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PI3K活性与BHA诱导小鼠胎肝细胞表达神经组织细胞特异基因有关
目的:了解丁羟回醚(BHA)对小鼠胎肝(FL)细胞神经组织特异基因表达的影响及其信号途径.方法:小鼠胎肝细胞,以DMEM/F12+10%胎牛血清培养液培养;第4 d后,去悬浮细胞,留黏附细胞,加入或者不加入磷酸肌醇3羟基激酶(PI3K)抑制剂LY294002(20 μmol/L)处理24 h,再加入BHA至终浓度0.2 mmol/L,然后继续培养5d.用Western blot和半定量RT-PCR方法分析BHA处理前后神经组织细胞特异基因表达.结果:胎肝细胞本身表达神经组织特异基因水平较低或者不表达.BHA则促进了胎肝细胞内神经组织特异基因表达:NF-L mRNA增加5.8倍、NF-H mRNA增加8 0倍、TH mRNA增加30倍、BF-1 mRNA增加2.68倍;NF-L蛋白增加11.29倍、NF-H蛋白增加5 5倍、BF-1蛋白增加2.53倍、TH蛋白增加4.76倍.而LY294002能明显抑制BHA诱导的神经组织细胞特异蛋白NF-L、NF-H、BF-1和TH的表达.结论:PI3K活性与BHA诱导小鼠胎肝细胞表达神经组织细胞特异结构和功能基因有关.
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维A酸对人胎肝细胞神经组织特异基因表达的影响及其信号途径
目的:了解维A酸对人胎肝细胞神经组织特异基因表达的影响及其信号途径.方法:采用免疫磁珠法分离入胎肝CD34+细胞,培养4 d后,蛋白激酶C特异抑制剂chelerythrine chloride(3μmol/L)处理24 h,再加入维A酸处理24 h(5×10-7mol/L),无血清培养基培养5 d,Western印迹和半定量RT-PCR法分析维A酸处理前后神经特异基因表达.结果:维A酸诱导处理使胎肝细胞表达神经组织细胞特异蛋白如Nestin、NeuN和NF-M显著增加,分别增加4.∞倍、5.12倍和7.27倍(P＜0.01).而chelerythrine chloride能明显抑制维A酸诱导的神经组织细胞特异蛋白Nestin、NeuN和NF-M的表达.MAP-2蛋白在维A酸处理前后均无明显表达.结论:维A酸通过蛋白激酶C途径促进人胎肝CD34+细胞表达神经组织细胞特异基因.
