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PI3K/AKT/mTOR信号通路在卵巢透明细胞癌中的研究进展
卵巢透明细胞癌（OCCC）是上皮性卵巢癌的一种特殊组织学类型，对传统的化疗方案耐药，预后不良，寻找新的靶向治疗方案迫在眉睫。磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶体蛋白（PI3K/AKT/mTOR）信号通路在卵巢癌的发生和发展中发挥重要作用，并且与化疗耐药密切相关。该通路的活化不但可以抑制细胞凋亡，促进细胞增殖，还参与肿瘤的侵袭与转移。在OCCC中，PI3K/AKT/mTOR信号通路中的多种蛋白表达异常，该通路中的受体及激酶可能成为治疗OCCC的潜在靶点。现有研究表明PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂不仅能增加紫杉醇或顺铂的细胞毒性效应，还可影响OCCC细胞系的生长情况。特别是OCCC中常见的AT丰富结合域1A（ARID1A）突变与PI3K/AKT/mTOR信号通路关系十分密切。因此，针对PI3K/AKT/mTOR信号通路开发新的靶向治疗药物可能对OCCC的治疗具有一定意义。综述该通路与OCCC的关系，以期为探索新的靶向治疗提供理论基础。
关键词： 卵巢肿瘤 1-磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白激酶类 信号传导 治疗 -
非小细胞肺癌EGFR突变与磷酸化信号传导蛋白表达的关系
目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与其下游磷酸化信号通路蛋白表达的关系.方法:利用PCR和基因测序检测NSCLC患者EGFR第19和21外显子突变,辅以免疫组化染色检测下游信号传导蛋白p-Akt、p-ERK1/2和p-STAT3的表达.结果:66例NSCLC中有11例发生EGFR突变,女性和伴细支气管肺泡特征的腺癌突变率较高.p-Akt、p-ERK1/2和p-STAT3的表达阳性率分别为54.5%、25.8%和33.3%,EGFR突变患者p-Akt阳性率(81.8%)显著高于无突变者(49.1%,P<0.05),且在伴细支气管肺泡特征的腺癌中呈高表达,两者之间p-ERK1/2和p-STAT3表达差异无统计学意义;p-ERK1/2表达与患者年龄相关,P-STAT3在腺癌、小肿瘤(≤3 cm)和Ⅰ期NSCLC中的表达均显著上调(P<0.05).结论:EGFR突变后的下游信号传导主要以激活Akt途径为主,检测下游信号传导蛋白表达是EGFR基因检测的重要补充,对NSCLC基因分型、疗效监测及预后评估具有重要意义.
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宫颈病变组织中PKR与NF-κB p65的表达与磷酸化观察
目的：探讨宫颈病变组织内蛋白激酶R（PKR）、核因子（NF）-κB p65的表达及磷酸化的意义，高危型人乳头状瘤病毒（hsHPV）对两者表达及磷酸化的影响，以及三者的关系。方法以67例宫颈癌、149例宫颈上皮内瘤样病变（CINⅠ~Ⅲ）、15例正常人宫颈组织为观察对象。检测各组hsHPV阳性表达情况，采用免疫组化SP法检测组织内PKR、磷酸化型PKR（p-PKR）、NF-κB p65和磷酸化型NF-κB p65（p-NF-κB p65）在上述分组中的表达。结果231例中hsHPV阳性136例，阴性95例。胞浆中PKR、p-PKR在hsHPV阳性组的表达低于hsHPV阴性组（27.2%和11.0%vs 41.1%和21.1%，χ2分别为4.858、4.371，均P＜0.05），在胞浆和胞核中NF-κB p65、p-NF-κB p65在hsHPV阳性组的表达高于hsHPV阴性组（46.3%、25.7%、22.8%和12.5%vs 32.6%、14.7%、11.6%和4.2%，χ2分别为4.345、4.048、4.729、4.650，均P＜0.05）；在胞浆和胞核中NF-κB p65（+）组PKR的阳性表达率低于NF-κB p65（-）组（25.5%vs 38.0%和20.4%vs 36.3%，χ2分别为3.898、4.396，P＜0.05），p-NF-κB p65（+）组在胞浆中PKR的阳性表达率低于p-NF-κB p65（-）组（19.0%vs 36.0%，χ2=4.462，P＜0.05）。结论 hsHPV可能抑制PKR的表达及磷酸化而促进NF-κB p65的表达及磷酸化，NF-κB p65的表达及磷酸化对PKR的表达可能有抑制作用；三者间的调节作用可能与宫颈癌的发生发展有关。
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宫颈病变组织中PKR、p-PKR、p-EIF2α表达及意义
目的:探讨蛋白激酶R(PKR)→真核细胞翻译起始因子2α(EIF2α)信号传导通路中PKR、磷酸化型PKR、EIF2α(p-PKR、p-EIF2α)表达与宫颈病变的相关性、在宫颈肿瘤形成演进过程中的作用及对宫颈癌患者预后的影响.方法:采用免疫组化法检测PKR、p-PKR、p-EIF2α在63例宫颈癌、114例宫颈上皮内瘤样病变(CINⅠ～Ⅲ)、15例正常宫颈组织中的表达.结果:PKR在各组的阳性表达率随宫颈病变级别升高而升高,并与宫颈病变级别呈正相关(P < 0.05);p-PKR、p-EIF2α在各组的阳性表达率随宫颈病变级别升高而先升高、后下降;在宫颈癌组,PKR的阳性表达率明显高于p-PKR(P < 0.01);宫颈癌患者临床分期晚者病情进展快(P < 0.01),p-PKR、p-EIF2α阴性表达者病情进展快(P < 0.05).结论:PKR的表达与宫颈病变级别相关;在宫颈高级别病变中存在PKR、EIF2α磷酸化障碍或p-PKR、p-EIF2α去磷酸化机制,使宫颈病变进展,可能导致宫颈癌患者预后不良.
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PDCD4对DAP5表达及大肠癌细胞凋亡的影响
目的 探讨程序性死亡基因4(PDCD4)对死亡相关蛋白5(DAP5) 的表达及对人大肠癌细胞系LOVO凋亡的影响.方法 构建重组真核表达载体pFLAG/PDCD4,转染人大肠癌细胞LOVO,G418(500 mg/L)筛选获得稳定表达PDCD4的细胞系.RT-PCR及Western blotting检测LOVO细胞中PDCD4的mRNA及蛋白表达,流式细胞仪检测LOVO细胞凋亡情况,Western blotting检测LOVO细胞DAP5表达的变化.结果 成功建立稳定表达PDCD4的大肠癌细胞LOVO-pFLAG/PDCD4.转染PDCD4 的LOVO-pFLAG/PDCD4 组与空白对照LOVO 组、转染空载质粒的LOVO-pFLAG组相比,PDCD4蛋白表达和mRNA水平明显升高(P < 0.01);细胞凋亡率明显增加(P < 0.01);同时伴有DAP5蛋白表达明显升高(P < 0.01).结论 PDCD4能够诱导大肠癌细胞LOVO的凋亡,其机制可能与上调DAP5的表达有关.
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PKR及NF-κB在子宫颈癌中的表达
目的:探讨双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)及核因子-κB(NF-κB)在子宫颈癌中的表达水平及临床意义.方法:采用免疫组化SABC法检测37例子宫颈癌、10例正常子宫颈组织中PKR和NF-κB表达水平,并分析其与子宫颈癌临床病理特征间的相关性.结果:子宫颈癌组织中PKR阳性表达率为64.9%(24/37),正常子宫颈组织为10.0%(1/10),PKR在子宫颈癌中的表达水平较正常子宫颈组织增高(χ<'2>=9.52,P<0.01).子宫颈癌组织中NF-κB阳性表达率为72.97%(27/37),而正常子宫颈组织中无NF-κB阳性表达,子宫颈癌组织中NF-κB表达较正常子宫颈组织增高(P=0.00).PKR表达与子宫颈癌患者年龄、病理类型、临床分期、肿瘤组织分化及患者预后无关;而NF-κB表达与临床分期、肿瘤组织分化有关,而与患者年龄、病理类型及患者预后无关.结论:NF-κB异常表达与子宫颈癌的发生、发展有关.
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ADMA对内皮生长晕细胞凋亡及JNK表达的影响
目的 探讨非对称二甲基精氨酸(ADMA)对内皮生长晕细胞(EOCs)凋亡的影响及凋亡相关c-Jun氨基末端激酶(JNK)表达水平的变化.方法 从脐带血中分离培养EOCs并进行鉴定,与不同浓度ADMA(0、1、5、10、20μmol/L)共同培育48 h.在10μmol/L ADMA培养液中加入不同浓度(0、5、10、20、40μmol/L)JNK特异性抑制剂SP600125,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3及磷酸化JNK(p-JNK)水平.结果 1、5、10、20μmol/L ADMA可诱导EOCs凋亡,浓度越高凋亡率越高(F=5.681,P<0.05).ADMA还可提高凋亡因子Caspase-3的水平(F=6.733,P<0.05),诱导JNK磷酸化.SP600125可缓解ADMA造成的EOCs细胞凋亡,抑制Caspase-3及p-JNK的表达.结论 ADMA可诱导EOCs细胞凋亡,此作用可能通过激活JNK信号转导途径实现.
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缺血预处理对体外循环后心肌细胞凋亡及P13K/Akt通路的影响
目的:观察缺血预处理对犬体外循环术后心肌细胞凋亡以及P13K/Akt通路的影响.方法:10只雄性健康家犬随机分为对照组和缺血预处理组.常规建立体外循环,对照组阻断主动脉60 min后开放;预处理组于阻断主动脉前,夹闭主动脉2 min后开放3 min,反复2次.于主动脉开放90 min后取心肌标本.使用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,免疫组化法检测磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)、凋亡相关蛋白BAX及Bcl-2表达情况.结果:缺血预处理可以明显减少体外循环后心肌细胞凋亡指数,降低再灌注90 min后凋亡蛋白BAX/Bcl-2比值,上调磷酸化Akt表达.结论:缺血预处理抑制犬体外循环后心肌细胞凋亡,并激活再灌注后P13K/Akt通路.
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大鼠脑创伤后ERK通路对皮质神经细胞c-fos蛋白表达及凋亡的影响
目的:探讨细胞外调节激酶(ERK)信号转导机制在颅脑创伤中的作用.方法:建立大鼠重型弥漫性颅脑创伤(TBI)模型,92只雄性SD大鼠分为创伤组和对照组,其中创伤组又分为伤后10min、30min、3h、6h、24h、48h和72h 7个时相组,采用免疫组化、蛋白印迹方法分别定性、定量检测以上两组ERK的表达,用免疫组化法检测c-fos蛋白表达,用原位末端标记法检测凋亡细胞.结果:创伤组p-ERK1/2和c-fos的表达及TUNEL阳性细胞在不同时间大多高于对照组:创伤组p-ERK1/2蛋白表达在伤后10min已较对照组明显升高(P<0.05),伤后6h达高峰,24h仍有大量表达,仍明显高于对照组(P<0.01),至伤后48h降至对照组水平(P＞0.05);创伤组c-fos免疫反应性在伤后10min开始升高(P<0.01),伤后6h达高峰(P<0.01),48h以后明显减弱,但仍高于对照组(P<0.01);镜下对照组未见TUNEL阳性细胞,创伤组伤后3h偶见TUNEL阳性细胞,6h明显增多,48h达高峰,均显著高于对照组(P<0.01).结论:大鼠脑创伤后ERK通路过度激活,可能通过诱导c-fos蛋白表达,进而导致神经细胞凋亡.
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Akt通路与丙泊酚后处理大鼠的脑保护作用
目的:观察丙泊酚后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡的影响及其与PI3K-Akt信号转导通路的关系.方法:采用Longa法建立局灶性脑缺血再灌注模型.60只雄性SD大鼠随机分成4组,每组15只.假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血再灌注+丙泊酚后处理组(P组)、缺血再灌注+丙泊酚后处理+LY294002(LY组).分别进行神经功能评分、脑梗死体积测定、TUNEL凋亡计数、western-blotting检测Akt与p-Akt的水平.结果:与I/R组比较,P组脑梗死体积减小,细胞凋亡减少,磷酸化Akt的表达增加.而这种保护作用会被PI3K-Akt信号通路阻断剂LY294002所抑制.结论:丙泊酚后处理抑制缺血再灌注所致的神经元细胞凋亡,这种保护作用由生存信号通路PI3K-Akt的活化所介导.
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T2DM小型猪模型骨骼肌、肝脏及胰腺组织蛋白激酶B表达及磷酸化的变化
目的：研究高脂高糖饮食联合链脲佐菌素（STZ）构建巴马小型猪2型糖尿病（T2DM）模型的可行性，并观察小型猪模型骨骼肌、肝脏及胰腺组织蛋白激酶B（PKB）表达及磷酸化变化。方法将健康雄性巴马小型猪10只随机分为2组：对照组5只，喂养普通饲料；糖尿病模型组5只，高脂高糖饮食联合STZ构建巴马小型猪T2DM模型。检测2组小型猪空腹血糖、空腹胰岛素水平，并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。采用Western blot法检测骨骼肌、肝脏及胰腺组织中PKB蛋白表达及磷酸化水平。结果（1）高脂高糖饲料喂养10个月后，与对照组比较，模型组体质量、空腹血糖、空腹胰岛素水平及HOMA-IR明显升高（P＜0.01）。（2）与对照组相比，模型组STZ给药后空腹血糖水平进一步升高，空腹胰岛素水平明显下降（P＜0.01）。（3）与对照组比较，模型组骨骼肌、肝脏及胰腺组织中PKB蛋白表达及磷酸化水平明显降低（P＜0.05）。结论高脂高糖饮食联合STZ多次腹腔注射可以成功构建T2DM小型猪模型，模型组小型猪骨骼肌、肝脏及胰腺组织PKB蛋白表达及磷酸化水平明显降低。
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Akt/GSK-3β/eNOS通路在藏红花酸保护离体大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用
目的：研究藏红花酸（CRO）对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用，探讨其与丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）/糖原合成酶激酶（GSK）-3β/一氧化氮合酶（eNOS）信号通路的关系。方法 SD大鼠40只，随机数字表法均分为正常（N）组、缺血再灌注（IR）组及5、10、15 mg/L加药（CRO1、CRO2、CRO3）组，比较再灌注30 min时各组心率（HR），冠脉流量（CF），左心室内压测定(LVDP、LV+dp/dtmax、LV-dp/dtmax)。灌流结束TTC心肌染色评估梗死范围，分光光度法测定肌浆乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶（CK-MB)；Western blot检测各组心肌组织内Akt、磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt )、GSK-3β、磷酸化的糖原合成酶激酶(p-GSK)-3β、eNOS、磷酸化的一氧化氮合酶（p-NOS）。结果 IR组再灌注30 min时HR、CF、LVDP、LV+dp/dtmax、LV-dp/dtmax较N组及加药组降低，心肌梗死面积较加药组增大，LDH、CK-MB表达较N组及加药组增加（均P<0.05），CRO3组再灌注指标较CRO1组升高，梗死面积降低，LDH、CK-MB表达减少（P<0.05）。IR组Akt、GSK-3b及eNOS较N组及加药组的表达差异无统计学意义，但p-Akt、p-GSK-3β及p-NOS与N组及加药组降低，且CRO3组较CRO1组增加（均P<0.05）。结论藏红花酸能够减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤，其作用机制可能与激活Akt/GSK-3β/eNOS通路并影响其磷酸化水平有关。
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二肽基肽酶-4抑制剂对阿尔茨海默病样神经退行性变的保护作用
目的 探讨二肽基肽酶-4抑制剂(DDP-4I)对阿尔茨海默病(AD)样神经退行性改变的保护作用及其机制.方法 取对数生长期的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分为6组:空白对照组(CON组),含1‰二甲基亚砜(DMSO)的磷酸盐缓冲液(PBS)处理12 h;wortmannin干预组(W组),0.03μmol/L wortmannin处理12 h;DPP-4I干预组(DPP-4I组),10μmol/L DPP-4I处理12 h;DPP-4I与wortmannin共同干预组(DPP-4I+W组),10μmol/L DPP-4I预处理2 h,再给予0.03μmol/L wortmannin处理12 h;DPP-4I+wortmannin+Ex9-39共同干预组(DPP-4I+W+Ex9-39组),10μmol/L Ex9-39预处理2 h,再加入10μmol/L DPP-4I作用2 h,后0.03μmol/L wortmannin处理12 h;Ex9-39干预组(Ex9-39组),10μmol/L Ex9-39处理12 h.MTT法检测各组细胞活性的变化,Western blot法检测各组微管相关的tau总蛋白(tau-5)及其不同磷酸化位点(pSpS199/202、pT231和pS396)、神经丝(NFs)相关蛋白(NF-H、NF-M)以及胰岛素信号通路PI3K/Akt/GSK-3β中关键酶的磷酸化水平.结果 (1)与CON组相比,W组细胞活力下降,pSpS199/202、pT231、pS396以及NF-H/M的磷酸化水平升高,而DPP-4I组细胞活力上升,上述指标的磷酸化水平下降;与W组相比,W+DPP-4I组的细胞活力上升,上述指标的磷酸化水平下降.(2)与CON组相比,Ex9-39组细胞活力下降,pSpS199/202、pT231、pS396以及NF-H/M的磷酸化水平升高;与DPP-4I+W组相比,DPP-4I+W+Ex9-39组上述指标发生相同的变化.(3)与CON组相比,W组p-PI3K、p-Akt、p-GSK3β水平下降,DPP-4I组p-PI3K、p-Akt、p-GSK3β水平上升;与W组相比,DPP-4I+W组p-PI3K、p-Akt、p-GSK3β水平上升.结论 DPP-4I可通过提高GLP-1的浓度和激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路来改善wotmannin诱导的AD样的tau蛋白和神经丝的过度磷酸化,保护神经细胞的退行性变.
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P53对蛋白激酶R和宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响
目的：探讨P53蛋白对蛋白激酶R（PKR）表达和活性以及对宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响。方法构建过表达p53基因的重组质粒pEGFP-C1/p53，转染HeLa细胞，采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测pEGFP-C1/p53转染组、空质粒pEGFP-C1转染组及空白对照组（仅加入转染试剂）p53及PKR mRNA的表达；采用Western Blot法检测上述3组中P53、PKR、磷酸化型PKR(p-PKR)，PKR下游底物真核细胞翻译启始因子2α（eIF2α）的磷酸化型p-eIF2α的表达；采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HeLa细胞增殖活性变化，Transwell侵袭实验检测HeLa细胞侵袭能力变化。结果 pEGFP-C1/p53转染组p53及PKR mRNA的相对表达量高于pEGFP-C1转染组和空白对照组（均P＜0.05），pEGFP-C1转染组和空白对照组比较，差异无统计学意义；pEGFP-C1/p53转染组P53、PKR、p-PKR及p-eIF2α蛋白的相对表达量高于pEGFP-C1转染组和空白对照组（均P＜0.05），pEGFP-C1转染组和空白对照组比较，差异无统计学意义；pEGFP-C1/p53转染组HeLa细胞增殖活性及侵袭能力均显著低于pEGFP-C1转染组和空白对照组（均P＜0.05），pEGFP-C1转染组和空白对照组比较，差异无统计学意义。结论P53能上调PKR的表达及活性，激活PKR/eIF2α信号通路，抑制宫颈癌HeLa细胞增殖及侵袭。
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PI3K/AKT信号通路在大鼠腹腔感染性脓毒症急性肾损伤中的作用
目的 探究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在大鼠腹腔感染性脓毒症急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)中的作用.方法 使用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)的方法制备大鼠腹腔感染性脓毒症模型,按照检测时间点(24、48、72 h)分组,于术后各时间点用全自动生化分析仪检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平;用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测大鼠肾脏组织PI3K mRNA及AKT mRNA的表达水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测大鼠肾脏组织Nod样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β及IL-18的表达水平.假手术组除不进行盲肠结扎及穿孔外,其余操作与CLP组相同.结果 与假手术组相比,CLP各组大鼠血Cr、BUN水平出现明显升高(P＜0.05),肾脏组织内PI3K及AKT mRNA表达水平明显升高(P＜0.01),且其下游NLRP3炎性小体蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),同时血清TNF-α、IL-1β及IL-18水平明显升高(P＜0.01).结论 PI3K/AKT信号通路在腹腔感染性脓毒症AKI中具有重要作用,其活化诱导下游NLRP3炎性小体活化增加,进而使炎症因子释放增加并加重脓毒症病情.
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二甲双胍改善脂代谢的可能机制探讨
目的 观察二甲双胍对2型糖尿病模型大鼠脂肪组织中腺苷酸活化蛋白激酶a2(AMPKa2)的表达及对脂代谢的影响,探讨其改善血脂的可能机制.方法 高脂饮食伴一次性腹腔注射链脲佐菌素的方法制备2型糖尿病模型,追模成功后随机分为模型组(DM-C)和治疗组(DM-T).DM-T组给予盐酸二甲双胍灌胃治疗.测定大鼠治疗前后的体质量,实验末测定各组大鼠肾周及睾周脂肪质量,并检测各组大鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,计算大鼠脂肪质量/体质量比值.同时以半定量逆转录一聚合酶链反应法(RT-PCR)检测各组大鼠脂肪组织AMPKα2 mRNA的表达.结果 与DM-C组比较,DM-T组大鼠脂肪组织AMPKα2的表达及血清HDL-C显著增高,AMPKa2(0.17±0.07)vs(1.06±0.50)(P<0.01); HDL-C(0.44±0.08)mmol/L vs(0.88±0.12)mmol/L(P<0.05).DM-T组大鼠TC、TG和LDL-C比DM-C组显著降低,TC(5.22±1.70)mmol/L vs(1.87±0.57)mmol/L(P<0.05); TG(5.11±0.92)mmol/L vs(0.78±0.39)mmol/L(P<0.05);LDL-C(2.08±1.44)mmol/L vs(0.93±0.38)retool/L(P<0.05).结论 二甲双胍可能通过上调2型糖尿病大鼠脂肪组织AMPKa2表达,调节机体脂代谢.
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慢性阻塞性肺疾病大鼠磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达研究
目的 通过观察COPD大鼠中磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide-3 kinases,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)与γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(gamma glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)的表达,研究PI3K、PKB通路和γ-GCS的关系及其在COPD中可能的参与机制.方法 30只健康雄性Wistar大鼠随机分COPD组和对照组.采用每日熏香烟和两次气管内注入脂多糖法制作COPD大鼠模型.检测大鼠肺组织中γ-GCS活性,原位杂交检测肺组织中γ-GCS mRNA的表达,免疫组织化学分析肺组织中PI3K、PKB与γ-GCS蛋白水平.结果 COPD组大鼠肺组织中γ-GCS差异(P＜0.01).PI3K、PKB与γ-GCS免疫组织化学在COPD组可见肺泡、支气管活性明显高于对照组,组间差异有统计学意义(P＜0.01).原位杂交示COPD组大鼠支气管,肺泡上皮细胞与小动脉平滑肌细胞γ-GCSmRNA广泛表达,与对照组有显著性壁细胞及小血管平滑肌细胞胞浆中皆有蛋白阳性信号表达;图象定量分析示大鼠COPD组PI3K、PKB与γ-GCS蛋白表达显著高于对照组(P＜0.01).直线相关分析得出PI3K、p-PKB蛋白表达与γ-GCS活性、mRNA及蛋白表达呈正相关.结论 COPD大鼠肺组织γ-GCS蛋白和mRNA表达增高,PI3K、p-PKB蛋白也有相应高表达,提示PI3K、PKB和γ-GCS可能在COPD的发病机制中发挥作用,且可能参与了γ-GCS的信号转导通路.
关键词： 肺疾病 阻塞性 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 蛋白激酶类 信号转导 -
AMPK信号通路在七氟醚预处理增强大鼠心肌细胞缺氧复氧时抗氧化能力中的作用
目的 探讨单磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)信号通路在七氟醚预处理增强大鼠心肌细胞缺氧复氧时抗氧化能力中的作用.方法 采用随机数字表法,将大鼠胚胎心肌细胞(H9C2细胞)分为3组(n=12):对照组(C组)、缺氧复氧损伤组(H/R组)和七氟醚预处理(SP组);采用随机数字表法,将AMPK基因敲除(AMPK siRNA)的H9C2细胞分为3组(n=12):对照组(A-C组)、缺氧复氧损伤组(A-H/R组)和七氟醚预处理(A-SP组).H9C2细胞置于95％N2+ 5％CO2培养箱孵育14 h,之后置于95％O2+ 5％CO2培养箱中孵育3h,建立缺氧复氧模型.SP组H9C2细胞培养液中加入七氟醚,终浓度为2.0 mmol/L,每次孵育15 min,共3次,间隔15 min进行七氟醚预处理.七氟醚预处理结束后15min建立缺氧复氧模型.复氧3h时,采用lucigenin增强化学发光法和DHE染色测定超氧阴离子水平,并测定LDH释放量和caspase-3活性.结果 与C组比较,H/R组和SP组H9C2细胞LDH释放量增多,caspase-3活性增强,超氧阴离子水平升高(P＜0.01);与H/R组比较,SP组H9C2细胞LDH释放量减少,caspase-3活性减弱,超氧阴离子水平降低,A-H/R组H9C2细胞LDH释放量增多,caspase-3活性增强,超氧阴离子水平升高(P＜0.01);与SP组比较,A-SP组H9C2细胞LDH释放量增多,caspase-3活性增强,超氧阴离子水平升高(P＜0.01);与A-H/R组比较,A-SP组H9C2细胞LDH释放量减少,caspase-3活性减弱,超氧阴离子水平降低(P＜0.01).结论 AMPK信号通路参与了七氟醚预处理增强大鼠心肌细胞缺氧复氧时的抗氧化能力,但并未起主要作用.
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异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌住损伤时蛋白激酶B活性的影响
目的 评价异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌住损伤时蛋白激酶B(Akt)活性的影响,以探讨异丙酚脑保护作用的机制.方法 健康SD大鼠90只,体重260～300 g,雌雄不拘,随机分为5组(n=18):假手术组(S组);局灶性脑缺血再灌注组(IR组)、P1-3组阻断大脑中动脉2 h,开放22 h,制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,分别于再灌注前3 min至再灌注5 min时经股静脉输注生理盐水2.5ml、异丙酚1、2、5 mg/kg(异丙酚采用生理盐水稀释至2.5 ml).于再灌注22 h时行神经行为学评分;测定大鼠脑梗死质量、免疫组化法检测大鼠脑组织caspase-3表达、Western blot法检测Akt活性.结果 与S组比较,再灌注22 h时IR组、P1-3组神经行为学评分、脑梗死质量比升高,脑组织caspase-3表达上调,P1组和P2组Akt活性升高,IR组和P3组Akt活性降低(P<0.05);与IR组比较,P1组和P2组大鼠神经行为学评分,脑梗死质量比降低,腩组织caspase-3表达下调,Akt活性升高(P<0.05).结论 静脉输注异丙酚1、2 mg/kg可通过升高Akt活性,抑制脑组织细胞凋亡,减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.
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PI3K/Akt信号转导通路在二氮嗪预处理减轻大鼠海马神经元缺氧复氧损伤中的作用
目的 探讨PDK/Akt信号转导通路在二氮嗪预处理减轻大鼠海马缺氧复氧损伤中的作用.方法 新生SD大鼠,出生时间<24 h,体重5-6 g,断头取海马组织,胰蛋白酶消化后,将神经元接种于96孔板或直径35 mm培养皿中,培养12 d后,随机分为6组:对照组(C组)、缺氧复氧组(HR组)、二氮嗪100μmol/L预处理组(Dz组)、二氮嗪100 μmol/L预处理+5-羟癸酸100μmol/L预处理组(DZ+HD组)、5-羟癸酸100 μmol/L预处理组(HD组)和二氮嗪100 μmol/L预处理+LY294002 50μmol/L预处理组(Dz+LY组),每组48孔或12皿.C组不给予任何处理,其余5组每天给予相应药物预处理l h,连续3 d,然后缺氧4 h,复氧24 h,测定神经元活力、凋亡率、Akt、Bcl-2和Bax的表达水平.结果 与C组比较,其余各组海马神经元活力降低.凋亡率升高,Akt和Bcl-2和Bax表达上调(P<0.01);与HR组比较.DZ组海马神经元活力升高.凋亡率降低,Altt和Bel-2表达上调,Bax表达下调(P<0.01);与Dz组比较,DZ+HD组、HD组和Dz+LY组海马神经元活力降低,凋亡率升高.Akt和Bel-2表达下调,Bax表达上调(P<0.01).结论 二氮嗪预处理可能通过激活PDK/Akt信号转导通路,上调Bel-2表达,下调Bax表达,抑制神经元凋亡,从而减轻大鼠海马缺氧复氧损伤.
