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燃煤型氟中毒对雌性大鼠卵巢颗粒细胞的影响
目的 动态观察燃煤型氟中毒对雌性大鼠卵巢颗粒细胞的影响.方法 将清洁级SD雌性大鼠90只随机分为对照组、中氟组、高氟组,每组30只,对照组大鼠食用非病区玉米饲料(含氟量5.2 mg/kg),中氟组和高氟组分别在饲料中添加45％和75％的某病区原煤加拌泥煤烘烤的玉米饲料(含氟量分别为47.8、96.0 mg/kg).每组分别于60、120、180 d动态观察雌鼠氟斑牙变化情况,测定尿氟、骨氟水平,采用透射电镜观察卵巢颗粒细胞超微结构变化,末端转移酶标记技术(TUNEL法)检测卵巢颗粒细胞凋亡情况.结果 成功建立燃煤型氟中毒雌鼠模型.透射电镜下发现,对照组卵巢颗粒细胞形态结构正常;染氟组可见颗粒细胞核膜皱缩,内质网、核糖体逐渐减少,线粒体肿胀,胞浆内出现较多的脂滴,随染氟剂量的增加逐渐出现颗粒细胞凋亡特征.除中氟组染氟60 d时卵巢颗粒细胞凋亡率与对照组差异无统计学意义外(P>0.05),各染氟组雌鼠颗粒细胞凋亡率均高于同期对照组(P＜0.05),且随染氟时间的延长和剂量的增加,颗粒细胞凋亡率逐渐增加.结论 氟中毒可能通过影响大鼠卵巢颗粒细胞结构,诱导和促进卵巢颗粒细胞凋亡,且颗粒细胞超微结构的损伤程度和凋亡率与染氟时间及剂量有关.
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低蛋白条件对燃煤型氟中毒雌鼠卵巢颗粒细胞的影响
为了解低蛋白条件对燃煤型氟中毒雌鼠卵巢颗粒细胞的影响,选取120只断乳2周的60～80 g清洁级SD雌性大鼠,随机分为对照组、低蛋白组、染氟组、低蛋白染氟组,每组30只.对照组和低蛋白组进食75％非病区玉米饲料(含氟量为5.2 mg/kg),染氟组和低蛋白染氟组进食75％燃煤型氟中毒病区玉米饲料(含氟量为96 mg/kg);对照组及染氟组饲料中大豆蛋白质含量为18 g/kg,低蛋白组和低蛋白染氟组为9g/kg.每组分别于60、120、180 d动态观察雌鼠氟斑牙变化情况,测定尿氟、骨氟水平,采用透射电镜观察卵巢颗粒细胞超微结构变化,以末端转移酶标记技术(TUNEL法)检测卵巢颗粒细胞凋亡情况.结果显示,成功建立燃煤型氟中毒雌鼠模型,低蛋白染氟组较染氟组电镜下病理损伤更明显.与对照组比较,低蛋白组120、180 d卵巢颗粒细胞凋亡率升高,染氟组和低蛋白染氟组60、120、180 d卵巢颗粒细胞凋亡率升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);低蛋白染氟组60、120、180 d卵巢颗粒细胞凋亡率高于低蛋白组,60、120 d卵巢颗粒细胞凋亡率高于染氟组,差异均有统计学意义(P＜0.05).染氟组180 d时卵巢颗粒细胞凋亡率高于60 d,差异有统计学意义(P＜0.05).析因分析结果显示,饲养60、120、180 d时氟对雌鼠卵巢颗粒细胞凋亡率有影响(F值分别为1 180.051,1 187.294,999.577,P＜0.05);饲养60、120 d时低蛋白对雌鼠卵巢颗粒细胞凋亡率有影响(F值分别为17.613,12.706,P＜0.05),而饲养180 d时无影响(F=4.017,P＞0.05),氟与低蛋白对雌鼠卵巢颗粒细胞凋亡率的影响无交互效应(F值分别为3.479,0.088,0.941,P＞0.05).提示低蛋白条件下燃煤型氟中毒雌鼠卵巢颗粒细胞病理损伤有所加重,但低蛋白与氟染毒对凋亡率的影响无明显相关性.
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一次性腹腔内铅染毒对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡率的影响
为探讨铅对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡率的影响,本研究将72只25日龄SPF级ICR雌性小鼠随机分为1和2mg/kg乙酸铅染毒组和对照组(生理盐水),每组24只.预饲2 d后,每只小鼠腹腔注射8 IU囊泡包埋的促卵泡素(FSH).48 h后,腹腔注射染毒乙酸铅,染毒剂量为0.2 ml/只.分别于染毒后48和96 h用流式细胞仪测定卵巢颗粒细胞凋亡率.结果 显示.染毒48 h后,对照组和1、2mg/kg乙酸铅染毒组颗粒细胞凋亡率分别为(7.6666±1.9675)%,(6.1000±0.435 9)%,(6.833 3±1.238 7)%,3者间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).染毒96 h后,1、2 mg/kg乙酸铅染毒组颗粒细胞凋亡率分别为(16.9000±2.433 8)%和(22.933 3±4.543 3)%.均高于对照组[(8.2000±1.50444)%1,差异有统计学意义(P＜0.05).与染毒48 h比较.染毒96 h后各乙酸铅染毒组的细胞凋亡率均较高,差异有统计学意义(P＜0.05).表明铅对卵巢颗粒细胞凋亡的促进作用具有时间依赖性和一定的剂量相关性.
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乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞INHB、FSHR mRNA及分泌功能的影响
[目的]运用血清药理学方法观察乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞抑制素(INHB)、促卵泡激素受体(FSHR)mRNA的表达及其分泌功能的影响.[方法]在大鼠卵巢颗粒细胞培养体系中加入乌萸汤、尿促卵泡激素(FSH)及正常大鼠含药血清,培养48 h后,分别用酶联免疫吸附法(ELISA),逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及放免法测定颗粒细胞INHB、FSHR、mRNA及培养液中雌二醇(E2)含量.[结果]各用药血清组E2含量较对照组均明显升高;颗粒细胞INHB、FSHR mRNA表达量明显增多,其中乌萸汤中剂量血清组效果优于西药组.[结论]乌萸汤含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞INHB、FSHR mRNA的表达以及E2分泌,说明乌萸汤可以通过调控卵巢局部因子、增强FSHR mRNA的表达从而提高卵巢对促性腺激素的反应性,改善下丘脑-垂体-卵巢轴,促进E2的分泌,以促进卵泡发育成熟及排出.
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梓醇对顺铂诱导大鼠卵巢颗粒细胞损伤的保护作用
目的 探讨梓醇对顺铂诱导大鼠卵巢颗粒细胞损伤的保护作用及作用机制.方法 收集大鼠卵巢颗粒细胞,经原代培养后设为对照组、模型组(顺铂50 nmol/L)和梓醇50、100、200μmol/L组,各组细胞按相应方式进行处理.采用MTT法测定细胞活力;流式细胞术Annexin V/PI双染法考察细胞凋亡情况;免疫组化法观察细胞增殖能力,WB法定量细胞凋亡蛋白的分子水平.结果 顺铂可显著抑制卵巢颗粒细胞活力、增殖,诱导细胞凋亡;在给予梓醇进行干预后,大鼠卵巢颗粒细胞活力增强、增殖上调,细胞凋亡减弱;经顺铂进行刺激损伤,卵巢颗粒细胞中caspase-3、caspase-9的活化蛋白表达量显著上升,而不同浓度的梓醇可显著下调细胞中cleaved caspase-3、cleaved caspase-9的蛋白表达量.结论 梓醇可以改善大鼠细胞活力、提高细胞增殖和抗凋亡能力,对顺铂诱导的卵巢颗粒细胞损伤产生明显的保护作用.
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育泡饮对大鼠卵巢颗粒细胞间隙连接蛋白43表达及分泌功能的影响
[目的]观察育泡饮对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞(GC)间隙连接蛋白43(CX43)表达及雌二醇(E2)分泌的影响,探索中药促进卵泡发育的可能作用机制.[方法]制备大鼠卵巢颗粒细胞进行原代培养,细胞培养48 h后,加入促卵泡激素(FSH) 50 ng/mL和不同剂量的育泡饮,继续培养48 h,放免法测定颗粒细胞培养液中E2的含量,Westernblot法检测CX43蛋白的表达.[结果]1)育泡饮能够促进卵巢颗粒细胞分泌E2,随着药物浓度的增大,E2分泌逐渐增加.2)育泡饮可明显促进颗粒细胞CX43蛋白的表达,其中高剂量组的促进作用与FSH组作用相似.[结论]育泡饮能明显促进卵巢颗粒细胞CX43蛋白的表达及E2分泌,说明育泡饮可通过上调CX43蛋白的表达促进颗粒细胞的增殖,增强颗粒细胞的抗凋亡能力,进而调节卵泡的发育.
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补肾调冲含药血清对离体卵巢颗粒细胞Bcl-2、P53蛋白表达的影响
[目的]探讨补肾调冲方对大鼠离体卵巢颗粒细胞原癌基因蛋白表达的影响.[方法]采用血清药理学的方法,以不同含药量的大鼠血清与体外培养的卵巢颗粒细胞共同孵育24 h,用免疫组化法检测Bcl-2、P53蛋白的表达.[结果]补肾调冲含药血清可增强Bcl-2蛋白的阳性表达.[结论]原癌基因作为卵巢内局部调节因子,参与卵巢颗粒细胞凋亡过程.补肾调冲含药血清可通过促进卵巢颗粒细胞内抑癌基因的蛋白表达,抑制颗粒细胞的凋亡.
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补肾促排方对大鼠卵巢颗粒细胞黄体生成素受体和卵泡刺激素受体的影响
目的 通过体外实验阐述补肾促排方治疗多囊卵巢综合征的药理学作用机制.方法 提取与鉴定大鼠卵巢颗粒细胞,提取补肾促排方水溶液.实验分为补肾促排方低、中、高剂量组和空白对照组,分别相应处理分离与鉴定的大鼠卵巢颗粒细胞24 h后提取mRNA,48 h后提取蛋白.通过RT-PCR和Wester-blot法分别检测各组黄体生成素受体(LHR)和卵泡刺激素受体(FSHR)mRNA和蛋白表达水平.结果 补肾促排方水溶液能够显著上调大鼠卵巢颗粒细胞LHR和FSHR mRNA和蛋白表达水平(P均<0.05),且呈现显著的浓度梯度依赖效应.结论 补肾促排方通过上调卵巢颗粒细胞LHR和FSHR的表达,促进卵泡的发育与排出,从而起到治疗多囊卵巢综合征的作用.
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药物对卵巢颗粒细胞和黄体细胞毒性的体外研究进展
1957-1961年的“反应停”事件引起全世界对生殖毒性的关注，揭开了药物生殖毒性研究的篇章。2006年11月，我国《药物生殖毒性研究技术指导原则》出台[1]，各界人士越来越关注生殖毒性。传统的动物生殖毒性研究需要大量的实验动物，周期长，工作量大，费用昂贵，且难以评价生殖毒性和阐明毒性机制。近年来，细胞分子生物学、基因技术等学科的飞速发展，使得体外检测技术和方法开始应用于动物体外生殖毒性机制研究，已由器官和细胞水平向着分子和基因水平方向发展，并且不断深入[2]。目前，国内外已创建了多种雌性生殖毒性体外研究方法，包括全胚胎培养技术和卵巢皮质薄片培养方法、颗粒细胞、黄体细胞、卵泡体外培养方法。
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乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞P38 MAPK信号转导途径的影响
目的：运用血清药理学方法观察乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞P38丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号转导途径的影响。方法：25只SD大鼠随机分为正常对照组、西药对照组、乌萸汤低、中、高剂量组，给药4 d后采血并分离血清。然后在大鼠卵巢颗粒细胞培养体系中加入各组血清，培养48 h后，用Western blot测定颗粒细胞P38 MAPK磷酸化蛋白的相对表达。结果：与空白对照组比较，各给药组颗粒细胞P38 MAPK磷酸化蛋白相对表达量明显增多（P＜0.01），乌萸汤中剂量组效果优于西药组（P＜0.01）。结论：乌萸汤含药血清通过提高P38 MAPK蛋白磷酸化水平从而促进卵巢颗粒细胞增殖，表明乌萸汤是通过调控P38 MAPK信号转导途径以促进卵泡发育成熟及排出。
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奠基方含药血清对类多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能影响的研究
目的:观察奠基方含药血清对类多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞(GC)体外分泌功能的影响.方法:采用血清药理学方法,以不同类PCOS 大鼠含药血清,与体外培养的颗粒细胞共同培养48 h,观察奠基方含药血清对类PCOS卵巢颗粒细胞雌激素(E2)、孕酮(P)分泌量的影响.结果:奠基方含药血清可明显增加颗粒细胞E2的分泌量,降低P 的分泌量.结论:奠基方可通过调节颗粒细胞的分泌功能进而改善类PCOS 的卵巢功能.
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体外受精-胚胎移植67例不孕症患者卵巢颗粒细胞凋亡率与妊娠结局的关系
目的:探讨卵巢颗粒细胞凋亡率与妊娠结局的关系.方法:选择67例适合进行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)手术的不孕症患者,收集卵泡液中的颗粒细胞,通过流式细胞仪检测卵泡液中卵巢颗粒细胞凋亡率,分析其与妊娠结局的关系.结果:IVF-ET患者临床妊娠组颗粒细胞凋亡率明显低于非临床妊娠组(P＜0.01).结论:卵巢颗粒细胞凋亡率可能可以预测IVF-ET妊娠结局.
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益气养血温肾调经法治疗卵巢肿瘤切除并化疗后闭经一例
患者女,32岁.因闭经6个月于2004年5月11日来我院就诊.患者于2003年9月行卵巢颗粒细胞瘤切除并化疗8个月,末次月经时间为2003年11月15日.曾于近期内行内分泌激素测定:睾酮(T)22.48 ng,孕酮(P)0.30 ng,雌二醇(E2)11.45 pg,黄体生成激素(LH)26.3 mU,卵泡刺激素(FSH)81.7 mU,皮脂醇(C)8.50 μg,催乳激素(PRL)4.55 ng.
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芹菜素对雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡影响
目的 探讨芹菜素(apigenin,Api)对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法 选情前期成年雌性SD大鼠20只,取卵巢颗粒细胞进行原代细菌培养,贴壁后随机分为4组(对照组、Api 10-4M组、Api 10-5M组、Api 10-6M组),加入处理因素.培养结束后,收集各组培养卵巢颗粒细胞,经苏木精-伊红染色和吖啶橙染色观察颗粒细胞形态,经MTT法及流式细胞仪检测颗粒细胞凋亡率,观察Api对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响.结果 MTT法检测对照组,Api 10-4M组、Api 10-5M组、Api 10-6M组A值分别为(0.87±0.059)、(0.29±0.057)(0.49±0.03)、(0.63±0.035);实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),提示实验组颗粒细胞数量减少,出现凋亡细胞;流式细胞仪检测对月强组、Api 10-4M组、Api 10-5M组、Api 10-6M组的颗粒细胞凋亡率分别为(3.63±0.37)%、(36.37±2.28)%、(34.67±1.96)%、(30.92±1.65)%,实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),提示实验组颗粒细胞凋亡率明显增高.结论 Api能抑制卵巢颗粒细胞的增殖,并促进其凋亡.
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邻苯二甲酸二辛酯对大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响
以邻苯二甲酸二辛酯(DOP)对大鼠卵巢颗粒细胞进行体外染毒、培养来研究DOP对卵巢颗粒细胞分泌功能的影响.提取未成年大鼠卵巢颗粒细胞进行体外培养,DOP染毒后测定细胞分泌产物(雌二醇和孕酮)含量.染毒组与对照组比较,雌二醇和孕酮水平均降低,差异有统计学意义(P＜0.01).雌二醇含量与DOP剂量的相关系数为-0.68 (P＜0.01)；孕酮含量与DOP剂量的相关系数为-0.79 (P＜0.01),提示在实验剂量下产生剂量-反应关系.DOP对大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能有抑制作用.
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补肾化痰法经APN信号通路对肥胖PCOS大鼠GC增殖的调控研究
目的:观察补肾化痰法经APN通路对肥胖PCOS大鼠卵巢GC增殖的调节作用研究.方法:采用来曲唑加高脂建立肥胖PCOS大鼠模型,补肾化痰复方治疗后,取卵巢组织行HE染色,免疫组化法检测AdipoR1/AdipoR2表达,realtime-PCR检测GC中p38MAPK、smad1/3、CCND2的mRNA表达水平.结果:与模型对照组比较,中药高、中剂量组卵巢GC中AdipoR1/2的表达增高(P＜0.05);中药高、中剂量组卵巢颗粒细胞p38MAPK、smad1/3、CCND2表达量均增高(P＜0.05).结论:补肾化痰法可能通过APN信号通路促进GC增殖,进而改善肥胖PCOS卵泡发育障碍,达到治疗作用.
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通脉大生片对大鼠卵巢颗粒细胞TGF-β1表达的影响
目的:探索通脉大生片对大鼠卵巢颗粒细胞TGF-β1的影响.方法:取原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞,随机分为自然生长对照组、通脉大生片高剂量组(通高组)、通脉大生片中剂量组(通中组)、通脉大生片低剂量组(通低组)、FSH组,分别于细胞生长对数期给药,取给药后1h、2h、6h、12h、24h、48h的细胞培养上清液,用酶联免疫法检测上清液中TGF-β1的表达量.结果:自然生长对照组各时间点的TGF-β1的表达量无明显变化,通高组、通中组、通低组于给药12h 时TGF-β1的表达量达高峰,随后开始下降,48h降到低,FSH组于给药2h后TGF-β1的表达量达高峰,随后开始下降,48h降到低.结论:通脉大生片可能是通过增加TGF-β1的表达量来促进卵泡发育,以达到治疗排卵障碍性不孕的目的.
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班氏促卵助孕汤含药血清对体外培养人卵巢颗粒细胞凋亡的影响
目的:运用血清药理学方法观察班氏促卵助孕汤对人卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法:向预培养24 h的人卵巢颗粒细胞中分别加入10％空白血清(对照组)、班氏促卵助孕汤含药血清(高、中、低剂量组),48 h后应用流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果:空白对照组的人卵巢颗粒细胞的凋亡率高于低、中、高3组班氏促卵助孕汤含药血清,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:班氏促卵助孕汤含药血清能明显抑制卵巢颗粒细胞的凋亡,可能是班氏促卵助孕汤调节卵巢功能的机制之一.
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人卵巢颗粒细胞分离培养方法的改进
背景：建立分离培养颗粒细胞快速有效的方法也是提高体外受精-胚胎移植成功率关键的一步。虽然目前文献中有较多关于人卵巢颗粒细胞分离方法的报道，但在细胞数量、纯度及后续生长等方面不尽人意。目的：建立有效的分离提纯、体外培养人卵巢黄素化颗粒细胞的方法。方法：收集体外受精-胚胎移植取卵时的卵泡液，用裂解法、沉淀法、密度梯度离心法分离，Ⅰ型胶原酶或透明质酸酶消化颗粒细胞黏液团并接种在培养皿中进行培养，培养液中加入或不加自体卵泡液。结果与结论：用裂解法得到的颗粒细胞数较沉淀法和密度梯度离心法得到的细胞数多(P >0.05，P <0.05)；3种方法提取的颗粒细胞活性比较无明显差异；培养24 h后沉淀法贴壁细胞数多(P <0.05)，而密度梯度离心法贴壁细胞数少(P <0.05)；透明质酸酶消化颗粒细胞较Ⅰ型胶原酶耗时少且消化彻底；加入自体卵泡液能够促进颗粒细胞生长和存活。结果证实，沉淀法提取颗粒细胞虽然耗时长，但培养的细胞存活率高、培养后收获的细胞数多；透明质酸酶较Ⅰ型胶原酶更适合消化颗粒细胞黏液团；在培养液中加入自体卵泡液更有益于颗粒细胞生长。
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IGF-I对子宫切除所致大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的抑制作用
目的探讨IGF-I对子宫切除所致大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的抑制作用.方法采用子宫切除术方法建立子宫切除Sprague-Dawley大鼠模型(保留卵巢).向体外培养的子宫切除大鼠卵巢颗粒细胞施加60ng/ml浓度外源性IGF-I.应用流式细胞仪检测细胞凋亡率.应用荧光显微镜观察细胞凋亡形态学特征.结果模型组(子宫切除)较正常组(子宫未切除)凋亡增加;IGF-I组(子宫切除+IGF-I)能减缓子宫切除引起的凋亡升高.结论外源性IGF-I抑制子宫切除大鼠卵巢颗粒细胞凋亡.
