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二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响
目的 观察二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞体外分泌功能的影响.方法 采用血清药理学方法,以不同含药量的初老小鼠血清,与体外培养的颗粒细胞共同培养48 h,观察二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞雌激素(E2)、孕酮(P)分泌量(化学发光免疫测定法)以及抑制素B(INHB)分泌量(ELISA法)的影响.结果 二至天癸颗粒舍药血清可明显增加颗粒细胞E2、P,INHB的分泌量.结论 二至天癸颗粒可通过调节颗粒细胞的分泌功能进而改善初老小鼠卵巢功能.
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苍附苁仙汤对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞胰岛素样生长因子-1受体基因表达的影响
目的：观察苍附苁仙汤对人卵巢颗粒细胞胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)mRNA表达的影响，探讨其治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的作用机制。方法采用随机数字表法将48例接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的不孕症患者随机分为治疗组和对照组各24例。对照组服用炔雌醇环丙孕酮＋常规长方案促排卵，治疗组在对照组治疗基础上加服苍附苁仙汤，疗程1个月。比较2组患者注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)日血清黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)水平及获卵数、优质胚胎数、妊娠数；采用实时荧光定量 PCR 测定取卵日成熟卵泡壁颗粒细胞IGF-1R mRNA表达。结果与对照组比较，治疗组血清LH、E2、P水平差异无统计学意义(P＞0.05)，优质胚胎数明显增高(P＜0.01)，获卵数及妊娠数差异无统计学意义(P＞0.05)；治疗组患者卵巢颗粒细胞IGF-1R mRNA表达显著高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)。结论苍附苁仙汤通过上调人卵巢颗粒细胞IGF-1R mRNA表达，增加优质胚胎数，达到治疗PCOS的目的。
关键词： 苍附苁仙汤 多囊卵巢综合征 卵巢颗粒细胞 胰岛素样生长因子-1受体 优质胚胎 -
桂枝茯苓胶囊对大鼠体外培养卵巢颗粒细胞增殖的影响及物质基础评价
目的:了解桂枝茯苓胶囊各分离部位对大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响,并探讨了物质基础与效应之间的关系.方法:将桂枝茯苓胶囊水提物经大孔树脂分离得到不同部位,以2,20,200 mg·L~(-1) 3个剂量加入培养的大鼠卵巢颗粒细胞中,通过MTT法观察药物对卵巢颗粒细胞生长的影响;采用LC\UV\MS\MS法对活性显著部位的主要色谱峰进行分析鉴定.结果:桂枝茯苓胶囊促进大鼠卵巢颗粒细胞增殖的活性部位主要为GZ-5,GZ-6,通过与标准化合物对照及质谱特征对活性显著部位GZ-5,GZ-6进行了归属和指认,鉴定了7个化合物,分别为苦杏仁苷、芍药内酯苷、芍药苷、1,2,3,4,6-O-没食子酰葡萄糖、苯甲酸、芍药新苷、肉桂酸等.结论:桂枝茯苓胶囊促进卵巢颗粒细胞增殖的生物效应源于水溶性部位,水溶性部位经大孔树脂吸附醇梯度洗脱得到了50%(GZ-5)、60%(GZ-6)两段活性部位.
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中药干预对卵巢颗粒细胞分泌功能及相关因子表达影响的研究进展
颗粒细胞(granulosa cell,GC)是卵巢中一类十分重要的细胞,它位于卵母细胞透明带的外侧,通常有多层,通过缝隙连接与卵母细胞相连,在卵母细胞体内外成熟过程中起着重要的作用[1].在卵泡的生长发育过程中,作为卵泡体细胞的颗粒细胞,通过细胞间的相互作用,对卵泡膜细胞和卵母细胞的发育、成熟及其功能起重要的调控作用,进而影响卵泡的启动、发育、成熟及闭锁的全过程[2,3].近年来,围绕中药干预改善卵巢颗粒细胞分泌功能及调控相关因子表达等方面,国内许多学者进行了一些探索,笔者现将近期实验研究进展综述如下.
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肾阴虚证及肾阳虚证不孕症患者卵巢颗粒细胞基因表达谱研究
目的 运用基因组学方法研究不孕症不同肾虚证型的基因表达差异并探索其潜在的目标基因.方法 选取肾阴虚证、肾阳虚证、正常(因男方因素不孕)行体外受精-胚胎移植/卵胞浆内单精子显微注射(IVF-ET/ICSI-ET)的不孕症患者各33例.收集3组患者取卵日直径1.80 ～2.00cm卵泡的卵泡液,提取颗粒细胞,应用高通量测序技术测定各组基因表达,分析各组差异表达的基因,对差异表达基因进行功能和通路分析.结果 与正常组相比,肾阴虚证组、肾阳虚证组基因表达谱均存在明显差异.肾阴虚证组与正常组的差异表达基因313条,其中219条上调、94条下调;肾阳虚证组与正常组的差异表达基因319条,其中218条上调、101条下调.差异表达基因的基因本体论(GO)和信号转导通路分析表明,肾阴虚证单独调节的基因主要与细胞凋亡、生殖功能相关,肾阳虚证单独调节的基因主要与女性妊娠、胚胎着床相关.结论 p53、Bax、Bcl-2、IGFBP7、HSL、RPL29等基因与细胞凋亡、生殖功能、女性妊娠、胚胎着床相关,这些基因有望成为不孕症中医肾虚辨证分型的目标基因.
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转化生长因子-β和Smad4在绝经过渡期大鼠卵巢颗粒细胞中的表达
目的 探讨转化生长因子-β(TGF-β)、Smad4在绝经过渡期大鼠卵巢颗粒细胞中的表达,分析其与卵巢功能衰退的关系.方法 雌性SD大鼠分为对照组(C组,6月龄,阴道涂片筛选,n=9)、绝经过渡期组(MT组,12 ～ 14月龄,阴道涂片筛选,n=8),大鼠麻醉处死后迅速取出卵巢,采用机械分离方法释放卵泡颗粒细胞,于CO2培养箱中培养,利用免疫细胞化学法检测促卵泡刺激素受体(FSHR)蛋白的表达,鉴定卵巢颗粒细胞;免疫细胞化学法检测TGF-β、Smad4蛋白在两组卵巢颗粒细胞的表达;采用Real-time PCR的方法检测各组颗粒细胞中TGF-β、Smad4 mRNA的表达.结果 免疫细胞化学显示分离培养的颗粒细胞纯度＞95％,MT组TGF-β、Smad4蛋白表达水平低于对照组(P ＜0.05);Real-time PCR结果显示,两组均有TGF-β、Smad4 mRNA的表达,MT组TGF-β、Smad4 mRNA表达水平显著低于对照组(P＜0.05).结论 TGF-β、Smad4参与绝经过渡期大鼠卵巢功能的衰退过程,绝经过渡期大鼠功能衰退的部分原因可能与卵巢颗粒细胞中TGF-β、Smad4的表达降低有关.
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Smad3促进大鼠卵巢颗粒细胞自噬
目的 探讨Smad3基因对大鼠卵巢颗粒细胞自噬的影响.方法 21d SD雌性大鼠腹腔注射孕马血清20 IU/只,48h后收集卵巢颗粒细胞进行原代培养.培养细胞分为3组:空白对照组:培养液中不加任何处理因素;敲低实验组:培养液中加入Smad3基因特异性的SiRNA及转染试剂RNAiMAX;过表达实验组:培养液中加入Smad3真核表达质粒及转染试剂Lip0 2000.免疫细胞化学方法鉴定培养细胞纯度;Western blotting方法检测Smad3蛋白表达变化,检测转染效率.Smad3基因敲低及过表达后,Western blotting方法检测自噬体膜形成标志蛋白LC3B及自噬调控相关蛋白Bcl-2的蛋白表达变化.结果 Smad3敲低时,LC3B蛋白Ⅱ型与Ⅰ型的比值(LC3BⅡ/Ⅰ)变化不明显,Bcl-2蛋白表达明显降低;Smad3过表达时,LC3BⅡ/Ⅰ明显增加,Bcl-2蛋白表达明显增加.结论 Smad3基因特异的SiRNA及真核表达质粒可以有效地转入大鼠卵巢颗粒细胞中,Smad3基因促进大鼠卵巢颗粒细胞自噬,其机制可能与Bcl-2蛋白相关.
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miR-9的靶蛋白在多囊卵巢综合征患者卵巢组织中的研究进展
多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄女性常见的一种生殖内分泌疾病,目前全世界育龄期女性的发病率占到4%~10%.PCOS具有异质性,其病理改变十分复杂,包括窦状卵泡发育异常、颗粒细胞增生凋亡、卵泡膜细胞过度增生、高雄激素血症及慢性排卵障碍等.至今具体发病机制尚未阐明,多基因异常和环境改变被认为是PCOS发病机制的两个重要因素.近年研究发现,微小核糖核酸(miRNA)异常表达与氧化应激、胰岛素抵抗、高雄激素血症、炎症以及各种癌症形成有关.研究显示,微小核糖核酸-9(miR-9)在PCOS患者卵泡液及卵巢颗粒细胞中的表达水平较健康妇女明显升高,考虑可能与PCOS的发病机制有关.通过KEGG database pathway及Target Scan等软件进行生物信息学分析结果提示miR-9主要的靶蛋白有核因子κB亚基1(NF-κB1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、胰岛素受体底物2(IRS2)等.文本将对miR-9的靶蛋白在PCOS患者卵巢组织中的表达研究进展进行综述.
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TNF-α对去子宫大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响
目的 探讨TNF-α对去子宫大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法 应用子宫切除术建立去子宫Sprague-Dawley大鼠模型.体外培养卵巢颗粒细胞并加60 ng/ml外源性TNF-α.应用荧光显微镜、流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 模型组较正常对照组凋亡增加;TNF-α组较模型组凋亡进一步加剧.结论 外源性TNF-α促进去子宫大鼠卵巢颗粒细胞凋亡.提示TNF-α可能加速了子宫切除所致卵巢早衰过程.
关键词： 肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 去子宫 卵巢颗粒细胞 凋亡 大鼠 -
卵巢颗粒细胞中卵泡刺激素受体基因突变与其启动子活性的关系
卵巢颗粒细胞中卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)基因突变是否影响其启动子活性,不同的学者报道尚不统一~([1-2]).报告基因法常用来研究某段DNA序列是否具有转录启动功能及其转录活性,该方法已被众多实验证实是有效的.
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抑制素B在多囊卵巢综合征患者血清、卵泡液及卵巢颗粒细胞中的表达及其意义
多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是一种发病多因性、临床表现多态性的内分泌综合征,以高雄激素血症、无排卵、肥胖和多囊卵巢为主要临床特征,是引起育龄期妇女排卵异常与不孕的常见疾病.抑制素B(inhibin B,.INHB)作为近年来受到重视的具有重要生殖调节作用的一种多肽,在PCOS发病中的作用逐渐受到关注.INHB是主要由性腺分泌的糖蛋白激素,现已证实INHB可以调节卵泡刺激素(FSH)的分泌[1].本研究通过检测INHB在PCOS患者血清、卵泡液及卵巢颗粒细胞中的表达水平,探讨其与PCOS发病的关系及其临床意义.
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人类卵巢胰岛素样生长因子系统与多囊卵巢综合征
多囊卵巢综合征(PCOS)的发病机制涉及下丘脑、垂体、肾上腺、胰岛、脂代谢异常等,卵巢局部调节失衡也起一定的作用.PCOS患者卵巢泡膜细胞生成雄激素过多,与高黄体生成激素、高胰岛素有关.卵巢颗粒细胞不能继续增殖及合成雌二醇,导致优势卵泡选择受阻. 但PCOS患者卵泡液中促卵泡激素、胰岛素样生长因子(IGF)-Ⅰ水平正常.颗粒细胞在体外对促卵泡激素、IGF-Ⅰ反应不低,说明芳香化酶功能良好.因此提出,"PCOS患者卵泡局部存在促卵泡激素抑制物,阻断芳香化酶激活"的假说.本文拟介绍妇女生长激素-IGF-Ⅰ轴、卵巢IGF系统,在正常卵巢功能调节及PCOS发病中的作用.
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卵巢颗粒细胞中卵泡刺激素的受体后信号传导通路
卵泡刺激索(FSH)是下丘脑-垂体-性腺轴中的关键激素,通过与颗粒细胞的FSH受体(FSHR)结合,发挥卵泡募集、促卵泡生长和卵母细胞成熟的作用,并与黄体生成素(LH)一起,介导排卵过程,促进和维持正常的性腺发育和生殖功能.研究颗粒细胞中FSH与FSHR结合后的信号传导通路(即受体后信号传导通路)机制,对了解颗粒细胞在卵泡发育过程中的作用以及对治疗不孕、不育药物的研制具有重要意义.本文将对颗粒细胞中FSH的受体后信号传导及功能调节的分子学机制的研究进展做一综述.
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妊娠相关血浆蛋白-A在卵泡发育中的作用
妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A),是一种早在孕妇血清中发现的高分子量的黏多糖蛋白,曾主要用于高危妊娠的产前筛查.随着分子生物学技术的发展和对子宫、卵巢分子水平的深入研究,人们发现,PAPP-A不但存在于孕妇血清中,也存在于子宫内膜基质细胞、蜕膜细胞及卵巢颗粒细胞、卵泡液中.
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长期力竭运动致动情周期紊乱大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达变化
目的:观察长期力竭运动致动情周期紊乱大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及其相关调控蛋白Bcl-2、Bax变化,探讨运动性月经周期失调的发生机制.方法:24只动情周期正常的3月龄SD雌性大鼠随机分为对照组和模型组.模型组大鼠每日进行一次力竭游泳运动直至其动情周期紊乱.造模成功后取卵巢组织,采用原位末端标记法(TUNEL)、免疫组织化学染色法分别检测大鼠卵巢颗粒细胞凋亡和Bcl-2/Bax表达.结果:两组大鼠均可见棕褐色阳染颗粒的凋亡细胞,对照组凋亡的卵巢颗粒细胞数目较少,散在分布,而模型组卵巢凋亡细胞分布范围广,有时密集成堆.模型组大鼠卵巢细胞凋亡指数较正常组显著升高(P＜0.01).对照组、模型组卵巢颗粒细胞胞浆均有Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达.模型组Bcl-2蛋白表达明显低于对照组(P＜0.05);而Bax蛋白表达则明显高于对照组(P＜0.01).结论:长期力竭运动抑制Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,导致卵巢颗粒细胞凋亡增加,导致动情周期紊乱.
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卵巢早衰的颗粒细胞凋亡机制研究进展
卵巢早衰发病率日益增高，已经成为严重危害女性身心健康的疾病，近年来对其病因的研究很多，目前认为，造成这种疾病的原因是多方面的，主要有基因缺陷、激素及其受体缺陷、代谢紊乱以及自身免疫失常。此外，一些人为的机械性损伤，也可以诱发卵巢早衰，但其确切机制仍未可知。众多研究显示无论是何原因引起卵巢早衰，都伴有颗粒细胞的凋亡，这也说明了颗粒细胞的凋亡与卵巢早衰有着直接的关系。因此，本文就当前关于卵巢早衰中颗粒细胞凋亡的研究进展加以综述，提出卵巢早衰的细胞凋亡机制，旨在为后续研究提供参考。
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外伤性卵巢颗粒细胞瘤破裂一例误诊分析
患者女,47岁,因外伤后腹痛2h入院.患者于入院前2h被踢伤下腹部,伤后剧烈腹痛,持续约5 min后缓解,约20 min后再次出现腹痛,呈持续性,门诊以闭合性腹部损伤收入院.患者平素身体健康,无腹部疾病史,就诊时已闭经2年.入院体格检查:体温36.9℃、心率92次/min、呼吸频率22次/min、血压130/86 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),下腹部膨隆,腹肌柔软,下腹部压痛,无反跳痛,肝脾肾区无叩击痛,移动性浊音阴性,肠鸣音活跃.腹部诊断性穿刺物为不凝血.术前诊断为闭合性腹部损伤,急症行开腹探查术.术中探查盆腔有积血及血凝块,积血600ml,血凝块350 g.
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女性卵巢颗粒细胞移植抗早衰可行性研究
目的 探讨女性生殖细胞的丢失和卵巢颗粒细胞(grain cell)的衰减是衰老的根本原因.利用卵巢颗粒细胞移植修复本源,是抗早衰的关键.方法 采用生物学高新技术将卵巢颗粒细胞为30名志愿者进行了移植.结果 及时给女性机体补充可以产生激素的颗粒细胞,可为生殖细胞补充营养,并可替代衰老的颗粒细胞,从而改善机体的亚健康状态.结论 移植后不但安全,没有发生排异反应和过敏反应,而且血脂下降,疲劳状态明显好转,体质增强,收到了满意的效果.
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Genistein对大鼠卵巢颗粒细胞CYP19表达的影响
目的 观察大豆异黄酮主要活性成分金雀异黄素(Genistein)对大鼠卵巢颗粒细胞CYP19表达的影响,探讨可能的分子机制.方法 选择25～28日龄的雌性大鼠21只,采用孕马血清促性腺激素(PMSG)皮下注射法建立促卵泡发育模型,分离颗粒细胞进行培养.实验分为0、0.1、1、5、10、100μmol/L Genistein组、17β-E2(10 nmol/L)组、雌激素受体(ER)-α阻断剂Tamoxifen(1μmol/L)预处理30 min后加Genistein(1和10 μmol/L)组,空白对照组即0μmol/LGenistein组.各组细胞处理48 h后,采用RT-PCR法检测CYP19及其上游调控基因肝受体类似物(LRH-1)mRNA的表达.结果 1、5和10 μmoFL Genistein组CYP19和LRH-lmRNA的表达高于空白对照组(P＜0.05);而100 μmol/L Genistein组CYP19和LRH-1 mRNA的表达与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).与10 μmol/L Genistein相比,Tamoxifen(1μmol/L)预处理细胞30 min后再加入10 μmol/L Genistein组LRH-1 mRNA的表达明显下降(P＜0.05),而CYP19 mRNA的表达则未受Tamoxifen的影响(P＞0.05).结论 l、5和10μmol/L Genistein可明显上调大鼠卵巢颗粒细胞CYP19和LRH-1 mRNA表达,但这种促进作用可能并非通过ER-α介导.
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补肾调肝方抗卵巢衰老的作用机制的研究
目的 探讨大鼠卵巢自初始发育至衰老过程中卵巢颗粒细胞及其细胞因子的变化规律及补肾调肝方药干预影响,以期为补肾调肝方药抗卵巢衰老的作用机制研究提供理论依据.方法 分别选取3月、6月、12月、18月、24月龄Wistar大鼠模拟其青春前期、青春期、性成熟期、近绝经期、老年期的生长发育过程;各月龄大鼠均设立干预组和对照组,干预组以补肾调肝方灌胃干预20 ml/(kg·d),对照组灌以同等剂量的无菌饮用水.以常规TUNEL染色法观察各组大鼠卵巢颗粒细胞状态,计算凋亡指数(AI);并以RT-PCR对颗粒细胞促凋亡因子Bax及凋亡抑制因子Bcl-2 的mRNA表达进行半定量分析.通过各月龄组之间的对比观察卵巢颗粒细胞及其细胞因子的变化规律,并通过干预组和对照组之间的对比对补肾调肝方药抗卵巢衰老的相关机制做相应探讨.结果 AI:对照组3、6、12月龄大鼠的AI均处于较低,18、24月龄大鼠AI均显著升高(P<0.05);与对照组相比,研究组大鼠各月龄AI均显著降低(P<0.05).Bax:对照组3、6、12月龄大鼠的Bax mRNA表达处于较低水平,18、24月龄显著升高(P<0.05);与对照组相比,干预组各月龄大鼠Bax mRNA表达均显著降低(P<0.05).Bcl-2:对照组3、6、12月龄大鼠Bcl-2 mRNA表达处于较高水平,18、24月龄显著降低(P<0.05);与对照组相比,干预组各月龄大鼠Bcl-2 mRNA表达均显著升高(P<0.05).结论 凋亡抑制因子Bcl-2 mRNA低表达及促凋亡因子Bax mRNA高表达所启动的颗粒细胞调亡过程可能为卵巢衰老的重要机制之一;补肾调肝方药可通过上调Bcl-2 mRNA表达与下调Bax mRNA表达抑制卵巢颗粒细胞的调亡,可能为其抗卵巢衰老的作用机制之一.
