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不同地区白术药材及饮片中白术内酯Ⅱ的含量测定
目的:采用HPLC测定不同地区白术药材及饮片中白术内酯Ⅱ的含量.方法:采用Tigerkin C18 (4.6 mm×200 mm,5μm)色谱柱,流动相甲醇-水(77∶23),流速1.0 mL· min -1,检测波长276 nm,柱温30℃.结果:测定了10个不同产地的白术药材和20个不同地区市售白术片及麸炒白术片中白术内酯Ⅱ的含量.结论:来源于不同地区的白术药材、白术片以及麸炒白术片中白术内酯Ⅱ的含量差别均较大.
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麸炒白术的炮制工艺优化
目的:优选麸炒白术的炮制工艺.方法:以白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ和苍术酮含量为指标,HPLC测定指标成分含量,采用L9(34)正交试验考察炒制温度、炒制时间、投麸量对麸炒白术炮制工艺的影响,确定佳炮制工艺.结果:麸炒佳工艺为炒制温度170℃,炒制时间2 min,投麸量10％.结论:优选的炮制工艺切实可行.
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苍术麸炒前后的专属性HPLC特征指纹图谱
目的:比较苍术麸炒前后专属性HPLC特征图谱,明确特征性图谱差异性,为苍术生品和麸炒品提供专属性质量评价指标.方法:取10批生苍术和对应麸炒苍术饮片的正己烷提取物进行HPLC分析,流动相色谱乙腈-水梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长254 nm.以苍术素色谱峰为参照峰,构建了10批苍术生晶和麸炒品的HPLC指纹图谱的共有模式.结果:苍术生品和麸炒品HPLC中有26个共有峰,各共有峰相对保留时间基本相同,RSD均＜0.5％;但相对峰面积有明显差异:第47.36 min和第46.35 min色谱峰的峰面积比值在生品中＞1,但在麸炒品中却＜1;第51.70 min和第49.25 min色谱峰的峰面积比值在生品中＜1,但在麸炒品中却＞1.结论:苍术生品和麸品的色谱特征峰差异明显、结果稳定、专属性强,可作为生苍术和麸炒苍术饮片的定性鉴别特征之一.
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HPLC-DAD波长切换法同时测定白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和苍术酮的含量
目的:建立波长切换技术同时测定白术中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ和苍术酮等多成分含量的HPLC-DAD分析方法.方法:HPLC-DAD梯度洗脱-波长切换法；色谱柱:Waters Sunfire C18柱(4.6mm× 250mm,5μm)；流动相:乙腈-水梯度洗脱；检测波长:220nm(白术内酯Ⅰ、Ⅲ及苍术酮),276nm(白术内酯Ⅱ)；进样量:10μL;流速:1.0mL/min;柱温:30℃.结果:白术中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ和苍术酮线性关系良好,加样回收率分别在98.48％-102.80％、96.72％-102.40％、95.19％-100.70％、97.15％-100.90％,平均加样回收率分别为100.40％(RSD=1.7％)、99.48％(RSD=1.8％)、97.47％(RSD=-1.8％)、98.90％(RSD=1.3％).结论:本方法简单、准确,灵敏度高,重复性好,可用于白术的质量评价.
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白术内酯类在人源Caco-2细胞单层模型中的肠吸收研究
采用人源Caco-2细胞单层模型,研究了倍半萜内酯类的白术内酯Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的肠渗透性.研究了它们从顶端到基底侧以及从基底侧到顶端的双向渗透性.HPLC法测定其浓度.白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的Papp值皆在10-5 cm/s水平,表明其具有高肠渗透率和良好吸收的特性.它们的双向转运具有时间和浓度依赖性,提示其吸收转运的主要机制为被动扩散.此外,白术内酯Ⅰ的吸收转运可能部分存在主动转运机制.
关键词： 白术内酯Ⅰ 白术内酯Ⅱ 白术内酯Ⅲ Caco-2细胞单层模型 肠吸收 -
白术内酯Ⅱ抗血小板作用及对血小板中蛋白激酶B磷酸化水平的影响
目的 观察白术内酯Ⅱ在体外对小鼠和人血小板活化的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 通过体外血小板聚集实验,采用比浊法测定不同浓度白术内酯Ⅱ对胶原诱发的小鼠及人血小板聚集的影响;通过血小板的铺展实验,检测白术内酯Ⅱ对人血小板铺展的作用;运用Western blot检测人血小板中蛋白激酶B(Akt473)的磷酸化水平.结果 白术内酯Ⅱ可抑制胶原刺激下小鼠和人血小板的体外聚集(P＜0.01);经白术内酯Ⅱ处理后的人血小板铺展面积缩小(P＜0.01);人血小板中Akt473分子的磷酸化水平降低(P＜ 0.01).结论 白术内酯Ⅱ对胶原诱导的小鼠和人血小板聚集能产生显著抑制作用,对人血小板的铺展也有抑制作用,其作用机制可能与血小板活化过程中的PI3K-Akt信号通路有关,提示白术内酯Ⅱ是一种有效的抗血小板化合物.
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白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ体内外抗轮状病毒作用研究
目的 研究白术的主要活性成分白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ体内外抗轮状病毒(RV)的作用.方法 以Caco-2细胞建立体外研究模型,采用细胞病变效应(CPE)法并结合MTT染色法,测定白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对细胞的毒性以及对RV生物合成、吸附的抑制作用,对RV的直接灭活作用,以利巴韦林为阳性对照药.结合半数有效浓度(EC50)和半数细胞毒性浓度(TC50)得出治疗指数(TI)值,并且以其作为评价指标.制各RV感染的乳鼠腹泻模型进行体内研究,观察乳鼠体征表现,根据腹泻分数以及体质量增长情况初步判断白术内酯Ⅲ的体内抗RV作用.结果 在体外研究中发现白术内酯Ⅲ具有直接灭活RV的作用,TI值为8;体内研究中白术内酯Ⅲ中剂量组抗RV效果佳.结论 白术的主要活性成分白术内酯Ⅲ在体内外均具有一定的抗RV作用;白术内酯Ⅲ主要通过体外直接灭活RV而发挥作用.
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HPLC-PDA指纹图谱结合UFLC-Q-TOF/MS定性鉴别评价不同产地白术药材质量
目的 建立白术药材HPLC-PDA指纹图谱并进行定性鉴别,为全面控制白术质量提供参考.方法 白术加70％甲醇超声60 min;色谱分析采用Inertsil(R) ODS-SP色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),柱温40℃,体积流量1.0 mL/min,采用Waters 2998紫外检测器,检测波长为235 nm,流动相为水(A)-乙腈(B),洗脱梯度为0～10 min,30％～45％ B;10～25 min,45％ B;25～50 min,45％～70％ B;50～55 min,70％ B;55～62 min,70％～30％ B;62～75 min,30％B.质谱测定采用电喷雾离子源(ESI)的飞行时间质谱(TOF/MS);正离子模式下;质量扫描范围m/z 50～1 500.结果 分别对不同产地的白术进行比较、拟合,标定了白术HPLC-PDA指纹图谱的6个共有峰,并通过高分辨UFLC-Q-TOF/MS对共有峰进行了指认,分别为5-羟甲基糠醛、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅵ和双白术内酯;对白术的色谱条件及系统适用性、提取条件进行了优化、考察,其精密度、稳定性、重复性RSD值均小于2％;测得的10批次样品与拟合指纹图谱相似度均大于0.95.结论 所建立的HPLC指纹图谱可作为规范白术的均一性和稳定性的质量控制手段.
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星点设计-效应面法优选米泔水漂白术炮制工艺
目的 优选樟帮特色米泔水漂白术炮制工艺,为米泔水漂白术炮制规范提供科学依据.方法 采用星点设计-效应面法进行米泔水漂白术炮制工艺设计,以米泔水用量、漂洗时间、漂洗温度为考察因素;采用HPLC法测定白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等成分量,进行加权综合评分计算OD值(归一化值),采用Design Expert进行2次项回归拟合,优选其佳工艺并进行验证.结果 佳炮制工艺漂洗条件为米泔水用量为9倍、漂洗时间55h、漂洗温度26℃,在此条件下,白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等成分量综合评分OD值为0.960.结论 米泔水漂白术在此条件下稳定可行,能为米泔水漂白术饮片生产与质量标准规范提供参考.
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建昌帮蜜糠炒白术炮制工艺优化
目的 优选建昌帮蜜糠炒白术的炮制工艺.方法 以白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、苍术酮、醇浸出物质量分数为指标,HPLC法及《中国药典》2010年版中的醇浸出物法测定各个指标,采用L9(34)正交试验,确定其佳炮制工艺参数:蜜糠用量、炒制温度和炒制时间.结果 蜜糠炒白术的佳工艺:辅料蜜糠用量为50％(占药材质量的百分比),炒制温度为200℃,炒制时间为5 min.结论 佳炮制工艺经验证,稳定可行.
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HPLC法测定白术不同炮制品中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ
目的 建立测定白术不同炮制品中自术内酯的测定方法.方法 采用外标法.Dikma Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈(A)-水(B)为流动相梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min;柱温为25℃;检测波长为220 nm(白术内酯Ⅰ、Ⅰ)、276 nm(白术内酯Ⅰ),进样量10μL.结果 白术内酯Ⅰ、Ⅰ、Ⅱ分别在1.14～114、0.776～77.6、3.21～321 μg/mL与峰面积呈良好的线性关系.白术生片、炒白术、麸炒白术、土炒白术中白术内酯Ⅰ、Ⅰ、Ⅰ的总量分别是1.326 1、1.591 0、1.534 8、1.738 0 mg/g.结论 不同炮制方法、辅料对白术各炮制品中白术内酯Ⅰ、Ⅰ、Ⅰ有一定影响.
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基于尤斯灌流室技术的泽泻汤大鼠肠吸收研究
[目的]研究泽泻汤中成分白术内酯Ⅱ和Ⅲ在大鼠不同肠段的跨膜吸收特征.[方法]采用Agilent Zorbax Plus C18色谱柱,流动相为乙腈-0.1%甲酸水(42:58),流速:0.3 mL/min.质谱电喷雾离子源,阳离子MRM模式,白术内酯Ⅱ和Ⅲ的定量离子分别为m/z233.2→m/z187,m/z249.15→m/z231.尤斯灌流室法考察泽泻汤在大鼠离体十二指肠、空肠、回肠、结肠的吸收,接收侧样品10000 r/min离心15 min后用液相色谱-质谱色谱法(LC-MS/MS)分析.[结果]白术内酯Ⅱ在大鼠不同肠黏膜的表观渗透系数范围在6.10~25.22×10-6 cm/s之间,白术内酯Ⅲ在1.88~5.41×10-6 cm/s之间,两者佳吸收部位是结肠.[结论]该方法专属性好,准确度高,可用于泽泻汤中白术内酯Ⅱ和Ⅲ的大鼠肠吸收研究.
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毛细管电泳紫外检测法同时测定白术中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ含量
目的 建立同时测定白术中白术内酯Ⅱ、Ⅲ的毛细管电泳紫外检测方法,并测定白术样品中白术内酯Ⅱ、Ⅲ的含量.方法 采用毛细管区带电泳法,紫外检测波长254 nm,缓冲液硼酸-硼砂体积比为5∶1,分离电压15 kV,柱温20℃,电动进样10 s.结果 在优条件下,白术内酯Ⅱ、Ⅲ完全分离;在线性范围内与峰面积线性关系良好,白术内酯Ⅱ线性方程为Y=2724.5X-54.078(r=0.9958),白术内酯Ⅲ的线性方程为Y=244.65X+201.8(r=0.9995),检测限(S/N=3)为0.2和1.0 μg/ml.结论 毛细管电泳紫外检测法可用于白术中白术内酯Ⅱ、Ⅲ的含量测定.
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白术生品及炮制品中白术内酯Ⅱ含量的研究
目的:建立HPLC测定白术生品及炮制品中白术内酯Ⅱ含量的方法.方法:色谱柱为YWG-ODS柱(4.6ram ×250mm,5μm);流动相:甲醇一水(80:20);流速:1.0mL/min;紫外检测波长:276nm;柱温:30℃.结果:白术内酯Ⅱ进样量在0.1349～0.8093μg范围内线性关系良好.平均回收率=97.6%,RSD=1.7%.结论:该法简便准确,重复性好,可作为白术质量控制的依据之一.
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多波长高效液相法同时测定土炒白术中3种白术内酯含量
目的:建立同时测定土炒白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量的检测方法,比较不同产地土炒白术质量差异.方法:采用高效液相法,时间波长程序220 nm(0～9 min)、276 nm(9 ～15 min)、220 nm(15～30min),同时测定不同产地10批白术土炒品中白术内酯Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ含量,运用化学模式识别技术分析其差异性.结果:不同产地土炒白术中3种白术内酯平均质量分数(ωB)之和分别为:1.216、3.376、2.828、1.185、2.842、2.674、1.034、1.206、1.147、2.441 mg·g-1;系统聚类与主成分分析分析表明不同产地10批白术土炒品可分为3类.结论:本含量测定方法准确、稳定,不同产地白术土炒品中内酯类成分含量存有差异.
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HPLC-PDA法同时测定痛泻要方中五种有效成分
目的:建立HPLC-PDA方法同时测定痛泻要方水煎液中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,芍药苷,芍药内酯苷五种有效成分的含量.方法:采用Thermo Fisher C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱,白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,芍药苷,芍药内酯苷以乙腈(A)-水(B)为流动相梯度洗脱,运行时间:32 min;柱温:30℃;流速:1.0 mL/min;检测波长:白术内酯Ⅰ及白术内酯Ⅲ为222 nm,白术内酯Ⅱ为278 nm;芍药苷、芍药内酯苷为232 nm;进样量:10 μL.结果:对检测结果进行线性考察,以峰面积(Y)与浓度(X)进行线性回归,结果表明白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ在0.032~0.320μg之间线性关系良好,芍药苷、芍药内酯苷在0.6~6.0μg之间线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率分别为:100.16%(RSD=2.7%),100.01%(RSD=1.7%),99.95%(RSD=1.5 %),99.57%(RSD=0.5%),99.34%(RSD=0.9%);供试品在24 h内稳定;痛泻要方中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,芍药苷,芍药内酯苷含量分别为(n=3):0.043 6、0.037 0、0.155 7、4.688 7、1.524 5 mg/g.结论:建立HPLC-PDA方法可同时测定痛泻要方中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,芍药苷,芍药内酯苷的含量,该方法简单便捷,重复性好,可用于痛泻要方的质量控制评价.
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中药白术的研究综述
作为临床常用中药之一的白术，它的化学成分主要有挥发油，如苍术酮、白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及双白术内酯等，此外尚含有白术多糖及多种氨基酸等其他成分。这些化学成分具有促进肠胃运动、提高机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老等药理作用。由于物质基础不同，对其进行质量标准研究选择白术内酯Ⅱ作为主要考察指标。近几年，对此研究颇多，因此将对白术不同化学成分的药理作用及质量方面的研究进行综述，为白术的进一步开发利用及临床用药提供参考。
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HPLC-DAD法同时测定消积化虫散中6种成分
目的 建立高效液相色谱-二极管阵列检测(HPLC-DAD)法同时测定消积化虫散(白术、茯苓、使君子仁等)中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、去氢土莫酸、去氢茯苓酸和茯苓酸的含有量.方法 分析采用依利特C18色谱柱;流动相为乙腈-甲醇(1∶1)(A)-0.05％磷酸溶液(B),梯度洗脱;体积流量1.1 mL/min;柱温25℃;检测波长210 nm(去氢土莫酸、去氢茯苓酸和茯苓酸)、220 nm(白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ)、276 nm(白术内酯Ⅱ).结果 6个成分均呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=6)为96.8％ ～ 99.4％,RSD值为0.66％ ～ 1.48％.结论 该方法简便、准确、快速,可用于消积化虫散的质量控制.
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HPLC波长切换法同时测定白术及其不同麸制品中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ
目的 建立高效液相色谱波长切换,同时测定白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的方法,比较生、制品中白术内酯含有量变化情况.方法 以Diamonsil C1s(5μm,150 mm ×4.6 mm)为分析色谱柱,甲醇-水(60∶40)为流动相,体积流量为1 mL/min,柱温为30℃,检测波长前25 min为220 nm,25 min后为276 nm.结果 白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ在上述色谱条件下分离良好,其线性范围依次为0.256 ～3.840 μg、0.102～1.530μg、0.216～3.240 μg;平均加样回收率(n=6)依次为100.5％、100.1％、99.4％;RSD分别为2.0％、1.5％、1.9％;白术经麸炒后,白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的量较生品及清炒品均有所增加.结论 波长切换色谱法可同时测定白术及其不同麸制品中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的量,具有快捷、简便的特点.
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白术软化切制工艺研究
目的 优化白术的软化和切制工艺.方法 以白术内酯Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ作为指标,采用正交试验法优选白术软化切制工艺参数.结果 白术的佳软化方法为在30℃下,每100 g药材用30 mL水喷淋软化8h.纵切为厚度约为5～6mm的厚片.结论 白术软化切制工艺合理可行,为进一步规范白术的软化切制工艺提供了参考依据.
