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响应面法优化连翘中桦木酸超声辅助提取工艺
目的:应用响应面法优化超声辅助提取连翘中桦木酸的工艺条件.方法:在单因素试验基础上,采用Box-Behnken试验设计和响应面分析法考察乙醇体积分数、提取温度、液固比对桦木酸提取率的影响.HPLC测定桦木酸含量,Thermo Hypersil GOLD AQ-C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm,5μm),流动相乙腈-水(9∶1),流速1.2 mL· min-1,柱温25℃,进样量20μL,检测波长210 nm.结果:佳超声提取工艺为乙醇体积分数80％,提取温度37℃,液固比32 mL·g-1,桦木酸提取率(4.28±0.05) mg·g-1,与模型预测值(4.30 mg·g-1)基本一致.结论:该工艺合理、可靠,有效成分提取率高.
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桦木酸对人肝癌HepG2肿瘤干细胞增殖的影响
目的：观察桦木酸（betulinic acid，BA）对人肝癌HepG2肿瘤干细胞增殖的影响，并从细胞生长周期和细胞凋亡两方面初步探讨其抗肝癌的作用机制。方法体外培养人肝癌HepG2肿瘤干细胞并证明其自我更新能力。CCK-8法检测40、20、10、5、2.5、1.25μmol/L BA作用人肝癌HepG2肿瘤干细胞24、48 h的细胞活力；40、20、10、5μmol/L BA作用人肝癌HepG2肿瘤干细胞48 h，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率。结果 BA对人肝癌HepG2肿瘤干细胞增殖有明显的抑制作用，并呈一定的量-效关系；BA能明显影响肿瘤干细胞周期，诱导肿瘤干细胞凋亡，40μmol/L BA明显阻滞细胞周期于S期，且细胞凋亡率达到10.86%。结论 BA 对人肝癌 HepG2肿瘤干细胞增殖具有明显的抑制作用，其可能通过影响肿瘤干细胞周期及诱导肿瘤干细胞凋亡而发挥作用。
关键词： 桦木酸 石见穿 人肝癌HepG2细胞 肿瘤干细胞 细胞凋亡 -
RP-HPLC测定大叶紫珠中桦木酸的含量
目的:建立云南民间常用药大叶紫珠中桦木酸的含量测定方法.方法:采用Kromasil-C18色谱柱(4.6mm×200 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液(63∶37)为流动相,205 nm为检测波长.结果:大叶紫珠中桦木酸与其他成分能得到很好的分离,考察3个不同来源的大叶紫珠叶中桦木酸的含量,不同来源桦木酸含量差异较大,其中云南大叶紫珠叶中桦木酸含量高.测定线性范围为0.016 6～0.332 mg·mL-1,r=0.999 8,平均回收率为98.5%.结论:该法便捷、灵敏、准确,重复性好,可以控制该药材的质量.
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桦木酸微乳的组成研究
目的 研究桦木酸微乳的配方组成,并评价其质量.方法 通过滴定法绘制三元相图,筛选微乳配方组成;建立桦木酸的HPLC测定法;考察微乳对桦木酸的增溶作用,及室温、40℃、光照条件下放置10d的稳定性.结果 Cremophor RH 40和Tween80均可形成微乳,随着Km(表面活性剂/乙醇的重量比)的增大,微乳区也增大,油相十四酸异丙酯和十六酸异丙酯对微乳区的影响不大,微乳在室温、40℃和以及光照的条件下一直呈澄清透明状态,说明微乳在这些条件下稳定.结论 优选的佳配方组成为Tween80-乙醇-十四酸异丙酯-水的比例为5:5:3:8.6.
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地胆草三萜成分的研究
目的 分离鉴定地胆草的化学成分,为PC-12细胞活性筛选提供样品.方法 用体积分数80%工业酒精提取,硅胶柱色谱分离纯化,根据理化性质和光谱分析确定结构.结果 分得8个三萜类成分,分别为无羁萜酮(friedlin,E-6),表无羁萜醇(epifriedlinol,E-7),羽扇豆醇(lupeol,E-8),羽扇豆醇乙酸酯(lupeol acetate,E-9),乌苏酸(ursolic acid,E-10),乌苏-12-烯-3β-十七酸酯(ursa-12-ene-3β-heptadecanoate,E-11),桦木酸(betulinic acid,E-12),30-羟基羽扇豆醇(30-hydroxylupeol,E-13).结论 化合物E-11为一个新的天然产物;化合物E-6,E-10,E-12,E-13为首次从该属植物中得到.
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青蒿素和桦木酸阻断脂多糖诱导小鼠血管新生及组织增殖
目的 揭示细菌脂多糖(LPS)诱发小鼠肿瘤样增殖中血管新生及组织增殖的病理机制及青蒿素和桦木酸阻断肿瘤样增殖的药理机制.方法 利用脂多糖或含脂多糖的完全弗氏佐剂(CFA)建立小鼠皮下组织及关节滑膜肿瘤样增殖模型,在形态学特征(炎症分级)描述及组织化学指标(血管及组织增殖、炎性细胞浸润)鉴定的基础上,采用生化法、生理法和免疫法定量测定一氧化氮(NO)、血氧饱和度(SpO2)和3-硝基酪氨酸(3NT)的血清浓度,并对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达水平进行免疫组化分析.结果 脂多糖与完全弗氏佐剂可导致炎症表型及组织异常增殖相关显微结构变化,使一氧化氮升高、血氧饱和度下降、3-硝基酪氨酸增加(蛋白质硝化),诱导型一氧化氮合酶、缺氧诱导因子1α和血管内皮细胞生长因子表达显著上调,并伴随血管新生及组织增殖.一氧化氮供体化合物可重现此过程,而一氧化氮合成抑制剂则有拮抗作用.青蒿琥酯和桦木酸可下调诱导型一氧化氮合酶、缺氧诱导因子1o和血管内皮细胞生长因子表达,降低一氧化氮并提高血氧饱和度,缓解或中止炎症性异常血管新生和组织增殖现象.结论 脂多糖激发的诱导型一氧化氮合酶过表达和一氧化氮大量释放可能是血管新生及组织增殖的直接驱动力,青蒿琥酯和桦木酸能阻断肿瘤样增殖的病理过程,因而具有潜在的预防及治疗作用.
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桦木酸对酒精性肝损伤小鼠线粒体凋亡通路的影响
目的 研究桦木酸(betulinic acid,BA)对酒精性肝损伤小鼠线粒体信号通路的影响.方法 56只健康雄性小鼠随机分为8组,即正常对照组(NC),酒精模型组(MC),BA低、中、高剂量组(L-BA,M-BA,H-BA,按0.25、0.5、1 mg/kg bw给与),BA低、中、高剂量与酒精联合组(L-BAA,M-BAA,H-BAA).NC、MC组灌胃1％的可溶性淀粉,其余各组灌胃混悬于可溶性淀粉中不同剂量的BA,1/d,连续14d后,除NC组,L-BA,M-BA,H-BA组灌胃生理盐水外,其余4组均按10 ml/kg灌胃50％酒精诱发酒精性肝损伤模型.检测血清细胞色素P4502E1(CYP2E1)水平,采用Western blot检测肝脏线粒体信号通路中Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达的变化.结果 BA预处理后,抑制由酒精引起的CYP2E1水平升高,显著降低酒精致肝损伤小鼠Bax/Bcl-2比值,明显减少Caspase-9和Caspase-3蛋白表达量,且呈量效关系.结论 说明BA对酒精诱导肝损伤有预防性的保护作用,这种保护作用可能与调控线粒体凋亡通路有关.
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桦木酸对小鼠酒精性肝损伤的保护作用
目的研究桦木酸(betulinic acid, BA)对酒精性肝损伤的保护作用。方法56只健康雄性KM小鼠随机分为：正常对照(NC)，酒精模型(MC)，BA低、中、高剂量（L-BA， M-BA，H-BA，按0.25、0.5、1mg/kg b w给与）， BA低、中、高剂量与酒精联合（L-BAA，M-BAA， H-BAA）8组；NC、MC组灌胃1%的可溶性淀粉，其余各组灌胃混悬于可溶性淀粉中不同剂量的BA，1/d，连续14d后，除NC组，L-BA， M-BA，H-BA组灌胃生理盐水外，其余4组均按10 ml/kg 灌胃50%酒精诱发酒精性肝损伤模型。测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶（ALP）的活性，甘油三酯(TG)、总胆固醇（TC）、白蛋白(ALB)、总蛋白（TP）的含量；肝脏超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性以及谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量，并观察肝脏病理改变。结果 BA预处理后，能显著降低酒精诱导肝损伤小鼠血清AST、ALT、ALP活性及TC和TG含量，提高ALB、A/G水平，增强SOD、CAT、和GSH-Px活性及GSH含量，降低MDA含量，明显减轻肝组织损伤程度，且呈量效关系。结论 BA 具有抗氧化损伤的能力，缓解酒精引起的脂质过氧化，对酒精诱导肝损伤有预防性的保护作用。[营养学报，2015，37（1）：68－72]
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薄荷化学成分的研究
目的 对薄荷Mentha haplocalyx的化学成分进行研究.方法 采用多种柱色谱技术进行分离纯化,并通过波谱分析方法鉴定化合物的结构.结果 从薄荷乙醇提取物中分离得到了11个化合物,分别鉴定为薄荷木酚素(1)、5-羟基-6,7,8,4'-四甲氧基黄酮(2)、桦木酸(3)、橙皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷(4)、龙胆酸-5-O-β-D-(6'-水杨酰基)-葡萄糖苷(5)、蒙花苷(6)、刺槐素(7)、5-羟基-6,7,8,3',4'-五甲氧基黄酮(8)、5,6,4'-三羟基-7,8-二甲氧基黄酮(9)、田蓟苷(10)、藿香苷(11).结论 化合物1为新的木酚素类化合物,命名为薄荷木酚素；化合物2为新天然产物；化合物4为首次从唇形科中分离得到；化合物3、5为首次从薄荷属中分离得到.
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木豆叶的化学成分研究
目的 研究木豆Cajanus cajan叶的化学成分.方法 通过正相硅胶色谱、中压反相硅胶色谱(ODS)、反相大孔树脂(MCI)、Sephadex LH-20凝胶等多种技术进行分离纯化,并通过核磁共振谱、质谱等波谱数据鉴定其结构.结果 从木豆叶醇提物中分离得到23个化合物,分别鉴定为木豆素(1)、木豆素A(2)、木豆素C(3)、木豆内酯A(4)、球松素(5)、荭草苷(6)、异牡荆苷(7)、牡荆苷(8)、cajanol (9)、cajanin (10)、樱黄素(11)、红车轴草素(12)、(2R,3R)-2,3-二氢-5-7,4 '-二甲氧基黄酮(13)、10′,16′-二羟基棕榈酸乙酯(14)、香草酸(15)、十七烷酸乙酯(16)、2-O-甲基肌醇(17)、2,3,4-三羟基异戊酸(18)、豆甾醇(19)、桦木酸(20)、十七烷酸(21)、β-谷甾醇(22)和β-胡萝卜苷(23).结论 化合物10～19均为首次从该属植物中分离得到.
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吴茱萸五加叶化学成分研究
目的 研究吴茱萸五加Acanthopanax evodiaefolius叶的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、制备薄层色谱及重结晶等方法进行分离纯化,利用波谱分析结合理化性质鉴定化合物的结构.结果 从吴茱萸五加叶甲醇提取物中分离得到13个化合物,分别鉴定为十七烷酸(1)、二十七烷醇(2)、反式肉桂酸(3)、乌苏酸(4)、齐墩果酸(5)、桦木酸(6)、科罗索酸(7)、芹菜素(8)、柚皮素(9)、麦芽酚(10)、丁香酸(11)、豆甾醇(12)、胡萝卜苷(13).结论 化合物1～3、7～10均为首次从本属植物中分离得到,所有化合物均为首次从吴茱萸五加中分离得到.
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决明毛状根化学成分的研究
目的研究决明毛状根的化学成分.方法应用毛状根培养技术,在实验室摇瓶积累生产决明毛状根干重90 g.结果从中分离得到1个化合物,根据其理化性质和波谱分析,鉴定为betulinic acid(桦木酸).结论此化合物为决明毛状根和该属植物中首次分离得到.通过决明毛状根与其干燥种子、根、茎、叶的化学成分在薄层层析上比较,结果表明:决明毛状根培养可代谢产生桦木酸或大幅度提高桦木酸的含量.
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桦木酸制备的研究进展
桦木酸是一种三萜类化合物,具有抗肿瘤细胞增长的作用,并且在抗艾滋病方面还有许多新的作用机制,这使桦木酸成为很有开发前景的药物,引起了人们的广泛关注[1].
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桦木酸体内抗肿瘤作用的初步研究
目的研究桦木酸对H22、S180小鼠肿瘤细胞药效学作用及对肿瘤细胞膜Ca2+、Mg2+-ATP酶活性的影响.方法通过限量实验确定桦木酸的给药剂量.动物随机分为6组,分别为桦木酸500、250、125 mg/kg剂量组,阳性对照组给予环磷酰胺(20 mg/kg),模型对照组分别给予相同体积的生理盐水和配药溶剂,灌胃给药.观察生命延长时间与瘤重抑制率;紫外分光光度法测定Ca2+、Mg2+-ATP酶活性.结果桦木酸使S180荷瘤小鼠肿瘤细胞膜Ca2+、Mg2+-ATP酶活性提高(P＜0.05).结论桦木酸抗肿瘤作用机制与其上调肿瘤细胞膜p53蛋白的表达,改变肿瘤细胞膜Ca2+、Mg2+-ATP酶活性有关.
关键词： 桦木酸 生命延长率 瘤重抑制率 Ca2+、Mg2+-ATP酶活性 -
桦木酸的抗肿瘤作用及其诱导KB细胞凋亡的研究
目的研究桦木酸(betulinic acid,BetA)体内对S180肉瘤的抑制作用和体外对人口腔上皮癌(KB)细胞系凋亡的诱导活性.方法 建立小鼠体内荷S180肉瘤模型,测定BetA的体内抑瘤率;采用MTT分析、细胞形态学观察、原位末端标记和流式细胞仪检测等方法检测BetA对KB细胞生长状态和细胞周期的影响以及诱导细胞凋亡的作用.结果 BetA 800和1 200 mg·kg-1给荷瘤小鼠灌胃,对S180肉瘤有显著的抑制作用;体外对KB细胞生长呈剂量依赖性抑制作用(其IC50为11.60 μmol·L-1),并出现大量凋亡细胞.结论 BetA体内对S180肉瘤、体外对KB细胞增殖均有抑制作用,诱导肿瘤细胞死亡的主要途径可能是凋亡.
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桦木酸对人肿瘤细胞的抗癌活性筛选
目的研究桦木酸(betulinic acid,BetA)对9种人肿瘤细胞的作用.方法采用噻唑兰(MTT)比色法测定KB(口腔上皮癌细胞)、OVCAR(卵巢癌细胞)、Bcap-37(乳腺癌细胞)、A2780(卵巢癌细胞)、HT-29(大肠癌细胞)、LS-1747(结肠腺癌细胞)、SMMC-7721(肝癌细胞)、PC-14(肺癌细胞)、K562(白血病细胞)对桦木酸及常用抗癌药cDDP(顺铂)、Taxol(紫杉醇)的敏感性.结果KB细胞对BetA为敏感(IC50为11.6 μmol·L-1),其次为LS-1747(IC50为12.5 μmol·L-1)、SMMC-7721(IC50为25.0 μmol·L-1).结论桦木酸可以用作特异性的细胞增殖抑制剂.
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人参皂甙Rh2提高人源肝癌细胞HepG2对桦木酸敏感性的作用机制
目的 探讨人参皂甙Rh2(G-Rh2)提高人源肝癌细胞HepG2对桦木酸(Bet A)敏感性的作用机制.方法 将对数生长期的HepG2细胞分为4组:G-Rh2组(加入7.5 μg/ml G-Rh2)、Bet A组(加入10 μg/ml Bet A)、G-Rh2+Bet A组(加入7.5μg/ml G-Rh2和10 μg/ml Bet A)及以不加药的细胞作为对照,荧光显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术分析细胞凋亡,并检测细胞Caspase-3活性,Western blot检测细胞Caspase-3底物多聚(ADP-核糖)聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]断裂和Caspase-9激活情况.结果 与G-Rh2和Bet A组相比,G-Rh2+Bet A组超过75%的细胞可见凋亡特征,且处于subG1期细胞的比例增加,Caspase-3活性增强,PARP和Caspase-9断裂明显.结论 G-Rh2提高HepG2细胞对Bet A的敏感性是通过细胞凋亡实现的,且涉及线粒体途径.
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桦木酸抑制U14宫颈癌小鼠肿瘤细胞增殖的实验研究
目的 研究不同剂量的桦木酸对U14宫颈癌小鼠肿瘤细胞的影响.方法 以U14宫颈癌小鼠为对象,观察不同剂量的桦木酸作用U14宫颈癌小鼠后肿瘤变化和相关的基因表达的变化.结果 U14宫颈癌小鼠对桦木酸较敏感,不仅能明显抑制肿瘤细胞生长(P<0.05),延长小鼠生存期,与环磷酰胺结果相近(P>0.05);而且实验后小鼠体重没有明显下降,与细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达变化明显.结论 桦木酸能够明显抑制U14宫颈癌小鼠肿瘤生长,并能够调节凋亡相关基因的表达诱导肿瘤细胞的凋亡.
关键词： 桦木酸 凋亡Bcl-2 Bax -
桦木酸对Hela细胞增殖周期中相关基因的表达
目的:研究在三个浓度梯度的桦木酸直接作用于Hela细胞后,对其在增殖周期过程中变化.方法:将培养至对数生长期的Hela细胞,经胰酶消化重悬后,制备成单细胞悬液继续培养24h,然后分组并分别用高、中、低三个浓度的桦木酸处理48h.分别提取经桦木酸处理后的各组Hela细胞的总蛋白.通过MTT法和Western blot法,对细胞增殖过程中的相关蛋白的进行定量分析.结果:在各组经桦木酸处理后的Hela细胞中,细胞周期蛋白CyclinD1随浓度升高表达逐渐下降,而P16蛋白的表达则逐渐增强,与对照组比较显著差异(P＜0.01).同时,参与细胞凋亡的相关蛋白Bcl-2和Bax的表达也随浓度的升高呈显著性差异(P＜0.01).结论:不同剂量的桦木酸能通过影响Hela细胞的生长周期,来抑制Hela细胞的增殖,并呈剂量依赖性.
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响应面分析法优化泽兰中桦木酸的超声辅助提取工艺
目的 应用响应面分析法优化泽兰中桦木酸的超声辅助提取工艺.方法 在单因素试验基础上,根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,采用3因素3水平的响应面分析法,考察乙醇体积分数、液固比、提取温度对桦木酸提取率的影响.结果 确定佳提取工艺为乙醇体积分数85％,液固比22∶1 mL/g,提取温度61℃,超声时间30min,桦木酸提取率为(5.32 ±0.04)mg/g.结论 利用Box-Behnken试验设计和响应面分析法成功优化了泽兰中桦木酸的提取工艺,利用该工艺提取桦木酸,提取率达到(5.32±0.04)mg/g.
