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磷脂酰肌醇3-激酶在间歇性低氧对抗大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的保护机制
目的 研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)在间歇性低氧(IH)对抗大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤中的作用机制.方法 将60只大鼠随机分为四组,分别为假手术组(n=15)、I/R组(n=15)、IH+I/R组(n=15)、IH+I/R+PI3K抑制剂组(n=15).将大鼠暴露在低氧循环制作IH动物模型,通过球囊结扎冠脉方法制作心肌I/R动物模型,通过TTC染色确定梗死面积.采用Western blot法检测蛋白激酶B(AKt)表达.结果 与I/R组比较,IH+I/R组的心肌梗死面积下降(P＜0.05),Akt蛋白表达升高(P＜0.05).与IH+I/R组比较,IH+I/R+PI3K抑制剂组心肌梗死面积增加(P＜0.05),Akt蛋白表达下降(P＜0.05).结论 IH在大鼠心肌缺血损伤中具有心脏保护作用,其保护机制与激PI3K信号通路有关.
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RNA干扰质粒对胰腺癌细胞系Panc-1原癌基因AKT2表达的影响
目的 探讨RNA干扰质粒抑制胰腺癌细胞系Panc-1原癌基因AKT2的表达对胰腺癌细胞生长和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 选择胰腺癌细胞系Panc-1,构建特异性抑制AKT2表达的RNA干扰质粒,瞬时和稳定转染胰腺癌细胞,采用MTT法及软琼脂克隆形成实验检测胰腺癌细胞生长能力,Heochst染色及Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡情况,通过Western blot方法检测凋亡蛋白caspase-3表达；并进行裸鼠移植瘤体内转染实验.结果 采用RNA干扰质粒沉默胰腺癌细胞系Panc -1原癌基因AKT2,能够有效抑制胰腺癌细胞Panc-1体外生长能力、促进细胞凋亡,诱导凋亡激酶caspase-3的表达；动物体内实验结果显示,干扰质粒能够有效抑制胰腺癌细胞系Panc-1在动物体内的成瘤能力.结论 RNA干扰质粒抑制原癌基因AKT2表达,可有效抑制胰腺癌细胞生长,促进凋亡,针对原癌基因AKT2的基因治疗对胰腺癌具有重要的潜在应用价值.
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蛋白激酶B与糖原合成激酶3
蛋白激酶B(PKB)通过依赖或不依赖磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)信号途径参与多种维持机体正常生命活动的调节机制,糖原合成-激酶3(GSK-3)影响PI3-K/PKB许多下游事件,包括胰岛素诱导的糖原和蛋白质合成调控、细胞生长分化、抗凋亡过程等,还与许多疾病有直接关系如糖尿病、癌症、Alzheimer病等.
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PI3 K/AKT/GSK-3β信号通路与心肌缺血/再灌注损伤的相关性研究
磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在肿瘤细胞中被发现. 随着分子医学的发展,研究发现,该通路通过调控下游的多种效应分子对器官的缺血/再灌注损伤起保护作用,其中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)是主要效应分子,两者联合被称为 PI3K/AKT/GSK-3β信号通路.该通路在心肌细胞缺血/缺氧培养、心肌暖缺血/再灌注损伤及离体心脏心肌缺血/再灌注损伤中的保护作用已经得到证实,但在心脏移植中对于心肌缺血冷保护及移植后的再灌注损伤的作用报道较少,需要进一步探讨.
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PI3 K/Akt信号通路在哮喘气道重塑中的研究进展
哮喘是一种气道慢性炎症性疾病,长期的慢性炎症刺激可以导致气道结构改变,形成气道重塑.气道重塑可以导致气道痉挛的可逆性减弱或丧失,表现为对支气管扩张剂不敏感或持续性通气障碍,脱离变应原后气道仍呈高反应性,肺功能指标持续性降低,甚至对糖皮质激素不敏感,在气道重塑的基础上再继发感染可导致病情的迅速恶化,因此在治疗慢性炎症的同时需要预防气道重塑.许多临床试验研究提示阻断磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号转导通路可以通过多种机制抑制小鼠气道重塑.了解这些机制有利于进一步研究哮喘的临床治疗.
关键词： 哮喘 气道重塑 磷脂酰肌醇-3-激酶 蛋白激酶B -
PI3K/Akt信号通路及神经损伤的研究进展
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路是一系列的级联反应过程,是一条经典的调节细胞存活、分化及凋亡信号转导通路,在生理和病理过程中起关键作用,并通过调节下游相关蛋白的活化过程发挥重要的生物学效应.由于神经细胞凋亡与一些老年性记忆减退或丧失之间有紧密联系,因此人们开始关注PI3K/Akt信号转导在神经系统发育和学习记忆中的作用机制.通过人们不断深入的研究,该信号通路在神经损伤性病变中的作用及机制被不断的发掘.总结PI3K/Akt的结构、作用机制与神经损伤性疾病中的关系,可为临床治疗神经损伤/退化性疾病提供理论指导.
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PKB基因表达在运动调节胰岛素抵抗中的作用
近年来,随着经济的高速发展以及人们生活水平的不断提高,我国人民的生活方式也日益静态化,随之而来的2型糖尿病、肥胖、心脑血管疾病、动脉粥样硬化等发病率出现升高趋势.胰岛素抵抗被公认为是这些内分泌代谢异常相关疾病共有的病理生理基础.蛋白激酶 B作为胰岛素信号转导通路中的重要蛋白,在运动改善胰岛素抵抗中的作用不容忽视.
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ILK/PI3K/PKB转导通路与肿瘤
整合素连接激酶(ILK)以依赖于磷酯酰肌醇3-激酶(PDK)方武激活,通过磷酸化下游底物蛋白激酶B(PKB)等使细胞外信号向下游传递,对细胞的生长、分化及细胞凋亡、细胞周期、细胞黏附等进行调控,在肿瘤的发生、发展中发挥着重要的作用.本文综述ILK/PI3K/PKB传导通路中一些酶类或基因在肿瘤中的表达及其与肿瘤发生、发展及治疗的研究进展.
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白术内酯Ⅱ抗血小板作用及对血小板中蛋白激酶B磷酸化水平的影响
目的 观察白术内酯Ⅱ在体外对小鼠和人血小板活化的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 通过体外血小板聚集实验,采用比浊法测定不同浓度白术内酯Ⅱ对胶原诱发的小鼠及人血小板聚集的影响;通过血小板的铺展实验,检测白术内酯Ⅱ对人血小板铺展的作用;运用Western blot检测人血小板中蛋白激酶B(Akt473)的磷酸化水平.结果 白术内酯Ⅱ可抑制胶原刺激下小鼠和人血小板的体外聚集(P＜0.01);经白术内酯Ⅱ处理后的人血小板铺展面积缩小(P＜0.01);人血小板中Akt473分子的磷酸化水平降低(P＜ 0.01).结论 白术内酯Ⅱ对胶原诱导的小鼠和人血小板聚集能产生显著抑制作用,对人血小板的铺展也有抑制作用,其作用机制可能与血小板活化过程中的PI3K-Akt信号通路有关,提示白术内酯Ⅱ是一种有效的抗血小板化合物.
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脂多糖诱导膀胱癌细胞释放HMGB1及其机制研究
目的 研究脂多糖(LPS)对膀胱癌细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的诱导作用,并探讨其可能的机制.方法 采用人膀胱癌细胞株T24,观察100 μg/L LPS诱导不同时间对培养上清液中HMGB1含量和细胞HMGB1 mRNA表达水平的变化,及不同浓度的磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路抑制剂LY294002对HMGB1释放的作用.分别使用酶联免疫吸附试验、荧光定量PCR法检测HMGB1含量和HMGB1mRNA表达水平.结果 培养上清液中HMGB1含量和细胞HMGB1 mRNA表达水平均于LPS诱导12 h后升高,并随诱导时间延长而进一步升高.LY294002对LPS诱导HMGB1释放有不完全的抑制作用.结论 LPS诱导膀胱癌细胞释放HMGB1,其机制可能与PI3K/AKT信号通路有关.
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外源性p物质与黏着斑激酶、蛋白激酶B、核因子在瘢痕形成中的关联性
目的 探讨外源性P物质与黏着斑激酶、蛋白激酶B、核因子在瘢痕形成中的关联性及时效性.方法 采用适宜浓度外源性P物质作用于人胚胎成纤维细胞,应用westenblot蛋白定量观察不同时间段黏着斑激酶、蛋白激酶B、核因子变化情况.结果 随着外源性P物质作用时间的延长,人胚胎成纤维细胞中黏着斑激酶、蛋白激酶B、核因子的表达逐渐升高,在30min达到高峰,并至少持续60min.结论 外源性P物质可能通过黏着斑激酶、蛋白激酶B、核因子途径迅速起效,有效促进成纤维细胞增殖,从而促进瘢痕形成.
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磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/骨形态发生蛋白-15通路与哺乳动物卵巢卵泡发育
哺乳动物卵巢卵泡是由卵母细胞与其周围的颗粒细胞和卵泡膜细胞共同组成的,其生长发育过程是一个高度协调的程序化过程,确保了正常卵母细胞成熟并使其具有受精能力.卵母细胞和颗粒细胞之间的旁分泌和自分泌功能在卵巢卵泡发育过程中具有重要作用,可以为卵泡的发育提供适宜的微环境.磷脂酰肌醇-3激酶/骨形态发生蛋白-15信号通路是其中一个重要的调控通路.骨形态发生蛋白-15是卵巢卵母细胞特异性分泌的信号分子,可以通过旁分泌作用调节卵巢卵泡的发育过程.本文主要概述磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路在卵巢卵泡发育过程中的作用及骨形态发生蛋白-15作为蛋白激酶B /叉头转录因子家族-3a下游信号分子对这一过程的调控,有助于进一步理解卵巢卵泡发育的分子调控以及治疗不孕不育等卵巢疾病.
关键词： 磷脂酰肌醇-3激酶 蛋白激酶B 骨形态发生蛋白-15 卵泡 卵巢 -
磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路对肺癌细胞放射后生物学行为变化影响的研究进展
放疗是治疗肺癌的主要方式之一,尽管其方法和技术不断完善,放疗后的复发转移依旧存在.研究放疗后的肺癌细胞生物学行为变化对于阻止肺癌复发和转移至关重要.磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3 K/AKT/mTOR)通路在肺癌细胞的增殖、转移、细胞转化、葡萄糖代谢、DNA修复和血管生成中起到重要作用.本文总结了放射后PI3 K/AKT/mTOR通路对肺癌细胞的增殖、侵袭、转移、放疗敏感性和能量代谢等生物学行为变化的影响的有关研究进展.
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miR-30a-5p靶向作用蛋白激酶B基因促进骨关节炎患者软骨细胞的凋亡
目的 观察miR-30a-5p在骨关节炎(OA)患者软骨组织中的表达及其对软骨细胞凋亡的作用机制.方法 2015年5月至2016年12月,收集南京中医药大学附属常州中医医院骨科289例OA软骨组织标本.聚合酶链反应(qPCR)检测不同患者软骨组织中miR-30a-5p以及蛋白激酶B(Akt) mRNA的表达情况,Tunel法检测软骨细胞凋亡情况,免疫印迹法组织和细胞中相关蛋白的表达,流式细胞仪检测不同细胞凋亡情况和细胞周期.结果 OA患者软骨组织miR-30a-5p相对表达量显著高于非OA[(3.64±0.95)比(1.03±0.31),P＜0.05],Akt基因表达较非OA显著下调[(0.41±0.17)比(1.08±0.26),P＜0.05];miR-30a-5p在OA患者软骨组织中的表达与Akt mRNA表达呈负相关(r =0.729 3,P＜0.001),与细胞凋亡率呈正相关(r=0.847 5,P＜0.001);在SW1353细胞内miR-30a-5p靶向负调控Akt基因表达,高表达的miR-30a-5p显著下调p-Akt,IkB-α,p-IkB-α,p65,p-p65和mTOR基因,p-mTOR蛋白表达(P＜0.05);与正常SW1353细胞相比,转入miR-30a-5p-mimics的SW1353细胞凋亡率增加9.65倍,G0/G1期细胞增加1.37倍,S期细胞降低了60.94％,G2/M期细胞降低了19.53％.结论 miR-30a-5p在OA患者软骨组织中呈现高表达,并且其高表达可以通过靶向作用Akt基因而将软骨细胞阻滞在G0/G1期,进而诱导软骨细胞的凋亡.
关键词： 软骨细胞 骨关节炎 软骨组织 MiR-30a-5p 蛋白激酶B -
蛋白激酶B与卵巢癌化疗耐药性研究进展
蛋白激酶B(Akt/PKB)是卵巢癌化疗敏感性的关键调控因子,可促进细胞周期运行,血管形成及细胞的生长.抑制细胞凋亡.其过度表达和活化在卵巢癌化疗耐药性的产生中起着重要作用.Akt通过影响p53功能、线粒体凋亡及JNK/p38信号传导等多种途径抑制化疗药物诱导的卵巢癌细胞凋亡,同时还可通过调节抑癌基因PTEN及X-连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)导致化疗耐药的产生.因此,加深对Akt的研究有助于进一步明确卵巢癌化疗耐药产生的机制.并使之成为卵巢癌化疗的有效作用靶点.
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氢醌暴露对小鼠骨髓造血干细胞中蛋白激酶B和FoxO1 mRNA和蛋白表达的影响
目的 探讨苯代谢物氢醌(hydroquinone,HQ)对小鼠骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)中蛋白激酶B和Forkhead转录因子1(Forkhead box O1,FoxO1)的mRNA和蛋白表达的影响.方法 提取7只健康8周龄SPF级雄性昆明小鼠的骨髓细胞,采用免疫磁珠法(magnetic activated cell sorting,MACS)分选出小鼠骨髓造血干细胞,分别暴露于含终浓度为0(对照)、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L HQ的培养基中培养24 h.检测细胞蛋白激酶B和FoxO1的mRNA及蛋白的表达.结果 与对照组比较,各剂量HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞蛋白激酶B mRNA和20、40 μmol/L HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞FoxO1 mRNA的表达水平均较高,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).与对照组比较,2.5～40μmol/L HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞FoxO1蛋白和5、10 μmol/L HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞蛋白激酶B蛋白的表达水平均较高,而20、40 μmol/L HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞蛋白激酶B蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).且随着HQ暴露剂量的升高,小鼠骨髓造血干细胞蛋白激酶B mRNA和蛋白的表达水平呈先上升后下降的趋势,FoxO1 mRNA和蛋白的表达水平呈波浪式下降的趋势.结论 骨髓造血干细胞的调节可能部分依赖于蛋白激酶B和FoxO1.
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亚砷酸钠对正常人类皮肤角质形成细胞蛋白激酶B及其下游信号因子IκB和NF-κB蛋白表达的影响
目的 探讨亚砷酸钠对人角质形成(HaCat)细胞蛋白激酶B(PKB/Akt)及其下游信号因子IκB和NF-κB蛋白表达的影响.方法 HaCat细胞分别暴露于终浓度为0(对照)～100 μmol/L的亚砷酸钠溶液6h.采用Alamar Blue还原法检测细胞活力,采用Western Blot法检测细胞磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化IκB(p-IκB)及胞核和胞浆中核转录因子NF-κB的蛋白表达水平.结果 各浓度亚砷酸钠染毒组HaCat细胞内p-Akt、p-IκB蛋白以及胞核中NF-κB蛋白表达水平均显著升高,细胞活力和胞浆中NF-κB蛋白表达水平均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05)；且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,HaCat细胞内p-Akt、p-IκB蛋白以及胞核中NF-κB蛋白表达水平呈逐渐上升的趋势,细胞活力和胞浆中NF-κB蛋白表达水平呈逐渐下降的趋势.结论 亚砷酸钠可使HaCat细胞活力明显下降；诱导HaCat细胞Akt蛋白的磷酸化活化,进而诱导其下游信号因子IκB磷酸化及核转录因子NF-κB入核表达.
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海参磷脂型二十碳五烯酸降血糖作用机制的研究
目的 研究海参磷脂型二十碳五烯酸(EPA-PC)对糖尿病大鼠的降血糖作用机制.方法 采用腹腔注射链脲佐菌素方法建立糖尿病大鼠模型,灌胃不同剂量磷脂型二十碳五烯酸(25和75mg/kg bw,以二十碳五烯酸含量计)60d.实验结束后,检测糖尿病大鼠空腹血糖和空腹血清胰岛素水平,采用Western blotting法检测大鼠腓肠肌和附睾脂肪组织中胰岛素受体、磷脂酰肌醇-3-激酶、蛋白激酶B和葡萄糖转运蛋白4蛋白表达.结果 海参EPA-PC能显著地降低糖尿病大鼠空腹血糖,增加血清胰岛素含量(P＜0.05,P＜0.01),促进骨骼肌和脂肪组织中胰岛素受体、磷脂酰肌醇-3-激酶、蛋白激酶B和葡萄糖转运蛋白4蛋白的表达(P＜0.01,P＜0.05).结论 海参EPA-PC通过上调胰岛素介导的磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号转导通路发挥降血糖作用.
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杨梅素对人肺腺癌细胞增殖的影响及其机制
目的 研究杨梅素(myricetin,Myr)对人肺腺癌(A549)细胞增殖的影响及其作用机制. 方法 以人肺腺癌系A549细胞为离体研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法研究不同浓度的Myr对A549细胞生长的抑制作用并测定其半数抑制浓度(IC_(50));采用Western blot法检测Myr对蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平的影响.结果 Myr对A549细胞具有明显的增殖抑制作用,随着Myr浓度的增加,细胞的存活率明显降低.Myr作用72 h的IC_(50)值为41.7 μg/ml.32 μg/ml杨梅素无血清作用A549 12 h即可显著抑制Akt~(Ser473)的磷酸化水平. 结论 Myr能够剂量依赖,陆抑制A549细胞增殖,Akt的活性下调可能是Myr体外诱导人A549肺腺癌细胞增殖抑制作用的分子靶点.
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亮氨酸对原代培养大鼠骨骼肌细胞葡萄糖摄取及蛋白激酶B表达的影响
目的 以原代培养的大鼠骨骼肌细胞为研究对象,观察亮氨酸对骨骼肌细胞及渥曼青霉素(wortmannin)处理后葡萄糖摄取能力及胰岛素信号通路关键分子蛋白激酶B(AKT)表达的影响,从而为探讨亮氨酸与胰岛素抵抗的关系和相关机制提供依据.方法 组织块法培养大鼠原代骨骼肌细胞,不同浓度的亮氨酸(0,0.4,2.0,4.0,8.0mmol/L)作用80min或45min,酶法测定基础状态下和胰岛素刺激下葡萄糖摄取能力,确定亮氨酸作用的佳浓度和作用时间;在此基础上,应用PI-3K抑制剂wortmannin作用30min,测定葡萄糖摄取能力,Western blot检测AKT及磷酸化AKT表达水平.结果 胰岛素刺激状态下,2mmol/L亮氨酸作用45min骨骼肌细胞葡萄糖摄取能力达大;2mmol/L亮氨酸干预可改善wortmannin对胰岛素刺激下骨骼肌细胞葡萄糖摄取的抑制作用,显著增强胰岛素信号传导关键分子pSer473 AKT的表达.结论亮氨酸可改善骨骼肌细胞胰岛素抵抗.这种作用不完全依赖于PI-3K胰岛素信号传导通路,并且可能与其增强AKT磷酸化水平有关.
