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Akt的活化对胃癌血管新生的促进作用
目的:研究Akt在胃癌及癌旁正常组织中的表达、活化状况及其与胃癌血管新生的关系.方法:收集手术切除的胃癌及相应的癌旁正常组织标本48例.采用Western blot法检测20例新鲜胃癌及癌旁组织Akt和磷酸化Akt(pAkt)蛋白的表达.以免疫组织化学法检测pAkt蛋白在48例胃癌和癌旁正常组织的表达以及血管内皮生长因子(VEGF)在48例胃癌组织中的表达水平.采用CD34抗原为血管内皮标记检测其在胃癌组织的免疫染色状况以确定肿瘤组织的微血管密度(MVD).结果:Western blot显示20例胃癌组织(20/20)和19例癌旁正常组织(19/20)中存在Akt蛋白的表达,Akt蛋白在胃癌组织中的表达水平为正常组织的2.7倍(0.186±0.013 vs 0.069±0.009,P＜0.001);在20例胃癌配对组织中皆可检测到pAkt蛋白的表达,但癌组织的水平为癌旁正常组织4.1倍(0.164±0.025 vs 0.040±0.006,P＜0.01).pAkt蛋白在胃癌和癌旁正常组织中表达的阳性率分别为66.7%(32/48)和58.3%(28/48),pAkt较高表达于组织分化较差(x2=8.280,P＜0.05)和TNM分期较晚(x2=8.526,P＜0.05)的胃癌组织中.48例胃癌组织的平均MVD为40.6±15.1,在32例pAkt表达阳性胃癌组织中,MVD均值为45.5±20.3,而16例pAkt表达阴性的胃癌组织中,MVD均值为30.6±12.1,统计分析表明两组之间具有显著性差异(P＜0.01).VEGF在48例胃癌组织中的阳性表达率为52.1%(25/48),x2检验分析表明pAkt与VEGF在胃癌组织中的表达水平密切相关(x2=12.89,P=0.012).结论:Akt及pAkt蛋白特异性过表达于胃癌组织.pAkt蛋白可能促进胃癌的血管新生,上调表达VEGF可能在其中发挥重要的介导作用.
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氯膦酸二钠脂质体对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜Akt、MAPK(ERK1/2)活性的影响
目的:研究氯膦酸二钠脂质体(liposomal clodronate,LC)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠肠黏膜蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)和丝裂原活化蛋白激酶1/2[mitogen-activated protein kinase,MAPK(ERKl/2)]活性的影响,探讨LC治疗SAP肠黏膜损伤的保护作用.方法:利用薄膜法制备LC.SD大鼠48只,随机分为3组:对照组(C组)、SAP+空白脂质体治疗组(P组)、SAP+Clodronate脂质体治疗组(T组).P组和T组采用胰腺被膜下均匀注射5％牛磺胆酸钠制作SAP模型后,分别经尾静脉注射空白脂质体和Clodronate脂质体,C组仅注射等量生理盐水.制模后2、6h分别取肠系膜上静脉血液,检测各组大鼠血清中淀粉酶(amylase,AMS)的含量,同时检测各组大鼠血清中白介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量,观察各组肠黏膜的病理学变化及病理评分,采用免疫组织化学方法检测肠黏膜巨噬细胞Akt和MAPK(ERK1/2)的表达情况.结果:P组大鼠在制模后2、6h的血清AMS水平较C组明显升高(P＜0.01).与P组比较,T大鼠各时相的血清AMS水平均显著降低(P＜0.01).P组较C组2、6h血清IL-6和TNF-α明显升高(P＜0.01).T组各时相较P组血清IL-6和TNF-α显著降低(P＜0.01).T组大鼠的肠黏膜病理变化均较P组明显减轻,病理学评分明显降低(P＜0.01).T组肠黏膜Akt和MAPK(ERK1/2)的表达较P组明显减少.结论:巨噬细胞在SAP大鼠肠黏膜损伤中起重要作用,LC可选择性清除巨噬细胞,减少肠黏膜Akt、MAPK(ERK1/2)的表达,对肠黏膜损伤有一定的保护作用.
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利培酮抑制结肠癌细胞株SW480生长的作用机制
目的:探讨利培酮对人结肠癌细胞株SW480生长抑制的作用机制及其相关研究.方法:表皮生长因子和利培酮单独或联合作用于SW480细胞,通过蛋白印迹实验观察蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)及细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)磷酸化程度,利用RT-PCR判断细胞因子信号转导抑制因子基因表达水平,利用显微镜及细胞计数方法判断细胞生长情况,结果:利培酮抑制人表皮生长因子诱导的结肠癌细胞株SW480细胞的生长;其机制是通过激活ERK1/2的活性并诱导SOCS3的基因的表达,从而抑制PKB的磷酸化,终抑制SW480的生长.结论:利培酮具有抑制表皮生长因子对人结肠癌细胞株的生长作用.
关键词： 利培酮 细胞外信号调节激酶1/2 细胞因子信号转导抑制因子 蛋白激酶B -
bFGF促进人大肠癌LoVo细胞增殖的信号转导机制
目的:通过改变碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作用于LoVo细胞的时间,检测PKB活性和Cyclin A的表达情况,进一步研究bFGF通过PI3-K/PKB通路调控大肠癌细胞生长的信号转导机制.方法:MTT法分析bFGF对LoVo细胞增殖程度的影响;(γ-32P)ATP掺入法检测大肠癌LoVo细胞株中PKB的活性;RT-PCR法检测大肠癌LoVo细胞株中Cyclin A的表达;Western blot法检测bFGF作用LoVo细胞后Cyclin A的表达.结果:bFGF以不同时间作用于LoVo细胞时,通过(γ-32P)ATP掺入法检测发现其可提高细胞PKB活性,PI3-K的抑制剂LY294002预处理后再施加bFGF,可显著降低PKB的活性,两者相比差异显著[704.32±12.35 pmol/(mg·min)vs 1352.79±19.85 pmol/(mg·min),P＜0.05].bFGF刺激LoVo细胞时Cyclin A蛋白和CyclinA mRNA表达均高于其他各施加因素组,而PI3-K的抑制剂LY294002组的Cyclin A蛋白和Cyclin A mRNA明显降低.结论:bFGF刺激大肠LoVo细胞后可通过依赖PI3-K/PKB途径调节Cyclin A的转录活性,促进其表达,进而促进细胞增殖.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 蛋白激酶B Cyclin A 大肠癌 -
蛋白激酶B丝氨酸磷酸化在非乙醇性脂肪肝发病机制中的作用
目的:探讨蛋白激酶B丝氨酸磷酸化在高脂诱导大鼠非乙醇性脂肪肝发病机制中的作用.方法:选Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组(n=20),高脂组(n=20)和高脂+罗格列酮组(n=20).分别用正常、高脂和高脂+罗格列酮饲料喂养16 wk,处死,观察血脂、胰岛素、肝功,肝脏组织学及超微结构的变化,免疫组化法检测丝氨酸磷酸化的蛋白激酶B在肝脏中的表达.结果:高脂组16 wk后,肝细胞中出现大量的脂肪滴,小叶内及汇管区炎性细胞浸润并伴有点片状坏死.超微结构示:细胞器结构消失,线粒体嵴断裂或空泡变.肝指数、甘油三酯、胰岛素抵抗指数、肝脏谷丙转氨酶(ALT)、γ-氨基酰胺转肽酶(GGT)(分别为3.96%±0.32%,2.87±0.3 mmol/L,15.59±1.7,136.7±0.26 nkat/L和1700.3±0.92 nkat/L)较正常对照组(2.31%±0.21%,0.56±0.20 mmol/L,1.79±1.7,125.0±0.14 nkat/L和158.4±0.63 nkat/L)相比明显增加(P＜0.01或P＜0.05).高脂组肝脏蛋白激酶B蛋白表达量为34.2%,与正常对照组的89.06%相比明显减弱(P＜0.01).结论:高脂可能通过抑制蛋白激酶B的活性的表达影响胰岛素信号传导而产生胰岛素抵抗进而参与了非乙醇性脂肪肝的形成.
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PI3K-Akt信号通路与肿瘤
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3Ks)信号参与增殖、分化、凋亡和葡萄糖转运等多种细胞功能的调节.近年来发现,IA型PI3K和其下游分子蛋白激酶B(PKB或Akt)所组成的信号通路与人类肿瘤的发生发展密切相关.该通路调节肿瘤细胞的增殖和存活,其活性异常不仅能导致细胞恶性转化,而且与肿瘤细胞的迁移、黏附、肿瘤血管生成以及细胞外基质的降解等相关,目前以PI3K-Akt信号通路关键分子为靶点的肿瘤治疗策略正在发展中.
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PI3K/Akt和COX-2信号通路阻断在胃癌治疗中的应用
磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB,PI3K/Akt)和环氧合酶-2(COX-2)信号通路的异常改变在肿瘤的发生、发展过程中起重要作用. 并且可以引起肿瘤的一系列生物学行为改变, 对肿瘤患者的治疗和预后产生很大影响. 本文研究PI3K/Akt和COX-2信号通路阻断及其机制, 为包括胃癌在内的多种肿瘤的分子靶向治疗提供新的方向.
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PTEN、Akt和pAkt蛋白在肝细胞癌组织中的表达及其与预后的关系
目的:探讨人肝细胞癌组织中PTEN、Akt和pAkt蛋白的表达及其预后价值.方法:应用免疫组织化学方法检测78例肝细胞癌组织及21例正常肝组织中PTEN、Akt和pAkt蛋白的表达,分析其与肝细胞癌临床病理特征及预后的关系.结果:在肝细胞癌组织中,PTEN蛋白的表达率显著低于正常肝组织(42.3％ vs 90.5％,P＜0.05),Akt及pAkt蛋白的表达率显著高于正常肝组织(66.7％ vs 33.3％；43.6％ vs 9.5％,均P＜0.05).PTEN蛋白的表达水平与肿瘤直径、门静脉癌栓、侵及周围脏器或淋巴结转移及TNM分期有关(均P＜0.05)；Akt及pAkt蛋白的表达水平与肿瘤直径、侵及周围脏器或淋巴结转移及TNM分期有关(均P＜0.05).PTEN与Akt蛋白表达呈负相关(r=-0.385,P=0.000),与pAkt蛋白表达呈负相关(r=-0.334,P=0.003).PTEN蛋白高表达患者术后生存率明显高于低表达患者(P=0.000),Akt、pAkt蛋白高表达患者术后生存率明显低于低表达患者(P=0.000).COX模型多因素分析结果显示,TNM分期及pAkt蛋白的表达是影响肝细胞癌预后的独立因素.结论:肝细胞癌组织中PTEN、Akt及pAkt的表达失调与肝细胞癌的恶性生物学行为密切相关,pAkt可以作为评价患者预后的指标.
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大肠癌组织bFGF,PKB,Cyclin A的表达及其与临床的相关性
目的:研究大肠癌组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),蛋白激酶B(PKB)及细胞周期蛋白A(Cvclin A)mRNA的表达水平及与临床病理的关系.方法:采用TRIzol法分别提取60例大肠癌组织,癌旁组织和10例正常组织的RNA,应用RT-PCR方法检测bFGF,PKB,Cyclin A mRNA的表达水平,PCR产物经凝胶成像及分析系统扫描后,以β-actin为参照标化bFGF,PKB,Cvclin A的含量.通过统计学分析其与临床病理关系.结果:bFGF,PKB,Cyclin A在大肠癌组织中的表达与癌旁组织相比有显著差异(bFGF:60%vs 10%;PKB:55% vs 35%;CyclinA:70% vs 5%;all P＜0.05),其表达水平与大肠癌Dukes分期有关(bFGF:χ2=4.434,P＜0.05;PKB:χ2=13.549,P＜0.01;CyclinA:χ2=21.210,P＜0.01).PKB在低分化肿瘤中的表达阳性率高于中高分化肿瘤(14/14 vs 29/46,P＜0.05).Cyclin A的表达在高、中分化肿瘤中明显高于低分化肿瘤(37/46 vs 3/14,P＜0.05).结论:bFGF,PKB,Cyclin A的mRNA水平与大肠癌的发生、发展相关.
关键词： 大肠癌 碱性成纤维细胞生长因子 蛋白激酶B 细胞周期蛋白A 逆转录-聚合酶链反应 -
肝细胞肝癌与活化的Cdc42结合蛋白激酶1的研究进展
原发性肝癌是指由肝细胞或肝内胆管上皮细胞发生的恶性肿瘤,简称肝癌.其发生率在各国和地区间差异很大,是我国常见的恶性肿瘤之一,死亡率高,在中国肿瘤相关性死亡率中排第2位.针对肝癌发病分子机制的研究是各大肝癌诊治中心的研究热点,其中对活化的Cdc42结合蛋白激酶1(activited Cdc42 kinase 1,ACK1)蛋白与肝癌相关性的研究在国内还是很少的.ACK1被发现在多种类型的肿瘤中过表达,并参与肿瘤的发生、发展,成为目前肿瘤信号传导通路研究的热点.本文拟就ACK1的结构特点、生物学功能及其与肝癌侵袭转移相关的研究进展进行简要综述.
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持续激活的Akt减少了 3T3-L1脂肪细胞脂联素蛋白的表达
目的研究蛋白激酶B(Akt/PKB)的持续激活与灭活对3T3-L1脂肪细胞内脂联素蛋白表达的影响. 方法通过腺病毒表达系统将持续激活的Akt(myrAkt)和无酶活性的Akt(Akt-AA)导入3T3-L1脂肪细胞内,应用免疫印迹法检测3T3-L1脂肪细胞脂联素蛋白的表达. 结果表达myrAkt的3T3-L1脂肪细胞中脂联素明显减少,表达Akt-AA的3T3-L1脂肪细胞中脂联素无明显变化. 结论 Akt的激活抑制了3T3-L1脂肪细胞中脂联素蛋白的表达,且Akt的激活是影响脂联素的充分条件,而不是必要条件.
关键词： 脂联素 蛋白激酶B 3T3-L1脂肪细胞 -
罗格列酮对高胰岛素培养的内皮细胞一氧化氮的影响及其机制研究
目的 观察罗格列酮(RGZ)对高胰岛素培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)NO浓度和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(PKB)表达的影响,探讨RGZ改善高胰岛素状态下内皮功能障碍的信号转导机制. 方法 高浓度胰岛素培养HUVEC 72h,并用不同浓度的RGZ进行干预.检测NO浓度,PI3K mRNA的表达,PKB、eNOS总蛋白和PKB丝氨酸473(PKB-Ser473)、eNOS丝氨酸1177(eNOS-Ser1177)的磷酸化表达. 结果 高浓度胰岛素培养HUVEC能呈剂量和时间依赖性地降低NO的浓度,抑制内皮细胞PI3K mRNA表达和PKB-Ser473、eNOS-Ser1177的磷酸化.用RGZ干预能显著升高高胰岛素培养的内皮细胞NO的浓度和PKB、eNOS的磷酸化,增强PI3K mRNA表达;eNOS和PI3K阻断剂均能阻断RGZ对高胰岛素培养的内皮细胞中NO浓度的升高,PI3K阻断剂还能阻断RGZ对高胰岛素培养内皮细胞PKB、eNOS的磷酸化. 结论 高胰岛素能下调PI3K/PKB/eNOS信号通路而抑制内皮细胞NO的产生,RGZ能通过上调PI3K/PKB通路而增强高胰岛素培养的内皮细胞eNOS的活性和NO的产生.
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胰岛素抵抗大鼠骨骼肌中蛋白激酶B表达及葡萄糖转运蛋白4转位的改变
目的研究高脂饮食喂养的胰岛素抵抗(IR)大鼠骨骼肌中蛋白激酶B(PKB)表达和葡萄糖转运蛋白4(GluT-4) 转位的改变及饮食治疗、葛根素、罗格列酮干预的影响. 方法将雄性SD大鼠50只随机分为正常饮食(A)组和高脂饮食(B)组,2个月后再将B组大鼠随机分为高脂饮食(C)组、正常饮食干预(D)组、葛根素干预(E)组和罗格列酮干预(F)组.干预1个月后检测骨骼肌中PKB的表达及转位至质膜的GluT-4含量. 结果 C组大鼠产生了明显的IR,骨骼肌中PKB的表达较A组显著降低(P<0.01),转位到质膜上的GluT-4含量显著减低(P<0.01);D、E、F组大鼠IR明显改善,骨骼肌中PKB的表达较C组大鼠显著增加(P<0.01),GluT-4含量较C组大鼠显著升高(P<0.01). 结论高脂饮食喂养的SD大鼠骨骼肌产生明显的IR,骨骼肌中Ins诱导的PKB表达降低,Ins刺激的GluT-4向质膜的转位减少.饮食治疗及葛根素、罗格列酮干预能增加骨骼肌中Ins刺激的PKB表达及GluT-4向质膜的转位.
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抵抗素对内皮细胞NO生成的影响及Akt信号机制
目的 探讨抵抗素对内皮细胞NO生成的影响及其可能的信号机制.方法 分离、培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),以不同浓度抵抗素(15、50、100 ng/ml)干预.荧光显微镜检测各组细胞中NO的生成,RT-PCR检测eNOS mRNA表达水平,Western blot检测Akt和eNOS磷酸化水平. 结果 15、50、100ng/ml抵抗素干预HUVECs 24h后,胰岛素刺激的内皮NO生成显著降低(三组分别为4.01±0.69、3.76±0.71、3.73±0.45,vs 对照组P均＜0.05),同时伴有内皮Akt和eNOS磷酸化水平的降低(vs 对照组P均＜0.05),而eNOS mRNA表达无显著改变. 结论 抵抗素可通过PI3K/Akt途径影响HUVECs eNOS磷酸化水平,进而调节内皮细胞NO生成,但该影响并非Akt依赖性.
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白藜三醇促进缺氧条件下人脐静脉内皮细胞的血管生成作用
目的:探讨白藜三醇(Res)对氯化钴(CoCl2)诱导缺氧的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的血管生成作用的影响及可能机制.方法:体外培养HUVEC分5组:DMEM高糖(＜4500 mg/L)培养基培养细胞组(正常组)、CoCl2+DMEM高糖培养基(缺氧组)、缺氧+LY294002(阻断剂组)、缺氧+白藜三醇(药物组)、缺氧+白藜三醇+LY294002(药物阻断剂组).采用CCK-8法检测细胞增殖情况;采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测低氧诱导因子1 α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达;免疫细胞化学的方法检测HIF-1α的蛋白表达;采用transwell chamber(迁移小室)检测内皮细胞的迁移能力;体外血管形成实验检测内皮细胞的体外血管形成能力.结果:①CCK-8:缺氧组及药物组(0.1、1、5、10 μmol/L)与正常组相比A490值升高(P均＜0.01);药物组(1、5μmol/L)与缺氧组比A490值升高(P均＜0.01).尤其药物组5μmol/L A490值明显升高(P＜0.01).②蛋白免疫印迹:缺氧组较正常组HIF-1 α、VEGF、p-Akt蛋白表达均增加(P均＜0.05);药物组(5 μmol/L)与缺氧组相比H1F-1α、VEGF、p-Akt蛋白表达均增加(P均＜0.01);药物阻断剂组(5μmol/L)较阻断剂组HIF-1 α、VEGF、p-Akt蛋白表达比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).③免疫细胞化学:缺氧组胞内HIF-1 α阳性表达,显色呈黄褐色;药物组(5μmol/L)胞内HIF-1 α强阳性表达,显色呈深黄褐色.④transwell chamber:药物组(5 μmol/L)内皮细胞迁移率大于缺氧组(P＜0.01).⑤体外血管形成实验:药物组(5 μmol/L)在体外的血管形成数量明显大于缺氧组(P＜0.01).结论:白藜三醇可能是激活磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI-3K)/Akt通路促进HIF-1 α聚集,从而促进血管的新生.
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PI3K/AKt/eNOS信号通路在硫化氢抑制ET-1诱导的心肌肥大中的作用
目的：观察磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）-蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶（AKt）-内皮型一氧化氮合酶（eNOS）信号转导通路在硫化氢（H2S）抑制内皮素-1（endothelin-1，ET-1）诱导心肌肥大过程中的作用。方法体外培养原代心肌细胞，将其随机分为6组，每组4孔，①对照组：加入等体积无血清的DMEM培养基；②肥大（ET-1）组：加入终浓度为10-8 mol/L的ET-1；剩余4组为实验组，各组分别加入不同终浓度的H2S供体-NaHS：③10-15 M NaHS组：加入10-15 mol/L NaHS+10-8 mol/l ET-1；④10-14 M NaHS组：加入10-14 mol/L NaHS+10-8 mol/L ET-1；⑤10-13 M NaHS组：加入10-13 mol/L NaHS+10-8 mol/L ET-1；⑥10-12 M NaHS组：加入10-12 mol/L NaHS+10-8 mol/L ET-1。上述各组药物分别刺激24 h后测定心肌细胞表面积、细胞总蛋白含量、培养液NO含量，RT-PCR检测心肌细胞心房利钠肽（atrial natriuretic peptide，ANP）、脑钠肽（B-type natriuretic peptide，BNP）、磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B，PKB/AKt）、eNOS mRNA水平，Western Blot技术检测总AKt和磷酸化AKt蛋白表达含量。结果肥大（ET-1）组的心肌细胞表面积（1933.80±143.06）和细胞总蛋白含量（367.51±25.9）均高于对照组（787.27±107.66，218.55±21.28，P＜0.05），ANP及BNP mRNA的表达量也明显增加（P＜0.05），但PI3K、AKt、eNOS mRNA表达水平，磷酸化AKt程度和NO的释放量（4.60±0.73）低于对照组（8.63±0.30，P＜0.05），各实验组给予不同浓度NaHS刺激后能够浓度依赖性的抑制这种肥大效应（P＜0.05），同时上调了PI3K/AKt/eNOS通路各信号分子的表达量（P＜0.05）。结论H2S对ET-1诱导的心肌肥大有一定的抑制作用，这种作用可能与激活PI3K-AKt-eNOS信号通路有关。
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地塞米松对大鼠成骨细胞功能及蛋白激酶B磷酸化的影响
目的 研究地塞米松 (dexamethasone, Dex) 对大鼠成骨细胞功能及Akt磷酸化的影响.方法 取新生 SD 大鼠颅骨体外分离培养的成骨细胞, 根据地塞米松作用浓度分为对照组 ( 0 mol/L Dex)、10-8mol/L Dex组、 10-7mol/L Dex组、 10-6mol/L Dex组 干预24 h; 应用Akt激动剂SC79进一步验证地塞米松对成骨细胞增生和功能的影响, 分为对照组 ( 0 mol/L Dex, 0 mol/L SC79)、 SC79 组 ( 0 mol/L Dex, 10 μmol/L SC79)、 Dex组 (10-6mol/L Dex, 0 mol/L SC79)、 SC79+Dex组 (10 μmol/L SC79, 10-6mol/L Dex)干预24 h.培养结束后, 运用Cell Counting Kit-8法检测细胞增生活力, 碱性磷酸酶 ( alkaline phosphatase, ALP) 试剂盒检测成骨细胞上清液中ALP的含量, Western blot法检测成骨细胞中ALP、 Akt、 p-Akt蛋白表达.结果 (1) 与对照组相比, 10-7mol/L、 10-6mol/L Dex组的细胞增生活性均明显下降 ( A值分别为0. 742± 0. 022、 0. 598±0. 028、 0. 570±0. 025 ), 差异有统计学意义 (P<0. 05). 10-8mol/L地塞米松对成骨细胞增生抑制不明显 (P>0. 05); (2) 除10-8mol/L Dex组外, 10-7mol/L Dex组、 10-6mol/L Dex组上清液中ALP含量均显著低于对照组 (ALP活性值分别为0. 316±0. 015、 0. 313±0. 013、 0. 351±0. 028), 差异有统计学意义 (P<0. 05); (3) 在10-8mol/L、 10-7mol/L、 10-6mol/L地塞米松作用下, 成骨细胞p-Akt蛋白表达较对照组分别减少16. 9%、 34. 9%、 62. 5%, 差异有统计学意义 (均P<0. 05), ALP蛋白分别减少16. 2%、 24. 8%、 69. 3%, 其中10-7mol/L Dex组、 10-6mol/L Dex组与对照组比较, 差异有统计学意义 (P<0. 05); (4) 与对照组相比, 10 μmol/L SC79刺激p-Akt蛋白的表达, 对ALP蛋白的表达具有促进作用 (P<0. 05); 与Dex组相比, SC79+Dex组成骨细胞增生活力及ALP活性明显升高, p-Akt、 ALP蛋白表达明显增加, 差异有统计学意义 (P<0. 05).结论 高浓度地塞米松可以抑制成骨细胞增生和ALP的表达, 其作用机制可能与下调Akt磷酸化有关.
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瘦素通过PI3K/Akt通路对大鼠气道平滑肌细胞凋亡的影响
目的 观察瘦素对大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)蛋白激酶-B(Akt)、磷酸化蛋白激酶-B(Pho-Akt)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-3(caspase-3)的表达及细胞凋亡的影响,探讨瘦素影响ASMC凋亡的可能机制.方法 体外培养大鼠ASMC,按随机数字表法分为空白对照组、瘦素50 μg/L组(Lep50组)、瘦素100 μg/L组(Lep100组)、瘦素200 μg/L组(Lep200组)及瘦素200μg/L±LY294002组[1-磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂组].各组均孵育24h后用Annexin-V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡率,Western blot测定Akt、Pho-Akt、Bcl-2、Bax和caspase-3的蛋白表达情况.结果 Lep50组、Lep100组、Lep200组的细胞凋亡率分别为(3.97±0.39)％、(1.88 ±0.72)％和(0.77±0.1 1)％,均低于空白对照组的(7.38±0.49)％(F =89.57,P＜0.05),且各组细胞凋亡率与瘦素浓度呈负相关(r=-0.711,P＜0.05)；PI3K抑制剂组凋亡率为(3.29±0.36)％,高于Lep200组(F =89.57,P＜0.01).Western blot结果显示随着瘦素浓度的升高Bcl-2表达增加,且与浓度呈正相关(r=0.939,P＜0.05),Bax和caspase-3表达下降,与瘦素浓度成负相关(r值分别为-0.908和-0.961,均P＜0.05),Bcl-2/Bax比值增加(F=20.56,P ＜0.05),Pho-Akt表达上调,且与瘦素浓度呈正相关(r=0.958,P ＜0.05)；PI3K抑制剂组较Lep200组Pho-Akt、Bcl-2表达下降(F值分别为32.93和19.48,均P＜0.05),Bax和caspase-3表达升高(F值分别为10.10和29.86,均P＜0.05),Bcl-2/Bax比值下降(F =20.56,P＜0.05).结论 瘦素可以抑制ASMC的凋亡,其机制可能与激活P13K/Akt通路有关.
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阿托伐他汀对氧化低密度脂蛋白信号转导途径的影响
目的探讨氧化低密度脂蛋白(oxLDL)促血管平滑肌细胞增殖的信号转导机制及3羟基3甲基戊二酸单酰辅酶A抑制剂阿托伐他汀(atorvastatin)的干预作用.方法采用培养兔血管平滑肌细胞方法,以细胞计数、噻唑蓝比色法测定细胞增殖能力,Western印迹法定量蛋白激酶B(PKB)表达水平,特异底物组蛋白H2B中γ32P掺入量测定PKB活性.以磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)特异抑制剂渥曼青霉素(WT)预处理细胞,间接反映PI3K活性.结果oxLDL(50 mg/L)使细胞增殖指标增至1.8～3 2倍,oxLDL可浓度(5～50 mg/L)、时间(3 min～24 h)依赖地增加PKB活性.WT及阿托伐他汀均可显著抑制VSMC增殖及PKB活性,并完全逆转oxLDL的上述作用,阿托伐他汀对VSMC增殖的抑制作用可被胆固醇前体甲羟戊酸(MVA)阻止.同等浓度的LDL对细胞增殖及PKB活性无明显影响.oxLDL、低密度脂蛋白(LDL)、WT及阿托伐他汀对PKB蛋白表达均无显著影响.结论oxLDL可能通过对PI3K/PKB的活化发挥促VSMC增殖作用,阿托伐他汀至少部分通过抑制PKB信号通路而显著抑制VSMC增殖,并且此作用与减少MVA的产生有关.
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糖尿病大鼠因PI3k-Akt-eNOS信号通路受损而易发心房颤动
目的 探讨糖尿病大鼠易发生心房颤动(房颤)的机制.方法 清洁级雄性GK大鼠24只,采用随机数表法分为GK组、胰岛素样生长因子(IGF)组和N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)组,每组8只,另设与GK匹配的同源WKY雄性大鼠8只作为对照组.IGF组每天尾静脉注射IGF-1 1.5 μg/kg;L-NAME组每天尾静脉注射L-NAME 1.5 μg/kg,0.5 h后尾静脉注射IGF-1 1.5 μg/kg;GK组和WKY组大鼠每天尾静脉注射与IGF组等量的生理盐水,持续4周.实验开始后,每周同一时间,测量大鼠随机血糖.4周后,采用彩色多普勒超声检测大鼠左心房前后径(LAD);多导电生理记录仪测量大鼠心房电生理参数,包括P波时限、PR间期、心房有效不应期(AERP)及其离散度(AERP-d)、房颤诱发率和持续时间.然后处死大鼠,取左心房心肌组织,苏木素伊红染色观测左心房肌细胞横截面(CSA);Masson染色观测心房肌胶原容积分数(CVF);Western blot法检测左心房组织磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)的蛋白表达量.结果 (1)各组大鼠干预前后随机血糖的变化:干预前,GK组、IGF组和L-NAME组大鼠随机血糖均高于WKY组(P均＜0.01).干预4周后,GK组大鼠随机血糖高于WKY组(P＜0.01);IGF组大鼠随机血糖低于GK组(P＜0.05);L-NAME组大鼠随机血糖高于IGF组(P＜0.05).(2)各组大鼠电生理指标:L-NAME组大鼠术中死亡1只,GK组、IGF组、L-NAME组和WKY组大鼠房颤的诱发率分别是7/8、2/8、6/7和3/8,房颤持续时间分别为11.9(9.3,13.1)、0(0,1.8)、11.5(4.4,12.0)和0(0,3.0)s.干预4周后,与WKY组比较,GK组大鼠P波时限和PR间期较长、AERP-d较大、房颤诱发率较高且持续时间较长(P均＜0.01).与GK组比较,IGF组大鼠P波时限和PR间期较短(P分别＜0.01和0.05)、AERP-d较小(P＜0.01)、房颤诱发率较低且持续时间较短(P均＜0.01).与IGF组比较,L-NAME组大鼠P波时限和PR间期较长、AERP-d较大、房颤诱发率较高且持续时间较长(P均＜0.05).四组大鼠间AERP比较差异无统计学意义(P＞0.05).(3)各组大鼠左心房CSA及CVF:干预4周后,与WKY组比较,GK组大鼠左心房CSA和CVF均较大(P均＜0.01).与GK组比较,IGF组大鼠左心房CSA及CVF均较小(P均＜0.01).与IGF组比较,L-NAME组大鼠左心房CSA及CVF均较大(P均＜0.01).(4)各组大鼠左心房心肌组织I3K和p-eNOS蛋白表达量:干预4周后,与WKY组比较,GK组大鼠左心房心肌组织PI3K和p-eNOS蛋白表达量较少(P分别＜0.01和0.05).与GK组比较,IGF组大鼠左心房心肌组织PI3K和p-eNOS蛋白表达量较多(P分别＜0.01和0.05).与IGF组比较,L-NAME组大鼠左心房心肌组织PI3K和p-eNOS蛋白表达量较少(P分别＜0.01和0.05).结论 糖尿病大鼠易发生房颤可能与PI3k-Akt-eNOS信号通路受损导致左心房结构重构与电重构有关.
