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前臂皮瓣游离移植一期再造阴茎1例报告
1 临床资料患者,男,23岁.于入院前3个月阴茎被他人致残后缺如,要求阴茎再造入院.专科情况:阴毛分布正常,阴茎大部缺损,仅留根部约2cm长,尿道口位于阴茎残端中央,针尖样大小.前臂皮瓣的设计:在左前臂腕部上方设计皮瓣,长12cm、宽14cm.皮瓣分三区:A区宽3cm,将皮肤向内翻卷以形成尿道;B区宽1cm,为去上皮组织区,以便将C区皮瓣卷成管状,包绕尿道皮管后缝合创面; C区宽10cm,内含桡动脉、头静脉、皮神经等,用以卷成管状,包绕尿道和软骨形成阴茎体.此外,在A、C区皮瓣的远端各作1cm的延伸部分,以便于形成龟头及将阴茎末端皮瓣创缘和尿道口创缘顺利缝合[1].
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骨髓干细胞体外组织工程软骨形成的实验研究
[目的] 探讨骨髓干细胞(BMSCs)在体外不同载体中软骨形成的能力和可行性.[方法] 分离培养猪BMSCs,将第3代BMSCs以载体内多点注射和表面点滴法植于A组:Ⅱ型纤维胶原蛋白海绵(fibrin collagen sponge),B组:生物蛋白海绵(fibrin collagen sponge and bFGF);C组:明胶海绵(gelatin sponge)3种载体上,于4周取材进行组织学分析.[结果] 纤维胶原蛋白海绵和生物蛋白海绵组均有软骨细胞形成,明胶海绵无细胞生长.利用SPSS 10.0软件统计学处理,显示B组软骨细胞阳性数量(92.75±10.57)多于A组(36.45±8.34),有统计学差异(P<0.01),两组都明显多于C组(0),有统计学差异(P<0.01).[结论] MSCs经分离扩增后种植于三维立体结构的纤维蛋白海绵载体上,在含有TGF-β1培养液中形成软骨;在TGF-β1和FGF的双重因子培养中,其软骨的形成能力明显增加.
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骨肿瘤中的骨形成蛋白表达及其意义
骨形成蛋白(Bone Morphogenetic Protein,BMP)初是作为‘种可在异位诱导骨和软骨形成的蛋白质被发现.通过近40年的研究发现,BMPs是一个至少包括20个成员的家族,不仪参与胚胎的形成、发育及组织细胞的分化和增殖,而且与某些肿瘤的发生、发展及转移密切相关,其中与BMPs关系为密切的是骨肿瘤.因大部分骨骼系统的恶性肿瘤都发生在骨骼发育期,并且BMPs是骨骼系统发育的重要生长因子,因此对BMPs在骨肉瘤发生、发展、侵袭和转移等方面的作用一直是研究的热点.
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C端甲状旁腺相关肽的克隆及其对骨骺干细胞的调控作用
目的 探讨C端甲状旁腺相关肽(PTHrp107-139)对体外培养的骨骺干细胞的调控作用以及与其他调控因子的关系.方法 采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)方法克隆大鼠PTHrp全长中的107～139片段,并将其亚克隆至质粒pTRE2hyg上,构建新的质粒pTRE2hyg-PTHrp107-139并将其与质粒pTet-on共转染分离纯化的骨骺干细胞,放入含有维生素C和地塞米松的全培养基中进行培养,分别加入0.1、0.5、2.0mg/L的强力霉素(Doxycycline)进行诱导,并设置空白对照.48～72 h后抽提各组细胞的RNA进行逆转录,然后通过半定量PCR的方法检测增殖细胞核抗原(PC-NA、SOX9等基因的表达变化,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡.结果 加入DOX组的PCNA、ColⅡ、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、Sox9表达增加,骨骺干细胞数量明显增多,而Ptc、Col X、骨形态发生蛋白(BMP)-6表达减少.结论 C端甲状旁腺相关肽可能有促进骨骺干细胞增殖并抑制其分化的作用,但对细胞凋亡无明显影响.
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胰岛素样生长因子-1抑制人椎间盘细胞凋亡及促进基质代谢的研究
胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在软骨形成和软骨自稳态调节中起关键作用.有研究表明,IGF-1能刺激软骨细胞分裂增殖,并可延缓及阻止多种体细胞的凋亡[1].我们通过体外培养人椎间盘细胞,观察不同浓度胰岛素生长因子对椎间盘细胞凋亡、增殖及细胞外基质代谢的影响.
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软骨细胞诱导骨髓基质细胞体内软骨形成
目的探讨软骨细胞在体内非软骨形成部位促进骨髓基质细胞(BMSCs)向软骨分化并形成软骨的可行性.方法猪BMSCs与软骨细胞按一定比例(6∶4或7∶3)混匀,取2.5×107个混合细胞悬浮于0.5 ml 30% Pluronic溶液后注射到裸鼠皮下(n=6).相同数量的单纯软骨细胞或BMSCs同样方法注射,分别作为阳性对照及阴性对照,0.75×107个软骨细胞同样注射作为低浓度软骨细胞对照.各组均8周后取材检测.结果混合细胞组及阳性对照组均形成了成熟的软骨.组织学可见成熟软骨陷窝、异染基质及Ⅱ型胶原表达.两组新生软骨糖胺多糖(GAG)含量差异无统计学意义(P>0.05),两混合组平均湿重分别为(320±48) mg和(294±37) mg,均达到阳性对照组70%以上.BMSCs组仅形成了纤维性组织,低浓度软骨细胞组在局部形成了少量软骨,但新生软骨平均湿重低于阳性对照的30%.结论上述结果提示软骨细胞能诱导BMSCs在体内非软骨形成部位向软骨分化并形成软骨组织.
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增强型绿色荧光蛋白基因转染及TGFβ3诱导前软骨干细胞向成软骨方向分化
目的探讨增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)转染前软骨干细胞(PSCs)的效果及TGFβ3诱导PSCs向成软骨方向定向分化的可行性.方法利用磁性细胞分选系统分离纯化有成纤维细胞生长因子受体-3(FGFR-3)表面标志的PSCs.采用脂质体介导法将EGFP基因转染PSCs,G418筛选得到EGFP基因修饰PSCs.用免疫组化及免疫荧光检测EGFP基因修饰PSCs的FGFR-3表达.采用藻酸盐凝胶培养,以TGFβ3诱导分离纯化的PSCs向成软骨方向定向分化.应用免疫组化、RT-PCR检测PSCs向成软骨方向分化过程中特异性软骨基质成分的表达情况.结果 EGFP基因转染PSCs后,24 h GFP开始表达,48～72 h GFP表达强.G418筛选后,EGFP基因修饰PSCs体外培养6周仍有较强GFP表达.在含TGFβ3的藻酸盐凝胶培养7、14、21 d均有II型胶原表达;诱导21 d的PSCs免疫组化检测可见细胞及周围均有X型胶原、Aggrecan、COMP表达; RT-PCR检测显示在培养早期(8 d内)开始出现Aggrecan、X型胶原、COMP等的表达,中期(8 d后)开始出现II型胶原表达.结论 EGFP基因修饰PSCs在体外能长期稳定表达GFP,为应用组织工程技术修复骨骺损伤提供方便追踪观察的种子细胞.TGFβ3能诱导PSCs向成软骨方向定向分化.
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转化生长因子-β3诱导大鼠前软骨干细胞成软骨分化的量效作用
目的 研究转化生长因子-β3(TGF-β3)诱导大鼠前软骨干细胞(PSCs)向软骨方向分化的可行性以及剂量效应关系.方法 在体外将分离纯化的大鼠PSCs置于含有不同剂量TGF-β3的诱导培养液中培养,依据其浓度分为5个实验组和1个对照组(不含TGF-β3),观察细胞生长情况,分别进行Ⅱ型胶原的免疫组织化学检测及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Ⅱ型胶原mRNA表达.结果 细胞生长良好.免疫组织化学检测对照组Ⅱ型胶原表达阴性,而含TGF-β3的诱导培养液诱导的各组细胞Ⅱ型胶原表达均阳性,其中10 μg/L组阳性率高.RT-PCR半定量检测也显示10 μg/L组Ⅱ型胶原mRNA表达量多,与其它组比较,差异均有显著意义(P<0.05).结论 TGF-β3在体外能有效诱导PSCs向软骨细胞定向分化.TGF-β3对PSCs促分化作用存在剂量依赖性.
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软骨组织工程新进展
软骨组织工程技术为治疗骨、软骨疾病提供了一种新的方法,其主要技术路线是,通过种子细胞和生物活性支架的体外共培养实现软骨组织的再生,并终完成组织的修复与重建.种子细胞的选择、支架的构建,培养条件的优化对软骨再生有重要作用,从而成为目前软骨工程领域的研究重点.
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多聚左旋赖氨酸促进大鼠肢芽细胞软骨分化的研究
目的:探讨多聚左旋赖氨酸(PL)对大鼠肢芽细胞向软骨细胞分化的促进作用及其可能机制.方法:取大鼠肢芽细胞在含不同剂量PL的培养液中培养4 d,根据培养细胞所形成的软骨集落形成情况、与阿尔新蓝结合量和Ⅱ型胶原的表达情况,判断PL促进肢芽细胞向软骨细胞分化现象;根据不同时间添加PL来推断其发挥大作用的时间;用免疫组化检测神经钙粘附蛋白的表达.结果:PL促进培养中大鼠肢芽细胞软骨集落的形成的佳剂量可能为10μg/mL;PL发挥大作用的时间为培养的第24 h内;免疫组化显示:5μg/mL组中Ⅱ型胶原和神经钙粘附蛋白的表达增强.结论:PL在一定浓度范围内以剂量依赖性方式促进大鼠肢芽细胞向软骨细胞分化且可能是通过增强神经钙粘附蛋白的表达来完成的.
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牙本质基质蛋白1在骨和软骨中的研究进展
牙本质基质蛋白1(dentin matrix protern 1,Dmp1)基因是骨和软骨发育过程中非常重要的基因之一,在骨组织中高度表达,其可能是介导骨和软骨形成的关键因子.随着研究的逐步深入,Dmp1被发现可能是调控下颌骨及髁状突软骨发育的候选基因.本文就Dmp1基因在骨和软骨中的研究作一综述.
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骨膜韧带样瘤1例
患者男，21岁，右前臂进行性缓慢肿大6年，偶伴酸痛，并逐渐出现畸形。查体：右前臂中远段肿胀，畸形，表面凹凸不平，表面皮肤无红肿及溃烂，皮下静脉稍怒张，局部无触痛，右尺桡骨中，远段肿胀畸形，表面呈大小不等结节状，前臂旋转功能受限，右肘、腕关节活动正常，右手部运动感觉正常。X线示：右尺桡骨中，远段骨质破坏，局部膨大，内见多个小透光区，骨皮质部分变薄，未见骨膜反应，骨髓腔未见异常。手术所见：肿瘤位于尺、桡骨之间，侵及桡骨骨皮质内，范围广泛，无病理性骨折。病理检查：肉眼见灰白色组织一堆，约13 cm×11 cm×3 cm，表面光滑，质地较坚硬。切面灰白色，编织状，无砂砾感和钙化。镜下见由致密的胶原纤维单一性排列，胶原纤维束呈波浪状，并见稀疏的小的纤维母细胞散在分布，纤维母细胞小，无异型性及核分裂，核长细核形，无巨细胞、骨或软骨形成。病理诊断：骨膜韧带样瘤。 讨论 骨的韧带样纤维瘤是原发于骨髓内和骨膜的良性纤维组织肿瘤，发生于髓内的韧带样纤维瘤称骨韧带样纤维瘤，占韧带样纤维瘤绝大多数，而骨外膜来源的肿瘤称骨膜韧带样瘤，非常少见。
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足舟状骨缺血性坏死
足舟状骨缺血性坏死在临床上较少见.在儿童又称Kohler病,在成年人出现则被命名为Müller-Weiss病[1].常常是由于创伤、发育障碍或其他疾病等原因破坏营养舟状骨的血运,导致软骨内骨化(软骨形成与成骨作用)异常或骨细胞死亡而出现.由于该病发病率低,且与发育障碍或其他疾病难以鉴别,故在临床诊断治疗中易产生混淆.
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骨髓间充质干细胞及其在软骨缺损修复中的研究进展
关节软骨在受到创伤后,难以自行修复.传统的治疗方法,因修复组织以纤维软骨为主,缺少正常透明软骨的力学性能及耐用性,故不能得到满意效果.在此情况下,应用组织工程方法修复关节软骨缺损却展示了令人鼓舞的前景.种子细胞是组织工程化软骨形成的首要条件.与其他软骨组织工程种子细胞相比,间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)易于从骨髓中分离,来源取材方便,对供体损伤小,具有强大的增殖能力及多向分化潜能,便于自体移植,近年来被认为是软骨组织工程理想的种子细胞.以下仅就骨髓间充质干细胞及其在软骨缺损修复中的研究进展作一综述.
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喉教学的几点体会
喉是呼吸系中重要器官之一,外形简单,但构造复杂,喉软骨,喉肌是教学中的难点,学生难以对每块喉软骨形成深刻印象,更不用说三维空间定位.喉肌数目多,起止点难记,功能多样,学生不易掌握,极易混淆.喉有呼吸, 发声等功能,临床上喉疾病较多.如何使各专业,各层次学生按教纲学好喉解剖知识.本文从以下几方面浅谈了教学体会:1.教师自制喉软骨模型;2.充分合理利用模型、挂图、标本;3.使用现代教学手段;4.注重教学反馈,矫正;5.强调名词概念.作者通过使用自制喉模型,在教学中收到了良好效果.
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构建椎间盘组织工程的人骨髓间充质干细胞的分离及三维培养
椎间盘退变(Degenerative disc disease,DDD)是下腰痛的主要原因.当前临床治疗主要目的在于恢复生物力学功能和缓解症状.而椎间盘组织工程的兴起为DDD的治疗提供了新方法,其中干细胞是用于椎间盘组织工程的重要种子细胞.在本实验中,我们研究人骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离培养的细胞学特性以及在Pellet三维培养体系下构建椎间盘组织工程细胞的可行性.结果提示该方法培养的MSCs 具较高的纯度,且体外培养具有较强的增殖能力,短时间内可大量扩增,达到组织工程需要的种子细胞数量要求,且细胞保持未分化状态,具有良好的生物安全性.并能表达Ⅱ型胶原和蛋白多糖等椎间盘细胞外基质,因此是椎间盘组织工程理想的种子细胞.
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hBMSCs诱导分化类髓核细胞
目的 探讨人椎间盘细胞和关节软骨细胞的分子表型差异,分析hBMSCs经TGF-β,和BMP-7联合诱导后能否分化为软骨细胞和髓核细胞.方法 取9例自愿捐赠者髂嵴骨髓20～40 mL分离培养hBMSCs.取第4代hBMSCs行三维微球培养.根据基础培养基中加入的生长因子不同,实验分成4组,分别为加入10 ng/mL TGF-β3组(A组)、200 ng/mL BMP-7组(B组)、同时加入两种生长因子组(C组)以及空白对照组(D组).于培养后21 d,行组织学及免疫组织化学观察:于培养后4、21 d进行PCR检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅹ型胶原、蛋白多糖和SOX9基因的表达.结果 培养后21 d,HE染色示A组和C组细胞呈软骨细胞样形态特征,甲苯胺蓝染色及免疫组织化学染色Ⅱ型胶原表达呈阳性.B组和D组细胞形态无明显改变,PCR检测示培养后21 d,A、C组SOX9、蛋白多糖、Ⅰ型胶原及Ⅱ型胶原表达较4 d时明显增加(P＜0.05).B、D组Ⅰ型胶原表达较4d时明显增加(P＜0.05),SOX9、蛋白多糖及Ⅱ犁胶原较4d时无明显变化(P＞0.05).其中仅A组X型胶原表达呈阳性.结论 TGF-β,和BMP-7联合应用能促进hBMSCs分化更接近于椎间盘细胞,可能为椎间盘组织工程提供种子细胞.
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骨髓基质干细胞的成软骨能力
目的综述近年骨髓基质干细胞成软骨分化的研究进展.方法广泛查阅近期有关骨髓基质干细胞成软骨分化的研究文献.着重阐述与成软骨分化有关的生长因子及分化后的组织成分.结果骨髓基质干细胞取材方便,体外扩增迅速,在特定的软骨培养液和生长因子作用下,可形成软骨样组织.作为自体来源的细胞可修复动物关节软骨缺损,避免了免疫反应.结论骨髓基质干细胞扩增后数量多,具有明确的成软骨能力,作自体移植无免疫反应,用于软骨组织工程有广阔的前景.成软骨分化的调控机制和应用值得进一步研究.
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GFP基因转染对骨髓基质细胞体内向软骨细胞分化的示踪作用
目的:实现绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)报告基因在骨髓基质细胞(BMSC)中的高效、稳定、持久表达, 直接示踪BMSC在关节软骨缺损内的分布及分化.方法:构建重组逆转录病毒表达载体RV-GFP, 通过PT67包装细胞克隆、G418筛选及扩增, 获得大量含GFP基因的假病毒液, 并直接转染BMSC.将含有GFP基因转染标记的BMSC与生物可降解材料复合后, 植入猪自体关节软骨缺损处, 7个月后共聚焦显微镜检测修复组织中GFP标记的BMSC的分布及分化. 结果:经双酶切鉴定证实重组逆转录病毒表达载体RV-GFP构建成功, 转染PT67细胞后可在荧光激发波长下, 发出明亮的绿色荧光, 转染率达20%～50%, 经G418筛选后可达100%.筛选、扩增后, PT67细胞的上清培养液可成功地转染BMSC, 筛选后能稳定、持久、高效表达GFP.将标记的BMSC植入关节软骨缺损7个月后, 修复组织仍能高效表达GFP, 激光共聚焦显微镜下显示, 多数新生软骨陷窝内有GFP标记的细胞. 结论:构建的重组逆转录病毒GFP载体, 能持久标记骨髓基质细胞, 用于细胞动态变化的研究及细胞转归的示踪, 该方法简便、灵敏、可靠、直观.标记的BMSC可在关节软骨缺损内分化为成熟的软骨细胞, 并在软骨缺损的修复中发挥重要作用.
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软骨细胞与骨髓基质细胞共培养裸鼠体内构建软骨组织的实验研究
目的:探讨软骨细胞在裸鼠体内促进骨髓基质细胞(BMSCs)向软骨分化并形成软骨组织的可行性.方法:从SD大鼠中分别分离出BMSC和软骨细胞进行体外培养.收集软骨细胞培养上清液,作为BMSCs诱导液从第2代开始进行诱导分化,7天后取出标本,免疫组织化学检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和aggrecan的mRNA表达.SD大鼠BMSCs与软骨细胞按一定比例(7:3)混匀,取5.0×107个混合细胞/ml的各组细胞悬液接种至壳聚糖生物材料,体外培养一周后植入裸鼠皮下,相同数量的单纯软骨细胞或BMSCs同样方法植入,分别作为阳性对照及阴性对照,1.5×107个软骨细胞同样植入作为低浓度软骨细胞对照.各组均8周后取材检测.结果:经诱导后的大鼠BMSCs的Ⅱ型胶原免疫组化检测阳性,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA呈阳性表达;混合细胞组及阳性对照组均形成了成熟的软骨,组织学可见成熟软骨陷窝、异染基质及Ⅱ型胶原表达;BMSCs组仅形成了纤维性组织;低浓度软骨细胞组在局部形成了少量软骨.结论:软骨细胞能在一定程度上提供软骨形成的微环境,诱导BMSCs在裸鼠体内向软骨组织分化并形成软骨组织.
