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动员后兔外周血间充质干细胞体外诱导转分化为心肌细胞
目的从动员后的兔外周血中分离间充质干细胞(MSCs),体外诱导转化为心肌细胞,为干细胞移植治疗心肌梗死提供新的无创性的细胞来源.方法给新西兰白兔皮下注射粒细胞集落刺激因子30 μg/(k·d)5 d,从外周血中分离MSCs,经5-氮胞苷作用24 h,进行肌动蛋白、结蛋白及心肌特异性肌钙蛋白T免疫组化鉴定.结果经5-氮胞苷诱导后的MSCs形成梭形多核细胞,2周后,部分细胞聚集成球形细胞团,球形细胞团及部分梭形多核细胞呈肌动蛋白、结蛋白及心肌特异性肌钙蛋白T阳性.结论从动员后的兔外周血中分离获得MSCs,可以在体外诱导成心肌细胞,有望成为移植治疗心肌梗死的新的无创性细胞来源.
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食管癌患者外周血中miR-181b-5p表达水平下降
目的 探讨miR-181b-5p在食管癌患者外周血中表达水平的变化,评价其在食管癌患者的诊断和预后评估的临床意义.方法 收集34例食管癌患者和26名健康志愿者全血标本,分为食管癌组和正常对照组;对白细胞总RNA的miRNA芯片结果进行分析;筛选单一miRNA候选指标并用RT-qPCR法进行验证.结果 与正常对照组相,比食管癌组miR-181b-5p表达水平下调.结论 miR-181b-5p在食管癌中表达下调,可能与食管癌的发生、发展相关.
关键词： 食管癌 外周血 miRNA芯片 miR-181b-5p -
供者特征对rhG-CSF动员的外周血和骨髓混合移植物中免疫细胞组成的影响
近,我们采用GIAC(即G,粒细胞集落刺激因子+I,强的免疫抑制+A,抗胸腺细胞球蛋白+C,外周血与骨髓联合)技术体系成功跨越了HLA不合屏障,从根本上解决了异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)供者来源缺乏的问题[1-2].大量资料显示,供者特征影响移植物的细胞组成,后者又与Allo-HSCT的预后密切相关[2-3].我们从供者的年龄、性别、体重等方面研究供者特征对粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的外周血和骨髓混合移植物中免疫细胞组成的影响.
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初发性类风湿关节炎患者外周血中Tfh细胞及其相关细胞因子的临床意义
滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cells,Tfh细胞)是近年来新发现的,真正意义上辅助B细胞功能的T细胞亚群,其辅助B细胞活化、增殖、分化和分泌免疫球蛋白[1].在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中,B细胞分泌大量高亲和力抗体可诱发炎性反应,致关节损伤[2].本实验拟通过对RA患者外周血Tfh细胞表型及相关细胞因子的检测,探讨其与初发性RA发病的关系.
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人外周血内皮祖细胞的培养过程及分化
目的:研究人外周血中内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)的培养及分离,并探索EPC生物学特性及诱导分化条件.方法:健康成人肘静脉血,用密度梯度离心法得到单个核细胞,接种于纤维连接蛋白包被的6孔板进行培养(含有人血管内皮细胞生长因子),观察细胞集落、梭形贴壁细胞的形成过程.应用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪进行EPC的鉴定.结果:在细胞培养的第4天,人外周血来源的单个核细胞开始形成从中间向外周放射的细胞集落;在第7天时形成典型的长梭形,首尾相连成条索状;培养第2周时,长梭形细胞渐消失,出现鹅卵石样的圆形椭圆形细胞;在第3周时,鹅卵石样细胞增殖旺盛.可以应用激光共聚焦显微镜成功鉴定EPC,并且VEGF和人纤维连接蛋白可以促进EPC的生长.结论:人外周血中的内皮祖细胞来源于单个核细胞,早期内皮祖细胞出现于细胞培养第4～7天,晚期内皮祖细胞出现于细胞培养2～3 周时.EPC在特定条件下可分化为内皮细胞,为EPC 的进一步研究及临床应用奠定了基础.
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非特异性精神发育迟滞患者外周血miRNA的差异表达及临床诊断价值
目的:研究非特异性精神发育迟滞患者外周血miRNA的差畀表达及其诊断价值.方法:检索国内外文献筛选与非特异性精神发育迟滞相关的10种miRNA,按照病历号随机选取30例非特异性精神发育迟滞患者作为病例组,同时按照体检号入组30例身心健康者作为对照组,入组后抽取静脉血5ml,运用实时荧光定量PCR技术检测病例组和对照成员10种miRNAs的表达水平.结果:①病例组与对照组比较年龄、性别、城乡、独生子女无统计学差异(P＞0.05);②病例组与对照组比较miRNA—125b、miRNA—132、miRNA—222、miRNA—223和miRNA—363表达水平有统计学差异(P＜0.05);③ROC分析发现,miRNA—222(AUC=0.786,P—0.043)、miR-NA—223(AUC=0.833,P=0.008)对特异性精神发育迟滞有一定的诊断价值.结论:miRNA—222和miRNA一223的异常表达对非特异性精神发育迟滞有一定的诊断作用,可能与非特异性精神发育迟滞的发病机制有明显关联.
关键词： 非特异性精神发育迟滞 微小RNA 实时荧光定量PCR 外周血 -
从兔外周血直接克隆B细胞κ轻链的可变区
目的 从兔外周血总RNA中直接扩增出B细胞κ轻链的可变区序列.方法 首先从IMGT/GENE-DB数据库中获取大耳白兔Ig胚系基因Vκ(IGKV)、Jκ(IGKJ)和Cκ(IGKC)的cDNA序列、设计引物,然后以非免疫兔外周血总RNA为模板进行RT-PCR扩增,回收产物并克隆到T载体,随机挑选单克隆测序,终将序列提交到IMGT/V-QUEST,分析出每个克隆的Vκ-Jκ组合,并利用BioEdit的本地Blast程序比较出Cκ的基因型.结果 共设计出4对引物,其中引物对RK.C1[4-5-9]无产物,引物对RK.C1[1-2-7]、RK.C1[3-6-8]和RK.C2[1-2-3-4]有产物,分别回收、克隆到T载体后各挑取20个克隆,共获得51个克隆的插入子序列.没有任何2个克隆的插入子序列完全相同,每个克隆均包含完整的兔Vκ、Jκ及Cκ的5'端序列,其中Vκ-Jκ-IGKC1组合的克隆33个,Vκ-Jκ-IGKC2组合的克隆18个;68个Vκ胚系基因中有22个出现,其中频率高的是IGKV1S10*01(12次),其次是IGKV1S36*01、IGKV1S37*01和IGKV1S4*01(各5次),其余均为3次以下;8个Jκ胚系基因中只有1个出现,为IGKJ1-2*01;2个Cκ基因的等位基因分别为IGKC1*01和IGKC2*03.33个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01]克隆中有17种不同的组合方式,其中频率高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01](7次).18个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03]克隆中有11种不同的组合方式,频率高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03](5次).Vκ-Jκ-Cκ组合方式相同的克隆,序列仍具有明显的差异.结论 利用自行设计的兼并引物,成功并特异地从兔外周血总RNA中直接扩增出了κ轻链的可变区,且产物具有良好的多样性,但所有Vκ-Jκ-Cκ组合中只出现了1种Jκ基因.
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从兔外周血直接克隆IgG重链可变区
目的 从兔外周血总RNA中直接扩增出IgG重链可变区基因.方法 先从IMGT/GENE-DB数据库中获取编码大耳白兔免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)的3个胚系基因片段VH(IGHV)、D(IGHD)和JH(IGHJ),以及编码γ重链恒定区(CH)基因Cγ(IGHG)的cDNA序列,然后设计嵌套引物,以兔外周血总RNA为模板,进行RT-PCR和Nested-PCR扩增,产物经胶回收后克隆到T载体,随机挑选白色克隆测序,后将序列用Bioedit软件的Local Blast功能比对出Cγ的基因型,同时提交到IMGT/V-QUEST分析出所属的VH、D和JH胚系基因.结果 获得25个克隆的插入子序列,每个克隆均为兔IgG重链可变区的编码基因,且包含了完整的VH、D、JH胚系基因片段,以及Cγ基因第1个外显子(CH1)序列的5’端部分,但没有任何2个克隆的序列完全相同.37个IGHV功能基因出现了2个;11个IGHD功能基因出现了8个;11个IGHJ功能基因出现了4个.VH-D-JH组合方式共出现18种,即使VH-D-JH组合方式相同,序列仍具有明显的差异.结论 从兔外周血总RNA中直接扩增出了IgG重链可变区,自行设计的引物显示出了高度的特异性和良好的兼并性.
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宫颈鳞癌患者血清膜联蛋白A5含量的检测及其临床意义
目的 检测膜联蛋白A5(ANXA5)在人宫颈鳞癌患者外周血中的含量改变,探讨ANXA5作为宫颈癌诊断标志物的可行性.方法 收集人宫颈鳞癌患者外周血清48例和正常育龄妇女外周血清38例,低速离心取上清,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法分别检测血清中ANXA5和鳞状细胞癌抗原(SCCAg)的含量;离心后取红细胞行RT-PCR进行患者与正常组ANXA5表达的检测.组间检验采用t检验;并进行肿瘤患者中ANXA5与SCCAg的相关性分析.结果 宫颈鳞癌患者血清中ANXA5的含量均比正常人显著增多,血细胞中ANXA5 mRNA的表达显著增多,差异有显著性(P<0.05);SCCAg在肿瘤组中的含量同样显著高于正常组(P<0.05);ANXA5与SCCAg具有明显的相关性,但ANXA5的阳性率大于SCCAg.结论 ANXA5在宫颈鳞癌患者外周血中含量增高,特异性和敏感性较高,可作为临床诊断和预后宫颈鳞癌的备选标志物.
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外周血中一种分泌胶原的新型细胞--循环成纤维细胞
由于"循环成纤维细胞"(circulating fibrocytes)在组织损伤、修复重建和基因治疗中的重要功能,自2004年首次命名以来深受人们的关注[1].其实这种细胞早在1994年就被人们发现、分离和鉴定[2].在研究组织创伤修复过程中发现和确认了一种纤维细胞(fibrocytes),并且基于它们的生长特点和独特的细胞膜表型给它们定义为循环成纤维细胞(circulatlng fibrocytes)或游走成纤维细胞(alitofibrocytes).循环成纤维细胞能生成和分泌胶原蛋白和其他基质蛋白,存在于外周血中,具有显示它们造血来源(hematopoetic orgin)的细胞表面标记.这种新的白细胞亚群开始曾被叫作"纤维细胞"(fibrocytes),这个术语是由希腊语"kytos"(细胞)和拉丁语"fiber"(纤维)共同组成.然而,这个定义在解剖学术语中可能导致混淆,如在组织学、病理学中的名词"纤维细胞"(fibrocytes)指的是"成熟"的成纤维细胞(mature fibroblasts).在内耳的解剖组织名词中也有叫作"fibrocytes"的细胞是指毛细胞.所以学者们需要考虑给循环成纤维细胞一个更具特色的名称即循环成纤维细胞(circulating fibrocytes)或游走成纤维细胞(alitofibrocytes),后者词汇中"alitis"在希腊语中表示"流浪者",以强调这些细胞的血源游走性.而循环成纤维细胞则强调它们存在于血循环之中.
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负载肝癌抗原的人树突状细胞生物学特性的研究
目的探讨负载肝癌抗原的树突状细胞(DC)对自身CIK细胞的诱导增殖能力和杀伤能力.方法从人外周血分离获得单核细胞,体外经重组细胞因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)培养获得DC,电镜观察其形态,流式细胞仪检测其表面抗原,混合淋巴细胞反应检测负载肝癌抗原DC诱导CIK细胞增殖活性,检测激活的CIK对肝癌细胞的杀伤作用.结果经体外培养,从外周血分离获得的大量成熟DC,检测表明高表达DC的抗原标志,负载抗原的DC具有很强的激发同种CIK增殖的能力,激活的CIK对肝癌细胞系具有很强的杀伤作用.结论实验结果为肝癌的临床免疫治疗提供了理论基础.
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慢性肾功能衰竭患者外周血细胞CD146的表达及意义
目的 探讨CD146在慢性肾功能衰竭(CRF)患者外周血细胞中的表达及意义.方法 收集本院2007年8月至2009年7月门诊及住院CRF患者51例为CRF组,33例正常人为健康对照组,流式细胞术检测两组外周血细胞CD146的表达并比较两组之间的差异,分析CRF患者外周血细胞CD146表达与血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)的相关性.结果 与对照组比较,CRF组单核细胞、中性粒细胞CD146+细胞百分率及CD45-CD146+细胞数量均显著升高[(4.09±3.48)%比(0.20±0.10)%;(4.71±3.94)%比(0.79±0.14)%;(16.43±10.48)个/μl比(2.16±0.81)个/μl,均P<0.001].CRF患者外周血CD45-CD146+细胞数量与BUN、Scr均呈正相关(r=0.480、0.595,均P<0.01).结论 外周血单核细胞及中性粒细胞CD146的表达及升高与CRF的发生有关,CD45-CD146+细胞数量增加与CRF的发生及严重程度有关.
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输血相关急性肺损伤患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞变化的临床意义
目的 检测输血相关急性肺损伤(TRALI)患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞(Treg)的计数及其功能基因叉头框蛋白3 (Foxp3) mRNA的表达水平,以及探讨其与疾病预后的关系.方法 收集2008年6月至2011年11月期间健康体检者(对照组,n=30)和重症监护病房收治的TRALI患者[TRALI组,n=26,TRALI组按预后又分为死亡组(n=5)和存活组(n=21)]外周抗凝血,采用流式细胞术分析各组T细胞亚群.采用四色流式细胞术以Foxp3-FITC/CD25-PE/CD4-PerCP/CD3-PC7抗体组合检测各组受试者外周血CD4+CD25highFoxp3 +Treg的计数,比较死亡组和存活组患者外周血CD4+CD25highFoxp3+Treg的水平.实时荧光定量PCR技术检测特异性转录因子Foxp3 mRNA的表达水平,并分析患者外周血CD4+CD25highFoxp3+Treg的比例与Foxp3mRNA的表达水平的关系.结果 TRALI患者与对照组健康人间CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞计数的差异无统计学意义,而CD3+CD8+T细胞则较对照组增加(P＜0.05),CD4+/CD8+比值降低(P＜0.05).死亡组CD3+CD8+T细胞比例高于存活组(P＜0.05),CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞比例和CD4+/CD8+比值则低于存活组(均P＜0.05).TRALI患者外周血CD4+CD25highFoxp3+Treg计数为(8.86±3.14)％,明显高于健康对照组(5.67±2.43)％(P＜0.05).TRALI死亡组患者外周血CD4+CD25highFoxp3+Treg计数为(11.23±3.79)％,显著高于存活组患者(7.69±3.21)％(P＜0.05).TRALI患者外周血Foxp3 mRNA的表达水平为(3.77±2.73)×105拷贝/μg,显著高于对照组(0.43±0.21) ×105拷贝/μg(P＜0.05).TRALI患者外周血CD4+CD25highFoxp3+ Treg计数与Foxp3 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.513 1,P＜0.05).结论 TRALI患者外周血CD4+C D25highFoxp3+ Treg和Foxp3mRNA的变化可能是导致TRALI疾病发展的关键因素之一,与疾病预后有密切关系.
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蝎毒及蝎毒多肽对小鼠免疫功能和外周血细胞计数的作用
目的观察蝎毒(SV)及蝎毒多肽(PSV)对正常小鼠免疫功能和外周血细胞计数的作用.方法取正常小鼠45只,随机分为3组:SV组、PSV组、对照组,分别腹腔注射,1次/d,连续5d.于首次给药6h、24h、8d后,每组取小鼠5只,称体重,眼球取血,计数外周血细胞、处死后脾脏、胸腺,计算脾重指数、胸腺指数.8d取外周血后测试体能.结果 SV组6h、24h、8d白细胞计数增加(p<0.05);PSV组略高于对照组.SV组6h中性粒比例明显增多,24h淋巴细胞比例明显增加(p<0.05),8d二者比例恢复正常;PSV组6h、24h中性粒略有增加,8d恢复正常.两组单核细胞均有增高.血小板计数SV组维持正常,PSV组升高.SV、PSV组脾重指数、胸腺指数和红细胞计数与对照组相比均不减少或略有增加(p>0.05),两组体能增强明显.结论 SV及PSV均可提高正常小鼠的免疫功能,维持或增加外周血各类细胞数目,改善机体整体功能状态.
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脾原发性结节型T细胞淋巴瘤1例
患者女性,56岁.上腹部不适10个月,乏力,失眠1个月入院.查体:一般情况欠佳,消瘦,脾肋下触及1～2 cm,全身浅表淋巴结不肿大,外周血Hb偏低,骨髓象正常.B超示脾门处探及6 cm×6.5 cm及2.7 cm×1.8 cm的略低回声团,边界清楚,提示脾内实质性占位.腹部CT示脾低密度占位.X光全胸片示两肺无明显活动性病变.术中见脾上、下极及脾前缘共见4个肿块,大小不等,脾门无肿大淋巴结.
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晚期非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药机制及外周血ctDNA基因检测的研究进展
针对EGFR敏感型突变的晚期非小细胞肺癌(NSCLC),EGFR-TKIs的治疗效果已得到临床证实,但这部分患者所面临的EGFR-TKIs耐药问题却还亟待解决.外周血ctDNA的研究为难以获取肿瘤组织的晚期NSCLC患者带来了新的检测途径.本文检索近年来关于NSCLC患者EGFR-TKIs治疗及其耐药相关文献,以及外周血ctDNA用于EGFR检测的相关文献,加以总结介绍.
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外周血标本检测EGFR基因突变的操作体会
本文旨在介绍外周血样品应用扩增阻滞突变系统(ARMS法)检测EGFR基因突变的操作流程,以及在实际操作中可能遇到的问题,并对外周血检测EGFR基因的应用和优缺点进行总结.1 材料与方法1.1 材料1.1.1 标本 收集中日友好医院2015-08～11间送检的10例外周血样品,其中男性8例,女性2例,年龄45～77岁,平均年龄60.5岁.每例样品采血10ml,EDTA抗凝.1.1.2 试剂 一次性使用真空采血管(游离DNA保护专用)、血清/血浆游离DNA分离试剂盒(离心柱型)、人类EGFR基因突变检测试剂盒(厦门艾德生物科技股份有限公司);无水乙醇(北京益利精细化学品有限公司);RNase-free water(QIAGEN).
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组织荚膜胞浆菌感染的诊断与分析(附1例报告)
目的 对1例组织荚膜胞浆菌病(histoplasmosis)进行病原学诊断并分析组织荚膜胞浆菌的培养特征. 方法 取外周血液推片,瑞氏染色,进行初步诊断;将0.1 ml血样接种于5%兔血心脑浸液琼脂平板,37 ℃培养分离病原菌,再将分离出的单菌落涂片染色并做单菌落小培养(25 ℃湿盒培养),同时转种于沙保弱培养基平板,分别置于37 ℃和25 ℃湿盒培养至4周.将25 ℃沙保弱培养基平板的培养物挑丝状物转种沙保弱培养基平板,置37 ℃培养7 d,涂片染色观察. 结果 血涂片瑞氏染色可见单核细胞胞浆内有多个酵母样菌,菌周有未着色的空晕;血标本接种于兔血琼脂平板37 ℃培养24 h后形成乳白色酵母型菌落,菌周无溶血环,单菌落25 ℃培养3 d镜检有典型的菌丝;用沙保弱培养基25 ℃培养4周后出现明显的深入培养基的丝状物,将丝状物转种后置37 ℃培养,孢子转变成酵母样菌. 结论 该菌在25 ℃培养形成丝状型菌落,37 ℃培养为酵母型菌落,符合组织荚膜胞浆菌一般特征.病例被诊断为组织荚膜胞浆菌感染.
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华支睾吸虫病患者LPO与GPT的观察分析
近年来的研究表明,脂质过氧化物(Lipid peroxide,LPO)与衰老、炎症、缺血和再灌注综合症、某些肿瘤有密切关系[1].但LPO与寄生虫感染间的关系了解得甚少.据报道[2],无论癫痫型和非癫痫型脑囊尾蚴病人,其外周血LPO含量均明显增高,认为脑囊尾蚴病的病理过程中有LPO参与.为探讨LPO在华支睾吸虫病发病过程中的作用,我们对30例华支睾吸虫病患者进行了实验研究,结果报告如下.
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癫痫型脑囊虫病患者细胞免疫功能状态的研究
虫体蛋白等刺激产生的异物反应可导致脑囊虫病患者机体免疫功能状态发生紊乱.免疫介质不仅参与了脑囊虫病的发病,可能还与癫痫发生机制密切相关[1].本研究通过对癫痫型脑囊虫病患者外周血T细胞亚群、NK细胞、白细胞介素-2受体(mIL-2R)变化的观察,探讨细胞免疫状态在脑囊虫病及癫痫发作中的临床意义.
