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糖基转移酶基因sisZ在大肠杆菌中的克隆与表达
目的:从西索霉素产生菌中克隆出表达西索米星的糖基转移酶基因sisZ.方法:采用PCR法从伊纽小单孢菌(Micromonospora inyoensis)的染色体扩增参与西索霉素生物合成的糖基转移酶基因sisZ,然后先后装载到克隆载体pUC18和表达载体pET-30a上.结果和结论:成功从伊纽小单孢菌扩增出参与西索霉素生物合成的糖基转移酶基因sisZ.其开放阅读框长1176bp,编码含391个氨基酸(41690 D)的多肽链,并在大肠杆菌E. coli BL21 (DE3)中实现表达.基因sisZ的碱基序列与gntZ (M. echinospora)的碱基序列的同源性高达94%.预测的SisZ蛋白序列与GntZ的同源性为98%.
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糖基转移酶-2基因silD在大肠埃希菌中的克隆与表达
从伊纽小单孢菌(Micromonospora inyoensis)扩增参与西索米星生物合成的糖基转移酶基因silD(1181bp),并分别将其克隆到pUC18和表达载体pET-30a上.其开放性阅读框长1173bp,编码含390aa(43.04ku)的多肽链,在大肠埃希菌BL21(DE3)::pET-silD中实现表达.基因silD的碱基序列与gntD(来自M.echinospora)的碱基序列的同源性高达94%.预测的SilD蛋白序列与GntD的同源性为98%.这是继从依纽小单孢菌克隆参与生物合成西索米星的抗性基因srml(AY661430)、西索米星2-脱氧蟹肌醇合成酶基因sisB(DQ250993)和糖基转移酶基因sisZ(DQ250994)后,克隆到的又一新基因.该基因在GenBank的接受号为DQ250992.基因silD的克隆和表达为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
