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疏肝法对围绝经期综合征肝郁证模型大鼠卵巢黄体生成素受体及促卵泡生成素受体的影响
目的 探讨疏肝法对围绝经期综合征(perimenopausal syndrome,PMS)肝郁证模型大鼠卵巢黄体生成素受体(luteotropic hormone receptor,LHR)及促卵泡生成素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)基因的作用机制.方法 以随机数字表法将SPF级围绝经期SD大鼠分为肝郁证模型组、柴胡疏肝散组及丹栀逍遥散组,每组8只.采用慢性束缚结合孤养的方法,建立PMS肝郁证大鼠模型,另有3月龄育龄期大鼠作为青年对照组.柴胡疏肝散组大鼠灌胃柴胡疏肝散水煎剂4.0 g(生药量)/(kg?d),丹栀逍遥散组灌胃丹栀逍遥散水煎剂4.9 g(生药量)/(kg?d),肝郁证模型组及青年对照组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续灌胃3周.放射性免疫技术检测大鼠血清雌二醇(estrodiol,E2)、促卵泡生成素(follicle stimulating hormone,FSH)及黄体生成素(luteotropic hormone,LH)水平;qRT-PCR法检测大鼠卵巢LHR、FSHR mRNA表达水平.结果 与肝郁证模型组相比,柴胡疏肝散组血清FSH[(4.32±0.33)mIU/ml比(5.24±0.45)mIU/ml]、丹栀逍遥散组血清LH[(6.76±0.52)mIU/ml比(8.08±0.59)mIU/ml]水平显着下降(P<0.01);丹栀逍遥散组卵巢FSHR[(4.17±1.04)比(6.14±1.04)]、LHR mRNA[(8.17±2.21比15.38±6.00)]表达水平降低(P<0.01).结论 疏肝法治疗PMS肝郁证大鼠的机制可能与调节性激素水平及降低卵巢LHR、FSHR表达水平相关.
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益肾调肝Ⅱ号方对多囊卵巢综合征大鼠卵巢黄体生成素受体表达的影响
目的 观察益肾调肝汤Ⅱ号方对多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠卵泡发育、卵巢黄体生成素受体(LHR)表达的影响.方法 24日龄Wistar大鼠进行皮下埋植左炔诺孕酮结合皮下注射人绒毛膜促性腺激素造模,将造模成功60只大鼠随机分为6组,每组10只,未造模10只大鼠为正常组.分组灌服生理盐水、盐酸二甲双胍片、益肾调肝汤Ⅰ号方、益肾调肝汤Ⅱ号方低、中、高剂量15天后,观察动物卵巢重量,光镜观察卵巢卵泡的大小、黄体数;免疫组化分析LHR在卵巢中的表达情况.结果 运用益肾调肝汤Ⅱ号方中、高剂量后,大鼠发育卵泡数增加,不成熟的早期发育卵泡减少,黄体数量增加,LHR表达增加.结论 益肾调肝汤Ⅱ号方能明显增加大鼠卵巢重量、减少小卵泡数、增加黄体数,可明显增强LHR在卵巢中的表达,有利于卵泡的发育及排卵.
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围着床期小鼠卵巢黄体生成素受体和血管内皮生长因子表达的免疫组织化学研究
目的 探讨黄体生成素受体(LHR)和血管内皮生长因子(VEGF)在围着床期小鼠卵巢中的生物学作用. 方法 应用免疫组织化学SABC法和图像分析,检测LHR与VEGF在昆明小鼠( n =28)动情期、孕1d、孕4d和孕6d卵巢中的分布状况和变化规律. 结果 LHR与VEGF免疫阳性细胞具有相似的分布和变化规律.在动情期,较大的卵泡周围的基质细胞呈强阳性着色,与其他组相比,差异显著( P <0.05).随着妊娠的继续,颗粒黄体细胞的着色逐渐增强,在孕6d时表达强.在动情期和孕1d,部分血管内皮和血细胞分别呈VEGF和LHR强阳性着色.从孕1d开始,卵泡膜细胞呈LHR阳性着色. 结论 LHR和VEGF的表达与围着床期小鼠卵巢中卵泡的发育、排卵和黄体形成过程密切相关.
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大鼠颌下腺黄体生成素及其受体的定位、核心片段的克隆及序列分析
目的 探讨大鼠颌下腺组织中是否表达黄体生成素(LH)及其受体(LHR),为进一步研究LH对颌下腺的功能调节提供理论依据.方法 采用免疫组织化学SABC和原位杂交方法进行定位研究;应用RT-PCR方法克隆获得LH及LHR基因的cDNA核心序列,并进行序列分析.结果 大鼠颌下腺浆液性腺泡上皮细胞呈LH和LHR免疫反应阳性.阳性物质分布于胞浆,胞核呈阴性反应.上述细胞同样含有LH和LHR mRNA杂交信号,信号物质亦分布于胞浆内,胞核呈阴性反应.从大鼠颌下腺组织中扩增的LH及LHR基因的特异性条带经序列分析发现,扩增产物的LH基因序列与文献报道的大鼠腺垂体的完全一致;扩增产物的LHR基因序列与大鼠睾丸组织的完全一致.结论 大鼠颌下腺浆液性腺泡上皮细胞既能产生LH,又能表达LHR,提示LH对颌下腺浆液性腺泡上皮细胞的作用可能是通过自分泌或旁分泌来实现的.
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缝隙连接蛋白43和黄体生成素受体在小鼠卵巢中的表达
目的 观察小鼠卵泡发育过程中缝隙连接蛋白43(Cx43)和黄体生成素受体(LHR)在小鼠卵巢中的表达以及黄体生成素(LH)对卵巢Cx43表达的影响,为这两种分子与卵泡发育的关系提供实验依据.方法 选择出生后1d、4d、7d、2周、3周、4周、6周、8周龄雌性C57小鼠共8组,每组10只,取卵巢.HE染色观察卵巢形态、卵泡发育并测量颗粒细胞体积分数.免疫组织化学和Western blotting观察卵巢组织中Cx43及LHR的表达,Westernblotting检测不同浓度黄体生成素(LH)孵育后对卵巢Cx43表达的影响.结果 HE染色显示,出生1d小鼠卵巢中见原始卵泡,出生7d卵巢内出现初级卵泡,2周时出现窦前卵泡和少量窦卵泡,3周、4周时,出现较多大的窦卵泡,6～8周时出现黄体.卵泡颗粒细胞体积分数在2周后的卵巢中明显增加.Cx43表达在各阶段卵泡的颗粒细胞胞膜上,LHR表达在卵泡膜细胞、颗粒细胞及卵母细胞胞质中.Cx43和LHR出生后2周卵巢中的表达开始明显增加,并随卵泡发育表达逐渐增强,在3周、4周、6周和8周维持相对较高水平.LH体外干预可增加卵巢组织Cx43的表达.结论 Cx43和LHR在卵泡发育中发挥重要作用,LH可能通过LHR促进卵巢卵泡颗粒细胞Cx43的表达.
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DEHP对新生雄性仔鼠毒性作用的实验研究
目的 探讨邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)对新生雄性仔鼠毒性作用及机制.方法 DEHP分别以低、中、高3组剂量[10、100、750mg/(kg·d)]灌胃作用于怀孕12天到产后21天(GD12 ～ PND21)的SD母鼠,观察DEHP对产后1天( PND1)及产后21天(PND21)雄性仔鼠体重、睾丸重量、肛生殖器距离(AGD)和其对胚胎Leydig细胞形态结构、促黄体生成素受体( LHR)及类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)的蛋白表达水平的影响.结果 PND1中、高剂量组雄仔鼠的体重下降明显,分别与对照组和低剂量组相比较均有显著性差异(P＜0.01)；高剂量组睾丸重量下降明显,与对照组相比较有显著性差异(P＜0.05)；中、高剂量组雄仔鼠的AGD均有不同程度缩短,与对照组和低剂量组相比缩短均有显著性差异(P＜0.01).PND21中、高剂量组雄仔鼠的体重下降明显,分别与对照组和低剂量组相比均有显著性差异(P＜0.01)；高剂量组睾丸重量下降明显,与对照组相比有显著性差异(P＜0.01)；中、高剂量组雄仔鼠的AGD缩短明显,分别与对照组比较有显著性差异(P＜0.01).光镜下低剂量组可见胚胎Leydig细胞(FLC)聚集呈簇分布,中剂量组与高剂量组均可见胚胎Leydig细胞呈瘤样增生.电镜示低剂量组Leydig细胞椭圆形、长梭形,脂质颗粒减少,线粒体、滑面内质网丰富.中、高剂量组Leydig细胞呈梭形或椭圆形,大小不一,核大、圆,胞质丰富,细胞聚集一起,胞质内可见丰富的脂质颗粒,脂质颗粒染色深,滑面内质网及线粒体扩张.中、高剂量组睾丸FLC的LHR蛋白表达明显减弱,与对照组比较有显著性差异(P＜0.01)；高剂量组睾丸FLC的StAR蛋白表达减弱明显,与对照组比较有显著性差异(P＜0.01).结论 DEHP对新生雄性仔鼠具有毒性作用,其可能机制是DEHP宫内暴露后,抑制睾丸FLC的LHR蛋白和StAR蛋白的表达从而影响睾丸的发育.
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补肾促排方对大鼠卵巢颗粒细胞黄体生成素受体和卵泡刺激素受体的影响
目的 通过体外实验阐述补肾促排方治疗多囊卵巢综合征的药理学作用机制.方法 提取与鉴定大鼠卵巢颗粒细胞,提取补肾促排方水溶液.实验分为补肾促排方低、中、高剂量组和空白对照组,分别相应处理分离与鉴定的大鼠卵巢颗粒细胞24 h后提取mRNA,48 h后提取蛋白.通过RT-PCR和Wester-blot法分别检测各组黄体生成素受体(LHR)和卵泡刺激素受体(FSHR)mRNA和蛋白表达水平.结果 补肾促排方水溶液能够显著上调大鼠卵巢颗粒细胞LHR和FSHR mRNA和蛋白表达水平(P均<0.05),且呈现显著的浓度梯度依赖效应.结论 补肾促排方通过上调卵巢颗粒细胞LHR和FSHR的表达,促进卵泡的发育与排出,从而起到治疗多囊卵巢综合征的作用.
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黄体生成素及其受体在大鼠胰腺的免疫荧光定位
目的 观察黄体生成素(LH)及其受体(LHR)在SD大鼠胰腺的定位分布,以了解LH对胰腺的功能意义.方法 选取SD大鼠12只,雌雄不拘,经腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后,用4％多聚甲醛灌流固定2h,取出胰腺组织置于300g/L蔗糖液中,用于双标记免疫荧光定位研究,在激光共聚焦扫描显微镜下观察.结果 胰腺部分外分泌腺细胞质、导管上皮细胞及部分胰岛细胞质LH反应阳性,小血管内皮细胞质呈LH弱阳性.部分胰岛细胞质呈LHR反应阳性,一些外分泌腺上皮细胞质呈LHR反应弱阳性,部分胰岛细胞及胰腺外分泌细胞质呈LH和LHR双阳性反应.结论 LH可能通过旁分泌或自分泌的途径对胰腺的功能起调节作用.
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黄体生成素及其受体在大鼠肝脏的定位
目的 观察黄体生成素(LH)及其受体(LHR)在大鼠肝脏的定位分布,为研究LH是否参与肝代谢功能的调节提供形态学依据.方法 应用免疫荧光组织化学双标染色技术,在激光共聚焦扫描显微镜下观察染色结果.结果 大鼠肝细胞既呈LH阳性又有LHR阳性,LH和LHR免疫反应阳性物质均分布在大鼠肝细胞的细胞质,细胞核为阴性.不同部位的肝细胞LH及其受体免疫反应强度存在差别.结论 LH及其受体存在于大鼠肝脏细胞,可能对肝脏的功能起调节作用.
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特发性性早熟女童LHR基因Asp578 Gly突变研究
目的:研究黄体生成素受体(LHR)基因Asps578 Cly突变与女童特发性性早熟的关系.方法:从16例特发性性早熟女童的口腔拭子中提取DNA,5'-CAC TGC TGG CTT TIT CAC TGT ATT-3'和5'-TGA AGG CAG CTG AGA TGG CAAAAA-3'作引物,经常规PCR扩增后采用限制性内切酶MspI消化,检测LHR基因是否存在A1733G的单碱基突变.结果:16例性早熟女童的LHR基因均未检测到Asp578 Gly突变.结论:Asp578 Gly突变不是女童特发性性早熟的主要病因.
关键词： 特发性性早熟 女童 黄体生成素受体 Asp578 Gly突变 -
何首乌饮对运动疲劳大鼠睾丸组织黄体生成素受体的影响
目的:探讨何首乌饮对运动疲劳大鼠睾丸组织黄体生成素受体(LHR)的影响.方法:复制运动疲劳动物模型,测定睾酮水平,采用RT-PCR、免疫印迹和免疫组织化学法检测各组睾丸组织LHR的表达变化.结果:LHR免疫组化阳性颗粒主要表达于间质细胞以及精母细胞胞膜和胞质,何首乌饮预防组和何首乌饮治疗组阳性信号较强,模型组弱.LHR蛋白和mRNA表达变化为:何首乌饮预防组、何首乌饮治疗组明显高于对照组和何首乌饮组,模型组明显低于对照组.结论:何首乌饮可以提高大鼠睾丸组织LHR的表达.
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黄体生成素对小鼠子宫生长发育及其相关基因表达的影响
目的:通过分析黄体生成素(LH)受体基因敲除小鼠子宫生长发育相关基因表达的改变,探讨LH对子宫生长发育的影响.方法:应用基因芯片和RT-PCR方法分析LH受体基因敲除鼠子宫基因表达.结果:155个基因表达改变超过3倍;与生长发育相关的基因中,10个基因表达上调、5个基因表达下调;细胞周期蛋白cyclinD基因上调、cyclin B基因下调,半定量RT-PCR分析证实了细胞周期蛋白基因表达的变化,表明LH受体基因敲除鼠子宫细胞生长发生阻滞,21 d雌二醇和孕酮替代疗法不能够使这些基因表达的改变完全恢复正常.结论:LH除促进卵巢类固醇激素合成调控子宫生长发育外,还对子宫生长发育直接起作用.
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黄体生成素受体mRNA结合蛋白的研究进展
黄体生成素受体(LHR)在生殖和发育过程中发挥重要作用.女性排卵前期的黄体生成素(LH)峰及药理剂量的人绒毛膜促性腺激素(hCG)可导致LHR的下调,而在受体下调的大鼠卵巢细胞质中发现LHRmRNA结合蛋白(LRBP).研究表明,LH/hCG与受体结合后激活cAMP/PKA/ERK通路及miR-122表达,导致LRBP表达量增加;LHR mRNA与LRBP结合后,诱导翻译沉默,并转移至P小体,导致LHR mRNA降解,与排卵前期受体的脱敏过程密切相关.该文就LRBP的研究进展进行综述.
关键词： 黄体生成素受体 黄体生成素受体mRNA结合蛋白 P小体 -
巴戟天对手机辐射致雄性大鼠LH及LHR紊乱的修复作用
目的:探讨巴戟天对手机辐射致成年雄性大鼠血清黄体生成素(LH)及睾丸组织中黄体生成素受体(LHR)水平紊乱的修复作用. 方法:成年雄性SD大鼠50只均分为5组:假辐射组(假辐射,不给药)、辐射组(辐射,不给药)、阴性对照组(辐射,灌胃等体积双蒸水)、巴戟天醇提物给药组(辐射,灌胃巴戟天醇提物)、巴戟天水提物给药组(辐射,灌胃巴戟天水提物).经手机辐射后,给以巴戟天水、醇提取物灌胃治疗2周.检测血清LH和睾丸组织中LHR表达水平. 结果:经巴戟天水、醇提物治疗2周后给药组LH水平分别为(30.15±8.71) ng/L和(33.28±6.61) ng/L,LHR的相对表达分别为(0.96±0.06)和(0.94±0.08).两个给药组LH及LHR表达水平显著降低(P＜0.05),两个给药组间未出现统计学差异(P＞0.05). 结论:巴戟天对手机辐射致成年雄性大鼠LH及LHR水平紊乱有修复作用.
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两种多囊卵巢综合征大鼠模型造模方法的比较
目的：采用来曲唑和脱氢表雄酮(DHEA)建立多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型，并对2种模型进行比较。方法：6周龄和23日龄SD雌性大鼠各60只分别用于来曲唑和DHEA建模，均随机分为实验组、溶剂对照组和空白对照组各20只；从建模前后大鼠体质量增长、动情周期、卵巢变化、血清性激素水平、卵巢中雄激素受体(AR)和黄体生成素受体(LHR)等指标进行模型评价。结果：①2种造模方法的实验组大鼠卵巢颗粒细胞层明显减少，间质增生。②来曲唑造模的实验组实验前后体质量增加量、卵巢体积和相对质量均大于对照组(F=13.136F9.778和6.544，P均＜0.05)；DHEA造模的实验组仪卵巢体积小于对照组(F=19.383，P＜0.001)。③来曲唑造模的实验组黄体生成素、睾酮(T)含量高于对照组，而卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)低于对照组(P＜0.05)；DHEA造模组的实验组血清T、E2高于对照组,FSH低于对照组(P＜0.05)。④来曲唑造模的实验组AR、LHR含量均高于对照组(P＜0.05)；DHEA造模的实验组仅AR高于对照组(P＜0.05)。结论：①来曲唑大鼠模型更接近于人PCOS特征，是相对理想的PCOS模型。②AR、LHR参与了多囊状卵巢的形成，可作为PCOS模型蛋白质水平的评价指标。
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LHR和EGFR在ART黄素化颗粒细胞上的表达与妊娠率的关系
目的 探讨黄体生成素受体(LHR)和表皮生长因子受体(EGFR)在人类辅助生殖技术(ART)黄素化颗粒细胞上的表达与妊娠率的关系.方法 前瞻性研究卵胞浆内单精子注射(ICSI) 30个新鲜取卵周期,取卵日黄素化颗粒细胞上LHR和EGFR的表达与临床妊娠率的关系.研究对象分为LHR组(A组)和EGFR组(B组),比较两组受体阳性表达率和妊娠率的关系.结果 女方年龄22 ～ 34岁,平均(27±3)岁；不孕年限1～13年,平均(3.8±3.3)年；两组受体阳性表达率在妊娠者与未妊娠者间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 颗粒细胞上LHR与EGFR的表达与ART的妊娠率显著相关.
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滋阴补阳中药对光损伤大鼠卵巢相关因子的影响
目的 研究人工光环境致生殖节律失调大鼠卵巢的病理机制,以及滋阴补阳中药调整生殖节律的局部作用机理.方法 采用持续人工光源环境对SD雌性大鼠持续光照造模,中药组在造模成功后连续用药18日后取卵巢进行HE染色观察卵巢结构,采用免疫组化法、检测隐色素2、褪黑素受体1、黄体生成素受体、表皮生长因子受体.结果 持续人工光源环境下生长的雌性大鼠卵巢呈现多囊样改变,各级发育卵泡消失,窦卵泡发育不良,排卵障碍,原位黄素化,形成结构异常、筛网状黄体.滋阴补阳中药上调隐色素2、褪黑素受体1、表皮生长因子受体,并促进了卵泡发育.结论 人工光源持续照射可导致卵巢结构和功能异常,滋阴补阳中药可通过上调颗粒细胞及卵泡膜细胞隐色素、褪黑素受体、表皮生长因子受体表达,增强褪黑素在卵巢局部的生物学作用,改善颗粒细胞、卵泡膜细胞激素合成、代谢过程,促进卵泡发育和卵巢结构、黄体功能的改善.
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特发性性早熟女童黄体生成素受体基因Asp578Gly激活突变的研究
目的研究黄体生成素受体(LHR)基因Asp578Gly突变与女童特发性性早熟的关系.方法选择5名特发性性早熟女童,口腔拭子提取DNA,用5'-CAC TGC TGG CTT TTT CAC TGT ATT-3'和5'-TGA AGG CAG CTG AGA TGG CAA AAA-3'作引物,经常规PCR扩增后,用限制性内切酶MspI消化,以检测LHR基因是否存在A1733G的单碱基突变.结果5名性早熟女童的黄体生成素受体基因均未检测到Asp578Gly突变.结论Asp578Gly突变不是女童特发性性早熟的主要病因.
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补肾化瘀方对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达的影响
目的 通过观察补肾化瘀方对大鼠卵巢颗粒细胞上卵泡刺激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)蛋白的表达,探讨中药对多囊卵巢综合征(PCOS)卵巢局部的影响及作用机制.方法 应用补肾化瘀方作用于以丙酸睾酮联合HCG诱导PCOS大鼠模型,采用免疫组化法,检测PCOS大鼠颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达.结果 与正常组相比,模型组大鼠卵巢体质量增加,呈多囊性改变,卵泡颗粒细胞减少而膜细胞层增加,补肾化瘀方组卵巢形态接近正常组.补肾化瘀方能明显提高PCOS大鼠颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达,补肾化瘀方各剂量组与模型组和妈富隆阳性对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05或0.01),而中剂量组与正常对照组比较,差异均无统计学意义.结论 补肾化瘀方能提高PCOS大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达,可能与补肾化瘀方具有促进卵泡发育和排出的作用机制有关.
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护卵汤对GnRHa 超排卵大鼠卵巢FSHR 和LHR 蛋白表达的影响
目的 观察护卵汤对超排卵大鼠卵巢促性腺激素受体---卵泡刺激素受体(FSHR) 和黄体生成素受体(LHR) 蛋白表达的影响,探讨其相关的作用机制.方法 模仿人类超排卵长方案,对大鼠使用促性腺激素释放激素(GnRHa)降调节及尿促性腺激素(HMG)等药物超排卵(模型组),同时给予部分大鼠不同剂量的中药护卵汤(护卵汤低、中、高剂量组),以及未使用药物的自然周期大鼠为正常对照(正常组).在注射绒毛膜促性腺激素(HCG)当天摘取卵巢组织,用免疫组化法检测FSHR 和LHR 的蛋白表达.结果1、与正常组比较,模型组卵巢FSHR 蛋白表达减少,差异有统计学意义(P＜0.05);两组大鼠卵巢LHR 蛋白表达的差异无统计学意义(P＞0.05).2、与模型组比较,护卵汤高剂量组卵巢FSHR 和LHR 蛋白表达均增加,差异有统计学意义(P＜0.05);3、与模型组比较,护卵汤中剂量组卵巢LHR 蛋白表达显著增加,差异有统计学意义(P＜0.01),两组间卵巢FSHR 蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);4、护卵汤低剂量组与模型组比较,卵巢FSHR 和LHR 蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论护卵汤能改善GnRHa 超排卵大鼠卵巢FSHR 和LHR 的蛋白表达,从而改善卵泡发育及卵巢反应性.
