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孕酮回植激活Akt/GSK3β信号通路逆转月经发生
目的 探讨在孕酮撤退月经模型小鼠月经发生的关键时期前,回植孕酮对蛋白激酶B/糖原合成激酶3β(Akt/GSK3β)信号通路的影响. 方法 30只成熟去势雌性C57BL/6J小鼠在建成小鼠孕酮撤退月经模型的基础上,随机分为3组:孕酮撤退后12 h组(12 h组)、孕酮撤退后16 h组(16 h组),以及在孕酮撤退后12 h回植孕酮皮埋管4 h组(回植孕酮组),每组10只.通过qRT-PCR法检测子宫内膜组织中Akt、GSK3β mRNA表达,Western blotting和免疫组织化学检测总Akt(t-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)(Ser473)和p-GSK3β(Ser9)蛋白的表达. 结果 与12 h组相比,回植孕酮组和16 h组中Akt mRNA表达显著下降(P均<0.05),而回植孕酮组和16 h组无显著性差异(P>0.05);12 h组的GSK3β mRNA表达量显著高于回植孕酮组和16 h组(P均<0.05).与12 h组相比,p-Akt、p-GSK3β蛋白在回植孕酮组表达量显著增高(P均<0.05);而16 h组子宫内膜组织中p-Akt、p-GSK3β蛋白表达量亦显著低于12 h组和回植孕酮组(P均<0.05).免疫组化结果显示,p-Akt和p-GSK3β蛋白在小鼠子宫组织中表达分布呈现相似的模式,主要广泛散在表达于蜕膜化区域的基质细胞及腺上皮和腔上皮细胞中,在蜕膜化区域周边稍有集中分布呈带的趋势. 结论 在月经发生关键时期之前回植孕酮可能通过非转录机制快速激活Akt/GSK3β信号通路及其下游级联反应,从而逆转月经发生.
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敲除淀粉样前体蛋白基因促进铝诱导的小鼠认知障碍损伤
目的 淀粉样前体蛋白(APP)基因是与痴呆症发生发展相关的重要基因,利用APP基因敲除小鼠探讨铝诱导的认知障碍损伤,及APP对中毒性认知障碍损伤的作用.方法 3月龄同窝阴性小鼠分为野生对照组(WT)和铝处理组(WT+ Al),APP敲除小鼠分为模型对照组(APP-/-)和模型处理组(APP-/-+Al),每组10只.铝处理组在粮食中加入相应剂量的乳酸铝,同窝阴性小鼠和APP-/-小鼠给予常规鼠粮作为对照,乳酸铝处理8周后进行水迷宫实验.HE染色观察小鼠脑组织神经病理改变;Western blotting检测糖原合成激酶3β(GSK-3p)和Caspase-3的活性变化.结果 与WT相比,WT+ Al小鼠在原平台区域停留时间和穿越原平台区域次数减少了28.1％和18.8％,而APP-/-+ A1小鼠在原平台区域停留时间和穿越原平台区域次数减少了44.1％和51％.Western blotting显示,WT+ Al小鼠和APP-/-+ Al小鼠脑组织中p-GSK-3β分别减少了17.4％和46.4％.结论 APP基因敲除促进铝诱导的神经毒性和学习记忆损伤.APP基因敲除导致GSK-3β的磷酸化水平降低、活性增高.由于GSK-3β活性增加对痴呆症具有促进作用,推测APP通过抑制GSK-3β活性在痴呆症发生过程中发挥保护效应.
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远志皂苷加β-细辛醚对APP/PS1小鼠海马记忆功能的影响
目的:通过观察远志皂苷加β-细辛醚对APP/PS1双转基因小鼠海马超微结构、行为学,以及蛋白激酶B (proteinkinase B,AKt)和糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)表达的影响,探讨“化痰开窍”法防治阿尔茨海默病(AD)的作用机制.方法:以3个月龄的APP/PS1双转基因小鼠为研究对象,设为模型组、药物组经远志皂苷+β-细辛醚(74 mg·kg-1·d-1)处理,正常对照组为3个月龄的C57BL/6小鼠.采用透射电镜观察小鼠海马超微结构;采用Morris水迷宫法和新物体识别实验检测药物对小鼠学习记忆能力的改善;应用免疫组化法检测Akt和GSK-3β的蛋白表达.结果:远志皂苷联合p-细辛醚可以改善APP/PS1双转基因小鼠的空间和非空间记忆功能,逆转APP/PS1双转基因小鼠海马神经元超微形态,上调p-Akt和p-GSK-3β的蛋白表达(P＜0.05).结论:远志汤的“化痰开窍”防治AD的药理效能,可能是通过调控Akt/GSK-3β通路实现的.
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上调整合素连接激酶可抑制肾小管上皮细胞E-cadherin表达
目的：研究上调整合素连接激酶(integerin-linked kinase，ILK)对肾小管上皮细胞(human kidney tubular cells，HKC) E-钙黏素(E-Cadherin)表达的影响。肾小管上皮细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)在肾间质纤维化中发挥重要作用。E-Cadherin是维持肾小管上皮细胞极性的关键蛋白。ILK是调控上皮细胞转分化的重要蛋白，其作用机制目前还不清楚。方法本研究中我们将ILK转染到HKC中过表达，然后用RT-PCR、Western blot及免疫荧光方法观察了ILK对E-Cadherin表达及糖原合成激酶-3β(glycogen synthase kinase 3β，GSK-3β)活性的影响。进一步用磷酸化下游底物GSK-3β抑制剂SB415286观察对E-Cadherin表达的影响。结果 ILK过表达可以明显抑制E-Cadherin表达,增加GSK-3β活性。用GSK-3β抑制剂处理后可以下调E-Cadherin的表达。免疫荧光显示ILK过表达可使上皮细胞发生极性改变， E-Cadherin表达下调。表明ILK上调可通过激活GSK抑制E-Cadherin表达，进而诱导肾小管上皮细胞出现转分化表型。
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二氮嗪后处理对应激性高血糖非糖尿病 大鼠缺血/再灌注心肌的影响
目的：观察二氮嗪后处理对应激性高血糖（SHG）非糖尿病大鼠缺血/再灌注（I/R）心肌的保护作用，并探讨其可能机制。方法按随机数字表法将60只健康雄性SD大鼠分为假手术（Sham）组、I/R组及低、中、高剂量二氮嗪后处理组（LIPO、MIPO、HIPO组），每组12只。采用结扎左冠状动脉前降支（LAD）30min、再灌注120min方法制备SHG心肌I/R损伤大鼠模型，以缺血30min血糖达到10mmol/L为合格模型；Sham组只穿线、不结扎LAD。缺血25min后LIPO、MIPO、HIPO组经股静脉输注4、7、10mg/kg二氮嗪〔溶于0.1%二甲亚砜（DMSO）〕2mL；Sham组、I/R组输注等量DMSO。连续监测血糖、血流动力学指标；再灌注120min测定血清肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）含量，氯化三苯四唑（TTC）染色分析心肌梗死面积，电镜下观察心肌细胞超微结构，蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（p-GSK-3β）表达。结果与Sham组比较，I/R组大鼠血糖明显升高，心率（HR）减慢，心肌收缩/舒张功能减退，心肌酶升高，心肌梗死面积增加，电镜下心肌组织水肿明显，线粒体肿胀，嵴断裂，糖原颗粒消失。再灌注120min后，与I/R组相比，HIPO组血糖进一步升高（mmol/L：16.93±3.22比14.65±3.61，P＜0.05）；LIPO组左心室内压下降大速率（-dp/dtmax）有所改善（mmHg/s：-1055±16比-982±10，P＜0.05），梗死面积明显缩小〔（32.45±3.54）%比（41.30±3.21）%，P＜0.05〕；MIPO组和HIPO组左心室收缩压〔LVSP（mmHg，1mmHg＝0.133kPa）：60±2、74±4比54±4〕、左心室舒张期末压〔LVEDP（mmHg）：24.6±1.5、18.9±1.3比27.9±1.6〕、左心室内压上升大速率〔+dp/dtmax（mmHg/s）：1049±37、1262±75比975±17〕、-dp/dtmax（mmHg/s：-1068±21、-1321±63比-982±10）均有不同程度改善（均P＜0.05），肌酸激酶〔CK（kU/L）：10.7±0.5、11.0±1.3比12.9±1.0〕、乳酸脱氢酶〔LDH（kU/L）：6.8±0.2、7.8±0.1比8.8±0.1〕明显降低（均P＜0.05），梗死面积减小〔（31.24±2.45）%、（30.81±2.68）%比（41.30±3.21）%，均P＜0.05〕，电镜下观察心肌组织损伤有所修复。与Sham组相比，I/R组p-Akt、p-GSK-3β水平明显降低（灰度值：0比0.187±0.018，0.110±0.045比0.200±0.081，均P＜0.05）；与I/R组相比，HIPO组p-Akt以及LIPO、MIPO、HIPO组p-GSK-3β水平均显著升高（灰度值：0.101±0.009比0，0.180±0.057、0.270±0.062、0.280±0.039比0.110±0.045，均P＜0.05）。不同剂量二氮嗪后处理对HR无明显影响。结论 I/R心肌存在SHG时可显著抑制PI3K/Akt-GSK-3β信号通路的活性，中、高剂量二氮嗪对合并SHG的I/R心肌具有保护作用，且中剂量不引起血糖明显增高；二氮嗪可能部分通过PI3K/Akt-GSK-3β信号通路作用于GSK-3β，使其磷酸化并抑制其活性而发挥心肌保护作用。
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糖原合成激酶3β对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响
目的：研究糖原合成激酶3β（ GSK3β）在骨肉瘤侵袭、转移中的作用。方法通过Western blot法检测骨肉瘤患者肿瘤组织及骨肉瘤细胞中GSK3β的表达和磷酸化水平；使用两种GSK3β小分子抑制剂处理骨肉瘤细胞，通过细胞迁移及侵袭实验检测GSK3β活性受抑制对骨肉瘤细胞迁移、侵袭的影响。结果 GSK3在骨肉瘤细胞中过表达且存在活性调节异常；在转移及非转移骨肉瘤患者肿瘤组织中均可检测到GSK3表达及活性异常，尤其在转移的骨肉瘤患者肿瘤组织中；抑制内源性GSK3活性，明显降低肿瘤细胞的迁移、侵袭能力。结论 GSK3β促进骨肉瘤细胞的侵袭、迁移，可能为骨肉瘤的临床治疗开辟潜在的靶点奠定理论基础。
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GSK3β对骨肉瘤细胞增殖的影响
目的：研究糖原合成激酶3β（ GSK3β）在骨肉瘤细胞增殖中的作用及其分子机制。方法通过Western blot法和NIRKA法，检测正常成骨细胞hFO及骨肉瘤细胞中GSK3β的表达和活性；使用两种GSK3β小分子抑制剂处理骨肉瘤细胞，检测GSK3β活性受抑制下骨肉瘤细胞增殖率和凋亡率；通过GSK3βsiRNA降低内源性GSK3β表达，Western blot法检测p27及其下游cyclinD1－CDK－Rb通路因子的蛋白表达及磷酸化；建立骨肉瘤细胞荷瘤小鼠模型，分别给予DMSO 作为对照，以及GSK3抑制剂SB 216763、AR－A014418，每周3次腹腔给药，观察肿瘤生长和裸鼠的体重变化情况。结果与正常人成骨细胞相比，骨肉瘤细胞中存在GSK3超表达及活性调节异常；内源性GSK3活性受抑制后抑制骨肉瘤细胞增殖，诱导细胞的凋亡；降低内源性GSK3活性，肿瘤体积与对照组比较，SB216763，AR －A014418组肿瘤增长受到抑制，有统计学意义（ P＜0．05）；降低骨肉瘤MG－63细胞内源性GSK3蛋白表达，使p27蛋白表达水平明显上调， Rb及其在S780、795部位的磷酸化水平下降，CDK2、4、6蛋白水平降低，cyclinD1的表达上调但其磷酸化水平没有影响。结论 GSK3β通过对p27及cyclinD1－CDK－Rb径路的调节促进骨肉瘤细胞的增殖，可能为骨肉瘤的临床治疗开辟一个潜在的靶点。
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氢分子对H2O2体外诱导氧化损伤大鼠脊髓神经元的保护作用
目的 证明氢分子对过氧化氢(H2O2)诱导氧化损伤的大鼠脊髓神经元具有保护效应,并初步探讨其相关机制.方法 将纯化培养7d后的大鼠脊髓神经元分为4组:(1)常规培养液(NM)对照组:以NM培养;(2)富氢培养液(HM)组:以HM培养;(3)NM+H2O2组:以NM培养2h后,加入100 μmol/L H2O2和15 μmol/L FeCl2继续培养;(4)HM+H2O2组:以HM培养2h后,加入100 μ mol/L H2O2和15 μmol/L FeCl2继续培养.各组处理后每6h更换各自培养液及氧化剂,在12h后停止处理并检测神经元胞内活性氧(ROS)生成的水平、细胞凋亡情况,以及糖元合成激酶3β(GSK-3β)和p-GSK-3β的表达水平.结果 与NM相比,HM可降低H2O2氧化损伤后神经元胞内ROS尤其是羟自由基(HO·)的生成(P＜0.01),减少神经元凋亡的数量(P＜0.01),下调caspase-3的表达(P＜0.01),促进GSK-3β的磷酸化(P＜0.01).结论 氢分子对H2 O2氧化损伤的神经元具有保护效应,其机制与降低神经元胞内ROS尤其是HO·的生成、减少神经元凋亡的数量和抑制凋亡信号通路的激活以及促进GSK-3β的磷酸化利于神经元生长有关.
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糖原合成激酶3β在二氮嗪后处理糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用
目的 观察糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)在二氮嗪(diazoxide,DZ)后处理糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/RI)中的作用及机制. 方法 单次腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)制备糖尿病大鼠模型,取造模成功的大鼠48只,复制在体心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)模型,按随机数字表法分为4组(每组12只):假手术组(Sham组)、I/R组(Ⅰ组)、DZ组(D组)、SB216763+DZ组(S组).连续监测血流动力学指标,比色法测血浆乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色分析心肌梗死面积,Western blot测磷酸化GSK-3β(phosphorylated GSK-3β,pGSK-3β)的表达. 结果 与Ⅰ组及D组比较,S组心功能明显改善(P＜0.05),血浆LDH[S组、Ⅰ组、D组为(5 335±502)、(7 943±831)、(7 176±521) U/L,P＜0.05]活性及心肌梗死面积[S组、Ⅰ组、D组为(21.0±1.6)％、(30.8±3.8)％、(31.3±2.9)％,P＜0.05]均显著降低,pGSK-3β表达增加(P＜0.05);Ⅰ组与D组比较上述指标差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 DZ后处理对糖尿病大鼠心肌I/RI无保护作用,GSK-3β抑制剂干预后DZ后处理对糖尿病大鼠心肌I/RI的保护作用恢复.
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异钩藤碱抑制PDGF-B B诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的实验研究
目的：探讨异钩藤碱对血小板源性生长因子BB（PDGF-BB）诱导的肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖的影响及其机制。方法建立PDGF-BB诱导的PASMCs增殖模型，通过MTT比色法和台盼蓝拒染法检测异钩藤碱对PASMCs增殖的影响及细胞毒性，流式细胞术检测细胞周期变化，Western blotting检测细胞周期相关蛋白的表达及血小板源性生长因子受体β（PDGF-Rβ）信号通路蛋白表达及磷酸化的影响。结果与正常对照相比，加入PDGF-BB（20 ng／mL）培养24 h，可促进PASMCs增殖约2．5倍；异钩藤碱剂量依赖性地抑制PDGF-BB 诱导的PASMCs增殖；异钩藤碱（25μmol／L）明显抑制PDGF-BB 诱导的S期细胞比例升高；Western blotting结果显示，异钩藤碱可抑制PDGF-BB 诱导的cyclin D1、CDK6的表达和p27 kip1的降解，下调PDGF-Rβ及其下游信号分子AKT、糖原合成激酶（GSK）3β的磷酸化。结论异钩藤碱通过将细胞周期阻滞于G0／G1期来抑制PDGF-BB 诱导的PASMCs增殖，其机制可能为通过抑制PDGF-Rβ及其下游信号通路的磷酸化、进而调节细胞周期相关蛋白的合成和降解来实现。
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生理性孕酮撤退过程中小鼠子宫角组织蛋白激酶B、糖原合成激酶3β的表达观察
目的 观察生理性孕酮撤退小鼠子宫角组织中蛋白激酶 B(Akt)及糖原合成激酶3β(GSK3β)的表达变化.方法 90只未交配健康成年雌性C57BL/6J小鼠,制作生理性孕酮撤退模型,分别在孕酮撤退0、8、12、16、20、24、32、40、48 h(48 h为小鼠生理性孕酮撤退周期)时处死10只小鼠,收集子宫角组织.采用real-time PCR法检测孕酮撤退各时点小鼠子宫角组织Akt、GSK3β mRNA,采用Western blotting法检测孕酮撤退各时点小鼠子宫角组织总蛋白激酶 B(t-Akt)、磷酸化蛋白激酶 B(Akt)及3βp-Akt及磷酸化糖原合成激酶(p-GSK3β).结果 随孕酮撤退时间延长,Akt mRNA及蛋白相对表达量逐渐降低,孕酮撤退20 h时达到低值,后随孕酮撤退时间逐渐延长,Akt mRNA及蛋白相对表达量逐渐升高.孕酮撤退8 h 时GSK mRNA及蛋白相对表达量高于孕酮撤退0 h时(P<0.05);随孕酮撤退时间延长,GSK mRNA及蛋白相对表达量逐渐降低,孕酮撤退24 h时达到低值,后随孕酮撤退时间逐渐延长, GSK mRNA及蛋白相对表达量逐渐增加.孕酮撤退20 h小鼠子宫角组织 Akt 、GSK3β mRNA表达量低于孕酮撤退后0、48 h(P均<0.05).与孕酮撤退0 h比较,孕酮撤退20 h时小鼠子宫角组织p-Akt、p-GSK3β的相对表达量均降低(P均<0.05).与孕酮撤退8 h比较,孕酮撤退20 h时小鼠子宫角组织p-GSK3β的相对表达量降低(P<0.05).与孕酮撤退20 h比较,孕酮撤退48 h时小鼠子宫角组织p-Akt、p-GSK3β的相对表达量均升高(P均<0.05).结论 生理性孕酮撤退小鼠子宫角组织中存在Akt表达随时间下降后上调,GSK3β表达随时间上调后下降后再次上调. Akt/GSK-3β信号通路可能在鼠孕酮撤退过程中起重要作用.
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缬沙坦和氟伐他汀对糖尿病大鼠视网膜糖原合成激酶3β表达的影响
背景 糖原合成激酶3β(GSK-3β)在糖代谢过程中起着重要作用,可能对糖尿病视网膜病变(DR)的发生有一定影响.研究表明缬沙坦能改善糖尿病鼠视网膜的视觉电生理表现.目的 探讨缬沙坦和氟伐他汀对糖尿病大鼠视网膜GSK-3β表达的影响. 方法 将50只SD大鼠通过一次性腹腔注射65 mg/kg链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,用随机数字表法将造模成功的47只大鼠随机分为4组.糖尿病对照组(12只)灌服质量分数0.5％羧甲基纤维素钠作为阳性对照,缬沙坦组(12只)、氟伐他汀组(11只)和缬沙坦联合氟伐他汀组(12只)分别于造模后3d灌服缬沙坦悬液、氟伐他汀悬液、缬沙坦+氟伐他汀悬液,每日1次,共12周.另纳入10只正常大鼠作为正常对照组,给予质量分数0.1％柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液进行腹腔注射,然后灌服0.5％羧甲基纤维素钠溶液.用药 12周后采集各组大鼠尾静脉血检测大鼠空腹血糖水平；采用Western blot法检测p-GSK-3β(Ser-9)蛋白在大鼠视网膜中的表达；采用免疫组织化学法检测p-GSK-3β(Ser-9)在视网膜的表达定位.结果 给药12周后,正常对照组、糖尿病对照组、缬沙坦组、氟伐他汀组及缬沙坦联合氟伐他汀组的空腹血糖分别为(5.28±0.30)、(26.08±3.33)、(26.03±2.66)、(25.90±2.86)、(25.99±2.14) mmol/L,差异有统计学意义(F=110.74,P＜0.01).Western blot结果显示,糖尿病对照组大鼠视网膜中p-GSK-3β( Ser-9)/β-actin灰度值显著高于正常对照组(2.774±0.139 vs 1.927±0.111,q=15.79,P＜0.01)；缬沙坦组、氟伐他汀组及缬沙坦联合氟伐他汀组p-GSK-3β( Ser-9)表达显著低于糖尿病对照组(1.895±0.090、2.051±0.113、1.537±0.071 vs 2.774±0.139)(q=13.69、13.48、23.06,P＜0.01),且缬沙坦联合氟伐他汀组显著低于缬沙坦组和氟伐他汀组(q=6.67、9.58,P＜0.01).免疫组织化学检测显示,p-GSK-3β(Ser-9)主要表达于视网膜神经节细胞层(GCL),正常对照组视网膜各层中p-GSK-3β(Ser-9)均呈弱表达,GCL略强.糖尿病对照组视网膜各层p-GSK-3β(Ser-9)表达较强,呈深棕色着染,但仍以GCL为明显.缬沙坦组与氟伐他汀组各层视网膜p-GSK-3β(Ser-9)着色较糖尿病对照组明显减弱.缬沙坦联合氟伐他汀组各层视网膜p-GSK-3β(Ser-9)着色进一步减弱.结论 糖尿病大鼠视网膜中p-GSK-3β( Ser-9)的表达增加,主要位于GCL.缬沙坦、氟伐他汀均能够抑制p-GSK-3β(Ser-9)的表达,联合用药作用更强.
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GSK-3β及β-catenin的表达定位与肺腺癌顺铂耐药作用机制研究
目的 研究人肺腺癌细胞系A549和其顺铂耐药细胞系A549/DDP中GSK-3β及β-catenin的表达定位差异,以探讨其与肺腺癌顺铂耐药的作用机制.方法 MTT法检测A549和A549/DDP细胞对顺铂的IC50;免疫细胞荧光法检测顺铂处理前后两种细胞GSK-3β及β-catenin的定位表达.结果 顺铂对A549/DDP细胞的IC50值为(28.984±i.404)μtmol/L高于A549细胞的(5.888±0.338)μmol/L(t=27.696,P＜0.001);A549/DDP细胞中的GSK-3β表达主要在胞质,顺铂处理后GSK-3β定位在胞质和胞核;β-catenin表达主要在胞膜、胞质,顺铂处理后定位转移至胞核.而A549细胞中GSK-3β及β-catenin表达定位无变化.结论 肺腺癌顺铂耐药的机制可能与GSK-3β胞质和胞核共同定位、β-catenin核转移定位相关.
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Wnt信号传导通路在阿尔茨海默病防治中的作用
Wnt是动物发育的重要信号分子,在胚胎诱导、细胞增殖、分化凋亡及极性化中扮演了重要的角色.近来研究表明Wnt信号分子与神经变性疾病,如阿尔茨海默病(AD)的发生、发展过程密切相关.一旦Ap在神经细胞内大量积聚,可导致Wnt信号通路的异常减弱,继而引起GSK3β活性增加,β-catenin过度降解,神经细胞变性凋亡.因此,通过调控Wnt信号通路的关键分子,利用该通路中特异信号分子及其下游效应物,从而对AD起到防治作用的策略也越来越受到人们的关注.
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糖原合成激酶3β表达与上皮性卵巢癌顺铂敏感性的关系研究
目的 探讨肿瘤组织中糖原合成激酶3β表达与顺铂敏感性的关系以及降低SKOV3细胞中糖原合成激酶3β的表达逆转细胞顺铂耐药性的可能性.方法 选取住院治疗的上皮性卵巢癌患者30例,所有患者采用TP方案进行化疗.采用免疫组化方法检测糖原合成激酶3β表达与临床疗效的关系.体外培养SKOV3细胞,采用氯化锂(LiCl)抑制糖原合成激酶3β,通过MTT法比较糖原合成激酶活性与细胞顺铂敏感性的关系.结果 顺铂对不同糖原合成激酶3β表达活性的SKOV3细胞的IC50分别为(37.67±1.95)、(55.37±2.95)μmol·L-1,差异有显著性(P<0.05).上皮性卵巢癌患者组织糖原合成激酶3β表达活性与TP方案的临床疗效相关,糖原合成激酶3β表达强阳性组有效率为71.4%,阳性组有效率为61.5%,阴性组有效率为30.0%.3组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 糖原合成激酶3β的表达与SKOV3细胞对顺铂的敏感性相关,不同糖原合成酶3β表达量与TP方案的临床疗效呈现相关性.
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金雀异黄酮对冈田酸诱导大鼠血小板Tau蛋白过度磷酸化的保护作用及机制
目的 探讨金雀异黄酮(GS)对冈田酸(OA)诱导大鼠血小板Tau蛋白过度磷酸化的保护作用及其机制.方法 通过MTT法观察不同浓度的OA对大鼠血小板存活的影响.应用蛋白免疫印迹方法,检测OA处理后大鼠血小板Tau蛋白磷酸化Ser199和Thr231位点、Tau-1(非磷酸化蛋白)、Tau-5(总Tau蛋白)、糖原合成激酶3β(GSK-3β)和抑制性磷酸化GSK-3βSer9位点的表达情况;并观察GS对OA诱导大鼠血小板上述指标变化的影响.结果 MTT检测结果表明,不同浓度的OA对血小板均有损伤作用,其中80 nmol/L OA对大鼠血小板损伤程度较为合适.Western blot检测结果表明,80 nmol/L OA处理12 h后,Tau蛋白Ser 199位点的磷酸化水平增高(P＜0.05),Thr231位点的磷酸化水平显著增高(P＜0.01);Tau-1的磷酸化水平显著降低(P＜0.01);Tau-5无明显变化;GSK-3β的表达无变化而抑制性磷酸化GSK-3βSer9位点的表达减少(P＜0.05).用0.5μmol/L GS预处理后可减轻OA所诱导的Tau蛋白过度磷酸化,同时抑制性磷酸化GSK-3βSer9位点的表达增加(P＜0.05).结论 OA可诱导大鼠血小板Tau蛋白Ser 199和Thr231位点的磷酸化水平增高,该作用可能通过激活GSK-3β实现.GS可能通过抑制血小板GSK-3β的活性,终达到减轻OA所诱导的大鼠血小板Tau蛋白过度磷酸化的作用.
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帕潘立酮对社会交往缺陷的改善作用及对脑皮层GSK3β磷酸化的影响
目的 探讨新型非典型抗精神病药物帕潘立酮(Paliperidone)对精神分裂症(Schizophrenia)社会交往缺陷的改善作用及对脑皮层GSK3β磷酸化的影响. 方法 应用地佐环平(dizocilpine,MK-801)连续腹腔注射,建立了精神分裂症模型小鼠.实验分为3组:对照组(腹腔注射同体积0.9％生理盐水)、MK-801组(模型组,给予0.5 mg.kg-1·d-1MK-801腹腔注射,连续注射7d)、MK-801+Paliperidone组(帕潘立酮治疗组,给予0.25 mg.kg-1·d-1帕潘立酮+0.5 mg·kg-1·d-1MK-801腹腔注射,连续注射7d).应用刻板性旋转实验评价精神分裂症模型的建立,并应用Miceprofile软件分析各组小鼠在自由活动状态下的社会交往行为变化.Western blotting(WB)检测鼠额叶皮层脑组织糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)的表达变化. 结果 MK-801处理后明显增加实验小鼠的刻板性旋转动作,成功建立了精神分裂症小鼠模型.Miceprofile视频分析结果显示,模型鼠的交往接触次数和时长明显低于对照组(P＜0.01),帕潘立酮处理后,明显改善交往接触次数和时长(P＜0.01).WB分析结果显示MK-801明显降低脑皮层GSK3β的磷酸化水平,而帕潘立酮处理后可升高GSK3β磷酸化水平.结论 本项研究表明新型抗精神病药物帕潘立酮可改善动物社会交往缺陷行为,可能与增加脑皮层的磷酸化GSK3β有关.
关键词： 帕潘立酮 社会交往 地佐环平(MK-801) 糖原合成激酶3β 精神分裂症 -
胰腺癌组织中GSK3β表达情况与细胞侵袭特性、增殖特性的相关性
目的:研究胰腺癌组织中GSK3β表达情况与细胞侵袭特性、增殖特性的相关性.方法:选择2013年5月~2016年3月期间在湖北省武汉市新洲区中医医院手术切除的胰腺癌组织和癌旁组织,采用免疫组化试剂盒测定GSK3β的阳性表达率,采用酶联免疫吸附试剂盒测定GSK3β以及侵袭相关分子、增殖相关分子的蛋白表达量.结果:胰腺癌组织中GSK3β的阳性表达率以及蛋白含量均显著高于癌旁组织;胰腺癌组织中CCL21、CCR7、Vimentin、Cyclin D1、CDK4、CDK6的表达量显著高于癌旁组织,E-cadherin、P15INK4B、P21WAF1/CIP1的表达量显著低于癌旁组织;GSK3β阳性表达胰腺癌组织中CCL21、CCR7、Vimentin、Cyclin D1、CDK4、CDK6的表达量显著高于GSK3β阴性表达胰腺癌组织,E-cadherin、P15INK4B、P21WAF1/CIP1的表达量显著低于GSK3β阴性表达胰腺癌组织.结论:胰腺癌组织中高表达的GSK3β对癌细胞的侵袭、增殖具有促进作用.
