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何首乌饮对衰老大鼠睾丸组织细胞Rb/p53信号转导通路的影响
目的 通过检测Rb、p16、p53、p19、p21在衰老大鼠睾丸组织中的表达,探讨何首乌饮抗大鼠睾丸组织衰老的机制. 方法 选用8周龄SD雄性大鼠84只,随机分为正常组、模型组、何首乌饮高、中、低剂量组、何首乌丸剂组、自然恢复组,每组12只,采用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型.采用免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR法检测磷酸化Rb蛋白(pRb)、p16、p53、p19、p21在大鼠睾丸组织的表达差异.结果 模型组大鼠睾丸组织Rb、p53、p16、p19、p21表达明显增加,pRb表达明显减少(P<0.05);何首乌饮、何首乌丸组能显著提高pRb的表达,降低Rb、p53、p16、p19、p21表达(P<0.05),何首乌饮高剂量组调节作用大于其他各组(P<0.05). 结论何首乌饮通过调节睾丸组织Rb/p53信号转导通路相关基因和蛋白表达起到延缓衰老的作用.
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中药何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理
目的 讨何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理.方法 36只SD大鼠随机分为3组:正常组、模型组、预防组.采用D-半乳糖连续腹腔注射法制造雌性大鼠亚急性衰老模型,预防组在造模的同时以中药方剂何首乌饮灌胃.应用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠卵巢组织p53、p19
、Rb及p16基因的表达,用Western blotting方法检测各组大鼠卵巢组织Rb及p16蛋白的表达情况. 结果何首乌饮明显抑制了衰老大鼠卵巢组织中p53、P19arf、Rb以及p16基因表达的上调趋势(P<0.05),且明显降低了衰老大鼠卵巢组织中Rb及p16蛋白的表达(P<0.05). 结论何首乌饮抑制衰老途径中关键的调节因子p53、P19arf、Rb及p16的表达,从而起到抗大鼠性腺衰老的作用. -
何首乌饮对过度训练大鼠睾丸组织3β-羟基类固醇脱氢酶的影响
目的 探讨何首乌饮对过度训练大鼠睾丸组织3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分为5组,A组为安静对照组;B组为安静何首乌饮组;C组为自然恢复组;D组为何首乌饮治疗组;E组为何首乌饮预防组,每组6只.C组、D和E组大鼠复制力竭运动动物模型,其中的E组每天训练前给何首乌饮20g/(kg·d)(含生药9.6kg/L)灌胃作为预防.模型成功后D组给何首乌饮20g/(kg·d)(含生药9.6kg/L)灌胃治疗60d.放射免疫法检测各组血清睾酮浓度,分别采用RT-PCR、Western blotting和免疫组织化学法检测各组睾酮合成催化酶3β-HSD的表达变化.结果 3β-HSD蛋白的阳性信号为间质细胞的胞质表达棕黄色颗粒.3β-HSD在组织、蛋白和mRNA的表达变化:B组明显高于A组(P＜0.05),E组和D组高于C组(P＜0.05),E组和D组之间无显著性差异.结论何首乌饮可以增强睾酮合成限速酶3β-HSD的表达.
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何首乌饮减轻β-淀粉样蛋白诱导的海马神经元损伤的作用机制
目的 探讨何首乌饮对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的大鼠原代培养海马神经元损伤保护作用及可能机制.方法 采用新生24h内的SD大鼠进行原代培养海马神经元,将培养10d的海马神经元分为模型组、何首乌饮保护组、何首乌饮治疗组、何首乌饮对照组及空白对照组.Hoechst33258染色观察海马神经元的凋亡率;免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测各组海马神经元硫氧还蛋白1(Trx1)蛋白和mRNA的表达情况.结果 模型组细胞凋亡率增高(P＜0.05),Trx1蛋白和mRNA的表达量明显减少(P＜0.05);与模型组相比,何首乌饮治疗组和预防组的凋亡率明显降低(P＜0.05),Trx1蛋白和mRNA的表达量明显增加(P＜0.05).结论 何首乌饮可明显减轻Aβ诱导的海马神经元的损伤,其机制可能与增加抗氧化蛋白Trx1的表达有关.
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何首乌饮对大鼠睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶蛋白表达的影响
目的 探究何首乌饮影响大鼠睾丸间质(Leydig)细胞类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450 scc)蛋白表达的变化.方法 选用10～20 d的幼年雄性Wistar大鼠,分离、培养Leydig细胞,然后收集.采用氧化损伤的方法建立Leydig细胞衰老模型.实验分组:间质细胞衰老模型组,何首乌饮处理组,首乌丸处理组,正常组和何首乌饮对照组.结果 衰老模型组Leydig细胞StAR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显低于正常组和何首乌饮对照组(P＜0.01).另一方面,何首乌饮和何首乌丸干预组StAR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显高于衰老模型组(P＜0.05),何首乌饮组好于何首乌丸组.结论 何首乌饮可提高睾丸Leydig细胞StAR和P450scc蛋白的表达,提高睾酮的合成能力,从而延缓Leydig细胞衰老.
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何首乌饮对衰老大鼠生精细胞线粒体凋亡通路关键基因表达的影响
目的 探讨何首乌饮对衰老大鼠睾丸生精细胞线粒体凋亡通路关键基因表达的影响.方法 选用12月龄Wistar雄鼠45只,随机分为3组:青年对照组、自然衰老组、何首乌饮组,每组15只,何首乌饮组和自然衰老组于16个月开始分别灌胃何首乌饮和等量蒸馏水,连续60d.青年对照组于12月龄,其余两组于18月龄分别进行实验,通过Real-time PCR、免疫荧光染色和免疫印迹法,观察各组大鼠睾丸组织线粒体凋亡通路关键基因DR6、BAX、Caspase-3、Cyt-C、14-3-3σ的表达变化.结果 自然衰老大鼠线粒体凋亡通路关键基因14-3-3σ表达明显低于青年对照组,DR6、BAX、Caspase-3、Cyt-C表达明显高于青年对照组;而何首乌饮用药后能明显逆转上述现象.结论 何首乌饮提高衰老大鼠精子质量与线粒体凋亡通路有关.
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何首乌饮对运动疲劳大鼠睾丸组织P450胆固醇侧链裂解酶和类固醇激素急性调节蛋白的影响
目的 探讨何首乌饮对运动疲劳大鼠睾丸组织细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)和类固醇激素急性调节蛋白(StAR)的影响.方法 60只雄性SD大鼠,随机分为安静对照组(A组)、安静何首乌饮组(B组)、模型组(C组)、自然恢复组(D组)、何首乌饮治疗组(E组);何首乌饮预防组(F组),每组10只.C、D、E和F组大鼠复制运动疲劳动物模型,其中F组每天训练前给何首乌饮20g/(kg·d)(含生药4.8kg/L)灌胃60 d.模型成功后E组给何首乌饮20 g/(kg·d)(含生药4.8kg/L)灌胃治疗60 d.采用美国Beckmancoulter Unicel Dxl 800仪器测定睾酮水平; 采用RT-PCR、Western blotting和免疫组织化学法检测各组睾酮合成限速酶P450scc和StAR的表达变化.结果 P450scc免疫组织化学阳性颗粒主要表达于间质细胞及精母细胞,B组和F组表达强,C组弱,与其余各组相比差异有统计学意义.P450scc蛋白和mRNA表达变化为B、F组明显高于E、D和A组(P<0.05),C组明显低于A组(P<0.05),A组和D组以及B组和F组两两之间差异无显著性;StAR免疫组织化学阳性颗粒主要表达于睾丸间质细胞胞质,阳性强度表现为E组和F组强,C组弱.StAR蛋白和mRNA表达变化为E和F组明显高于A、D组(P<0.05),C组明显低于A组(P<0.05),A、D组之间无差异.结论 何首乌饮可以提高睾酮合成限速酶P450scc和StAR的表达.
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何首乌饮对运动性疲劳大鼠睾丸组织17β-羟基类固醇脱氢酶表达的影响
目的 探讨何首乌饮对运动性疲劳大鼠睾丸组织17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-HSD)的影响.方法 50只雄性SD大鼠随机分为5组,A组为安静对照组;B组为安静何首乌饮组;C组为模型组;D组为何首乌饮治疗组;E组为何首乌饮预防组,每组10只.C、D和E组大鼠复制运动性疲劳动物模型,其中E组每天训练前给予何首乌饮20g/(kg·d) (含生药9.6kg/L) 灌胃作为预防.模型成功后D组大鼠给予何首乌饮20g/(kg·d) (含生药9.6kg/L)灌胃治疗60d.放射免疫法检测各组大鼠血清睾酮浓度,分别采用免疫组织化学法、Western blotting和RT-PCR检测各组大鼠睾酮合成催化酶的表达变化.结果 17β-HSD蛋白的阳性产物主要表达在睾丸间质细胞.17β-HSD mRNA及蛋白表达变化:与C组相比,D组和E组17β-HSD有显著性提高(P＜0.05),而D组和E组无差异(P>0.05).结论 何首乌饮可以提高睾酮合成限速酶17β-HSD的表达.
关键词： 何首乌饮 运动性疲劳 睾酮 17β-羟基类固醇脱氢酶 免疫组织化学 免疫印迹法 反转录-聚合酶链反应 大鼠 -
中药何首乌饮对衰老大鼠卵巢组织形态学影响的实验研究
目的:观察中药何首乌饮对衰老模型大鼠卵巢形态学的影响.方法:将48只SD大鼠随机分为3组:正常组、模型组、预防组.采用D-半乳糖连续腹腔注射法制造雌性大鼠亚急性衰老模型,预防组在造模的同时以中药方剂何首乌饮灌胃.应用HE染色及透射电镜方法观察各组大鼠卵巢组织形态学的变化.结果:何首乌饮明显增加了衰老大鼠卵巢组织中原始卵泡、生长卵泡及黄体的数量(P＜0.05,P＜0.01),且明显改善了衰老大鼠卵巢颗粒细胞的超微结构,使滑面内质网增加,线粒体及高尔基复合体丰富.结论:何首乌饮通过影响衰老大鼠卵巢形态学的改变,具有预防和延缓颗粒细胞凋亡而达到阻止卵泡闭锁,可能是抗大鼠性腺衰老的作用机制之一.
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何首乌饮对衰老大鼠卵巢组织凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2及Caspase-3表达的影响
目的:探讨何首乌饮对衰老大鼠卵巢组织凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2及Caspase-3表达的影响.方法:D-半乳糖连续腹腔注射致亚急性衰老动物模型,造模后灌胃给予何首乌饮,连续60 d,大鼠断头取卵巢.采用免疫组织化学分析方法检测各组大鼠凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达；Western blotting法检测各组大鼠卵巢Caspase-3蛋白表达的变化.结果:模型组较正常组卵巢细胞Bax和Caspase-3表达量增加,Bcl-2表达减弱；何首乌饮可使卵巢Bax和Caspase-3表达量降低,Bcl-2表达增加,并呈现一定的剂量依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:何首乌饮方剂能延缓衰老大鼠卵巢细胞凋亡的发生,其机制可能是通过干预凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2及Caspase-3的表达抑制卵巢细胞的凋亡.
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何首乌饮对亚急性衰老大鼠的抗氧化和调血脂作用
目的:探讨何首乌饮对亚急性衰老大鼠的抗氧化和调血脂作用.方法:D-半乳糖连续腹腔注射致亚急性衰老大鼠模型,造模同时灌胃何首乌饮10,20,40 g·kg-1·d-1,qd,连续给药60 d后测大鼠血清中丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并检测血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)的含量.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血清MDA,TG和TC含量明显升高,SOD,GSH-PX,TAOC和HDL-C明显下降,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).与模型组比较,何首乌饮组血清MDA含量显著下降,血清SOD,GSH-PX活性,TAOC和HDL-C含量显著上升(P<0.05),呈现一定的剂量依赖性.结论:何首乌饮延缓D-半乳糖诱发的大鼠亚急性衰老的作用机制可能与其抗氧化和调血脂作用有关.
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何首乌饮对D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺形态学的影响
目的:探讨何首乌饮对衰老大鼠下颌下腺组织结构、超微结构的影响.方法:何首乌饮对D-半乳糖诱发的衰老大鼠模型的干预作用分治疗和预防两部分.光镜下计算其组织结构的相对体积比;透射电镜下观察主要细胞的超微结构.结果:①组织结构:腺实质相对体积比在预防组中以模型组低,各治疗组间以自然恢复组低;伴随衰老,脂肪和纤维间质含量逐渐增多,预防各组间以模型组高,治疗各组间以自然恢复组高.②超微结构:衰老模型组可见颗粒曲管(GCT)及腺细胞核固缩,线粒体肿胀及嵴断裂、粗面内质网减少,有核糖体脱落现象,何首乌饮预防组明显好于治疗组,治疗组改变程度较自然恢复组明显减轻.结论:①伴随衰老,D-半乳糖模型大鼠下颌下腺腺实质成分逐渐减少而被脂肪和纤维间质所替代,超微结构也有变化;②何首乌饮可改善衰老大鼠下颌下腺组织结构及超微结构的衰老变化,预防用药效果更好.
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何首乌饮含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞端粒酶活性的影响
目的 观察不同剂量的中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞端粒酶活性的影响,探讨其在调节卵泡微环境过程中所起的作用.方法 制备大鼠排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞(GC)分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养.用TRAP-ELISA方法分析GC的端粒酶活性;运用流式细胞术分析GC凋亡、坏死情况.结果 各剂量组何首乌饮含药血清可明显上调GC端粒酶活性,与对照组比较,中、高剂量何首乌饮含药血清能够显著提高GC端粒酶活性(P均<0.05).随着中药血清药物剂量的增加,颗粒细胞凋亡率逐渐下降,与对照组比较,中、高剂量组何首乌饮含药血清均能够显著降低离体GC的凋亡率(P均<0.01),各含药血清组细胞坏死率虽较对照组高,但与各组比较差别无统计学意义.结论 何首乌饮通过上调离体培养的大鼠卵巢GC端粒酶活性、抑制凋亡从而对卵泡局部微环境的调节,可能是其调节下丘脑-垂体-卵巢轴的重要靶点之一.
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中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2,bax表达的影响
目的 通过测定不同剂量的中药何首乌饮含药血清作用后的大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达及caspase-3活性,探讨何首乌饮对卵巢自身功能的影响.方法 制备排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养,Western blotting检测GC内凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达情况;分光光度法检测颗粒细胞内caspase-3活性.结果 何首乌饮含药血清可上调颗粒细胞bcl-2蛋白表达,下调bax蛋白表达,中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,可明显上调bcl-2蛋白表达(P均<0.01),中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,明显下调bax蛋白表达(P均<0.01).何首乌饮含药血清可下调颗粒细胞caspase-3活性,中、高剂量何首乌饮含药血清组与对照组比较有显著性差异(P均<0.01).结论 何首乌饮增加GC内凋亡抑制蛋白bcl-2表达及减少凋亡促进蛋白bax表达的作用,可能是其抑制GC凋亡,防止卵泡闭锁的作用途径之一;同时何首乌饮可能是在凋亡的较早阶段,通过阻断caspase-3的级联裂解即可开始起效,而发挥凋亡抑制作用.
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何首乌饮对D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺Bcl-2、Bax表达的影响
目的 探讨何首乌饮对衰老大鼠下颌下腺凋亡相关蛋白表达的影响.方法 用免疫组织化学方法观察衰老大鼠下颌下腺Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 Bcl-2蛋白阳性表达在预防各组间以正常组高,模型组低(P＜0.01).治疗各组间以阴性对照组高,自然恢复组低(P＜0.01),Bax蛋白的阳性表达在预防各组间以模型组高,正常组低(P＜0.01).治疗各组间以自然恢复组高,阴性对照组低(P＜0.01).结论 衰老大鼠下颌下腺Bcl-2表达减少、Bax表达增加.何首乌饮可通过提高抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达、降低促凋亡蛋白Bax的表达而达到延缓细胞衰老、凋亡的目的 .
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何首乌饮对衰老大鼠精子DNA完整性的影响
目的：：通过观察大鼠精子DNA完整性的变化，探讨何首乌饮对衰老大鼠精子质量的影响。方法：雄性Wistar大鼠随机分为青年对照组、自然衰老组、何首乌丸组、何首乌饮1组和2组。采用精子DNA吖啶橙荧光检测试剂盒检测精子DNA完整性，荧光显微镜下观察，头部发绿色荧光的为DNA正常精子，发红色或黄色荧光为DNA异常精子。结果：自然衰老组大鼠头部发绿色荧光精子数量明显减少，发红色或黄色荧光的DNA异常精子显著增多，与青年对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.01）；何首乌饮和何首乌丸干预组头部发绿色荧光的精子比自然衰老组大鼠显著增多(P＜0.01，P＜0.05），且用药60d何首乌饮组(1组）头部发绿色荧光的精子明显多于其它两个用药组(P＜0.01）。结论：何首乌饮能明显改善自然衰老大鼠精子DNA的完整性，提高精子质量。
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何首乌饮对衰老雄性大鼠睾丸生殖功能的影响
目的:探讨何首乌饮对衰老雄性大鼠生殖功能的影响.方法:32只雄性SD大鼠随机分为正常组、衰老模型组、何首乌饮组和何首乌丸组,每组8只.采用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型,何首乌饮组和何首乌丸组大鼠分别给予何首乌饮(38.4g/kg/d)和何首乌丸(8.24g/kg/d)灌胃60d.光镜下观察大鼠睾丸附睾头精子数量、存活率和活动度,放射免疫法检测血清睾酮浓度,原位杂交法观察睾丸IGF-1 mRNA的表达.结果:何首乌饮可显著提高衰老大鼠精子数量、存活率和活动度,血清睾酮浓度,睾丸IGF-1 mRNA的表达;何首乌饮组大鼠各指标与何首乌丸组、模型组比较差异显著(P<0.05).结论:何首乌饮可改善衰老雄性大鼠的生殖功能,延缓性腺衰老.
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何首乌饮对Leydig细胞衰老模型β-半乳糖苷酶表达的影响
目的:探讨何首乌饮对eydig细胞衰老模型β-半乳糖苷酶表达的影响.方法:采用3 β-HSD特异性染色鉴定体外培养的大鼠睾丸Leydig细胞,分为正常组、Leydig细胞衰老损伤组、何首乌饮预防组和何首乌饮治疗组,用50 μ mol/L的H2O2和100μmol/L的FeSO4处理Leydig细胞建立Leydig细胞衰老模型.观察各组Leydig细胞β-半乳糖苷酶表达的变化.结果:正常组Leydig细胞无β-半乳糖苷酶表达.与正常组比较,衰老组Leydig细胞β-半乳糖苷酶的表达明显升高(P＜0.05)；何首乌饮预防组、治疗组Leydig细胞β-半乳糖苷酶的表达明显低于衰老组(P＜0.05),何首乌饮治疗组、预防组Leydig细胞β-半乳糖苷酶的表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:何首乌饮可通过降低β-半乳糖苷酶的表达保护睾丸Leydig细胞衰老损伤.
关键词： 睾丸Leydig细胞 β-半乳糖苷酶 何首乌饮 衰老 -
何首乌饮对衰老大鼠肾脏组织形态学的影响
目的:探讨何首乌饮对衰老大鼠肾脏的保护作用.方法:D-半乳糖腹腔注射建立大鼠衰老模型,何首乌饮连续灌胃,肾组织切片HE染色,显微镜下观察肾组织形态学的变化并进行定量分析.结果:何首乌饮组的肾小球数目明显高于模型组(P<0.01),与正常组接近;肾小囊囊腔宽和肾小球直径明显低于模型组(P<0.01).结论:何首乌饮能改善衰老大鼠肾脏的形态学结构,具有延缓肾脏老化的作用.
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中药何首乌饮对衰老大鼠抗氧化能力的影响
目的:观察何首乌饮对亚急性衰老大鼠血清丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及总抗氧化能力(T-AOC)的影响.方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和何首乌饮预防组,每组10只.D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型,何首乌饮预防组大鼠在腹腔注射D-半乳糖的同时灌胃何首乌饮(0.06ml/kg),用药60d.分别检测各组大鼠血清MDA含量、GSH -Px活性、SOD活性及T-AOC.结果:与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠MDA含量明显升高,GSH -Px活性、SOD活性、T-AOC明显降低(P＜0.01,P＜0.05)；与模型组比较,何首乌饮预防组大鼠MDA含量明显降低,GSH -Px活性、SOD活性、T-AOC明显升高(P＜0.01).结论:何首乌饮可抑制衰老大鼠抗氧化能力的降低,具有一定延缓衰老的作用.
