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输血相关急性肺损伤患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞变化的临床意义
目的 检测输血相关急性肺损伤(TRALI)患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞(Treg)的计数及其功能基因叉头框蛋白3 (Foxp3) mRNA的表达水平,以及探讨其与疾病预后的关系.方法 收集2008年6月至2011年11月期间健康体检者(对照组,n=30)和重症监护病房收治的TRALI患者[TRALI组,n=26,TRALI组按预后又分为死亡组(n=5)和存活组(n=21)]外周抗凝血,采用流式细胞术分析各组T细胞亚群.采用四色流式细胞术以Foxp3-FITC/CD25-PE/CD4-PerCP/CD3-PC7抗体组合检测各组受试者外周血CD4+CD25highFoxp3 +Treg的计数,比较死亡组和存活组患者外周血CD4+CD25highFoxp3+Treg的水平.实时荧光定量PCR技术检测特异性转录因子Foxp3 mRNA的表达水平,并分析患者外周血CD4+CD25highFoxp3+Treg的比例与Foxp3mRNA的表达水平的关系.结果 TRALI患者与对照组健康人间CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞计数的差异无统计学意义,而CD3+CD8+T细胞则较对照组增加(P＜0.05),CD4+/CD8+比值降低(P＜0.05).死亡组CD3+CD8+T细胞比例高于存活组(P＜0.05),CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞比例和CD4+/CD8+比值则低于存活组(均P＜0.05).TRALI患者外周血CD4+CD25highFoxp3+Treg计数为(8.86±3.14)％,明显高于健康对照组(5.67±2.43)％(P＜0.05).TRALI死亡组患者外周血CD4+CD25highFoxp3+Treg计数为(11.23±3.79)％,显著高于存活组患者(7.69±3.21)％(P＜0.05).TRALI患者外周血Foxp3 mRNA的表达水平为(3.77±2.73)×105拷贝/μg,显著高于对照组(0.43±0.21) ×105拷贝/μg(P＜0.05).TRALI患者外周血CD4+CD25highFoxp3+ Treg计数与Foxp3 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.513 1,P＜0.05).结论 TRALI患者外周血CD4+C D25highFoxp3+ Treg和Foxp3mRNA的变化可能是导致TRALI疾病发展的关键因素之一,与疾病预后有密切关系.
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慢性乙型肝炎患者CD4+T细胞Foxp3基因甲基化状态的研究
目的 研究慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者CD4 +T细胞叉头框转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)基因的甲基化状态.方法 收集59例CHB患者和22例健康对照者(HC)的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),流式细胞技术检测外周血CD4+T细胞中CD4+ 25+ Foxp3+调节性T细胞(CD4+ 25+ Foxp3+ Tregs)的比例,实时定量聚合酶链反应和免疫印迹法检测CD4 +T细胞Foxp3基因和蛋白表达水平,甲基化特异性聚合酶链反应检测CD4+T细胞Foxp3基因的甲基化状态.结果 CHB患者CD4+ 25+ Foxp3+ Tregs比例、Foxp3基因mRNA和蛋白表达水平均明显高于HC组(P＜0.05).CHB患者中,Foxp3基因的甲基化率显著低于HC组(P＜0.05),Foxp3基因甲基化组的mRNA表达水平及CD4+ 25+ Foxp3+ Tregs比例均显著低于未甲基化组(P＜0.05).结论 CHB患者CD4 +T细胞中Foxp3基因存在异常去甲基化,与慢性乙型肝炎的免疫机制有关.
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镁对哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞凋亡及Foxp3表达的影响
目的:观察镁对分离培养的健康人和哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞凋亡及叉头框蛋白3(Foxp3)表达的影响.方法:经磁珠分离法分离出健康人和哮喘患者外周血CD4+CD25+T细胞,分镁剂干预组(10 mmol/L)及空白组培养72 h后,用流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞的凋亡率及Foxp3表达情况.结果:(1)健康人外周血CD4+CD25+T细胞的纯度为77.4%～92.3%,哮喘患者CD4+CD25+T细胞的纯度为75.2%～93.8%.(2)CD4+CD25+T细胞占外周血CD4+T细胞的比例在健康组为4.12%～7.98%,在哮喘组为4.51%～8.68%,两者没有显著差异(P＞0.05).(3)镁(10 mmol/L)可以诱导健康组及哮喘组外周血CD4+CD25+T细胞凋亡率增加(P＜0.05),但对Foxp3的表达无影响(P＞0.05).结论:镁促进CD4+CD25+T调节细胞凋亡增加可能为其治疗支气管哮喘的作用机制之一.
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调节性及辅助性T细胞在人类IgA肾病中的表达及意义
目的 探讨CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)及辅助性T细胞亚群(Th1、Th2)比例失衡在IgA肾病(IgAN)免疫发病机制中的作用.方法 用流式细胞仪检测IgAN患者外周血Treg及Th1、Th2的比例.以胞内染色技术检测叉头框蛋白3(FOXP3)的表达.Treg及Th1、Th2的比例与IgAN各项临床病理指标的相关性分析采用Spearman或Pearson相关分析法.结果 IgAN患者外周血中Treg比例明显高于健康人p(2.14±0.82)%比(1.59±0.53)%,P＜0.05],与血IgA水平呈正相关(r=0.397,P＜0.05),与eGFR呈负相关(r=-0.376,P＜0.05).IgAN患者外周血中Th2细胞比例显著高于健康对照组[(2.57±0.72)%比(1.81±1.10)%,P＜0.05],与血IgA水平呈正相关(r=0.468,P＜0.05).IgAN患者Th1/Th2比值显著低于健康对照组(5.75±1.89比12.73±9.79,P＜0.05),但与临床各指标间没有相关性.结论 IgAN患者体内存在T细胞亚群表达紊乱.Treg在外周血中的增多以及以,Th2为优势的Th1/Th2失衡可能在IgAN的发病中起重要作用.
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hp-MSCs对RSV引起小儿毛细支气管炎的保护作用及机制研究
目的 探讨人胎盘间充质干细胞(hp-MSCs)水平降低与毛细支气管炎发病的相关性及hP-MSCs防治毛细支气管炎的分子机制.方法 在滨州医学院附属医院产科招募志愿者,同时收集新生儿胎盘.毛细支气管炎患者由儿科医生根据临床诊断标准做出诊断;以毛细支气管炎患者为病例组,正常体检儿童为对照组,进行病例对照研究;胎盘hp-MSCs水平检测采用锥虫蓝染色计数法,hp-MSCs表面标记物的检测采用流式细胞仪方法;采用ELISA(酶联免疫吸附法)检测白细胞介素-9(IL-9)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β1 (TGFβ-1)水平,采用Real time PCR和Western blot法检测叉头框蛋白3(Foxp3)及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)基因和蛋白表达水平.结果 两组人群在是否存在特异性皮炎、毛细支气管炎1级和2级家族史有显著性差异(P＜0.05).病例组hp-MSCs水平及其表面标记物CD44和CD29水平显著降低(P＜0.05).呼吸道合胞体病毒(RSV)感染升高IL-17和IL-9等炎症因子水平,降低IL-10和TGFβ-1等抗炎因子水平;而hp-MSCs干预可以降低IL-17和IL-9水平而升高IL-10和TGFβ-1水平(均P＜0.05).RSV感染可以下调Foxp3基因和蛋白表达,上调RORγt基因和蛋白表达;而hp-MSCs干预可以上调Foxp3基因和蛋白表达,下调RORγt基因和蛋白表达.结论 胎盘hp-MSCs水平降低是引起婴幼儿毛细支气管炎的独立危险因素,hp-MSCs通过上调Foxp3的蛋白和基因表达,以及下调RORγt蛋白和基因表达起到防治婴幼儿毛细支气管炎的作用.
