC的分析时间短、灵敏度高,两种方法在线性范围、精密度、准确度方面均无显著差异.结论:所建立的HPLC法简便可靠,可用于土茯苓的质量评价;UPLC法节省了分析时间和溶剂的消耗,是一种值得推广的、更为快速、准确的中药质量评价方法.

硫酸沙丁胺醇/四氟乙烷气雾剂的处方筛选和大鼠呼吸道吸收研究

目的:研究以四氟乙烷(HFA-134a)为抛射剂的硫酸沙丁胺醇定量吸入气雾剂(MDI)的处方组成和大鼠吸入后呼吸道的吸收情况.方法:通过溶解度的测定和正交实验设计筛选气雾剂处方;采用大鼠鼻腔插管吸入法给予气雾剂;以荧光HPLC检测血药浓度,并对实验数据进行药代动力学研究.结果:筛选出稳定、均匀的非氟里昂MDI处方;建立了硫酸沙丁胺醇MDI的体内分析法;大鼠吸入硫酸沙丁胺醇/HFA-134a MDI后,对国外对照品和氟里昂处方零阶矩比值分别为109.86%和135.54%.结论:初步认定HFA-134a可作为氟里昂MDI的替代抛射剂,大鼠吸入吸收效果优于氟里昂处方,与国外市售HFA-134a产品相当.

应激上调心肌内皮素受体和对氯苄基四氢小檗碱CPU86017及其RS异构体的干预作用

目的:研究异丙肾上腺素诱导的心肌细胞中内皮素(ET)受体变化情况;研究对氯苄基四氢小檗碱CPU86017及其RS异构体对应激上调心肌内皮素受体的干预作用.方法:原代培养乳鼠心肌细胞,加入异丙肾上腺素造模,给予普萘洛尔、CPU86017及其RS异构体干预.结果:异丙肾上腺素同时诱导ET_A和ET_B上调,且ET_B比ET_A更明显.普萘洛尔、CPU86017及其RS异构进行干预后,均使ET受体异常表达改善,并呈剂量相关性.在高剂量(10 μmol/L)下,RS异构体效应较CPU86017更显著.结论:CPU86017和RS异构体的心血管效应与其抑制ET_A和ET_B过度表达有关.

Endostar体外稳定性研究

目的:比较重组人内皮抑素恩度~(TM)(Endostar~(TM))和毕赤酵母表达的内皮抑素(endostatin)在不同温度及不同pH条件下的稳定性,通过检测对内皮细胞的增殖抑制比较Endostar在4 ℃和37℃下的生物活性.方法:将Endostar和endostatin于4 ℃保存或37℃放置96 h后进行不同条件的聚丙烯酰胺凝胶电泳,比较Endostar和endostatin之间以及它们在不同温度放置后的电泳行为,采用兔源多克隆抗体进行Western blot验证.同时检测在两种温度下的Endostar对于人脐静脉内皮细胞HUVEC细胞增殖的抑制作用.结果:在还原性电泳中Endostar和endostatin在20 kD左右处均只出现一条带.在3种酸性非还原电泳条件下,endostatin出现明显的"smear"现象,无法观察到主要条带,Endostar在酸性不连续非还原电泳条件下只出现一条带,而在两种连续非还原电泳中虽然也出现"smear"现象,但是主要条带仍然存在,Endostar和en-dostatin在37℃放置96 h后与它们保存在4℃的样品相比,在各种电泳条件下有相似的电泳行为,Western blot验证了相应电泳的结果.在两种温度下的Endostar对于HUVEC的增殖抑制作用基本相同.结论:Endostar和endostatin具有相似的热稳定性,但在酸性条件下Endostar较endostatin更为稳定.

高脂高糖饲料喂养结合慢性应激促进大鼠胰岛素抵抗

目的:考察高脂高糖饲料喂养结合慢性应激对大鼠胰岛素抵抗的影响.方法:雄性大鼠分为普通饲料组、高脂高糖饲料(HFSD)组、普通饲料结合慢性应激(CS)组和高脂高糖饲料结合慢性应激(HFSD+CS)组.实验持续10周后,测量血脂、血糖及血胰岛素,高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验检测胰岛素抵抗,并检测肝细胞过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)mRNA表达.结果:HFSD组、CS组和HFSD+CS组均表现胰岛素抵抗,且HFSD+CS组抵抗作用明显.血脂异常、高血糖、高胰岛素血症、肝细胞PPAR-α mRNA表达下降在HFSD+CS组中也明显.慢性应激结合高脂高糖饲料对胰岛素抵抗程度、高血糖及高游离脂肪酸状态产生明显的交互作用.结论:慢性应激结合高脂高糖饲料喂养可起协同作用,促进胰岛素抵抗的发生,其产生原因主要与高血清游离脂肪酸状态有关.

α-芳基-3,5-二甲氧基苯丙烯酰胺的合成及抗炎活性

目的:寻找高效低毒的非甾体抗炎药.方法:将具有抗炎活性的2-(2,4-二氯苯基)-3-(3,5-二甲氧基苯基)丙烯酸(Ⅰ)转化为酰胺衍生物,应用二甲苯致小鼠耳肿胀模型评价其抗炎活性.结果:合成了12个新化合物(Ⅱ_(1-12)),其结构经IR、~1H NMR和高分辨MS确证.其中化合物Ⅱ_3与阴性对照CMC-Na相比呈现显著的抗炎活性(P<0.01),与阳性对照阿司匹林相比有较强的抗炎活性(P<0.05).结论:化合物Ⅱ_3值得进一步研究.

高延展性聚合物水分散体的制备和特性研究

目的:制备新型高延展性聚合物水分散体,用于延展性缓释包衣,并对其理化性质和缓释包衣性能进行研究.方法:采用乳液聚合法,制备聚合物水分散体;研究其理化性质、成膜能力;考察其衣膜的机械性质和释药行为.结果:自制聚合物水分散体(甲基丙烯酸甲酯.丙烯酸乙酯,1:2)具有适宜的理化性质、成膜能力和延展性,无需增塑剂和加热老化便能形成高延展性、低黏性的衣膜.制得的阿替洛尔缓释微丸4 h释药50%以上,10 h释药80%以上,释药行为在压片前后无明显变化.结论:自制高延展性聚合物水分散体适于延展性缓释包衣,可用于制备缓释微丸片.

银杏叶中一个新的萜内酯类成分

目的:研究银杏(Ginkgo biloba L.)叶中新的化学成分.方法:运用柱色谱方法分离纯化.利用UV、IR、MS、~1H NMR、~(13)C NMR等色谱技术鉴定化合物结构.结果:从银杏叶中分离鉴定出1个新化合物:1,7,10-三羟基-3,14-去氢银杏内酯(Ⅱ)和1个已知化合物:银杏内酯L(ginkgolide L)(Ⅰ).结论:化合物Ⅱ为新化合物,命名为银杏内酯N(ginkgolide N);化合物Ⅰ的光谱数据为首次报道.

衍生化LC-MS法测定人体内佐芬普利及其活性代谢物以及药代动力学研究

目的:建立衍生化LC-MS法同时测定佐芬普利及其活性代谢物佐芬普利拉的人体血药浓度,研究健康中国受试者单次和多次口服佐芬普利钙片后,佐芬普利和佐芬普利拉的药代动力学特征.方法:10名健康受试者先分别单次口服15,30和60 mg受试制剂,然后连续6 d多次口服30 mg受试制剂,以对溴苯甲酰甲基溴为衍生化试剂,采用衍生化LC-MS法同时测定人血浆中佐芬普利及其活性代谢物佐芬普利拉的浓度,并计算二者的药代动力学参数.结果:健康受试者分别单次口服佐芬普利片后,3个剂量组的佐芬普利和佐芬普利拉的半衰期相近;在15～60 mg剂量范围内,佐芬普利和佐芬普利拉的AUC_(0-24h)和c_(max)均与剂量呈良好的线性关系,且均不存在性别差异.多剂量(每日1次,每次30 mg)连续给药6 d后,佐芬普利的平均稳态血药浓度c_(av)为(5.07±1.06)ng/mL,血药浓度波动度DF为14.26±2.94,蓄积常数为0.94±0.31.佐芬普利拉的c_(av)为(40.31±5.40)ng/mL,DF为11.61±4.68,蓄积常数为0.83±0.13.结论:佐芬普利及活性代谢物佐芬普利拉在中国人体内均呈线性药代动力学特征,多次给药后在体内均无蓄积;二者在中国人体内的药代动力学特征和代谢与欧洲人之间存在种族差异.

LC-MS/MS法研究黄芩素及其主要代谢物在大鼠体内的组织分布与排泄

目的:研究黄芩素及其主要代谢物黄芩苷在大鼠体内组织分布及排泄.方法:液相色谱分离采用C_(18)柱(150mm ×6.0 mm,5 μm),甲醇-10 mmol/L醋酸铵溶液(含0.5%甲酸)(70:30)为流动相;质谱检测采用ESI离子源,正离子SRM方式检测.生物样品处理采用加入磷酸盐缓冲液,以甲醇-乙腈(1:1)提取,上清液以氮气流吹干,流动相复溶进样分析.结果:大鼠灌服黄芩素,原形药物及其主要代谢物在大鼠体内分布在20～40 min及10 h呈现双峰现象,与血药浓度曲线规律一致.给药20 min后肾组织中代谢物浓度显著高于原形,胃、肝及肠中原形药物浓度高于代谢物,肺中两者接近.排泄研究显示,大鼠胆汁与尿液中代谢物浓度远高于原形药物,而在粪便中以原形药物为主.结论:黄芩素在大鼠体内吸收迅速,20～40 min迅速分布至各主要脏器,并发生生物转化.

Raltegravir的合成工艺研究

目的:研究治疗获得性免疫缺陷综合症药物raltegravir的合成工艺.方法:经过成氨基腈,苄氧羰基保护氨基,从腈成氨肟,环合成二羟基嘧啶,氮甲基化,微波催化成酰胺,脱保护,再经酰化缩合成酰胺等8步反应制备rahegravir.结果:经过对合成工艺的改进得到了目标产物,其结构经~1H NMR,~(13)C NMR,LR-MS和HR-MS确证,总收率为12.0%.结论:此方法原料易得、操作简单、成本低.

重组NuBCP-9/Tumstatin(74-98)融合多肽的构建、表达和活性研究

目的:构建抗肿瘤融合肽NuBCP-9/Tumstatin(74-98)(简称NT)原核表达载体并转化大肠杆菌BL21(DE3),获得具有多靶点抗肿瘤活性的融合肽.方法:将抗肿瘤小肽NuBCP-9和Tumstatin(74-98)用柔性肽(G_4S)_3连接,根据大肠杆菌偏爱密码子,采用重叠延伸PCR技术扩增融合肽序列,并将其克隆至pET32a(+)质粒中,构建pET32a-NT表达载体,转化大肠杆菌B121(DE3),诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白表达量并优化表达条件,经亲和色谱、酶切和超滤等方法分离、纯化得到重组融合肽;采用MTT法测定融合肽对人脐静脉内皮细胞ECV304和人肺癌细胞A549的抑制活性影响.结果:成功构建了重组表达载体pET32a-NT,优化表达条件获得了25%的可溶性蛋白表达量.活性研究表明,在融合肽终浓度为20μmol/L时,对ECV304和A549的抑制率分别为60.8%和65.2%.结论:融合肽初步表现出抗肿瘤活性,为进一步药效药理学研究奠定了基础.

双氯芬酸钠层状双金属氢氧化物纳米复合物的制备及性质研究

目的:制备双氯芬酸钠-层状双金属氢氧化物(DS-LDH)纳米复合物并考察其性质.方法:采用共沉淀法将双氯芬酸钠插入层状双金属氢氧化物(LDH)层间.通过激光粒度仪、XRD、IR、TEM等手段对纳米复合物进行表征.采用桨法考察了复合物在不同介质中的释药特征.通过二甲苯致小鼠耳肿胀实验比较了DS和DS-LDH的抗炎活性.结果:DS阴离子可取代层间的酸根离子形成DS-LDH纳米复合物,具有一定缓释特性.Zn-Al-NO_3-LDH具有近中性pH,更适合作为眼用制剂的药物载体.DS与LDH形成纳米复合物后,不影响其抗炎活性.结论:层状双金属氢氧化物可以用作为阴离子药物的缓释载体,成功制备的新型的双氯芬酸钠-无机纳米复合物具有潜在的临床应用价值.

栀子甘草豉汤的LC-PDA-MS/MS分析及抗抑郁作用研究

目的:建立栀子甘草豉汤的LC-PDA-MS/MS分析方法,研究该传统经方的化学组成;初步探讨该经方的抗抑郁作用.方法:通过LC-PDA-MS/MS系统分离分析化合物,色谱柱为ODS C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为1%乙酸水溶液和甲醇;梯度洗脱;利用ESI-MS/MS技术和UV特征光谱归属主要色谱峰对应的化合物;采用小鼠悬尾实验(TST)和强迫游泳实验(FST)模型,考察栀子甘草豉汤的抗抑郁作用.结果:有效分离了栀子甘草豉汤中的成分,鉴定出其中10个化合物,这些成分分别属于环烯醚萜苷类、黄酮类和三萜皂苷类;首次发现该经方在小鼠悬尾和强迫游泳模型中具有抗抑郁作用.结论:LC-PDA-MS/MS方法能有效分离和鉴定栀子甘草豉汤中的主要化学成分;栀子甘草豉汤具有抗抑郁作用,其药效物质成分与已识译出的化学成分群之间的关系有待进一步探讨.

地塞米松纳米立方液晶眼用制剂家兔房水药代动力学

目的:以地塞米松(DEX)为模型药物制备眼用纳米立方液晶眼用制剂,并对其家兔房水药代动力学进行了考察.方法:采用高压均质法制备DEX纳米立方液晶,激光粒度测定仪测定粒径,低温透射电镜观察粒子的微观形态;Draize评分法评价制剂的眼部刺激性;采用微渗析法评价家兔的房水药代动力学.结果:DEX纳米立方液晶平均粒径约200 nm,低温透射电镜可见其清晰的立方体结构.Draize评分结果显示,该制剂对家兔眼部无刺激性.房水药代动力学结果显示,DEX纳米立方液晶制剂组AUC_(0→240),c_(max)均显著高于市售溶液剂组,且处方1(F1,10%脂质含量)和处方2(F2,20%脂质含量)的AUC_(0→240)分别是市售溶液剂的1.8倍和2.9倍(P<0.05).结论:DEX纳米立方液晶眼用制剂能够显著提高房水药物浓度,改善药物在眼部组织的生物利用度.

喷雾干燥乳剂提高一氧化氮供体药物ZLR-8大鼠在体肠吸收的研究

目的:考察难溶性一氧化氮供体药物ZLR-8大鼠在体肠吸收特征及喷雾干燥乳剂对ZLR-8肠吸收的促进作用.方法:采用大鼠在体小肠回流装置,以UV法和HPLC法分别测定酚红和ZLR-8的含量,计算ZLR-8在各肠段的吸收速率常数,考察ZLR-8浓度、肠循环液pH对肠吸收的影响,并对ZLR-8混悬液与ZLR-8喷雾干燥乳剂的肠吸收进行比较.结果:以喷雾干燥乳剂给药,大鼠十二指肠、空肠、回肠、结肠1 h后对ZLR-8的吸收百分率分别为(23.54±1.40)%,(15.95±0.09)%,(12.30±0.74)%,(3.98±0.12)%,吸收速率常数分别为(0.248±0.046 0),(0.143±0.036 0),(0.069 2±0.001 3),(0.020 8±0.000 4)h~(-1),各肠段吸收特性有极显著性差异.ZLR-8浓度对吸收速率常数无显著影响,但吸收量与浓度线性相关;肠循环液pH显著影响肠吸收,ZLR-8在pH 5.4～7.4时有较好吸收;与混悬液相比,喷雾干燥乳剂极显著性增加大鼠肠吸收.结论:ZLR-8混悬液仅在小肠有微弱吸收,在其他肠段无明显吸收;喷雾干燥乳剂在各肠段均有明显吸收,吸收机制为被动扩散,极显著性地提高了ZLR-8的肠吸收.

基于分子片段的药物发现

药物是由若干个分子片段相互连接所构成的,分子片段具有功能性和结构性两大特点.功能性分子片段包含药物产生生物活性所必须的结构单元(简称药效基团);而结构性分子片段则是将功能性分子片段连接起来从而形成特定结构的分子骨架.药物分子结构复杂多样,但如果将其分子骨架进行分解,则会发现药物分子通常包含相似的分子片段,这些片段分子具有较为简单的分子结构,较低的相对分子质量和脂水分配系数.对片段分子进行分类和生物活性筛选,通过分子的扩增、融合以及置换连接方式等手段发现先导化合物的方法称为基于分子片段的药物发现方法.这种方法改进了传统的基于结构以及基于高通量筛选的药物发现方法,控制了先导化合物的相对分子质量和类药性特征,提高了新药研究的成功率.本文结合先导物发现实例对基于分子片段的药物发现方法的内容,研究思路以及片段分子的结构优化方法进行了综述.

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