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骨髓间充质干细胞抑制CD4+初始T细胞体外分化为Th17细胞
目的 探讨骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对辅助T细胞17 (Th17)体外分化的免疫调控作用.方法 小鼠CD4+初始T(naive T)细胞与小鼠BM-MSCs共培养,诱导分化3d后流式细胞术检测CD4+ IL-17+ Th17的生成比率,ELISA法检测培养上清中IL-17的浓度,qRT-PCR及Western blot检测Th17特异转录因子Rorγt的表达水平.共培养体系中加入IL-10和PGE2中和抗体后检测Th17的分化率.结果 小鼠BM-MSCs分泌高水平细胞因子TGF-β和IL-6.共培养组CD4+IL-17+Th17的生成率(2.5％±1.5％)和IL-17浓度(23±3 ng/L)均显著低于无BM-MSCs对照组(分别为17.8％±4.2％和268 ±27 ng/L,P＜0.05),且转录因子Rorγt的表达量也明显降低.共培养组IL-10和PGE2浓度随诱导天数的增加而逐渐上升,显著高于同期对照组(P＜0.05).共培养体系中加入IL-10或PGE2中和抗体后,显著提升CD4+ IL-17+ Th17的生成率(从2.0％±0.5％提高到11.8％±2.5％,P＜0.05),提高IL-17分泌水平(从24 ±4 ng/L上升到123 ±25 ng/L,P＜0.05),增强Rorγt的表达量.联合使用两种中和抗体能进一步提高Th17的分化生成率.结论 虽然BM-MSCs分泌高水平的Th17分化所需的细胞因子TGF-β和IL-6,但BM-MSCs却抑制Th17的体外分化,其抑制机制可能与IL-10和PGE2有关.
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rhG-CSF动员的外周血采集物与稳态骨髓中CD4+、CD8+初始及记忆T细胞亚群的比较
本研究探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员的外周血采集物(G-PB)与稳态骨髓(SS-BM)中CD4+、CD8+初始、记忆T细胞亚群的差异.依据细胞表面CD45RA和CD62L的表达将CD4+、CD8+ T细胞划分为初始T细胞(naive,CD45RA+ CD62L+)、中心记忆T细胞(central memory,TCM,CD45RA-CD62L+)、效应记忆T细胞(effector memory,TEM,CD45RA-CD62L-)、终末分化效应记忆T细胞(terminally differentiated effector memory,TTD,CD45RA+CD62L-).用流式细胞仪测定G-PB与SS-BM中CI4+、CD8+初始和记忆T细胞的比例组成,并计算每微升采集物中各细胞亚群的绝对数量.结果表明:G-PB中CD4+、CD8+T细胞的比例组成及CD4+/CD8+比值均高于SS-BM(P＜0.05);G-PB中CD4+初始T细胞的比例显著低于SS-BM(P＜0.001),而CD4+ TEM比例显著高于SS-BM(P＜0.001);G-PB中CD8+初始和记忆T细胞亚群的比例与SS-BM无显著差异(P＞0.05);与SS-BM相比,G-PB中CD4+ CD62L+ T细胞的比例明显降低(P=0.001),每微升G-PB移植物中的各淋巴细胞亚群均明显高于SS-BM(p＜0.001).结论:G-PB与SS-BM中CD4+、CD8+初始和记忆T细胞亚群在相对和绝对数量方面存在明显的差异,这种差异可能影响G-PB和SS-BM移植后急性、慢性移植物抗宿主病发生率及其程度的异同.
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外周T细胞淋巴瘤患者CD45RO+T以及CD45RA+T在外周血中的分布特点分析
目的:探讨外周T细胞淋巴瘤(Peripheral T cell lymphoma,PTCL)患者记忆T细胞(CD45RO+T)以及初始T细胞(CD45RA+T)在外周血中的不同分布特点的临床意义.方法:选取我院2010年2月～2014年2月收治的27例PTCL患者,以同期30例健康体检者作为对照,通过比较PTCL患者与健康受试者外周血中CD45RO+T、CD45RA+T的分布差异,分析不同临床分期的PTCL患者外周血中上述指标的差异.结果:PTCL患者的淋巴结中T细胞抗原呈多样性表达,以CD4+为主要免疫表型,无B细胞相关抗原表达;患者组外周血CD4+/CD8+、CD4+CD4SRO+T显著低于正常组(P＜0.05),CD4+ CD45RA+T、CD8+ CD45RA+T、CD8+ CD45RO+T显著高于正常组(P＜0.05);Ⅰ/Ⅱ期PTCL患者外周血CD4+/CD8+、CD4+ CD45RO+T显著高于Ⅲ/Ⅳ期患者(P＜0.05),CD4+CD45RA+T、CD8+ CD45RA+T、CD8+CD45RO+T显著低于Ⅲ/Ⅳ期患者(P＜0.05).结论:CD45RO+T和CD45RA+T在PTCL患者中存在明显的分布差异,针对其不同分布情况制定相应PTCL的处理方案,可提高PTCL的确诊率,改善患者的预后.
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白细胞介素-7的生物学特性及其在临床治疗中的作用和意义
白细胞介素-7(interleukin-7,IL-7)在T细胞的发育过程及其维持与恢复成熟T细胞的体内平衡上均发挥着重要作用.IL-7应用在普通或者淋巴细胞减少症模型小鼠,非人灵长类动物和患者身上均获得了以下结果:T细胞广泛增殖,T细胞数目增多,外周血T细胞亚群得到调控及其T细胞受体的多样性增多.这些效应和潜在的治疗价值使得近年来IL-7日益受到关注.本文对IL-7的生物学特性和其在临床治疗中的作用的新研究作了综述.
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CHOP方案治疗前后外周 T 细胞淋巴瘤患者外周血 CD45 RA＋T 和CD45 RO＋T的变化特点
目的：探讨CHOP方案对外周T细胞淋巴瘤（ PTCL）患者外周血中初始和记忆T细胞水平的变化及其临床意义。方法：采用流式细胞术检测20例PTCL患者CHOP方案化疗前后外周血中CD4＋CD45RA＋、CD4＋CD45RO＋、CD8＋CD45RA＋和CD8＋CD45 RO＋T 细胞的比例，分析疗效与 T 细胞亚群的关系。结果：PTCL 患者化疗前外周血中 CD4＋T 细胞、CD4＋CD45RO＋细胞的比例明显降低，CD4＋CD45RA＋、CD8＋、CD8＋CD45RO＋和CD8＋CD45RA＋T细胞的比例均明显升高（P＜0．05），而化疗后PTCL患者CD4＋、CD4＋CD45RO＋细胞的比例较治疗前升高， CD4＋CD45RA＋、CD8＋、CD8＋CD45RO＋和CD8＋CD45RA＋T细胞比例则较治疗前稍下降（P＜0．05）。治疗前后化疗有效组的CD4＋CD45RA＋均明显高于化疗无效组（P＜0．05）。结论：CHOP治疗对PTCL患者胸腺输出功能有一定的影响，伴有较高胸腺输出功能者对化疗效果更好。
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乳腺癌患者荷瘤状态T淋巴细胞亚群检测及其临床意义
目的：检测乳腺癌患者外周血T淋巴细胞总数及T淋巴细胞亚群中的CD4＋T细胞、CD8＋T细胞、CD45RA＋T细胞、CD45RO＋T细胞的百分率以评价患者的免疫状态。方法试验组选择女性原发性乳腺肿瘤患者40例，其中Ⅰ期乳腺癌23例，Ⅱ＋Ⅲ期乳腺癌17例；以女性健康体检者30例为对照组。应用流式细胞仪，采用三色荧光免疫标记技术分别检测各组外周血T淋巴细胞亚群的数量，统计分析各组检测结果的差异性。结果试验组 CD3＋T 细胞、CD4＋T 细胞百分率明显低于对照组（ P＜0.05），Ⅱ＋Ⅲ期患者明显低于Ⅰ期患者（ P＜0.05）。与对照组比较，试验组CD45RA＋T细胞明显减少，而 CD45RO＋T 细胞明显增多（P＜0.05）；与Ⅰ期乳腺癌患者比较，Ⅱ＋Ⅲ期乳腺癌患者 CD45RA＋T 细胞明显减少，而CD45RO＋T细胞明显增多，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 T细胞亚群检测是评价肿瘤患者细胞免疫功能的重要指标，具有重要的临床应用价值。乳腺癌患者免疫功能与肿瘤恶变的发生、发展及临床分期有一定相关性，随着病情的进展，机体免疫功能呈现下降趋势。
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一种检测小鼠T淋巴细胞中sjTRECs含量简易方法的研究
目的建立一种快速、简单的检测小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞的信号结合T细胞受体删除环(signal joint TCR rearrangement excision circles,sjTRECs)水平的方法,并研究其准确性,以期推测初始T细胞含量从而评价胸腺功能.方法根据标准质粒荧光定量PCR的扩增曲线选择合适有效的扩增循环次数;优化PCR条件;梯度稀释的标准质粒(103-108拷贝)PCR扩增后使用图像分析软件包分析琼脂糖凝胶电泳的图像,测量PCR产物带的光密度,经统计获得标准曲线及方程.将样本的PCR产物带的光密度代入标准曲线方程,从而获得样本的sjTRECs水平读数,并和实时定量PCR结果比较.结果获得适合的PCR条件;成功建立可信度高的标准曲线;与实时定量PCR的检测结果比较,小鼠sjTRECs含量随年龄变化的趋势一致.结论成功建立研究方法,与实时定量PCR评价sjTRECs水平得到明显相似的结果,表明此方法可能成为TREC水平检测的一种有效可靠的分析方法.
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初始和记忆T细胞的研究进展
T细胞介导的细胞免疫应答在预防和控制病原微生物感染过程中发挥着重要的作用.T细胞具有多样性和复杂性的特点,不同T细胞亚群在形态、功能及作用机制等方面的研究已成为近年来免疫学研究的热点之一.本文介绍了近年来初始和记忆T细胞的表面标志、细胞内细胞因子、免疫应答的特征和影响记忆T细胞形成、维持的因素等方面的研究新进展,对于疫苗的设计和疫苗效果的评价具有十分重要的意义.
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替比夫定对T细胞免疫调节作用的实验性研究
目的：探索核苷类药物替比夫定的免疫调节作用。方法选择6～8周健康雄性BALB／c小鼠，每日灌胃替比夫定，对照组每日灌胃等量0．9％氯化钠溶液。14 d后取小鼠脾脏细胞，检测记忆性T细胞表型，调节性T细胞比例，T细胞中IL‐2、TNF‐α及IFN‐γ表达水平，并以羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）染色法检测 T 细胞的增殖能力。结果与对照组相比，替比夫定灌胃组小鼠脾脏中T细胞分泌细胞因子IL‐2、TNF‐α及IFN‐γ的水平，和由 TCR／CD3作用下的细胞增殖能力均无显著性差异，但脾脏T细胞的亚群分布发生明显改变，初始T细胞比例明显升高，效应T细胞比例明显降低，且调节性T细胞的比例也明显降低。结论替比夫定导致的外周初始T细胞的比例升高和调节性T细胞比例的降低有利于增强免疫系统对外界抗原的应答能力，替比夫定不仅可以通过直接抑制病毒复制发挥药效，同时还有可能通过调节患者的免疫功能发挥间接抗病毒作用。
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FOLFOX化疗对转移性结直肠癌患者CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+T细胞的影响及临床意义
目的 探讨FOLFOX化疗方案对转移性结直肠癌(mCRC)患者外周血中初始(CD4+CD45RA+)和记忆(CD4+CD45RO+)T细胞亚群的影响及其临床意义.方法 采用CD3、CD4、CD45RO、CD45RA荧光抗体对10例健康对照及27例mCRC患者接受FOLFOX方案化疗前 、后的外周血细胞进行标记,流式细胞术检测CD4+T细胞及其亚群CD4+CD45RO+、CD4+CD45RA+百分率,并进一步分析其与临床疗效之间的关系.结果 与正常对照组相比,mCRC患者化疗前外周血中CD4+T细胞比例无明显差异(P>0.05);其中CD4+CD45RA+T细胞比例明显降低(P<0.01)、CD4+CD45RO+T细胞比例明显增高(P<0.05).与化疗前相比,经FOLFOX化疗后mCRC患者外周血CD4+T细胞比例明显增高(P<0.001);其中CD4+CD45RA+T细胞比例下降(P<0.001)、CD4+CD45RO+T细胞的比例明显升高(P<0.05).分析发现,化疗有效组中,化疗前 、后患者CD4+CD45RA+比例无明显变化(P>0.05),均高于化疗无效组(P<0.01,P<0.001);化疗后CD4+CD45RO+T细胞百分率增高(P<0.05).结论 FOLFOX化疗可升高mCRC患者外周血中CD4+T细胞并改变细胞亚群的比例,对CD4+CD45RA+比例较高的患者具有较好的疗效.
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重度苯中毒患者T细胞受体 Vβ亚家族TRECs的分析
目的 检测重度苯中毒患者外周血23个TCR Vβ-Dβ1TRECs的存在情况,进一步了解重度苯中毒患者胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况.方法 分别在5×104和1×104个外周血单个核细胞水平下,采用半巢式对12例重度苯中毒患者和10例正常人的23个TCRVβ-Dβ1TRECs进行扩增.结果 在5×104和1×104细胞水平下,苯中毒组检出各TCRVβ-Dβ1TRECs数均显著低于对照组(P＜0.05).在5×104细胞水平时,对照组检测到23个TCRVβ-Dβ1TRECs,苯中毒组仅检测到17个TCRVβ-Dβ1TRECs,其中12 个TCRVβ-Dβ1TRECs检出率与对照组相比明显降低(P＜0.05).结论 本研究提供了苯中毒患者外周血中各TCRVβ-Dβ1TRECs存在情况.苯中毒患者TCRVβ-Dβ1TRECs检出数量和检出率低于正常人,提示重度苯中毒患者胸腺近期输出功能存在部分缺陷和低下的情况.
关键词： 苯 TCRVβ基因 T细胞受体重排删除环 初始T细胞 -
应用四色荧光分析技术测定造血干细胞移植后患者CD45RA+细胞的变化
目的探讨流式细胞技术测定造血干细胞移植(HSCT)后患者外周血中初始T细胞CD45RA+的变化与临床意义.方法收集来自南方医院的49例造血干细胞移植病人的移植前、移植之后15、30、90和180 d不同时间点的90份肝素抗凝外周血标本.应用流式细胞技术测定外周血CD4+CD45RA+/CD8+CD45RA+细胞数的动态变化.结果在49名造血干细胞移植患者外周血标本中选择90份样本进行检测,移植后30 d,CD8+CD45RA+细胞即能恢复到正常水平,而CD4+CD45RA+细胞产量半年之内仍低于正常并持续缓慢增长.经HSCT患者的胸腺再生输出功能明显低于自体干细胞移植患者(P＜0.01).异体外周血干细胞移植患者的胸腺恢复能力显著比异体骨髓移植患者更快(P＜0.05).结论通过流式细胞仪检测患者外周血中CD4+CD45RA+/CD8+CD45RA+细胞的变化,可以相对定量地检测患者的胸腺再生输出功能,并通过测量新生T细胞的合成来监视胸腺功能在免疫重建中的作用,为临床干细胞移植治疗提供有力的数据.
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外周T细胞淋巴瘤患者外周血CD45RA+T和CD45RO+T细胞分布特点
目的 探讨外周T细胞淋巴瘤(PTCL)患者外周血中初始和记忆T细胞水平及其临床意义.方法 采用流式细胞术检测10例PTCL患者外周血CD4+和CD8+T细胞中CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+T细胞的比例,10例正常健康成人外周血作为对照.结果 PTCL患者外周血中CD4+的比例明显降低,CD8+的比例明显升高,CD4+CD45RO+细胞明显低于对照组,CD4+CD45RA+、CD8+CD45RO+和CD8+CD45RA+T比例均升高(P＜0.05).结论 PTCL病人胸腺近期输出功能仍较强,但仍需进一步分析T细胞活化和效应功能.
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记忆性干细胞样T细胞在肿瘤治疗应用中的研究进展
记忆性干细胞样T细胞(stem memory T cells,TSCM)是近几年发现的一个细胞亚群,约占外周血中总的CD4+T细胞和CD8+T细胞的2％～4％,是记忆性T细胞的早期分化阶段,具有记忆性细胞和干细胞的特点,基因谱介于初始T细胞和中央记忆T细胞之间.记忆性干细胞样T细胞具有自我更新和长期存活能力,这些特点使它们成为肿瘤领域关注的热点.本文将简述记忆性干细胞样T细胞的一些特点,以及它们在肿瘤治疗中的应用.
关键词： 初始T细胞 记忆性T细胞 干细胞 记忆性干细胞样T细胞 -
外周T细胞淋巴瘤患者中PD-1的表达对CD45RA+、CD45RO+T细胞的影响
目的:探讨外周T细胞淋巴瘤(PTCL)患者淋巴瘤组织中PD-1的表达与外周血中初始和记忆T细胞水平的关系.方法:20例PTCL患者采用免疫组化法检测淋巴瘤组织中PD-1的表达,采用流式细胞术检测CHOP方案化疗前后外周血中CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+T细胞的比例,分析PD-1的表达与T细胞亚群的关系.结果:PD-1、PD-L1蛋白在PTCL患者中表达升高,PD-1阳性患者疗效较差.PD-1阳性患者中CD4+T细胞、CD8+T细胞明显低于PD-1阴性患者;PD-1阴性组患者CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+、 CD8+CD45RO+T细胞明显高于PD-1阳性患者,差异有统计学意义.结论:PTCL患者中存在PD-1/PD-L1蛋白的表达异常,PD-1阳性患者存在更明显的T细胞免疫功能缺陷.
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慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T细胞亚群分布和PD-1表达特征研究
目的 分析慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血中CD8+T细胞及其亚群表面程序性死亡受体-1(PD-1)表达的变化特征及其临床关联性.方法 用流式细胞术检测14例CHB患者和15例健康对照者外周血中CD8-T细胞及其亚群初始T细胞(TN)、中央记忆T细胞(TCM)、效应记忆T细胞(TEM)、终末效应记忆T细胞(TEMRA)的频数及细胞表面PD-1的表达水平,同时收集患者一般资料、生化指标和乙型肝炎病毒(HBV)病毒学指标等临床资料.使用SAS 9.1统计软件分析数据,应用Mann-Whitney U test 分析组间差异,应用Spearman秩相关进行相关性分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与健康对照组相比,CHB患者的TEMRA亚群在CD8+T细胞中的频数显著降低(P=0.012),总CD8+T细胞(P=0.018)及其TEM亚群(P=0.004)表面PD-1的表达水平显著上升.相关性研究显示,CD8+ TEM细胞表面PD-1的表达水平与HBV DNA载量呈显著正相关(r=0.554,P=0.040).结论 CHB患者外周血中PD-1阳性的CD8+ TEM频数升高,且与外周血中HBV DNA载量呈正相关,提示慢性乙型肝炎患者机体内HBV复制的活跃性可能与外周血中CD8+T细胞的活化状态,特别是其TEM亚群上PD-1的高表达关联.
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间充质干细胞诱导体外分化来的初始T细胞表型变化的实验研究
目的 将体外由CD+34细胞分化而来的初始T细胞与异基因骨髓间充质干细胞(MSC)共孵育,观察初始T细胞表型的变化.方法 传3代以上的MSC与脐血CD+34细胞分化的初始T细胞共孵育1周.用流式细胞仪检测其表型变化.结果 与对照组相比,CD+8细胞明显增加[共孵育组(35.9±6.3)%,单纯初始T细胞培养组(18.4±4.5)%],且CD;CD;细胞明显增加[共孵育组(27.6±2.8)%,单纯初始T细胞培养组(15.2±3.1)%].结论 骨髓MSC在体外与异基因初始T淋巴细胞共孵育使CD+8初始T细胞表达增加,这种变化町能与其诱导免疫耐受相关.
