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确证家兔外周血中存在具有多向分化能力的间充质干细胞
本研究确证家兔外周血中存在具有多向分化潜能的间充质干细胞(MSC).取成年新西兰大白兔,经每日皮下注射粒细胞集落刺激因子30 μg/kg动员6d后采集外周血样品,用Ficoll密度梯度离心和贴壁培养法分离纯化外周血间充质干细胞(PBMSC),镜下观察其生长形态并绘制增殖曲线;流式细胞术分析其表型特征;并分别对培养的PBMSC进行成骨、成软骨及成脂细胞诱导分化能力鉴定.结果表明:①原代培养24h后,可见较多短梭形及多角形贴壁细胞,3-4d后出现集落样生长,传代培养的PBMSC形态均一、呈长梭形漩涡状生长;②PBMSC增殖能力旺盛,培养2d后进入对数生长期,细胞倍增时间为37.4 h;③流式细胞术检测显示,培养的PBMSC高表达CD29,不表达CD14;④PBMSC经成骨诱导培养21 d后,茜素红染色显示有明显的钙结节形成;经微团无血清软骨培养体系诱导培养21d后,细胞团切片,阿利新蓝染色呈强阳性反应;经成脂诱导培养21 d后,油红染色显示诱导细胞胞浆内有大量脂滴.结论:成功从兔外周血中分离培养了PBMSC,在适宜诱导培养条件下具有向成骨、成软骨、成脂分化的能力.
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一种简单快速扩增和获取外周血γδT细胞的方法
本研究目的是建立一种简单快速的扩增人外周血γδT细胞的方法,以便用于γδT细胞的生物学特性和临床过继性免疫治疗的研究.取人外周血5-10 ml,分离获取单个核细胞,用结核杆菌低分子多肽抗原(MTb-Ag)刺激细胞增殖,通过荧光单克隆抗体TCRγδ-PE染色及流式细胞仪检测γδT细胞所占比例,用MTT试验检测细胞毒活性.结果表明:MTb-Ag能特异地刺激外周血单个核细胞中的γδT细胞增殖,γδT细胞可达69.2%,对K562细胞具有较高的杀伤活性.结论:本方法是一种简单、快速、特异的体外扩增和获取人外周血γδT细胞的方法.
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rhG-CSF体内应用对骨髓和外周血造血干/祖细胞上CXCR-4表达的影响
为了观察rhG-CSF动员对外周血和骨髓造血干/祖细胞上CXCR-4表达的影响,应用三色荧光标记技术对动员前后骨髓和外周血中单个核细胞(MNC)和CD34+细胞上CXCR-4的表达进行了测定.结果显示,G-CSF动员显著增加了外周血MNC及骨髓CD34+细胞上CXCR-4的表达,骨髓MNC及外周血CD34+细胞上CXCR-4的表达无变化,稳态骨髓(SS-BM)中CD34+细胞比例与G-BM、G-PB中CD34+细胞比例呈正相关,与采集到的骨髓及外周血中CD34+细胞/公斤也具有良好的正相关性.结论:G-CSF体内应用后CD34+细胞上CXCR-4表达的变化可能是动员机制的一部分,CXCR-4的高表达可能有利于MNC的植入,SS-BM中CD34+细胞的含量可作为动员效果好坏的预测指标.
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中剂量rhG-CSF动员对供者外周血免疫细胞组成的影响
本研究观察12例健康供者在使用10μg/(kg·day)rhG-CSF动员前后白细胞总数变化.应用外周血涂片瑞氏染色对白细胞进行形态学分类,使用流式细胞术分析动员前后外周血单个核细胞中T细胞、B细胞、NK细胞和单核细胞比例的变化.结果发现,动员前1天外周血白细胞计数中位数为6.25(4.7-7.8)×109/L,其中淋巴细胞中位数为2.07(1.63-3.1)×109/L,单核细胞中位数为0.163(0.078-0.414)×109/L;动员第5天外周血白细胞计数中位数为37.47(24-72.57)×109/L,其中淋巴细胞中位数为3.22(1.46-5.31)×109/L,单核细胞中位数为1.2(0.706-3.627)×109/L.供者外周血白细胞的增加为动员前的6.26±2.14倍(P<0.01),其中淋巴细胞的增加为动员前的1.45±0.76倍(P<0.05),单核细胞数增加为动员前的7.48±4.41倍(P<0.01).流式细胞术分析发现,动员前CD3+T淋巴细胞占外周血单个核细胞(PBMNC)比例的中位数为46.96%[(32.36-57.45)%],动员后为40.94%[(25.31-48.9)%];动员前CD4+/CD8+淋巴细胞比例为1.27±0.46,动员后为1.36±0.51;动员前CD4+CD8+T淋巴细胞占PBMNC比例的中位数为0.41%[(0.16-1.51)%],动员后为0.49%[(0.09-2.0)%];动员前CD16+CD56+NK细胞占PBMNC比例的中位数为13.98%[(4.08-25.08)%],动员后为16.65%[(12.06-33.05)%];动员前CD3+CD16+CD56+NK-T细胞占PBMNC比例的中位数为2.75%[(0.37-6.38)%],动员后为3.13%[(0.46-5.95)%];动员前CD20+B淋巴细胞占PBMNC比例的中位数为9.28%[(5.97-16.33)%],动员后为9.94%[(7.36-20.41)%];动员前CD14+单核细胞占PBMNC比例的中位数为12.48%[(3.54-19.35)%],动员后为29.52%[(16.51-36.76)%].动员后CD14+单核细胞在PBMNC中的比例比动员前增加2.87±1.51倍(P<0.05);动员前后T淋巴细胞、NK细胞、NK-T细胞、B淋巴细胞在PBMNC中的比例以及动员前后CD4+/CD8+淋巴细胞比均无显著变化(P>0.10).结论:rhG-CSF动员引起的单核细胞增加可能在异基因外周血造血干/祖细胞移植的相关事件中发挥着重要作用.
关键词: 重组人粒细胞集落刺激因子 动员 免疫细胞 外周血 -
骨髓增生异常综合征外周血活化T细胞的研究
目前认为免疫功能在骨髓增生异常综合征(MDS)发病、发展及向白血病的转变中,可能起重要作用[1].本实验通过流式细胞术和双标记技术来检测20例MDS患者外周血活化T细胞的变化,以探讨MDS的发病机制,以期为预防及治疗提供理论依据.
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外周T细胞淋巴瘤患者CD45RO+T以及CD45RA+T在外周血中的分布特点分析
目的:探讨外周T细胞淋巴瘤(Peripheral T cell lymphoma,PTCL)患者记忆T细胞(CD45RO+T)以及初始T细胞(CD45RA+T)在外周血中的不同分布特点的临床意义.方法:选取我院2010年2月~2014年2月收治的27例PTCL患者,以同期30例健康体检者作为对照,通过比较PTCL患者与健康受试者外周血中CD45RO+T、CD45RA+T的分布差异,分析不同临床分期的PTCL患者外周血中上述指标的差异.结果:PTCL患者的淋巴结中T细胞抗原呈多样性表达,以CD4+为主要免疫表型,无B细胞相关抗原表达;患者组外周血CD4+/CD8+、CD4+CD4SRO+T显著低于正常组(P<0.05),CD4+ CD45RA+T、CD8+ CD45RA+T、CD8+ CD45RO+T显著高于正常组(P<0.05);Ⅰ/Ⅱ期PTCL患者外周血CD4+/CD8+、CD4+ CD45RO+T显著高于Ⅲ/Ⅳ期患者(P<0.05),CD4+CD45RA+T、CD8+ CD45RA+T、CD8+CD45RO+T显著低于Ⅲ/Ⅳ期患者(P<0.05).结论:CD45RO+T和CD45RA+T在PTCL患者中存在明显的分布差异,针对其不同分布情况制定相应PTCL的处理方案,可提高PTCL的确诊率,改善患者的预后.
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特发性血小板减少性紫癜患者外周血共刺激分子的表达及与血小板抗体关系的临床研究
本研究检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血共刺激分子CD80、CD86和CD137的表达及血清血小板抗体(PAIgG)含量并探讨二者相关性及与血小板数量等疾病表现的关系,以期阐明共刺激分子在特发性血小板减少性紫癜发病及病情判断中的作用.分别应用免疫荧光法和流式细胞术检测48例ITP患者及40名正常人外周血单个核细胞(PBMNC)表面共刺激分子CD80、CD86和CD137的表达;应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清PAIgC含量.结果表明:ITP患者CD80、CD86和CD137的表达水平分别为(4.92±2.02)%,(8.68±4.25)%,(5.32±2.67)%,PAIgG平均含量为210±3.02 ng/107PA,均明显高于正常对照组(2.01±0.75)%,(4.56±2.06)%,(1.37±1.25)%和20±1.13 ng/107PA(p<0.01).共刺激分子表达水平与PAIgG含量呈正相关(r=0.302,P<0.05),与患者血小板数量呈负相关(r=-0.369,P<0.05).结论:共刺激分子CD80、CD86和CD137是参与ITP发病和免疫反应的重要共刺激分子,其过度表达与ITP发病及临床病情密切相关.纠正其异常表达、调节免疫状态可能是ITP的治疗策略之一,具有重要的临床研究意义.
关键词: 特发性血小板减少性紫癜 外周血 共刺激分子 血小板抗体 -
人外周血来源的过度生长内皮细胞的分离、培养及鉴定
与内皮干细胞相比,外周血来源的过度生长内皮细胞(blood outgrowth endothelial cells,BOECs)富含血管新生和细胞黏附所需的蛋白,生物学特性更像内皮细胞;同时它克服了成熟的人脐血内皮细胞体外培养扩增量少和表型易发生改变的缺点,成为一种研究血管异常相关性疾病的新工具.本研究旨在建立从人外周血中体外培养、扩增BOECs,并进行鉴定的方法.采集外周血,梯度离心获得单个核细胞,接种于胶原铺板的细胞培养皿上,EGM-2培养4周.观察BOECs的形态学特征,流式细胞术分析细胞表面抗原表达.血管性血友病因子(yon Willebrand factor,vWF)多聚体分析BOECs上清vWF多聚体分布,荧光共聚焦显微镜鉴定细胞内vWF的贮存及vWF的刺激分泌.结果表明,体外诱导培养4周左右,出现克隆性生长的细胞集落,BOECs呈现“铺路石”样外观.经过3周左右的扩增后,过度生长的内皮细胞表达CD31、CD34、EPCR阳性,CD14、CD45、CD133阴性.收集BOECs上清,进行vWF多聚体分析,与正常血浆相比vWF多聚体分布无差异.在荧光共聚焦显微镜下观察,BOECs内贮存vWF,加入佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)刺激后,细胞内vWF增加,细胞表面可见vWF丝状结构.结论:本研究运用该实验方法在国内首次实现了人BOECs的体外培养、扩增及鉴定.该方法可以为血管性血友病病人发病机制的探讨提供天然的细胞模型,并可能为病人基因治疗提供新工具.
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胎盘组织——间充质干细胞的新来源
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是早分离自人骨髓组织的一类具有多向分化潜能的干细胞[1],随后陆续在人脂肪组织、外周血、肌肉和结缔组织中也发现了MSC[2-5].目前MSC是临床研究普遍的细胞来源,在组织工程研究、刨伤修复和肿瘤治疗等领域应用广泛,但MSC在骨髓、外周血等组织中的含量极低,并且有研究表明MSC含量会随着人年龄的增长而逐渐降低,同时细胞的增殖分化能力也大大下降[6].
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IL-17在肿瘤发生发展中的作用及其临床意义
白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)是由多种细胞分泌的一种促炎性细胞因子。IL-17在多种肿瘤中发挥着关键作用。在临床研究中,Zhu 等[1]发现人类乳腺癌肿瘤中存在 IL-17蛋白的表达。胃癌患者外周血中 CD8+T细胞产生的 IL-17水平升高,且与胃癌的进展相关[2]。另外,在肺癌伴随恶性胸腔积液患者的胸腔积液中,IL-17的浓度明显高于其在良性胸腔积液患者胸腔积液中的水平[3]。然而, IL-17R敲除小鼠和 IL-17/IFN-γ双敲小鼠抑制肿瘤生长[4],提示 IL-17具有促进肿瘤生长作用。有报道认为,IL-17以 T细胞依赖的方式抑制肿瘤的生长[5]。在 IL-17敲除小鼠中肿瘤的生长速度显著加快[6]。因此,IL-17可能通过不同的机制发挥着促进或抑制肿瘤的效应。下面主要就 IL-17在肿瘤中的作用进行简要综述。
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子宫体原发弥漫性大B细胞淋巴瘤一例
患者女,78岁.绝经30余年,近1个月无明显诱因出现下腹部坠胀感,于2010年7月收入院.无明显腹痛,无阴道流血.妇科检查:老年性外阴,阴道通畅,宫颈光滑,下腹部可触及一个肿块,大小约7 cm×8 cm,无压痛,因患者肥胖附件触诊不清.肝脾未见异常,全身淋巴结无肿大.下腹部CT:盆腔肿块.下腹部磁共振检查:子宫底部肿瘤,考虑肉瘤可能.胸部X线片未见异常.外周血、骨髓涂片均正常.患者入院后行广泛全子宫、双附件切除术及盆腔淋巴结清扫术.
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弥漫性大B细胞淋巴瘤梭形细胞变异二例
例1男,57岁.左上腹疼痛1月余,加重2天.以往无任何自觉症状和体征.2003年9月19日因意外撞击伤在外院急诊,CT检查提示脾脏血肿.留院观察,但症状未见缓解,且近2天疼痛加剧,转来我院就诊.外周血检查未见异常.脾脏切除术中,见脾脏肿大呈结节状,大结节约8 cm,脾门见一直径1 cm肿大淋巴结.腹主动脉旁及其他处未见淋巴结肿大.术中冷冻病理诊断为恶性梭形细胞肿瘤.术后诊断:梭形细胞淋巴瘤,弥漫性大B性,伴脾门淋巴结累及.行CHOP方案化疗,随访至今3个半月,未复发.
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子宫弥漫性浸润型B细胞淋巴瘤并乳腺转移一例
患者女,62岁.发现腹部肿块5 d,于2001年2月28日入院,体检:神志清楚,全身浅表淋巴结未触及.妇科检查:举痛,右附件触及肿块,表面凹凸不平,固定,左附件正常.B超:子宫萎缩,盆腔与宫底相连肿块11.0 cm×8.9 cm,诊断右卵巢囊腺瘤,其他脏器未见异常.实验室检查:外周血及骨髓象正常(术后).术中见子宫如孕3个月大,表面凹凸不平,双侧附件正常,右侧宫旁有一不规则瘤体,其组织松脆,鱼肉状,术中冷冻切片诊断:小细胞恶性肿瘤.全切子宫及双附件.
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原发性甲状腺B细胞淋巴瘤
一、材料与方法1.材料:收集本院1998~2001年9例原发性甲状腺B细胞淋巴瘤手术切除标本,复习临床资料,所有病例除甲状腺肿块,部分伴局部颈淋巴结有肿大外,其余部位未发现浅表淋巴结肿大.肝、脾无实质性肿块,外周血、骨髓检查均无异常,无淋巴瘤既往史.
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血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤骨髓/外周血瘤细胞免疫表型分析
血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)是一类以异形T淋巴细胞增生伴显著血管增生,以及滤泡树突状细胞增生为主要表现,为一类来源于成熟T细胞的淋巴瘤[1].过去AITL瘤细胞形态学诊断缺乏特异性的鉴别特征,而近来AITL瘤细胞CD10[2]和CXCL13表达意义的发现为AITL的诊断提供了有力的支持,为了更深入了解AITL瘤细胞的免疫表型特征及发病机制,我们利用流式细胞术分析AITL患者骨髓及外周血有核细胞表面CD分子标志,期望获得更多信息.
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低氧诱导肺动脉内皮细胞间质细胞衍生因子-1的表达及其调控机制
肺血管重塑(PVR)是低氧性肺动脉高压持续且难以逆转的主要原因,其主要病变表现为肺动脉壁细胞增多,但其来源和机制仍不清楚.研究表明骨髓和外周血中存在血管壁细胞的祖细胞,并且参与了PVR的形成[1-3].间质细胞衍生因子-1(SDF-1)是特异性介导干细胞归巢至骨髓,介导祖细胞归巢至损伤或缺血组织的关键因子,SDF-1表达在这些部位的血管内皮细胞,而低氧是这些部位的微环境特征,也是诱导SDF-1表达的主要原因[4-5].低氧诱导因子-1α(HIF-1α)是特异性介导细胞低氧反应的关键因子,直接调控脐静脉内皮细胞SDF-1基因的表达[6].我们旨在探讨低氧对肺动脉内皮细胞SDF-1表达的影响及HIF-1α对其表达的调控作用.
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消化道恶性肿瘤患者外周血人类斯钙素1基因表达的检测
一、材料与方法1.材料:69例消化道恶性肿瘤患者均为东南大学附属中大医院普外科和胸心外科2002年9月~2003年7月住院病人,所有病例均经病理确诊.取术前外周血.以消化道恶性肿瘤组织标本为阳性对照,以非肿瘤患者(14例消化道炎症疾病人群)及健康捐献者(15例健康人群和5例妊娠期妇女)外周血为阴性对照.Trizon试剂为加拿大Sangon公司产品;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒及Taq酶等为日本TAKARA公司产品.
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肺癌患者血清中p53基因突变的检测及意义
肺癌是目前严重危害人类健康的常见恶性肿瘤之一.临床上诊断为早期的一些肺癌患者外周血中可能已经有循环的肿瘤DNA[1],提示检测其外周血中的肿瘤DNA,对肺癌患者的诊断、分期和预后的判断等可能具有重要价值.
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外周血中血管内皮前体细胞的分离和鉴定
新血管的形成主要有两种方式,一是血管形成(vasculogenesis),即造血血管母细胞(hemangioblast)原位分化成内皮细胞并形成原始毛细血管丛的过程[1,2];二是血管新生(angiogenesis),指由已存在的血管以出芽的方式形成新血管的过程[3,4].一直以来,人们认为血管形成只发生于胚胎发育时期,在出生后并不存在.1997年,Asahara等[5]发现在人的外周血中存在血管内皮前体细胞(endothelial progenitor cells, EPC),该种细胞可参与出生后的多种病理和生理过程中的新血管形成[6],此现象同胚胎时期的血管形成相类似,故称作出生后血管形成(postnatal vasculogenesis).我们采用外周血作为材料来源,建立了一种稳定可重复的分离、鉴定末梢血液EPC的方法,为进一步研究EPC在生理和病理过程中的作用提供重要的实验基础.
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HIV/AIDS患者外周血T淋巴细胞功能亚群的变化
研究发现CD28在CD4+、CD8+ T细胞上的表达可以代表CD4+、CD8+ T细胞的功能,本实验检测HIV/AIDS患者外周血CD4+ CD28+、CD8+ CD28+ T淋巴细胞,以探讨患者T淋巴细胞功能的变化.1 对象 正常对照为51例健康献血员,平均年龄(36±10)岁.在北京佑安医院就诊的HIV/AIDS患者50例,男31例、女19例,年龄10~56岁,平均(33.6±9.2)岁;所有患者均未接受抗逆转录病毒治疗.其中HIV感染者14例,AIDS患者36例.