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ErbB信号与蛋白激酶B在快速起搏所致猴心衰心肌细胞损伤中的作用
为了研究ErbB受体与蛋白激酶B在心力衰竭发生机制中的作用,建立快速起搏诱导恒河猴心力衰竭模型.采用颈总动脉插管技术,测定左心室大压力上升速度(LVdp/dtmax)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室收缩末期压(LVSP)等血流动力学指标;采用电化学发光免疫测定法观察脑钠肽(BNP)含量;采用RT-PCR方法测定ErbB2、蛋白激酶B(PKB)、Bcl-xl mRNA表达水平;采用Western blotting检测蛋白激酶B活性(phospho-PKB,即磷酸化蛋白激酶B蛋白水平)及凋亡相关基因Bcl-xl的蛋白水平.快速起搏诱导心力衰竭模型恒河猴心肌收缩能力显著下降,心衰标志物脑钠肽水平明显上升(P＜0.05).与对照组比较ErbB2,PKB及Bcl-xl mRNA表达水平明显下降(P＜0.05),同时心肌组织蛋白激酶B活性显著下降,Bcl-xl蛋白水平也明显下降(P＜0.05).快速起搏所致猴心衰心肌细胞损伤的机制可能与ErbB2、下游蛋白激酶B、凋亡抑制基因Bcl-xl表达水平下降及蛋白激酶B活性下降有关.
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N-(Z)-9-十八烯基-2-丙磺酰胺对2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的影响及其机制
探索新化合物N-(Z)-9-十八烯基-2-丙磺酰胺(N15)对2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗小鼠的影响并探讨其可能作用机制.采用链脲佐菌素(STZ)连续小剂量腹腔注射诱导T2DM小鼠模型,N15 (50、100和200mg.kg-1·d-1)和吡格列酮(6 mg·kg-1·d-1)连续灌胃给药6周,期间分别对小鼠空腹血糖(FBG)、胰岛素(FIns)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)进行测定比较;并于末次给药后测定各组小鼠葡萄糖耐量(OGTT)和胰岛素耐量(IPITT);通过Western blot对能量代谢关键蛋白Akt、AMPK和Glut4加以分析.结果表明,N15可显著降低模型小鼠FBG、Fins和HOMA-IR水平(P＜0.01),改善葡萄糖及胰岛素耐受程度(P＜0.01,P＜0.001),并显著上调肝脏p-Akt、p-AMPK和Glut4蛋白表达水平(P＜0.01),且作用效果与吡格列酮相当(P＞0.05).上述结果表明,新型化合物N15具有改善2型糖尿病胰岛素抵抗的功效,其机制可能与增加肝内胰岛素受体调节及促使磷脂酰肌醇3磷酸磷酸化相关.
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褪黑素对亚油酸导致的胰岛素信号转导缺陷的修复机制
目的：探讨褪黑素（ MT）对亚油酸（ LA）引起HepG2细胞胰岛素信号缺陷的修复作用及其机制。方法将培养的HepG2细胞分为对照组（ BSA组）、亚油酸组（ LA组）、亚油酸＋褪黑素组（ LA＋MT组）、亚油酸＋维生素C组（ LA＋VitC组）。 BSA组予以10％牛血清白蛋白处理24 h；LA组予以0．5 mmol? L－1亚油酸处理24 h， LA＋MT组予以10μmol? L－1褪黑素和0．5 mmol? L－1亚油酸处理24 h；LA＋VitC组予以1 mmol? L－1维生素C和0．5 mmol? L－1亚油酸处理24 h。用荧光比色法测定各组细胞胞内氧自由基水平，用Western印迹法检测胰岛素刺激后胞内胰岛素信号蛋白磷酸化水平，包括蛋白激酶B、叉头转录因子以及c－Jun氨基末端激酶。结果 LA组的氧自由基含量明显高于BSA组（P＜0．05）；LA＋MT组的氧自由基含量明显低于LA组（P＜0．05）；LA＋MT组与BSA组相比，氧自由基含量差异无统计学意义（ P＞0．05）。 LA＋VitC组与LA组相比，氧自由基的含量减少，但仍高于 LA＋MT 组，差异有统计学意义（ P＜0．05）。LA组与BSA组相比，蛋白激酶B、叉头转录因子磷酸化水平减少，而c－Jun氨基末端激酶磷酸化水平升高；LA＋MT组与LA组相比，蛋白激酶B、叉头转录因子磷酸化水平显著升高， c－Jun氨基末端激酶磷酸化水平明显降低，组间比较差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论亚油酸可导致细胞内氧自由基增加，褪黑素能够清除亚油酸产生的过量氧自由基，减少c－Jun氨基末端激酶的活化，修复胰岛素下游信号损伤。
关键词： 胰岛素抵抗 活性氧自由基 褪黑素 蛋白激酶B c-Jun氨基末端激酶 -
田蓟苷对A549细胞的抑制作用及其机制研究
目的 研究田蓟苷对人非小细胞肺癌细胞系(A549)的抑制作用及其作用机制.方法 对照组和10,20,40,80,160μmol·L-1实验组分别用0,10,20,40,80,160 μmol·L-1田蓟苷处理A549细胞24h,用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK8)观察各组A549细胞增殖情况;用流式细胞仪检测各组A549的凋亡情况.低氧模型组将A549在低氧培养箱中培养4h,10,20,40 μmol·L-1低氧实验组将A549在普通培养箱中用10,20,40 μmol·L-1的田蓟苷预处理4h,再放入低氧培养箱中继续培养4h,用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞内血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的表达情况;用Western blot法检测细胞内VEGF、HIF-1α及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达情况.结果 与对照组比较,田蓟苷对A549增殖有显著抑制作用,呈剂量依赖性.10,20,40,80,160 μmol·L-1实验组的增殖抑制率分别为(5.83±1.67)％,(6.77±0.87)％,(12.26 ±0.23)％,(22.97 ±0.50)％,(46.24±1.44)％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).10,20,40,80,160mol·L-1田蓟苷的凋亡率分别为(6.80±0.62)％,(14.70±1.36)％,(24.76±4.37)％,(39.26±6.42)％,(62.31±1.79)％,与对照组相比,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).低氧模型组HIF-1α表达量为4.30±0.26,VEGF表达量为6.02±0.53,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05);10,20,40 μmol·L-1低氧实验组的VEGF表达量为4.73±0.20,2.31±0.09,1.47 ±0.16;HIF-1α的表达量分别为3.01 ±0.11,1.81±0.13,1.03 ±0.16,与低氧模型组比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).低氧模型组p-AKT蛋白表达量为(106.47±2.08)％,HIF-1α表达量为(204.31±8.35)％,VEGF-A表达量为(212.30 ±4.80)％;10,20,40 μmol·L-1低氧实验组p-AKT蛋白表达量为(87.51±2.72)％,(75.18±1.67)％,(32 40 ±0.86)％;HIF-1α的表达量为(182.54±6.42)％,(90.95±2.76)％,(15.03±4.21)％;VEGF-A的表达量分别为(156.38±5.12)％,(79.62±2.84)％,(13.72±4.64)％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 田蓟苷具有通过AKT/HIF-1α信号通路抑制体外A549增殖、诱导其凋亡的作用.
关键词： 田蓟苷 人非小细胞肺癌细胞系 蛋白激酶B 缺氧诱导因子-1α -
苦瓜总皂苷对改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗关键因子的影响
目的：通过苦瓜总皂苷对2型糖尿病大鼠蛋白激酶B（PKB 或Akt－2）和腺苷酸活化蛋白激酶（ AMPK ）的作用来揭示其改善胰岛素抵抗的机制。方法用高脂高糖饮食喂养结合小剂量链脲佐菌素注射，来复制2型糖尿病模型。按照体重随机分为6组：正常组、模型组、对照组和3个剂量实验组，对照组和3个剂量实验组大鼠每天分别给予50 mg · kg－1二甲双胍2 mL和3个剂量（100，200，400 mg· kg－1）苦瓜总皂苷2 mL，灌胃8周。用生化分析仪检测空腹血糖，用酶联免疫吸附试验检测胰岛素，用RT－PCR和Western Blot法检测肝组织Akt－2和AMPK的mRNA和蛋白表达量。结果3个剂量实验组稳态胰岛素抵抗评价指数较模型组明显降低，Akt－2和AMPK的mRNA和蛋白表达量较模型组明显增高。结论苦瓜总皂苷改善胰岛素抵抗的作用机制可能为上调Akt－2和AMPK的mRNA以及蛋白表达量。
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PI3K/AKT/ERK在胃肠道肿瘤中的表达与临床病理的关系
目的 探讨PI3K,Akt,ERKl/2在胃肠道肿瘤中的表达与临床病理的关系及意义.方法 选取2009年5月至2011年5月北京安贞医院病理科有完整病历资料及分期的胃肠道恶性肿瘤组织标本共30例,其中胃癌14例,结肠癌9例,直肠癌7例.同时每例取其癌旁组织作对照.采用EnVision TM二步法染色及S-P免疫组化法对PI3K,Akt,ERKl/2在胃肠道肿瘤组织中的表达进行测定.结果 PI3K/AKT在胃肠道肿瘤组织中阳性表达率分别为67%(20/30)和80%(24/30),明显高于癌旁组织中的表达20%(7/30)和20%(5/25),ERK1/2在胃肠道肿瘤组织中阳性表达率为57%(17/30),明显高于癌旁组织中的表达17%(5/30),差异有统计学意义(P均<0.05).PI3K/AKT/ERK蛋白在胃肠道肿瘤组织中的表达与患者的年龄、病理分型、淋巴结转移、临床病理分期及有无远处转移均无显著关系(P＞0.05).结论 PI3K,Akt,ERKl/2在胃肠道肿瘤组织中高表达,但与临床病理无关,可能参与了肿瘤发生发展的早期事件.
关键词： 胃肠道肿瘤 磷脂酰肌醇-3激酶 蛋白激酶B 细胞外信号调节激酶1/2 临床病理 -
远志皂苷加β-细辛醚对APP/PS1小鼠海马记忆功能的影响
目的:通过观察远志皂苷加β-细辛醚对APP/PS1双转基因小鼠海马超微结构、行为学,以及蛋白激酶B (proteinkinase B,AKt)和糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)表达的影响,探讨“化痰开窍”法防治阿尔茨海默病(AD)的作用机制.方法:以3个月龄的APP/PS1双转基因小鼠为研究对象,设为模型组、药物组经远志皂苷+β-细辛醚(74 mg·kg-1·d-1)处理,正常对照组为3个月龄的C57BL/6小鼠.采用透射电镜观察小鼠海马超微结构;采用Morris水迷宫法和新物体识别实验检测药物对小鼠学习记忆能力的改善;应用免疫组化法检测Akt和GSK-3β的蛋白表达.结果:远志皂苷联合p-细辛醚可以改善APP/PS1双转基因小鼠的空间和非空间记忆功能,逆转APP/PS1双转基因小鼠海马神经元超微形态,上调p-Akt和p-GSK-3β的蛋白表达(P＜0.05).结论:远志汤的“化痰开窍”防治AD的药理效能,可能是通过调控Akt/GSK-3β通路实现的.
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复方丹参滴丸及阿司匹林对老年ACS患者血小板聚集功能及PKB活性变化的影响
目的:探讨复方丹参滴丸对老年冠状动脉综合征(ACS)患者血小板聚集功能及蛋白激酶B(PKB)的活性变化的影响.方法:ACS患者48例,随机分2组,即复方丹参滴丸(CRS)组和阿司匹林(AS)组;26例健康老年人作为对照组(NC组).ACS患者在常规抗凝治疗的同时给予抗血小板治疗,印CRS组给予复方丹参滴丸30粒口服;AS组给予阿司匹林300 mg口服.于用药前10 rain及用药后3.5,6,24 h测定血小板聚集率(PLTAR)、血小板蛋白激酶B的活性变化(PKBA).结果:所有老年ACS患者血小板大聚集率均较NC组明显增加(P<0.01);胞膜蛋白激酶B(PKB)表达较对照组明显增高(P<0.01);而胞浆PKB表达则显著降低(P<0.01).口服CRS和AS后6 h血小板大聚集率较用药前降低明显(P<0.01).但24 h时CRS对血小板聚集仍有较强的抑制作用,而AS已不明显.口服CRS 6h后ACS组患者血小板胞膜PKB活性较用药前明显下降(P<0.01);而胞浆PKB表达则已明显升高.AS组二指标虽有所变化,但用药前后比较无显著差异.结论:老年ACS患者体内血小板处于活化状态,复方丹参滴丸能有效抑制血小板活化,作用优于AS,为抗血小板治疗提供新选择.
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黄芩素对2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的小鼠实验性肠炎的作用和机制
目的 探讨黄芩素对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠肠炎实验模型的作用及机制.方法 将BALB/c小鼠随机分成3组(n=10):正常对照组、模型组(TNBS)和黄芩素组(TNBS+黄芩素20 mg·kg-1).黄芩素组于造模前2dig给予黄芩素,每天1次,共9d.测量结肠长度,并取结肠组织进行HE染色,进行组织损伤和炎症细胞浸润评分;ELISA测定结肠组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量.体外制备细菌脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7炎症细胞模型,黄芩素(10,25和50 mmol·L-1)给药干预,Griess 试剂法测定上清中一氧化氮(NO)含量;荧光定量PCR检测炎症介质TNF-α、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、诱导型NO合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA表达;Western蛋白印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/NF-κB (PI3K/AKT/N F-κB)通路磷酸化蛋白(p-PI3K,p-AKT,p-p65和p-IκBa)表达.结果 与正常对照组相比,模型组小鼠结肠缩短,组织病理损伤,炎症细胞浸润,组织TNF-α含量增高;黄芩素给药组上述症状得到显著改善(P＜0.05).与细胞对照组相比,LPS模型组细胞NO分泌、炎症介质(TNF-α,IL-6,IL-1β,iNOS,COX-2和MCP-1)mRNA表达及PI3K/AKT/NF-κB通路磷酸化蛋白表达均增高(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,黄芩素给药组上述指标均降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 黄芩素可减轻TNBS诱导的小鼠实验性肠炎的症状,作用机制可能与抑制PI3K/AKT/NF-κB通路的激活从而抑制炎症介质的表达和减少炎症因子释放有关.
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肝细胞生长因子预处理对过氧化氢诱导大鼠神经干细胞凋亡的保护作用
目的 研究肝细胞生长因子(HGF)对神经干细胞(NSC)凋亡的保护作用及其作用机制,为HGF用于NSC移植提供实验基础.方法 分离培养大鼠NSC.细胞分为正常对照、模型(H2O2 100 μmol·L-1)、HGF+H2O2(HGF 15, 30及60 μg·L-1预处理24 h后,再加入H2O2 100 μmol·L-1处理4 h),LY294002(PI3K/Akt通路抑制剂)+HGF+ H2O2(先加入LY294002 20 μmol·L-1处理30 min,再加入HGF 60 μg·L-1处理24 h,后再加入100 μmol·L-1 H2O2培养4 h)组.MTT法检测细胞存活率;TUNEL法检测细胞凋亡率;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性;Western印迹分析Bcl-2, Bax蛋白表达.结果 MTT检测发现,随着HGF浓度的增加,NSC细胞的存活率也增加.与模型组[(63.5±2.4)%]比较,HGF 15, 30及60 μg·L-1预处理组细胞存活率明显升高[(79.1±7.5)%,(83.8±6.1)%和(86.6±8.2)%;n=3,P<0.05].TUNEL法检测发现,HGF预处理组凋亡细胞明显减少,模型组的凋亡率为(43.5±6.2)%,HGF预处理组则分别为(34.2±8.6)%,(21.7±3.8)%及(19.4±4.0)%.Caspase-3活性检测表明,与模型组相比,HGF预处理组细胞caspase-3活性降低.Western印迹分析结果显示,与模型组比较,HGF预处理使细胞的Bcl-2蛋白表达升高,但Bax蛋白表达不受影响;HGF的抗凋亡效应可被PI3K/Akt通道阻滞剂LY294002阻断.结论 HGF可减轻H2O2所诱导的大鼠NSC凋亡,且呈一定的浓度依赖关系, 其作用机制可能与NSC的PI3K/Akt通路激活和Bcl-2表达增强有关.
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银杏二萜内酯葡胺注射液通过激活Akt/Nrf2通路抑制缺糖缺氧诱导的SH-SY5Y细胞的氧化应激损伤
目的：探讨银杏二萜内酯葡胺注射液（DGMI）抑制缺糖缺氧（OGD）诱导人源性神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）的氧化应激损伤及其机制。方法 SH-SY5Y细胞随机分为正常细胞对照组，OGD模型组， OGD 4 h+DGMI 25 mg·L-1组，OGD 4 h+银杏叶提取物注射液（EGBLI）25 mg·L-1组，OGD 4 h+银杏内酯注射液（LGBI）25 mg·L-1组。药物作用6 h后，CCK-8法检测细胞存活，水溶性四唑盐1（WST-1）显色法法检测SOD活性，荧光探针法（DCFH-DA）检测ROS生成，Western蛋白印迹法检测细胞内血红素加氧酶（HO-1）、醌氧化还原酶（Nqo1）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、细胞内核因子E2相关因子2（Nrf2）、磷酸化Nrf2（p-Nrf2）的表达；OGD 4 h+DGMI 25 mg·L-1组加入PI3K抑制剂LY294002（终浓度为0，12.5，25和50μmol·L-1），检测1 h后Akt，p-Akt，Nrf2和p-Nrf2的蛋白表达。结果与正常细胞对照组相比，OGD模型组SH-SY5Y细胞存活和SOD活性降低（P<0.01），ROS含量升高（P<0.01），降低p-Akt，Nrf2， p-Nrf2，HO-1和Nqo1的表达（P<0.01）；与OGD模型组相比，OGD 4 h+药物组作用6 h，细胞存活率和SOD活性显著提高（P<0.01），ROS含量降低（P<0.05，P<0.01），p-Akt，Nrf2，p-Nrf2，HO-1和Nqo1蛋白表达水平提高（P<0.01），且DGMI 25 mg · L-1效果优于EGBLI 25 mg · L-1和LGBI 25 mg · L-1（P<0.05，P<0.01）；相较DGMI组，DGMI和LY294002作用1 h后p-Akt和p-Nrf2的表达被显著抑制（P<0.01），抑制效果呈浓度依赖性。结论 DGMI 25 mg·L-1对OGD诱导的SH-SY5Y细胞具有抗氧化保护作用，其机制可能与激活Akt/Nrf2通路有关。
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知母总皂苷对老年大鼠学习记忆行为和海马突触相关蛋白表达的影响
目的 探讨知母总皂苷(SAaB)对老年大鼠学习记忆能力及突触相关蛋白表达的影响.方法 ig 给予18个月龄SD大鼠SAaB 100和200 mg·kg-1,每天1次,连续9周,第8周开始进行Morris水迷宫实验,记录逃避潜伏期及各象限游泳时间.免疫组织化学法观察海马突触素蛋白(SYP)分布.Western印迹法检测CA3区SYP、突触后致密蛋白95( PSD95)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)蛋白分布.结果 与青年大鼠对照组比较,老年对照组大鼠逃避潜伏期显著增加,原平台象限游泳时间占总时间的百分比显著缩短(P＜0.05),海马SYP,PSD95,p-Akt和p-mTOR表达显著降低(P＜0.01).与老年对照组相比,给予SAaB后,青年大鼠逃避潜伏期显著缩短,原平台象限游泳时间占总时间的百分比显著增加(P＜0.05)；海马SYP,PSD95,p-Akt和p-mTOR表达显著增加(P＜0.01).结论 SAaB 能显著改善老年大鼠学习记忆能力,可能与上调SYP和PSD95表达及激活Akt/mTOR信号通路有关.
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知母皂苷元通过上调PI3K/Akt信号通路减轻淀粉样β蛋白诱导的乳大鼠海马神经元突触损伤
目的 探讨知母皂苷元(Sar)减轻淀粉样β蛋白(Aβ)诱导的海马神经元突触损伤的信号转导机制.方法 取出生0 ～24 h SD乳大鼠海马神经元,体外培养7d.海马神经元分别加入磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)特异性阻断剂LY294002 30 μmol· L-1或蛋白激酶B(Akt)特异性阻断剂曲西立滨1 μmol· L-11h后,加Sar 30和100 μmol· L-1作用1h,再加Aβ1-42 50 nmol· L-1作用24 h.应用突触囊泡蛋白(SYP)免疫荧光染色观察突触的改变.Western蛋白质印迹法检测海马神经元SYP、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化糖原合成酶3β(p-GSK3β)表达水平的改变.结果 与正常对照组相比,Aβ1-42组培养的海马神经元SYP,p-Akt和p-GSK3β表达水平明显减低(P＜0.01).与Aβ1-42组相比,Aβ1-42+Sar 30和100 μmol·L-1组海马神经元SYP,p-Akt和p-GSK3β表达水平明显增加(P＜0.01).给予LY294002作用后,SYP和p-Akt表达水平明显降低(P＜0.05).给予曲西立滨作用后,SYP和p-GSK3β表达水平明显降低(P＜0.05).单独给予LY294002,海马神经元SYP表达无变化,p-Akt表达水平明显降低(P＜0.01).单独给予曲西立滨,海马神经元SYP和p-GSK3β蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).结论 Sar通过上调PI3K/Akt/GSK3β信号通路对抗Aβ1-42诱导的海马神经元突触损伤.
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铅暴露导致小鼠学习记忆功能障碍及海马蛋白激酶B表达降低
目的 探讨蛋白激酶B(PKB)在慢性铅暴露所致小鼠学习记忆功能障碍中的作用.方法 5～6周龄小鼠交配后,铅暴露组仔鼠通过胎盘、乳汁和饮水饲醋酸铅2.4,4.8和9.6 mmol·L-1,连续42 d.第42天水迷宫实验测平台潜伏期;检测血及脑铅浓度;Sanna方法检测仔鼠海马CA1区长时程增强(LTP)和群峰电位幅值(PS);Westem印迹法检测脑海马总PKB(t-PKB)及磷酸化PKB(p-PKB)的表达.结果 与正常对照组相比,铅暴露组小鼠寻找平台时间明显延长(P＜0.05).正常对照组血铅为(0.05 ±0.02)mg·L-1,铅暴露组分别为0.29±0.06,0.91±0.15和(1.46±0.37) mg·L-1;正常对照组脑铅为(0.12±0.056) μg·g-1,铅暴露组分别为2.07±0.55,10.18 ±1.51和(14.20±2.63) μg·g-1.学习记忆降低程度与血铅、脑铅浓度成正相关(r =0.678,r=0.645,P＜0.01).高频刺激后,正常对照组的PS幅值明显升高,为刺激前的1.76倍,而铅暴露组PS幅值下降到刺激前的85％.与正常对照组比较,暴露铅4.8及9.6 mmol·L-1组,PS幅值明显下降(P＜0.01).铅暴露组的LTP诱发成功率亦有所下降.小鼠海马CA1区LTP损伤程度与血铅、脑铅浓度呈正相关(r=0.659,r=0.638,P＜0.01).铅暴露组小鼠脑海马p-PKB表达均明显降低,并具有浓度效应关系.p-PKB表达与血脑铅浓度呈负相关(r=-0.840,r=-0.813,P＜0.01),与学习记忆能力损伤程度呈负相关(r=-0.668,P＜0.01).铅对小鼠海马神经元细胞t-PKB的表达无影响.结论 慢性铅暴露可导致学习记忆功能下降,可能与海马p-PKB表达下降有关.
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阿托伐他汀通过激活PI3K/Akt/mTOR信号转导而促进神经元突起生长
目的 探讨阿托伐他汀(Ato)对体外培养大鼠皮质神经元突起生长促进作用的信号转导机制.方法 取培养7 d大脑皮质神经元,分为Ato 10 μmol·L-1作用48 h组和阻断剂+Ato组,先分别加入阻断剂PD98059 50 μmol·L-1、LY294002 30 μmol·L-1、曲西立滨(TCBN)2.5 μmol·L-1和西罗莫司(雷帕霉素,Rapa) 100 nmol·L-1作用1 h,再加入Ato共同作用48 h.应用倒置相差显微镜观察神经元突起生长状况;Western 印迹法检测磷酸化的磷酸肌醇依赖激酶1(PDK1)、磷酸化蛋白激酶B(Akt)、磷酸化西罗莫司靶蛋白(mTOR)、磷酸化的核糖体S6激酶(p70S6K)和磷酸化的真核翻译起始因子4E结合蛋白 1(p-4E-BP1)的表达.结果 形态学观察结果显示,Ato 10 μmol·L-1组可明显促进突起生长,表现为突起总长度增加、一级突起数目增多、末端分支数增多及胞体面积增大.PD98059,LY294002,TCBN和Rapa均可阻断Ato对神经元突起生长的促进作用.Western印迹结果显示,Ato 10 μmol·L-1可显著上调p-PDK1,p-Akt(Ser473),p-mTOR,p-p70S6K和p-4E-BP1蛋白表达水平(P<0.01).LY294002可显著阻断Ato引起的p-PDK1,p-Akt(Ser473) 蛋白表达水平增加(P<0.01).TCBN 可显著阻断Ato引起的p-mTOR蛋白表达水平增加(P<0.01).Rapa可明显阻断Ato引起的p-p70S6K和p-4E-BP1蛋白表达水平增加(P<0.01).结论 Ato对体外培养皮质神经元突起发育的促进作用可能与激动MEK/ERK信号转导通路有一定的关系,主要可能与通过激活PI3K/Akt/mTOR信号转导通路有关.
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MAPK和AKT磷酸化下调参与Toll样受体抑制的人牙周膜干细胞的成骨分化
目的:探讨Toll样受体(Toll like receptors, TLR)对人牙周膜干细胞成骨分化的影响及其可能的分子机制.方法:应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction, real-time PCR)及流式细胞术检测TLR在人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells, hPDLSCs)上的表达.在成骨培养基中加入多种浓度的不同TLR配体培养7 ～ 14 d,检测TLR对hPDLSCs成骨的影响.通过Western blotting方法检测TLR配体刺激hPDLSCs 7 d 后,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)及蛋白激酶 B(protein kinase B, PKB or AKT)磷酸化水平的变化及runt相关转录因子2(runt related transcription factor 2, Runx2)的变化,并对比加入MAPK及AKT抑制剂后Runx2的变化,探究TLR是否通过影响下游的MAPK及AKT的活化而影响hPDLSCs的成骨分化.结果:TLR1、TLR3、TLR4、TLR6在hPDLSCs上表达较高,不同TLR的阳性细胞百分比为TLR1 2.82％ ± 0.68％,TLR2 1.26％ ±0.09％,TLR3 13.23％ ±2.05％ ,TLR4 3.64％ ±0. 79％ ,TLR6 3. 21％ ±1.64％,其趋势与 TLR 在 hPDLSCs 中 mRNA 表达相一致.高浓度的 TLR 配体(PolyI:C 10 mg/L, LPS 10 mg/L , Pam3CSK4 1 mg/L, FSL-1 50 μg/L)刺激hPDLSCs可减少矿化结节的形成,减弱ALP染色及降低ALP活性.高浓度TLR配体刺激还可下调细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)、P38、c-Jun 氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)及AKT的磷酸化水平,伴随Runx2的表达水平下调,应用MAPK及AKT抑制剂也可下调Runx2的表达.结论:高浓度的TLR配体刺激可抑制hPDLSCs的成骨分化,这种抑制作用和MAPK及AKT磷酸化降低相关.
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化浊解毒方对慢性糜烂性胃炎浊毒内蕴证患者蛋白激酶B及肝细胞生长因子受体表达的影响
目的 观察化浊解毒方治疗慢性糜烂性胃炎(CEG)浊毒内蕴证患者的临床疗效,并从治疗前后血清和胃黏膜组织中蛋白激酶B(Akt)、肝细胞生长因子受体(c-Met)表达水平的变化方面探讨化浊解毒方的作用机制.方法 采用随机单盲对照临床试验设计,将80例患者随机分为2组,治疗组予化浊解毒方治疗,对照组予阿拉坦五味丸治疗,观察2组患者治疗前后血清及胃黏膜组织中Akt、c-Met的表达水平.结果 治疗后,治疗组血清和胃黏膜组织Akt表达水平较对照组明显降低(P<0.05),治疗组胃黏膜组织c-Met表达水平较对照组明显降低(P<0.05),差异有统计学意义.结论 化浊解毒方能显著降低血清及胃黏膜组织中Akt、c-Met的表达水平,其作用机制可能是该方通过调控Akt、c-Met的表达水平及其活性而对CEG产生作用.
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针刺联合美多芭对帕金森病小鼠脑多巴胺神经元及蛋白激酶B表达的影响
目的 通过观察针刺舞蹈震颤控制区联合美多芭对帕金森病(PD)小鼠脑内蛋白激酶B(Akt)表达的影响来探讨针刺联合美多芭对多巴胺(DA)能神经元的保护作用及可能机制.方法 将C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、美多芭组、针刺组和针刺联合美多芭(简称针美)组.应用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)的方法建立PD小鼠模型,后3组在造模后采取不同治疗措施,造模后小鼠存活28 d.采用爬杆法观察小鼠行为学;免疫组织化学技术检测小鼠中脑黑质致密部多巴胺神经元的丢失程度及脑Akt的表达.结果 3个治疗组小鼠行为学爬杆时间均较模型组有明显缩短(P<0.05).造模后,小鼠黑质致密部多巴胺神经元表达较正常组减少(P<0.05),其中针美组多巴胺神经元表达较模型组及美多芭组增多(P<0.05).在黑质致密部,针美组Akt与其余各组相比,表达明显升高(P<0.05);在海马部位,针美组在CA1、CA3和CA4区的表达比模型组和美多芭组明显升高(P<0.05),在CA1和CA4的表达比针刺组有明显上升(P<0.05).结论 针刺舞蹈震颤控制区特别是再给予美多芭复合治疗可能通过调节脑磷酯酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/Akt 通路,从而达到治疗PD的目的.
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IL-6对肝癌细胞增殖、侵袭和转移的影响
目的 观察白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)对肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭和转移的影响并探究其作用机制.方法 体外培养SMMC-7721细胞,分别加入不同浓度IL-6(0、5、10、20、40 ng/ml)和(或)AKT抑制剂LY294002.MTT、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验、细胞黏附实验分别检测细胞的增殖、转移和侵袭能力的变化;Westernblot方法检测AKT、p-AKT、MMP-9、CD44、Ezrin蛋白的表达量.结果 IL-6组(5、10、20 ng/ml)浓度依赖性促进细胞增殖率、划痕愈合率、侵袭细胞数目和黏附细胞吸光度值增加(P＜ 0.05);IL-6浓度20 ng/ml与40 ng/ml之间差异无统计学意义(P＞0.05).IL-6佳作用浓度组(20 ng/ml)细胞增殖率(62.76％±6.86％)、划痕愈合率(92.37％±9.38％)、侵袭细胞数目(174.41±15.14)、黏附细胞吸光度值(0.531±0.055),P-AKT、MMP-9、CD44、Ezrin蛋白的表达量均高于对照组和IL-6(20ng/ml)+ LY296002(20μmol/L)组(P＜0.05).各组AKT蛋白表达量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-6可能通过AKT通路影响MMP-9、CD44、Ezrin蛋白的表达,促进肝癌细胞的增殖、侵袭和转移.
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PI3K/AKT/Bcl-2凋亡信号传导通路的研究进展
细胞信号传导通路与疾病的相关性是近年来的研究热点，磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路是其中的一条重要通路，具有促进细胞增殖、抑制凋亡、促进细胞迁移以及血管生成和影响疾病预后等功能。当PI3K/AKT信号通路被激活后，其通过影响下游的多种效应分子，影响细胞凋亡，进而导致疾病的发生、发展。 B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)是AKT的底物之一，能够抑制细胞的凋亡，导致多种疾病如肿瘤或瘢痕等发生。本文就PI3K/AKT/Bcl-2信号通路的组成、调节以及与疾病的关系展开综述。
关键词： 磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白激酶B B细胞淋巴瘤-2蛋白 信号传导通路
