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二甲双胍对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响
目的 探讨二甲双胍对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、胶原合成及蛋白激酶B/叉头框蛋白O1(Akt/FoxOl)信号通路磷酸化水平的影响.方法 将瘢痕疙瘩成纤维细胞分为培养液处理的空白对照组和用含不同浓度二甲双胍培养液处理的实验组,给药后48 h采用CCK-8比色法检测细胞增殖,western blot技术检测Akt 、FoxO1的磷酸化水平,羟脯氨酸试剂盒检测胶原的合成.结果 二甲双胍可显著抑制成纤维细胞的增殖,用30、60、90、120 mmol/L不同浓度的二甲双胍处理成纤维细胞后,成纤维细胞的抑制率依次升高为(13.30±2.04)％、(22.64±4.70)％、(54.00±5.34)％和(63.12±3.48)％,呈明显的剂量依赖性.与空白对照组比较,二甲双胍处理后的成纤维细胞中Akt、FoxO1磷酸化水平降低,胶原蛋白产生减少,并且呈剂量依赖性(P ＜0.05,P＜0.01).结论 二甲双胍可显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成,其机制可能与调控Akt/FoxOl信号通路的磷酸化水平有关.
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IGF1和IGF1R及AKT与卵巢癌顺铂耐药相关性研究
目的:检测胰岛素生长因子(IGF)信号通路关键蛋白IGF-1、IGF-1R及Akt在顺铂耐药卵巢癌患者血清中的表达,及其与多药耐药蛋白MRP2的相关性.方法:利用ATP-TCA法对40例卵巢癌标本进行药敏试验,其中16例对顺铂耐药,24例对顺铂敏感.ELISA法分别检测顺铂耐药和敏感组患者血清中IGF-1、IGF-1R及Akt和MRP2的表达,进行相关性分析.结果:IGF-1、IGF-1R及Akt在卵巢癌顺铂耐药组的表达显著高于敏感组,P值均为0.000 1；MRP2的表达卵巢癌顺铂耐药组高于敏感组,P=0.035; IGF-1和IGF-1R有显著相关性,r=0.755,P=0.0001；IGF-1、IGF-1R和Akt有显著相关性,r值分别为0.812和0.643,P值均为0.000 1；MRP2和IGF-1有相关性,r=0.493,P=0.018；IGF-1R与MRP2无相关性,r=0.231,P=0.173; Akt和MRP2无相关性,r=0.274,P=0.106.结论:IGF信号通路关键蛋白IGF-1、IGF-1R及Akt可能参与卵巢癌顺铂耐药,IGF-1与多药耐药蛋白有一定的相关性,IGF-1可能作为卵巢癌靶向治疗的新靶点.
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直肠癌组织Akt-mTOR蛋白表达与临床病理因素相关性分析
目的:探讨直肠癌组织Akt-mTOR蛋白表达与临床病理特征和预后的相关性.方法:应用免疫组织化学技术检测Akt和mTOR蛋白在60例直肠癌组织、30例直肠腺瘤组织及10例癌旁正常黏膜组织中的表达,并对60例患者进行随访.结果:Akt蛋白在直肠癌组织、直肠腺瘤及正常直肠黏膜组织中的阳性表达率分别为60.0％(36/60) 、33.3％(10/30)和10.0％(1/10),其在直肠癌组织与直肠腺瘤组织、正常直肠黏膜组织中的表达差异均有统计学意义(x2值分别为5.692和8.600,P值分别为0.017和0.003),直肠腺瘤组织与正常直肠黏膜组织中的表达差异无统计学意义,x2=2.048,P=0.152;mTOR蛋白在直肠癌组织、直肠腺瘤及正常直肠黏膜组织中的阳性表达率分别为61.7％(37/60)、36.7％(11/30)和10.0％(1/10)；其在直肠癌组织与直肠腺瘤组织、正常直肠黏膜组织中的表达差异均有统计学意义(x2值分别为5.022和9.220,P值分别为0.017和0.002),直肠腺瘤组织与正常直肠黏膜组织中的表达差异无统计学意义,x2=2.540,P=0.111.两者在直肠癌组织中过表达并成正相关,r=0.583,P＜0.05.Akt蛋白表达水平与患者的术前CEA水平、TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关,P＜0.05；与患者的年龄、性别、肿瘤部位、形态和分化程度无关,P＞0.05；mTOR蛋白表达水平与患者的术前CEA水平、分化程度、TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关,P值均＜0.01；与患者的年龄、性别、肿瘤部位和形态无关,P＞0.05.Cox回归模型分析显示,远处转移是直肠癌的独立预后危险的因素.结论:Akt-mTOR信号通路在直肠癌组织中表达水平均与CEA水平、TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关,但其与预后的关系仍需进一步研究.
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HIF-1α基因表达沉默对肝癌细胞PI3K/AKT信号转导通路影响的研究
目的:探讨沉默缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF 1α)基因表达对肝癌细胞PI3K/AKT信号转导通路的影响.方法:选用大鼠CBRH-7919肝癌细胞株作为研究对象,利用氯化钻(CoCl2)建立厌氧模型.构建HIF-1α小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)特异性载体复合物,小分子RNA干扰技术沉默肝癌细胞HIF 1α的基因表达,分别利用RT-PCR和免疫印迹法检测肝癌细胞HIF-1α、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、磷酸化AKT(p-AKT)、AKT和PI3K在mRNA和(或)蛋白水平的表达变化.结果:肝癌细胞在缺氧条件下表达HIF-1α较常氧对照组显著增多,差异具有统计学意义,PmRNA=0.002,P蛋白=0.003.特异性HIF-1αsiRNA表达载体转染肝癌细胞后,肝癌细胞HIF-1α(PmRNA和P蛋白均＜0.001)、VEGF(PmRNA—0.001,P蛋白＜0.001)和p AKT(P蛋白＜0.001)的表达明显减少;AKT和PI3K的表达显著增多,与对照组的差异均具有统计学意义,P蛋白值分别为0.032和0.020.结论:特异性siRNA干扰沉默HIF-1α基因表达可抑制肝癌细胞PI3K/AKT信号转导通路的激活.
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缺氧对骨肉瘤细胞MG63核干细胞因子表达调节及其机制的探讨
目的:探讨缺氧对骨肉瘤细胞MG63核干细胞因子(NS)表达的调节及其机制.方法:反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测缺氧对NS转录和蛋白表达的影响；蛋白质印迹法检测在雷帕霉素抑制缺氧诱导因--1 α(HIF-1α)表达或激酶抑制剂预处理后NS在缺氧下的变化,检测NS调节的下游因子p53和活性Caspase-3蛋白表达的变化.结果:缺氧6、12和24 h后NS蛋白表达分别升高了1.26(P＞0.05)、1.58 (P＜0.05)和1.92倍(P＜0.01),NS的转录分别升高了1.33(P＞0.05)、1.49 (P＜0.05)和1.54倍(P＜0.05).蛋白激酶B(Akt)抑制剂wortman-nin逆转了缺氧对NS的上调,而细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂U0126、蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89和雷帕霉素则没有逆转缺氧对NS的上调.Akt活性在缺氧6、12和24 h后分别升高了1.51(P＞0.05)、1.56 (P＜0.05)和1.23倍(P＞0.05).尽管缺氧上调了NS的表达,但NS的下游因子p53与活性Caspase-3蛋白表达在缺氧后无明显变化.结论:缺氧通过增强Akt的活性上调了NS的表达.
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RNA干扰沉默AKT基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡影响研究
目的:通过小分子干扰RNA(siRNA)技术沉默卵巢癌SKOV3细胞中PI3K/AKT信号通路关键基因蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)基因的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响.方法:人卵巢癌SKOV3细胞体外培养,随机分为对照组、空白载体组和siRNA干扰组,siRNA干扰组通过脂质体介导AKT siRNA转染SKOV3细胞.荧光定量PCR法检测AKT在干扰前后AKT mRNA的表达,免疫荧光细胞化学法检测PI3K、AKT与PCNA蛋白在各组中的表达,MTT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞仪Annexin V/PI法检测细胞凋亡率的变化.结果:siRNA干扰组AKT mRNA的表达量为(0.325±0.04)明显抑制,并显著低于对照组,q=58.96,P＜0.001;免疫荧光细胞化学结果示,siRNA干扰组的AKT、PCNA蛋白的荧光强度较对照组与空白载体组明显降低,而PI3K蛋白在3组间差异无统计学意义,P=0.637;流式细胞仪Annexin V/PI法检测结果示,siRNA干扰组细胞凋亡率高达(79.52±2.31)％,较对照组(27.35±2.01)％与空白载体组(28.64±1.96)％明显升高,约是空白载体组(q=60.880,P＜0.001)与对照组(q=58.553,P＜0.001)的3倍,差异有统计学意义.结论:AKTsiRNA可干扰AKT基因的表达,抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡,有望成为治疗卵巢癌的新方法.
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非小细胞肺癌组织中表皮生长因子受体磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B1及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mRNA表达及其临床意义
目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B1/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt1/mTOR)通路与表皮生长因子受体(EGFR)基因的关系,及其PI3K/Akt1/mTOR通路导致EGFR-酪氨酸激酶抑制剂(TKI)耐药的具体机制.方法 选择135例未经过放化疗或靶向药物治疗的非小细胞肺癌(NSCLC)患者的肿瘤组织标本,检测其EGFR、PIK3CA、Akt1和mTOR的mRNA表达水平,并进行相关性分析.结果 EGFR与Akt1、mTOR的表达水平呈正相关(r分别为0.342、0.320和0.281,均P＜0.01),与PIK3CA基因无关.结论 EGFR基因表达与Akt1和mTOR相关,与PIK3CA无关,提示EGFR基因可能直接激活Akt及其下游通路,而不经过PI3K.
关键词： 肺肿瘤 表皮生长因子受体 脂酰肌醇3激酶 蛋白激酶B 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 -
木犀草素对食管癌TE-1细胞增殖和迁移的影响
目的 探讨木犀草素对食管癌TE-1细胞增殖和侵袭功能的影响及其作用机制.方法培养食管癌TE-1细胞,使用不同浓度的木犀草素干预.采用噻唑蓝 (MTT) 法检测木犀草素处理后TE-1细胞的活性,采用Transwell实验检测TE-1细胞的侵袭力.采用蛋白印记检测TE-1细胞中基质金属蛋白酶2和MMP9的表达水平及蛋白激酶B (AKT) 的磷酸化水平变化情况.结果 MTT实验证明木犀草素具有抑制TE-1细胞的活性.Transwell实验证明木犀草素能减少TE-1细胞的迁移能力.木犀草素能降低TE-1细胞表达基质金属蛋白酶2 (MMP2) 和MMP9,同时能够抑制蛋白激酶B (AKT) 的磷酸化.结论 木犀草素通过抑制AKT磷酸化,减少MMP2和MMP9的表达,从而抑制食管癌TE-1的活性和侵袭.
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胃肠道恶性肿瘤组织中磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B和细胞外信号调节蛋白激酶l/2的表达及意义
目的 探讨胃肠道恶性肿瘤组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和细胞外信号调节蛋白激酶l/2(ERKl/2)的表达及意义.方法 回顾性分析2011年8月至2013年6月间收治的50例胃肠道恶性肿瘤组织标本的临床资料.结果 胃肠道恶性肿瘤组织中PI3K、Akt和ERKl/2的阳性表达率和免疫组化评分均明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05);患者年龄、病理类型、淋巴结转移、病理分期和远处转移情况与PI3K、Akt和ERKl/2的表达无显著相关(P＞0.05).结论 胃肠道恶性肿瘤组织中PI3K、Akt和ERKl/2呈高表达,但与临床病理无关,可能参与肿瘤发生发展的早期事件.
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蛋白激酶B在肺鳞癌和腺癌中的表达及其临床病理意义
目的研究蛋白激酶B(PKB)在肺鳞癌、腺癌组织中的表达及其与肺癌临床病理学特征的关系.方法采用免疫组织化学及免疫印迹技术,检测PKB在26例肺鳞癌、15例肺腺癌和12例肺良性病变组织中的表达.结果PKB在良性肺组织中的表达多为散在弱阳性,而在肺癌组织中阳性细胞数显著增多.PKB在肺癌中的阳性表达率(58.5%)和强度显著高于良性肺组织(P值分别为0.0037和0.0225).在鳞癌和腺癌中,PKB阳性表达率分别为50.0%(13/26)和60.0%(9/15),组间PKB阳性表达率和强度差异无统计学意义.晚期肺癌(Ⅲ+Ⅳ期)PKB阳性表达率和强度高于早期肺癌(Ⅰ+Ⅱ期),低分化肿瘤PKB阳性表达率高于中、高分化肿瘤,伴有局部淋巴结转移患者的肺癌组织PKB表达强度显著高于无淋巴结转移患者.结论PKB在肺鳞癌和腺癌中过表达,其过表达与肿瘤高分期、低分化和局部淋巴结转移有关,PKB可能在肺鳞癌和腺癌的发生发展中起重要作用.
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过表达miR-17-92基因簇对前列腺癌细胞生物学特性的影响及机制
目的 探讨过表达miR-17-92基因簇对前列腺癌细胞生物学特性的影响及潜在机制.方法 采用过表达miR-17-92基因的质粒转染包装细胞,并构建过表达miR-17-92基因簇的前列腺癌DU145-17-92细胞.采用xCelligence系统实时动态监测DU145-control和 DU145-17-92细胞的生长能力,采用Ki-67抗原检测技术和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)分别检测DU145-control和DU145-17-92细胞中细胞增殖和凋亡情况,采用流式细胞术分析DU145-control和DU145-17-92细胞的细胞周期,采用Western blot检测DU145-control和DU145-17-92细胞中凋亡相关蛋白和增殖相关蛋白的表达.结果 xCelligence系统监测显示,从接种24 h后,DU145-17-92细胞的生长速度显著高于DU145-control细胞(P<0.01).细胞培养24、48、72 h后,DU145-control组的Ki-67阳性细胞率分别为(56.57±1.68)%、(85.48±0.26)%和(90.85±2.08)%,DU145-17-92组的Ki-67阳性细胞率分别为(73.64±0.68)%、(93.43±1.23)%和(97.36±0.86)%,两组仅在培养24 h时差异有统计学意义(P<0.01).细胞培养24、48、72 h后,DU145-control组的细胞凋亡率分别为(6.76±0.09)%、(14.51±0.86)%和(20.73±1.64)%,DU145-17-92组的细胞凋亡率分别为(1.86±0.15)%、(7.90±0.40)%和(4.92±0.48)%,差异均有统计学意义(均P<0.01).Western blot检测显示,DU145-control和DU145-17-92细胞中,Bcl-2家族促凋亡蛋白(BIM)的表达水平分别为0.83±0.00和0.16±0.00, 人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)蛋白的表达水平分别为0.91±0.00和0.13±0.00,差异均有统计学意义(均P<0.01).过表达miR-17-92基因簇促进了蛋白激酶B(Akt)中丝氨酸473位点(p-Akt-473)的磷酸化,但对308位点(p-Akt-308)的磷酸化无明显影响.DU145-control和DU145-17-92细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白的表达水平分别为0.21±0.01和0.72±0.01,差异有统计学意义(P<0.01).结论 过表达miR-17-92基因簇能显著影响DU145细胞的生长、增殖、凋亡和细胞周期等生物学特性,这与凋亡调控相关蛋白BIM和抑癌蛋白PTEN表达的下调有关,Akt和ERK信号通路的活化及凋亡相关蛋白表达水平的失调也起着重要的作用.
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尼美舒利抑制胃癌细胞蛋白激酶B活性的研究
目的观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对胃癌细胞株SGC7901增殖、端粒酶活性和蛋白激酶(PKB)的影响,以探讨其抗肿瘤作用机制.方法尼美舒利作用胃癌细胞株SGC7901不同时间后,采用噻唑蓝(MTT)比色法和PCR-ELISA半定量法检测细胞的生存率和端粒酶活性,PKB活性的检测采用非放射性蛋白激酶活性分析法.结果尼美舒利抑制SGC7901细胞的生长呈时间-剂量依赖性,同时它也显著抑制SGC7901细胞的端粒酶和PKB活性,且端粒酶活性的降低与PKB活性的抑制有关.结论选择性COX-2抑制剂能抑制胃癌细胞株的端粒酶活性,其作用机制可能与阻碍PKB的活性有关,这可能是选择性COX-2抑制剂抗肿瘤的又一新的机制.
关键词： 尼美舒利 选择性环氧合酶-2抑制剂 胃肿瘤 端粒酶 蛋白激酶B -
PKB介导的bFGF在人类大肠癌细胞中的表达及其相关性
目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)通路调控大肠癌细胞生长的信号转导机制.方法 MTT法分析bFGF对大肠癌LoVo细胞增生程度的影响;(γ-32P)ATP掺入法检测LoVo细胞株中PKB的活性;RT-PCR法检测LoVo细胞株中细胞周期素A(cyclinA)的表达;Western Blot检测PKB和cyclinA的表达.结果 bFGF以不同时间作用于LoVo细胞时,通过(γ-32P)ATP掺入法检测发现可提高细胞PKB活性.PKB的抑制剂LY294002预处理后再施加bFGF,可显著降低PKB的活性(P＜0.05),bFGF刺激LoVo细胞cyclinA蛋白表达都高于其他各组,LY294002抑制组蛋白明显降低,而PKB在各组中的表达无明显变化.结论 bFGF刺激大肠癌LoVo细胞后可通过依赖PI3K/PKB途径调节cyclin A的转录活性促进其表达,进而促进细胞增生.
关键词： 成纤维细胞生长因子2 蛋白激酶B 肠肿瘤 -
内皮素受体拮抗剂BQ-123经PI3-K/Akt信号通路改善蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤的效果
目的：探讨内皮素受体拮抗剂BQ-123对蛛网膜下腔出血（SAH）后早期脑损伤的治疗作用及其机制。方法按随机数字表法将120只SD大鼠分为假手术组、SAH组、低剂量BQ-123组（50μg／ kg）和高剂量BQ-123组（75μg／ kg），每组30只。采用枕大池二次注血法制作SAH 大鼠模型，每组造模后进一步分为6、24、72、144 h 4个时间点亚组。采用光镜和电镜观察海马区形态结构变化，免疫组化和逆转录聚合酶链反应检测海马区磷脂酰肌醇3-激酶（PI3-K）、蛋白激酶B（PKB／Akt）和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的表达。结果（1）模型制作过程中，SAH组死亡7只，1只模型不符合标准被剔除；BQ-123高、低剂量组分别死亡6只，各组有1只模型不符合标准被剔除。终纳入统计学分析：假手术组30只，SAH组22只，BQ-123高、低剂量组均为23只大鼠。（2）与假手术组比较，SAH组各时间点PI3-K、AKt、mTOR的表达增高（均P ＜0.05）。与SAH 组比较，BQ-123低剂量组海马区神经元形态结构损伤减轻，各时间点存活神经元数量增加[（132±18），（110±16），（84±13），（92±10）个／高倍视野]（均P ＜0.05），大鼠抓力值有所升高，学习记忆功能改善；PI3-K和Akt表达进一步升高（均P ＜0.05），mTOR的表达下降（均P ＜0.05）。（3）与BQ-123低剂量组各时间点存活神经元比较，BQ-123高剂量组海马区神经元形态结构损伤减轻，各时间点[存活神经元数量（153±20）、（131±18）、（137±19）、（135±17）个／高倍视野]增加（均P ＜0.05），大鼠抓力值有所升高，动物学习记忆功能改善；PI3-K（3.8±0.8、8.9±2.4、8.6±2.4、6.2±2.0）、Akt（4.86±1.74、8.64±1.62、7.94±1.70、6.48±1.58）表达进一步增多（均P ＜0.05），mTOR（2.89±0.26、2.14±0.18、1.94±0.17、1.62±0.12）的表达下降（均P ＜0.05）。结论BQ-123对SAH 后早期脑损伤有较好的治疗作用，其机制可能与调控PI3-K／Akt信号途径有关。
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反义miR -221/222抑制Akt通路活性提高胶质瘤细胞放射敏感性的研究
目的 探讨敲低miR -221/222表达抑制Akt通路活性提高胶质瘤细胞放射敏感性的作用.方法 脂质体共转染反义寡聚核苷酸(反义miR -221/222)下调胶质瘤U251,LN -229细胞miR -221与miR -222的表达.用Northern印迹方法测定转染后细胞miR -221、miR -222的表达水平；克隆形成实验验证各组胶质瘤细胞的放射敏感性；Western印迹分析各组胶质瘤细胞的pAkt蛋白表达变化；反义miR -221/222联合X线照射治疗裸鼠皮下移植瘤,观察肿瘤生长水平；Real - timePCR检测治疗后miR - 221、miR - 222的表达；免疫组化分析肿瘤组织中pAkt蛋白表达水平.结果 Northern印迹分析显示反义miR -221/222可以有效地敲低胶质瘤细胞的miR -221和miR -222的表达水平.克隆形成实验证实反义miR - 221/222联合X线照射可增加胶质瘤细胞放射敏感性.Western印迹分析显示反义miR -221/222可下调pAkt蛋白表达.经反义miR -221/222转染联合X线照射治疗后,裸鼠皮下移植瘤生长明显受抑,肿瘤组织中miR -221/miR -222表达水平下降,pAkt蛋白表达水平也明显降低.结论 反义miR - 221/222通过抑制Akt通路活性增加胶质瘤细胞的放射敏感性.
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乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对内皮细胞增殖的影响及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的作用
目的 研究人乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的促增殖作用,并初步探讨MAPK/ERK和PI3K/Akt信号转导通路在此过程中的作用.方法 低温超速离心及密度梯度离心法提取乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes.采用MTT法分别检测50、100、200、400μg/ml Exosomes对HUVECs促增殖作用的影响,流式细胞仪测定200μg/ml Exosomes对HUVECs细胞周期的影响,Western blotting检测200μg/ml Exosomes诱导下HUVECs细胞内细胞外调节蛋白激酶(ERK)和蛋白激酶B (Akt)蛋白的表达水平.结果 乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes可促进HUVECs细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性.200μg/ml Exosomes作用HUVECs细胞24h后,S期细胞比例(27.8％±3.37％)较对照组(15.34％±0.71％)增加(P＜0.05),G1/S期细胞比例(2.22％±0.37％)与对照组(4.67％±0.47％)比较下降(P＜0.05).Western blotting结果显示,200μg/ml Exosomes作用HUVECs细胞24、48、72h后,磷酸化ERK表达(0.3378±0.0415,0.4967±0.0511,0.9205±0.0462)与磷酸化Akt蛋白表达(0.4091±0.0361,0.5484±0.0382,0.7496±0.0481)与对照组(磷酸化ERK 0.1836±0.0324,磷酸化Akt 0.2582±0.0215)相比有所增加(P＜0.05).结论 乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes能促进HUVECs的增殖,其机制可能与细胞周期改变,以及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的持续活化有关.
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PI3 K在肿瘤坏死因子诱导L929细胞程序性坏死过程中的调控作用研究
目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶（ phosphatidylinositol-3-kinase， PI3K）在肿瘤坏死因子α（ tumor necrosis factor alpha， TNFα）诱导细胞程序性坏死过程中的调控作用与机制。方法利用慢病毒介导的RNA干涉技术构建PI3K催化亚基p110α敲低、RIP1敲低及RIP1与p110α双敲低的L929细胞株，Western印迹或RT-PCR验证敲低效果。同时，利用Western印迹检测AKT和混合系激酶区域样蛋白（ MLKL）磷酸化及MLKL多聚化。流式细胞术和显微拍照术检测细胞死亡。结果 PI3K和AKT抑制剂及p110α敲低都可降低AKT磷酸化水平，并阻断TNFα诱导的L929细胞程序性坏死。敲低RIP1并不抑制TNFα与Z-VAD联合诱导的L929细胞程序性坏死，但这种RIP1非依赖性细胞程序性坏死能为p110α敲低抑制。此外，p110α敲低可抑制TNFα与Z-VAD联合诱导的MLKL活化及其介导的细胞程序性坏死。结论 PI3K是调控细胞程序性坏死的重要靶点，可通过RIP1依赖及非依赖性方式激活，进而活化AKT与MLKL，启动TNFα诱导的细胞程序性坏死。
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整合蛋白连接激酶:抗肿瘤药物作用的新靶点
整合蛋白连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)是一个Ser/Thr蛋白激酶.它能介导细胞与胞外基质的相互作用,并通过下游底物蛋白激酶B和糖原合成酶激酶3将胞外信号向下游传递.从而增强细胞的侵袭能力、促进细胞周期循环的进行并抑制细胞凋亡.一些蛋白磷酸酶如PTEN和ILKAP能够对ILK的活性或其信号传导途径进行抑制,一些小分子的ILK拮抗剂也能抑制ILK的活性.抑制ILK可使细胞恶性度和成瘤能力下降,导致细胞凋亡和G1到S期细胞周期循环的停滞.这些结果显示,抑制ILK的活性将对某些肿瘤的治疗有着非常重要的意义.近来一些研究显示,某些非甾体类抗炎药、神经节苷酯在体内的作用位点就是ILK或其介导的相关途径.
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消癌平注射液抗血管生成作用及其机制研究
研究消癌平注射液对血管生成的影响,并探索其作用机制与血管内皮生长因子(VEGF)信号通路的相关性.采用CCK8实验和BrdU掺入细胞免疫荧光实验检测消癌平注射液对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的增殖影响;采用细胞划痕愈合和小室迁移实验考察消癌平注射液对HUVECs的迁移能力影响;采用HUVECs管腔形成实验、大鼠动脉环出芽实验以及鸡胚尿囊膜(CAM)实验等考察消癌平注射液的抗血管生成作用;分别采用ELISA酶联免疫吸附实验和Western blot检测HUVECs中VEGF的分泌情况以及血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)等蛋白的表达变化.结果显示,消癌平注射液可剂量和时间依赖性地抑制HUVECs增殖,在24、48和72 h各时间点对HUVECs的IC50值(mg.mL-1)分别为48.7±7.14,29.1±2.25和22.0±4.53.消癌平注射液可抑制HUVECs的DNA合成以及迁移作用;还可抑制HUVECs管腔样结构形成,并且一定浓度下可抑制大鼠动脉环切口处微血管样结构萌发以及鸡胚尿囊膜血管生长;此外,消癌平注射液还可抑制HUVECs中VEGF分泌并下调p-VEGFR2和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达.本研究结果表明,消癌平注射液可在体外和离体水平抑制血管生成,其作用机制可能与抑制VEGF分泌、VEGF引起的VEGFR2及其下游AKT信号通路活化有关.
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虫草素抑制肝癌转移及分子机制研究
探讨虫草素抑制肝癌细胞MHCC97H转移及其分子机制.采用MTT法检测细胞增殖;应用细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell检测细胞侵袭及迁移能力;Western blotting检测蛋白的表达水平;应用皮下移植及尾静脉注射法检测肿瘤原位生长及肺转移.实验结果表明虫草素剂量依赖性地抑制MHCC97H细胞的生长、迁移及侵袭能力,这与其降低AKT、p-AKT、p-GSK-3β、β-catenin、N-cadherin、MMP-7和MMP-9蛋白表达,上调E-cadherin的蛋白表达等有关.动物实验表明虫草素剂量依赖性地抑制MHCC97H细胞的原位生长及肺转移,虫草素高剂量组(40 mg·kg-1)、中剂量组(20 mg·kg-1)、低剂量组(10 mg·kg-1)及5-氟尿嘧啶组的原位移植瘤重分别为0.38±0.04、0.61 ±0.08、1.13±0.36和0.65±0.07 g,与对照组瘤重(1.52±0.46 g)相比,虫草素高、中剂量组及5-氟尿嘧啶组具有显著性差异(P＜0.01),但虫草素低剂量组无统计学差异(P＞0.05);在肺转移模型中,以上各组的肺转移结节数分别为48.9±7.2、67.2±9.4、106.4±11.3和73.6±8.6,与对照组肺转移结节数(123.5±14.5)相比,虫草素高、中剂量组及5-氟尿嘧啶组具有显著性差异(P＜0.01),虫草素低剂量组无统计学差异(P＞0.05)且肺转移结节中相关蛋白表达的变化与细胞实验一致.故虫草素通过调控AKT信号通路抑制肝癌细胞MHCC97H生长及转移.
