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何首乌饮对大鼠睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶蛋白表达的影响
目的 探究何首乌饮影响大鼠睾丸间质(Leydig)细胞类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450 scc)蛋白表达的变化.方法 选用10～20 d的幼年雄性Wistar大鼠,分离、培养Leydig细胞,然后收集.采用氧化损伤的方法建立Leydig细胞衰老模型.实验分组:间质细胞衰老模型组,何首乌饮处理组,首乌丸处理组,正常组和何首乌饮对照组.结果 衰老模型组Leydig细胞StAR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显低于正常组和何首乌饮对照组(P＜0.01).另一方面,何首乌饮和何首乌丸干预组StAR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显高于衰老模型组(P＜0.05),何首乌饮组好于何首乌丸组.结论 何首乌饮可提高睾丸Leydig细胞StAR和P450scc蛋白的表达,提高睾酮的合成能力,从而延缓Leydig细胞衰老.
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何首乌饮对Leydig细胞衰老模型β-半乳糖苷酶表达的影响
目的:探讨何首乌饮对eydig细胞衰老模型β-半乳糖苷酶表达的影响.方法:采用3 β-HSD特异性染色鉴定体外培养的大鼠睾丸Leydig细胞,分为正常组、Leydig细胞衰老损伤组、何首乌饮预防组和何首乌饮治疗组,用50 μ mol/L的H2O2和100μmol/L的FeSO4处理Leydig细胞建立Leydig细胞衰老模型.观察各组Leydig细胞β-半乳糖苷酶表达的变化.结果:正常组Leydig细胞无β-半乳糖苷酶表达.与正常组比较,衰老组Leydig细胞β-半乳糖苷酶的表达明显升高(P＜0.05)；何首乌饮预防组、治疗组Leydig细胞β-半乳糖苷酶的表达明显低于衰老组(P＜0.05),何首乌饮治疗组、预防组Leydig细胞β-半乳糖苷酶的表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:何首乌饮可通过降低β-半乳糖苷酶的表达保护睾丸Leydig细胞衰老损伤.
关键词： 睾丸Leydig细胞 β-半乳糖苷酶 何首乌饮 衰老 -
小鼠胚胎睾丸Leydig细胞培养、纯化及其功能研究
目的:探讨小鼠胚胎睾丸Leydig细胞体外培养、鉴定、纯化的方法,并进行形态学观察、分泌睾酮能力等生物学特性检测.方法:选择胎龄16 d的胎鼠睾丸,0.03%胶原酶Ⅰ消化,3β-羟基类固醇脱氢酶(HSD)染色鉴定及纯度测定,锥虫蓝染色检测细胞活率.放免法测定Leydig细胞不同培养时间及密度下分泌睾酮的水平.结果:Leydig细胞培养前和培养72 h后纯度分别为(45.10±1.66)%和(81.17±2.32)%;培养液中可检测到睾酮,睾酮水平与Leydig细胞数、培养时间相关,单个Leydig细胞睾酮分泌能力逐日下降.结论:该法分离的胚胎Leydig细胞纯度较高,生长性好,保持增殖和分泌睾酮的生物学特性,可应用于相关的研究.
关键词： 睾丸Leydig细胞 睾酮 胚胎 小鼠 体外培养 -
碱性成纤维细胞生长因子在大鼠BMSCs向睾丸Leydig细胞分化中的作用研究
目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向分化为睾丸Leydig细胞过程中的作用,探讨BMSCs定向分化为Leydig细胞的适宜方法. 方法:将经纯化鉴定的SD大鼠BMSCs第3代细胞接种于6孔板,随机分为对照组(A)、人绒毛膜促性腺素(hCG)+血小板源性生长因子(PDGF)诱导组(B)、hCG+ PDGF+5.0 ng/ml bFGF诱导组(C)、hCG+ PDGF+ 10.0 ng/ml bFGF诱导组(D)、hCG+ PDGF+20.0 ng/ml bFGF诱导组(E),分别于第7、14、21天进行形态学观察、培养液睾酮水平及3β-羟化类固醇脱氢酶(3β-HSD)免疫荧光检测. 结果:B、C、D、E组细胞诱导后体积变大,互相连接呈长梭形或不规则形,贴壁生长,核大、较圆,符合Leydig细胞的特点.随着时间和bFGF浓度的增加,B、C、D、E组睾酮水平逐渐升高,3β-HSD阳性表达细胞逐渐增多,C、D、E组与B组,D、E组与C组间差异有统计学意义(P均＜0.05);D、E组之间差异无统计学意义(P＞0.05). 结论:bFGF在大鼠BMSCs向Leydig细胞体外诱导分化过程中有明显促进作用.
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邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导小鼠胚胎Leydig细胞凋亡的体外实验研究
目的 研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[Di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]对小鼠胚胎睾丸Leydig细胞凋亡诱导作用.方法 DEHP50、100、200 μg/ml分别作用于体外培养、纯化的胎龄16 d(GD16)小鼠胚胎睾丸Leydig细胞.光镜、电镜观察Leydig细胞形态和超微结构变化,DNA末端原位标记染色法(TUNEL法)和Annexin-V/PI双染法流式细胞仪分别检测Leydig细胞凋亡指数、凋亡细胞比例.结果 DEHP处理组透射电镜可见凋亡典型的形态学变化,凋亡指数及凋亡细胞比例与对照组比较有显著或非常显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).结论 DEHP能诱导小鼠胚胎睾丸Leydig细胞凋亡.
