ALM-ASA法鉴别人参和西洋参ITS及5.8s基因上单核苷酸多态性位点

目的:查找并发现参类药材的单核苷酸多态性(SNP)位点,利用SNP的准确测定来鉴别人参和西洋参.方法:根据ITS及5.8s基因上人参和西洋参的SNP位点设计特异性引物,利用适配器连接介导的等位基因特异性扩增法(ALM-ASA)进行检测.结果:PCR反应体系优化后,能在同一反应中同时鉴别人参、西洋参.根据凝胶电泳中扩增片段的大小判断SNP的类型,出现294 bp条带的为人参,111 bp条带的为西洋参.结论:ALM-ASA法极大提高了PCR反应的特异性,结果准确,可同时测定多个SNP位点.采用该方法测定ITS及5.8s基因上的SNP位点能有效地对参类品种进行鉴别和质量控制.

LC-APCI-MS/MS法测定大鼠尿液和胆汁中的BAPTA-AM浓度

目的:建立液相色谱-大气压化学离子化-串联质谱联用(LC-APCI-MS/MS)法测定大鼠尿液和胆汁中的BAP-TA-AM浓度.方法:尿液和胆汁样品经乙腈沉淀去蛋白,离心后取上清液进行LC-APCI-MS/MS分析.色谱柱:Zorbax C18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相:含0.5%乙酸和75%甲醇的水溶液;流速:1mI/min.大气压化学离子化(APCI)离子源,以选择离子反应检测(SRM)方式进行检测.用于定量分析的检测离子对分别为:m/z 765.15→647.25(BAPTA-AM)和m/z 419.10→343.05(内标,尼莫地平).结果:尿液和胆汁中BAPTA-AM在0.25～50nr/mL范围内线性关系良好,回收率大于90%,定量下限为0.25ng/mL,批内与批间RSD均小于10%.结论:建立的LC-APCI-MS/MS法符合生物样本测定要求,可用于大鼠静脉给予BAPTA-AM脂质体后,大鼠尿液和胆汁中BAPTA-AM浓度的测定.

高相对分子质量鼠尾藻多酚的抗凝血活性及对血小板内钙水平的影响

目的:研究高相对分子质量鼠尾藻多酚(STI-3, Mr1.0×105)的抗凝血活性及其对血小板内钙水平的影响.方法:Wistar大鼠灌胃给药测定STI-3对活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)的影响;以新西兰白兔为实验动物制备洗涤血小板并应用流式细胞方法测定血小板内钙离子浓度.结果:STI-3(20mg/kg)在体内显著延长APTT(P<0.05)、PT(P<0.O1)和TT(P<0.O1),与相同剂量阿司匹林效果相近;与正常对照组相比,在二磷酸腺苷(ADP)刺激后1.0mg/mL和2.0mg/mL STI-3两个剂量组血小板内钙离子浓度增加量(△C)均呈现显著性降低(P<0.05),且其抑制效果与1.0mg/mL阿司匹林相近.结论:STI-3可同时干扰内源性、外源性凝血因子的活性,具有显著的抗凝血活性;可显著减少免洗涤血小板内钙释放及外钙内流.提示STI-3的抗凝血活性机制可能与其降低血小板内钙离子浓度密切相关.

体外模型研究P-糖蛋白介导的拉莫三嗪在血脑屏障上的转运

目的:研究药物转运蛋白P-糖蛋白(P-gP)是否介导拉莫三嗪(LTG)在血脑屏障上的转运过程.方法:通过原代培养的大鼠脑微血管内皮细胞模型进行LTG摄取和外排实验,HPLC法测定单用LTG和合用能量抑制剂叠氮化钠(NaN3),P-gP调节剂环孢素A(CsA)、维拉帕米(Ver)及丙磺舒(PBD)时各组细胞内LTG的量.结果:LTG细胞摄取过程具有时间和浓度依赖性的特点.合用NaN3、CsA、Ver和PBD,均能显著增加LTG稳态摄取量,降低LTG外排量.结论:P-gp参与了LTG在血脑屏障上的转运过程.

顺铂植入剂在蛋白变性剂醋酸中的行为研究

目的:研究顺铂植入剂与蛋白变性剂70%醋酸共存时的相容性以及顺铂植入剂的释药规律.方法:在显微镜下观察顺铂植入剂在蛋白变性剂70%醋酸中的形态变化.用HPLC法测定顺铂植入剂体外释药规律;测定顺铂植入剂植入小鼠体内后的释药规律.结果:顺铂植入剂在70%醋酸中仅发生表面隆起、龟裂,植入剂的辅料被腐蚀.顺铂植入剂在70%醋酸中的释药和植入小鼠体内的释药均符合一级释药方程,但在体外释药较快.结论:顺铂植入剂与70%醋酸具有相容性,可以配伍使用.

CS-HPLC-ESI-MSn法分析复方丹参滴丸的代谢指纹图谱

目的:建立舌下含服复方丹参滴丸后人血浆中活性成分的代谢特征指纹图谱.方法:在不同时间点采集人血浆样品,通过微血管张力实验测试血管扩张效果,采用柱切换系统对样品进行富集纯化.结果:1.5h采集的血浆扩张血管能力强,在色谱图中出现5个新的色谱峰.结论:色谱图中5个特征色谱峰与复方丹参滴丸的药效物质基础关系密切.

微波辐射合成1,4-二酮化合物

目的:研究在微波辐射下经Stetter反应合成1,4-二酮化合物的新方法.方法:以β-酮酸酯为原料,经胺解、与芳基甲醛缩合得α-芳基亚甲基-β-酮酰胺,在微波辐射下,对氟苯甲醛与α-芳基亚甲基-β-酮酰胺经Stetter反应加成得2-异丁酰基(或环丙甲酰基)-3,4-二芳基-4-氧代丁酰胺类1,4-酮化合物.结果:设计并合成了10个1,4-二酮化合物,其结构经IR、1H NMR和MS确证.结论:微波合成技术应用于Stetter反应合成1,4-二酮化合物方法可行,比传统合成方法反应时间短且收率更高.

PLA-mPEG的合成和多西紫杉醇聚合物胶束的制备

目的:制备多西紫杉醇的聚合物胶束,提高其在水中的溶解度.方法:用开环反应合成不同比例的聚乳酸-聚乙二醇单甲醚(PLA-mPEG)共聚物,通过DSC、 IR、 1H NMR确证其结构,荧光法测定其临界胶束浓度(CMC).以溶剂蒸发-固体熔融分散法制备多西紫杉醇聚合物胶束,正交设计优化其制备工艺.HPLC测定其载药量、包封率,激光粒度仪测定其粒径及分布,IR确证含药胶束的形成.结果:采用比例为6/4的PLA-mPEG共聚物为载体,以乙腈为有机溶剂制备,所得胶束平均粒径为47.0nm,载药量为27.3%,包封率为97.4%,且IR确证药物已被包封在胶束中,而非物理混合.结论:PLA-mPEG聚合物胶束能显著提高多西紫杉醇在水中的溶解度.

羧甲基壳聚糖修饰阿霉素纳米脂质体的pH敏感性研究

目的:研究一种由羧甲基壳聚糖修饰的pH敏感阿霉素纳米脂质体,并考察羧甲基壳聚糖的分子参数对其敏感性的影响.方法:采用逆相蒸发-pH梯度法制备羧甲基壳聚糖修饰的阿霉素脂质体;用反透析-UV分光光度法测定包封率;用TEM和激光粒度仪分别考察脂质体形态与粒径分布;由药物渗漏实验考察pH敏感性.并研究羧甲基壳聚糖取代度、相对分子质量和质量分数对脂质体pH敏感性的影响.结果:所制纳米脂质体的包封率达87%,形态圆整,粒径分布为(74.7±11.5)nm;羧甲基壳聚糖的羧甲基取代度、相对分子质量、质量分数对修饰的纳米脂质体药物渗漏有不同程度的影响.结论:逆相蒸发-pH梯度法可成功制备羧甲基壳聚糖修饰pH敏阿霉素纳米脂质体;调变羧甲基壳聚糖的取代度、相对分子质量和质量分数均可实现羧甲基壳聚糖修饰阿霉素纳米脂质体的pH敏智能控释.

蜂毒素脂质体质量评价方法的研究

目的:考察蜂毒素脂质体包封率的测定方法和游离药物的含量测定方法,对蜂毒素脂质体进行质量评价.方法:对于游离蜂毒素的含量测定,比较了单波长考马斯亮蓝法、双波长考马斯亮蓝法、福林-酚法、二喹啉甲酸法及高效液相色谱法等5种含量测定方法.对于蜂毒素脂质体包封率测定,筛选了透析法及超滤-离心法.结果:在吸收度及线性均良好的情况下,双波长考马斯亮蓝法可用于测定蜂毒素脂质体包封率时游离蜂毒素的含量,检测范围为0.5～25.0μg/mL,范围内线性良好,相关系数为0.9996.脂质体包封率测定采用超滤离心法,游离药物的平均回收率在95.75%～98.30%之间,脂质体不能透过截留相对分子质量为105的超滤膜.采用超滤离心法结合双波长考马斯亮蓝法测定3批蜂毒素脂质体的包封率为(91.45±0.83)%,RSD小于1%.结论:该方法可用于蜂毒素脂质体的质量评价.

热毒宁注射液对人鼻病毒(N36)的体外抑制作用

目的:研究中草药热毒宁注射液对人鼻病毒(HRV, N36)的抑制作用.方法:以利巴韦林为阳性对照药,采用细胞培养技术及MTT比色法,观察在热毒宁干预下,人胚胎上皮细胞的病变效应(CPE)及吸收度值(A),计算各组细胞的病毒抑制率.比较不同药物剂量及不同给药方式下热毒宁对HRV的抑制作用效果.结果:热毒宁注射液半数中毒浓度TC50为5.873g/L.预防、直接灭活及治疗给药方式下,CPE法测定的半数有效浓度EC50分别为0.576、0.836及0.640g/L,治疗指数(TI)分别为10.20、7.03及9.18; MTT法测定的EC50分别为0.551、2.310及1.230g/L, TI分别为10.66、2.54及4.78.结论:热毒宁对HRV (N36)有直接灭活及抑制增殖作用,对其感染靶细胞有阻断作用,且呈明显量效关系.热毒宁对HRV (N36)的抑制作用,以预防给药更明显.

丹参制剂中丹参水溶性成分的指纹对照法质量分析

目的:建立指纹对照测定法以及定性和定量相似性评价体系,研究丹参及其复方制剂中的丹参水溶性成分,并用于评价中药制剂整体质量.方法:采用Lichrospher ODS-2(250mm×4.6mm, 5μm)色谱柱,甲醇(A)-1.0%冰醋酸溶液(B)线性梯度程序洗脱:0min (25% A)～70min (75% A),流速为1.0mL/min,柱温30℃,检测波长254nm,建立丹参水溶性成分高效液相色谱指纹图谱.采用夹角余弦(Cosθ)法和相对欧氏距离(RED)法,分别从化学成分分布相似性和含量相似性两个方面评价不同丹参制剂与指纹对照品的相似程度.结果:丹参水溶性成分高效液相色谱指纹图谱中,以丹酚酸B为参照物峰,确定了16个指纹共有峰.不同厂家生产的丹参片剂定性相似度没有显著性差异,但定量相似度有较大差异.结论:高效液相色谱指纹图谱的同时定性和定量相似度分析可全面反映中药制剂的整体质量,可用于丹参制剂质量分析.

绿色荧光蛋白基因转染内皮前体细胞与肿瘤新生血管的关系

目的:了解骨髓来源的内皮前体细胞(endothelial progenitor ceils, EPCs)与肿瘤新生血管的关系.方法:通过分离、培养骨髓来源的EPCs,真核表达载体pcDNA3.1/GFP质粒以阳离子脂质体转染法将其导入EPCs,并检测其表达;建立小鼠Lewis肿瘤移植模型,回输基因修饰EPCs,免疫组织化学法观察肿瘤新生血管局部GFP表达情况并计数.结果:pcDNA3.1/GFP真核表达载体转染EPCs后,EPCs表达GFP片断.部分GFP标记的EPCs在肿瘤新生血管定位,计数结果提示约14.0%肿瘤新生血管内皮细胞来源于EPCs.结论:骨髓来源的EPCs参与肿瘤新生血管形成.

内皮细胞提取和高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用预测玄参中的活性成分

目的:应用内皮细胞提取和高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用(HPLC-ESI/TOF MS)预测玄参的活性成分.方法:应用内皮细胞作为靶细胞,中药提取液中的活性成分可选择性地与其结合,洗去未结合的成分,用HPLC-ESI/TOF MS对细胞解离液中的成分进行分析.结果:从玄参提取液中检测出6个可与内皮细胞结合的成分,其中3个鉴定为安格洛苷C (angoroside C)、肉桂酸(cinnamic acid)和哈巴俄苷(harpagoside).结论:细胞解离液中检测到的成分为玄参中与内皮细胞有结合作用的成分,本方法可用于预测中药中与内皮细胞相结合的活性成分.

糖基转移酶基因sisZ在大肠杆菌中的克隆与表达

目的:从西索霉素产生菌中克隆出表达西索米星的糖基转移酶基因sisZ.方法:采用PCR法从伊纽小单孢菌(Micromonospora inyoensis)的染色体扩增参与西索霉素生物合成的糖基转移酶基因sisZ,然后先后装载到克隆载体pUC18和表达载体pET-30a上.结果和结论:成功从伊纽小单孢菌扩增出参与西索霉素生物合成的糖基转移酶基因sisZ.其开放阅读框长1176bp,编码含391个氨基酸(41690 D)的多肽链,并在大肠杆菌E. coli BL21 (DE3)中实现表达.基因sisZ的碱基序列与gntZ (M. echinospora)的碱基序列的同源性高达94%.预测的SisZ蛋白序列与GntZ的同源性为98%.

尿液pH值变化对大鼠体内苯丙胺类兴奋剂药动学的影响

目的:研究尿液pH值对大鼠体内苯丙醇胺、伪麻黄碱和芬氟拉明药动学的影响.方法:大鼠随机分成3组,分别灌胃生理盐水、氯化铵和碳酸氢钠以使大鼠尿液pH呈正常、偏酸性或偏碱性状态;3组大鼠灌胃苯丙醇胺、伪麻黄碱和芬氟拉明后,用柱前衍生-HPLC法分别测定血浆中3种药物的浓度,估算相应的药动学参数并比较.结果:当尿液pH值降低时,苯丙醇胺、伪麻黄碱和芬氟拉明的吸收相血药浓度、Ka、cmax、lmax和Vd基本不变,但消除相血药浓度、t1/2、MRT、AUC0-∞显著减小,且CL/F明显增加.结论:苯丙醇胺、伪麻黄碱和芬氟拉明的吸收不受尿液酸碱度变化的影响,但随着尿液pH值的减小,其消除显著加快.

普瑞巴林衍生物的合成及镇痛活性

目的:研究普瑞巴林衍生物的合成及其镇痛活性.方法:由相应的苯甲酰氯与取代苯酚成酯,再通过Fries重排(或Fries重排同时脱甲基)合成不同的取代2-羟基二苯甲酮,然后与普瑞巴林缩合生成目标化合物;通过测定目标化合物对小鼠痛阈的影响,评价其镇痛活性.结果:合成的12个目标化合物Ⅳ1-12均未见文献报道,其结构经IR、1H NMR、ESIMS和元素分析确证.结论:初步药理活性筛选结果显示,化合物Ⅳ1、Ⅳ4和Ⅳ6有显著的镇痛作用,其中Ⅳ4的镇痛活性优于普瑞巴林.

肿瘤信号转导通路及相关药物研发的现状与展望(上)

随着对肿瘤细胞信号转导通路研究的不断深入,人们对肿瘤细胞内部迷乱的信号转导机制以及它们对肿瘤生长、凋亡、转移等的影响已越来越了解.寻找能对肿瘤细胞信号转导进行调控的化合物从而达到抗肿瘤目的,已经成为全球生物医药领域研究的热点之一.本文就肿瘤发展进程相关的信号转导通路及人为干预的新研究进展作一综述.

CYP3A和P-糖蛋白在药物肠首过效应中的协同作用

P-糖蛋白(P-gp)是一种ATP依赖型的药物外排转运体,限制相应底物在小肠的吸收;CYP3A是肠上皮细胞中的一种重要的代谢酶,广泛参与药物的代谢.许多药物既是P-gp的底物,又是CYP3A的底物,两者共同作用可使药物口服后的首过效应增加,吸收程度降低.另有一些药物是P-gp和CYP3A的共同抑制剂,与P-gp和CYP3A的底物共同服用后能促进底物的吸收.本文对近年来关于P-gp和CYP3A在药物肠吸收首过效应中协同作用的研究报道作一综述.

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日本苦苣菜的化学成分

目的:研究日本产草药苦苣菜(Sonchus oleraceus)的化学成分.方法:用有机溶剂提取,然后用硅胶柱色谱和制备型高效液相色谱法分离纯化.根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定其结构.结果与结论:从日本产的苦苣菜中首次分离鉴定了6种化合物:羽扇豆醇(lupeol, Ⅰ)、α-香树素(α-amyrin, Ⅱ)、β-香树素(β-amyrin, Ⅲ)、乌索酸(ursonic acid, Ⅳ)、齐墩果酸(oleanolic acid, Ⅴ)和桦木酸(betulinic acid, Ⅵ).

HPLC法测定盐酸非那嗪奈原料药含量及有关物质

目的:建立测定盐酸非那嗪奈原料药的含量及其有关物质的HPLC法,为盐酸非那嗪奈原料药制定质量控制标准.方法:采用Waters Spherisorb苯基柱(250mm×4.6mm, 5μm), 0.01mol/L磷酸氢二铵和0.01mol/L五水合氢氧化四甲基铵缓冲液(磷酸调pH至3.0)-甲醇-乙腈(1:2:4)为流动相;检测波长为254nm;柱温30℃;流速1.0mL/min.结果:主峰能与相邻杂质峰较好分离,盐酸非那嗪奈的浓度在1.0～200μg/mL范围内线性关系良好,r为0.9999.结论:该法简便、准确、专属性好,可用于盐酸非那嗪奈原料药的含量及有关物质的测定.

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