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PI3K在TCR和CD28协同激发的γδT细胞活化信号转导中的作用
目的探讨CD28协同结核杆菌(M.tb)低分子多肽激活人外周血γδ+ T细胞时,其胞内信号的传递经过磷酸肌醇3激酶(PI3K)的介导作用. 方法用激发型抗CD28单抗模拟第二信号,与M.tb抗原一起刺激纯化的T细胞,同时用特异性PI3K抑制剂LY294002阻断PI3K的活性,用流式细胞仪分析γδ+ T细胞上CD69分子的表达及γδ+ T细胞的增殖效应. 结果随着LY294002浓度的增加,γδ+ T细胞表面CD69分子的表达率降低,其增殖效应亦被不同程度地阻断. 结论抗CD28单抗可协同M.tb抗原激活γδ+ T细胞,其活化信号在γδ+ T细胞内的转导经过PI3K的介导.
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Bcl-2、cyclin A2和PI3K在激素受体阴性乳腺癌中的表达及意义
目的 探讨激素受体阴性乳腺癌中B淋巴细胞瘤/白血病2基因(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)、细胞周期素A2(cyclin A2)和磷酸肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)的表达及意义.方法 采用实时聚合酶链反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测Bcl-2、cyclin A2和PI3K在激素受体阴性乳腺癌组织(58例)、乳腺正常组织(14例)中的表达水平,并采用Mann-Whitney U检验分析其与临床病理特征的关系.结果 与乳腺正常组织相比,激素受体阴性乳腺癌中Bcl-2表达降低,而cyclin A2和PI3K表达增高(P＜0.05).在乳腺癌组织中,Bcl-2在TNM分期Ⅲ期、组织学分级Ⅲ级和出现转移复发的患者中表达水平降低(P＜0.05),但其表达在不同年龄、肿瘤大小和淋巴结转移的组间差异无显著性(P＞0.05)；cyclin A2在转移复发的患者中显著高表达(P＜0.05),但在不同的年龄、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期和淋巴结状态的组间差异均无显著性(P＞0.05)；PI3K在有淋巴结转移和TNM分期Ⅲ期的患者中高表达(P＜0.05),但其表达在不同年龄、肿瘤大小、组织学分级以及是否转移复发的组间差异均无显著性(P＞0.05).结论 Bcl-2低表达、cyclin A2和PI3K高表达可能与激素受体阴性乳腺癌的发生发展有关.
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以磷酸肌醇3激酶通路为靶点的抗肿瘤药物
磷酸肌醇3激酶(P13K)通路是一个关键的信号转导系统,它可将癌基因和多种受体与许多细胞功能联系在一起,还是肿瘤中常被激活的通路.靶向P13K同工酶和通路中包括AKT和mTOR在内的其他主要节点的抑制剂已进入临床试验阶段,但存在一定问题.本文重点阐述人们在理解P13K通路方面取得的进展,并讨论研发靶向这条通路的抗肿瘤药物的机遇与面临的挑战.
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PKB基因表达在运动调节胰岛素抵抗中的作用
近年来,随着经济的高速发展以及人们生活水平的不断提高,我国人民的生活方式也日益静态化,随之而来的2型糖尿病、肥胖、心脑血管疾病、动脉粥样硬化等发病率出现升高趋势.胰岛素抵抗被公认为是这些内分泌代谢异常相关疾病共有的病理生理基础.蛋白激酶 B作为胰岛素信号转导通路中的重要蛋白,在运动改善胰岛素抵抗中的作用不容忽视.
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系统性红斑狼疮患者外周血T细胞磷酸肌醇3激酶信号通路异常活化
目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T细胞中磷酸肌醇3激酶(PI3K)信号通路活化情况及其临床意义.方法 检测28例SLE患者的T细胞PI3K通路活性.8例类风湿关节炎患者为对照,另以15名健康者为正常对照组.外周血T细胞分离采用RosettSep T细胞提取试剂盒提取,PI3K活性采用免疫沉淀和ELISA法,Akt及其磷酸化蛋白运用免疫印迹法,T细胞增殖采用MTT法,细胞因子水平采用ELISA检测.结果 新鲜分离的SLE患者外周血T细胞PI3K和Akt活性均显著高于正常对照组和类风湿关节炎组;SLE患者T细胞在体外培养24 h后PI3K和Akt活性与正常对照组差异无统计学意义,而正常对照组T细胞用SLE患者血清孵育24 h后PI3K和Akt活性显著增高;PI3K特异性抑制剂LY294002显著抑制SLE患者T细胞增殖(125±21 vs 197±26,P<0.05)及分泌白细胞介素(IL)-6和IL-10[分别为(425±69)ng/L vs(816±116)ng/L,P<0.05;(114±18)ng/L vs(207±31)ng/L,P<0.05].新鲜分离的SLE患者外周血T细胞PI3K和Akt活性与SLEDAI无相关关系.结论 SLE患者T细胞存在PDK信号通路异常活化,并与T细胞增殖和细胞因子分泌有关,SLE外周血中可能存在激活该通路的血清因子.
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PI3K活性与BHA诱导小鼠胎肝细胞表达神经组织细胞特异基因有关
目的:了解丁羟回醚(BHA)对小鼠胎肝(FL)细胞神经组织特异基因表达的影响及其信号途径.方法:小鼠胎肝细胞,以DMEM/F12+10%胎牛血清培养液培养;第4 d后,去悬浮细胞,留黏附细胞,加入或者不加入磷酸肌醇3羟基激酶(PI3K)抑制剂LY294002(20 μmol/L)处理24 h,再加入BHA至终浓度0.2 mmol/L,然后继续培养5d.用Western blot和半定量RT-PCR方法分析BHA处理前后神经组织细胞特异基因表达.结果:胎肝细胞本身表达神经组织特异基因水平较低或者不表达.BHA则促进了胎肝细胞内神经组织特异基因表达:NF-L mRNA增加5.8倍、NF-H mRNA增加8 0倍、TH mRNA增加30倍、BF-1 mRNA增加2.68倍;NF-L蛋白增加11.29倍、NF-H蛋白增加5 5倍、BF-1蛋白增加2.53倍、TH蛋白增加4.76倍.而LY294002能明显抑制BHA诱导的神经组织细胞特异蛋白NF-L、NF-H、BF-1和TH的表达.结论:PI3K活性与BHA诱导小鼠胎肝细胞表达神经组织细胞特异结构和功能基因有关.
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EGFR与PI3K/AKT信号通路相关蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及其意义
目的 研究表皮生长因子受体(EGFR)和磷酸肌醇3激酶、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶信号通路相关蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达以及其临床意义.方法 应用免疫组化学SP法检测100例NSCLC组织及其相应正常癌旁组织中的EGFR、PI3K、AKT蛋白表达水平.结果 100例正常的癌旁组织中EGFR、PI3K及AKT蛋白的阳性表达率分别为13%、11%、7%,100例NSCLC组织中EGFR、PI3K及AKT蛋白的阳性表达率分别为63%、51%、23%,两种组织的3种阳性表达率差异均有统计学意义(P<0.05).结论 EGFR可能通过激活其下游的PI3K/AKT通路发挥致癌作用.
关键词： 表皮生长因子受体 磷酸肌醇3激酶 丝氨酸∕苏氨酸蛋白激酶 非小细胞肺癌 免疫组化 -
胃癌组织 VIP 与癌组织炎性细胞内 NKG2 D、PI3 K p85α、NF-κB p65表达的关系
目的：分析胃癌组织中血管活性肠肽（VIP）与癌组织炎性细胞内NKG2D、磷酸肌醇3激酶（PI3K）p85α、核转录因子κB（ NF-κB） p65的关系。方法采用免疫组化法检测72例胃癌患者的癌组织及癌旁正常组织中的VIP，以及相应组织中炎性细胞内的NKG2D、PI3K p85α、NF-κB p65。结果胃癌组织中VIP阳性表达率与癌旁正常组织无明显差异，而表达强度显著高于癌旁正常组织（P＜0．01）；胃癌组织炎性细胞内NKG2D、PI3K p85α、NF-κB p65在阳性表达率及表达强度均高于癌旁正常组织（P均＜0．01）。 VIP、NKG2D、PI3K p85α、NF-κB p65表达强度与胃癌的组织分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关（P均＜0．05），与性别、年龄、肿瘤部位无关（P均＞0．05）；胃癌组织 VIP表达与癌组织炎性细胞内 NKG2D、PI3K p85α、NF-κB p65表达均呈负相关（ r 分别为－0．341、－0．245、－0．249，P均＜0．05）。结论 VIP可能通过PI3K／NF-κB途径作用于免疫细胞NKG2D，抑制免疫监视，促进胃癌的免疫逃逸。
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丁基苯酞通过磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B通路对局部脑缺血损伤脑梗死的保护作用
目的 观察丁基苯酞对局部脑缺血损伤引起的脑梗死的保护作用.方法 制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),观察丁基苯酞对脑梗死率的影响,以及与磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的关系.结果 丁基苯酞(10、30 mg/kg)给药后可以使MCAO大鼠的脑梗死率由41.2％降低至19.7％,神经功能评分由3.8分降低至2.6分,细胞角蛋白(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的水平由5 784 U/L和2 997 U/L降低至2 674 U/L和1 615 U/L,并且引起磷酸化Akt(p-Akt)表达增加3倍和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3表达降低约3倍.而同时给予PI3K抑制剂LY294002后,可以完全拮抗丁基苯酞引起的MCAO大鼠脑梗死率降低(梗死率由19.8％升高至40.4％)、p-Akt表达的增加和Caspase-3表达的降低.结论 丁基苯酞通过激活PI3K/Akt通路对局部脑缺血损伤引起的脑梗死产生保护作用.
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Notch与磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路在膀胱癌的作用及其机制
目的 探讨Notch信号通路与磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3 K/Akt)信号通路在膀胱癌中的作用及其机制.方法 分别通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测Notch信号通路与PI3 K/Akt信号通路的关键因子在36对膀胱癌及癌旁组织中的表达,然后采用Notch信号通路抑制剂(2S)-N-N-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)及PI3K信号通路抑制剂LY 294002分别抑制以上通路,采用MTS法观察2条信号通路对膀胱癌细胞5637与T24增殖的影响,后检测抑制Notch信号通路后Akt的表达变化,观察2条信号通路是否存在相互作用关系.细胞实验各重复3次.结果 Notch信号通路与PI3K信号通路在膀胱癌中呈活化状态.与瘤旁组织比较,肿瘤组织中Notch1受体升高(2.60±0.37)倍,Hes1升高(1.80±0.24)倍(P＜0.05),磷酸化Akt蛋白表达升高.再者,分别抑制2条信号通路后均抑制膀胱癌细胞的增殖.抑制Notch信号通路后Hes1下降(3.60±0.53)倍,第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)表达下降(2.30±0.24)倍(P＜0.05),磷酸化Akt蛋白表达也显著下调.结论 Notch信号通路可能通过调节PI3K信号通路在膀胱癌中起促癌作用.
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丹参酮ⅡA通过抑制磷酸肌醇3激酶-蛋白激酶B-雷帕霉素靶蛋白-p70S6激酶1通路促进胃癌细胞在体外的自噬
目的 探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)体外对人胃癌SGC7901细胞自噬的影响及机制.方法 不同浓度(0.5、1、2和4 mg/L) TanⅡA作用体外培养的胃癌SGC7901细胞24、48、72 h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活力的改变；TanⅡA(1、2和4mg/L)作用48 h,流式细胞术检测细胞自噬小体的含量；Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ的蛋白的表达水平及磷酸肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-p70S6激酶1(p70S6K1)的活性.结果 0.5 mg/L TanⅡA对胃癌SGC7901细胞没有明显的生长抑制作用,1、2和4 mg/L TanⅡA对胃癌SGC7901细胞则有明显的生长抑制作用,且抑制作用呈剂量和时间依赖性(P＜0.05)；流式细胞分析结果显示,1、2和4 mg/L TanⅡA组细胞内酸性自噬小体含量分别为(9.77±1.92)、(13.28 ±2.95)和(16.54±3.28)％,与对照组(4.16±0.64)％比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；Westem blot结果显示,1、2和4 mg/L TanⅡA作用后胃癌SGC7901细胞中Beclin-1的相对表达量为0.62±0.12、0.71±0.11和0.85±0.13,与对照组(0.37±0.05)比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；1、2和4 mg/L TanⅡA作用后胃癌SGC7901细胞中LC3-Ⅱ的相对表达量为0.48±0.06、0.65 ±0.11和0.86 ±0.14,与对照组(0.31±0.03)比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；此外,1、2和4 mg/L TanⅡA作用后胃癌SGC7901细胞PI3K-Akt-mTOR-p70S6K1活性则下降(P＜0.05).结论 TanⅡA可通过抑制PI3 K-Akt-mTOR-p70S6K1信号通路促进人胃癌SGC7901细胞自噬.
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缺血预处理对兔肺缺血再灌注性损伤的蛋白质组学研究
目的观察缺血预处理对兔肺缺血再灌注性损伤的蛋白质变化,探讨其可能的肺保护机制.方法 12只家兔,随机分为预处理组和对照组,每组6只.对照组经历单纯的缺血再灌注损伤,预处理组在缺血再灌注前予以缺血预处理.以二维电泳分离肺组织中的全部蛋白质,应用PDQuest软件寻找差异表达的蛋白质点并以MALDI-TOF质谱仪和Mascot软件对其鉴定.结果研究发现了35个明显差异表达的蛋白质,包括磷酸肌醇3激酶Δ催化亚单位在内的17个蛋白质达到了鉴定.结论通过磷酸肌醇3激酶信号传导通路抑制炎性反应可能是缺血预处理的保护机制.
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急性心肌缺血大鼠心肌α辅肌动蛋白含量变化及其与心功能的关系
目的 观察大鼠心肌缺血及再灌注过程中心肌细胞骨架蛋白α辅肌动蛋白(α-actinin)含量的变化及其与心功能的关系.方法 Wistar大鼠随机分为假手术组(sham),缺血30 min组(I30min),缺血1 h组(I1h),缺血1 h再灌注2 h组(IR),每组各8只.通过结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌缺血及再灌注模型,记录左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左室内压上升大速度(+dp/dt max)、左室内压下降大速度(-dp/dt max).采用免疫组化方法检测各组心肌中α-actinin含量和分布.ELISA法定量检测各组心肌组织磷酸肌醇3激酶(P13K)和磷脂酶C(PLC)含量.急性分离大鼠心肌细胞,并用PI3K抑制剂(LY-29400)和PLC抑制剂(U-73122)处理细胞,观察其对心肌细胞收缩舒张能力及对α-actinin含量的影响.结果 (1)随缺血时间延长,大鼠LVSP、+dp/dtmax、-dp/dt max下降,LVEDP升高;再灌注后LVSP、+dp/dtmax、-dp/dt max回升,LVEDP回落,但不能恢复到缺血前水平.(2)免疫组化染色观察到随缺血时间延长,α-actinin 出现点状、片状缺失,含量下降.(3)急性缺血过程中PI3K和PLC含量逐渐增加(P<0.05).(4)应用LY-294002及U-73122 后单个心肌细胞收缩幅度较缺血组明显增加(P<0.05).(5)应用LY-294002及U-73122后心肌细胞α-actinin免疫荧光强度较缺血组增加(P<0.001).结论 心肌缺血时心肌细胞骨架蛋白α-actinin的含量减少可能与缺血后PI3K和PLC含量增加有关,并且α-actinin结构与含量变化可能是导致心肌功能障碍的原因之一.
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生育酚结合蛋白通过磷酸肌醇3激酶途径抑制前列腺癌的生长
[目的]探讨生育酚结合蛋白(TAP)对前列腺癌细胞的生长调节及其分子机制.[方法]四甲基偶氮唑盐生长试验(MTT)测定细胞增殖情况,体外集落形成试验测定各细胞的致癌能力,高效液相层析法检测细胞内维生素E的浓度,利用基因转染、基因沉默、免疫印迹、Northern blot,RT-PCR、荧光定量PCR、免疫沉淀等方法研究TAP对前列腺细胞生长的作用及机制.[结果]TAP mRNA水平在前列腺癌细胞LNCaP、PC-3、DU-145、CWR22R中均较正常前列腺细胞RWPE-1低.TAP可促进癌细胞保留维生素E并增强其抗前列腺癌增殖的效应.无维生素E作用下,转染TAP可抑制前列腺癌细胞LNCaP、DU-145的生长,第6天细胞数比对照组分别减少35.8%与42.4%;LNCaP细胞克隆形成率下降54.3%(P＜0.05).利用siRNA在良性前列腺细胞HPr-1中沉默TAP基因,培养9 d后,细胞数比对照组增加124.3%(P＜0.01).TAP通过抑制磷酸肌醇PI3激酶信号,而非通过影响细胞周期或雄激素受体信号发挥作用.免疫沉淀实验表明TAP通过抑制PI3K的亚单位p110与p85的相互作用,进而干扰PI3K-Akt信号通路;持续激活Akt的活性可削弱TAP对前列腺癌细胞生长的抑制能力.[结论]TAP不仅能促进前列腺癌细胞摄取和增强维生素E的抗前列腺癌效应,还可通过非维生素E途径发挥作用,可能是防治前列腺癌的有价值的分子靶点.
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晚期糖基化终产物对足细胞内肾素-血管紧张素系统的影响
目的 观察晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对足细胞内肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)的影响及作用机制.方法 不同浓度的AGEs干预小鼠足细胞24h,分别检测肾素(renin)、血管紧张素原(renin-angiotensin system,AGT)、血管紧张素Ⅱ1型、2型受体(AT1R、AT2R)的表达,血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)的活性和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)的浓度,观察蛋白激酶B(Akt)的磷酸化,然后分别加入磷酸肌醇3激酶抑制剂LY294002、Iosartan、captopril和chymastatin,观察足细胞粘附性的变化.结果 与对照组相比,AGEs(80 μg/mL)明显上调AGT和AT1R的表达[(183.0±19.0)％ vs 100％,(179.0±17.0)％ vs100％,P＜0.05],裂解液中ACE活性明显增加[(142.8 ±10.3)U/μgvs (85.0 ±9.2)U/μg,P＜0.05],细胞上清中AngⅡ的浓度明显增加[(11.2±0.8) pg/mL vs(7.0±0.7)pg/mL,P＜0.05]；Akt的磷酸化上调100％ (P ＜0.05),而LY294002可减轻AGEs介导的足细胞内RAS的激活；与AGEs组相比,LY294002可改善AGEs介导的足细胞粘附性的下降[(82±13)％ vs (40±12)％；(78±14)％vs(42±13)％,P＜0.05].结论 AGEs可能通过磷酸肌醇3激酶途径激活足细胞内的RAS,降低足细胞粘附性.
关键词： 晚期糖基化终产物 磷酸肌醇3激酶 足细胞 肾素-血管紧张素系统 -
PKC途径和P13K在人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ中的作用
目的 研究信号转导中的蛋白激酶C(PKC)途径与磷酸肌醇3激酶(P13K)在人外周血γδT细胞分泌Th1型细胞因子IL-2与IFN-γ中的作用.方法 人PBMC先用P13K抑制剂Ly29400Z、PKC抑制剂Rottlerin或NT-κB抑制剂TPCK分别预处理1h,再加入结核杆菌低分子量多肽抗原(Mtb-Ag)和rhIL-2刺激3 d,后用低浓度PMA+Ionomycin短时再刺激后检测γδT细胞IL-2和IFN-T分泌;并同时检测,αβT细胞作为对照.结果 无抑制剂的对照组γδT和αβT细胞中分泌IL-2的比例分别为44.5%和15.2%,分泌IFN-γ的比例分别为51.1%和10.7%;Ly294002、Rottlerin、TPCK组分泌IL-2的γδT和αβT细胞均显著减少(P＜0.05或P＜0.01),后二组分泌IFN-γ的78T和αβT细胞亦显著减少(P＜0.05或P＜0.01);但Ly294002组分泌IFN-γ的γδT和αβT细胞反而上升至77.2%和22.3%(P＜0.01).结论 PKC途径活化促进人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ;PDK亦促进人γδT细胞分泌IL-2但在其分泌IFN-γ中起负向作用.
