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炎症小体与慢性肝脏疾病
多种慢性肝脏疾病都与组织的无菌性炎症有关.核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族形成的多蛋白复合物--炎症小体,作为炎症反应的核心,能被多种外源或内源性刺激激活,引起下游炎症因子分泌,诱发炎症反应,其过度激活会造成组织损伤.现已证实炎症小体在酒精性和非酒精性脂肪性肝病、肝脏缺血再灌注损伤及药物性肝损伤等疾病中起关键作用,是肝脏发生纤维化和癌变的决定因素之一.本文就炎症小体的结构、活化信号及激活通路、调节机制及其与慢性肝脏疾病关系的研究进展作一综述,以期为慢性肝脏疾病的治疗提供新的方向和靶点.
关键词： 肝疾病 慢性病 炎症 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 白细胞介素类 -
腹腔注射内毒素对成年和老年大鼠记忆功能的影响
目的 探讨腹腔注射内毒素对成年和老年大鼠记忆功能的影响.方法 将成年和老年雄性SD大鼠各16只随机分为4组:成年大鼠生理盐水组(A组)、成年大鼠内毒素组(B组)、老年大鼠生理盐水组(C组)和老年大鼠内毒素组(D组),每组8只.经腹腔注射内毒素250μg/kg或等体积的生理盐水,24 h后记录大鼠从明室进入暗室的潜伏期作为记忆成绩.取海马组织,应用酶联免疫吸附法测定白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)蛋白的表达,并检测其中半胱氨酸天冬氨酸酶1(Caspase-1)的活性.结果 D组大鼠进入暗室的潜伏期明显短于C组,差异有统计学意义(P<0.01),而B组与A组大鼠进入暗室的潜伏期差异无统计学意义(P>0.05);D组大鼠海马组织caspase-1活性较B组明显升高(P<0.05);B组大鼠海马IL-1β蛋白表达较A组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),D组大鼠海马IL-1β蛋白表达明显高于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 腹腔注射内毒素后老年大鼠记忆功能受损,但并不影响成年大鼠的记忆功能,这可能与衰老加重内毒素诱导的海马IL-1β蛋白表达升高有关.
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缺氧缺血新生大鼠脑组织caspase-1和白细胞介素18 mRNA表达及其关系探讨
目的研究caspase-1及其底物之一白细胞介素(IL)-18 mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用及其意义.方法 112只7日龄新生Wistar大鼠按照完全随机化方法分为对照组、HIBD 3、8、24 h、3、6和14 d组,每组16只.其中8只采用RT-PCR 方法检测caspase-1和IL-18 mRNA在HIBD后脑皮层中的表达及其相关性,另外8只光镜下观察脑组织病理学改变.结果对照组有caspase-1 mRNA少量表达(0.2918 ± 0.0809),HIBD 24 h组其水平开始增加(0.5222 ± 0.0941,与对照组比较P<0.01),6 d达高峰(0.7886 ± 0.0480,与其余各组相比P<0.01), 此后下降,但HIBD 14 d (0.5314 ± 0.1272)仍可检测出.对照组IL-18 mRNA水平为0.3218 ± 0.0466,HIBD 24 h至6 d其表达逐渐增加(24 h: 0.5823 ± 0.0740; 3 d:0.6976 ± 0.1073; 6 d: 0.9110±0.0647,与对照组比较均为P<0.01),并达高峰(HIBD 6 d组与其余各组相比P<0.01).HIBD后IL-18 mRNA的表达在时间上与caspase-1具有紧密相关性(r=0.871,P<0.01).组织学检查发现神经元变性、坏死在HIBD 1～6天逐渐加重.结论 HIBD后caspase-1和IL-18 mRNA的表达逐渐增加,其变化规律与光镜观察到的脑损伤进展的时间框架吻合,提示它们均参与了新生鼠HIBD的病理形成过程.
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NLRP3炎性小体及下游因子IL-1β/IL-18在变应性鼻炎大鼠模型中的表达及意义
目的 检测天然免疫因子NLRP3炎性小体及下游因子白细胞介素1β(IL-1β)/IL-18在变应性鼻炎(AR)大鼠模型中的表达情况及其意义.方法 40只健康SD大鼠,雌雄不限,随机数字表法分为对照组(A组)、AR模型1组(B组)、AR模型2组(C组)、AR模型3组(D组),每组10只.A组不加卵清蛋白,B、C、D组用卵清蛋白及氢氧化铝基础致敏后,用5％卵清蛋白生理盐水溶液分别滴鼻10、20、30 d,1次/d,激发完成记录大鼠鼻部症状并处死大鼠.苏木精-伊红(HE)染色观察嗜酸粒细胞(EOS)计数、免疫组化观察NLRP3、半胱氨酸天冬酶1(Caspase-1)在各组大鼠鼻黏膜的表达情况,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠卵清蛋白特异性IgE (OVA-sIgE)、IL-18、IL-1β在各组大鼠外周血中的相对表达量及IL-1β、IL-18在各组大鼠鼻腔冲洗液中的含量.以SPSS 17.0软件进行统计学分析.结果 嗜酸粒细胞(EOS)计数、行为学评分、OVA-sIgE浓度在AR模型组高于对照组,差异有统计学意义(P值均＜0.05),AR模型组之间比较差异亦有统计学意义(P值均＜0.05).NLRP3在B、C、D组鼻黏膜中的相对表达量分别为48.80±10.75、71.80±16.98、100.32±13.91,高于对照组的17.47±5.59,差异有统计学意义(F=78.399,P＜0.05);Caspase-1在B、C、D组鼻黏膜中的相对表达量分别为36.33 ±4.71、50.87±11.18、73.10±14.77,高于对照组的11.48±2.70,差异有统计学意义(F=71.727,P＜0.05);IL-1β在B、C、D组外周血中的含量分别为(56.46±10.13)、(82.37±11.93)、(112.01±22.91) pg/ml,高于对照组的(38.26±4.66)pg/ml,差异有统计学意义(F =51.981,P＜0.05);IL-18在B、C、D组外周血中的含量分别为(177.92±23.63)、(194.33±20.78)、(234.06±31.70) pg/ml,高于对照组的(89.71±5.56)pg/ml,差异有统计学意义(F =73.295,P＜0.05).且AR模型组之间比较差异亦有统计学意义(P值均＜0.05).NLRP3表达量与行为学评分、OVA-sIgE浓度、EOS细胞计数呈正相关(r值分别为0.833、0.873、0.868,P值均＜0.01).结论 NLRP3炎性小体及下游因子IL-1β/IL-18参与了AR的发病过程,可能与AR的炎性反应程度有关.
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糖尿病视网膜病变患者视网膜组织学改变和细胞生化检测指标异常分析
目的评价糖尿病患者视网膜组织学改变和细胞生化检测指标异常.方法将视网膜分为4个象限,胰酶消化法分离视网膜血管,比较各象限病变程度,将颞侧和鼻侧视网膜匀浆后检测其细胞生化指标.结果视网膜微动脉瘤、无细胞血管及凋亡周细胞的数量以颞侧多于鼻侧.视网膜各象限的糖转移因子、蛋白激酶C-β、半胱氨酸蛋白酶-1的检测结果明显不同.结论视网膜微血管病变和细胞生化检测指标异常程度在糖尿病视网膜病变患者视网膜的4个象限分布不均,推测其分布差异在糖尿病视网膜病变的发生、发展中起重要作用.(中华眼科杂志,2004,40:689-691)
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Caspase-1激活的细胞因子在实验性重症急性胰腺炎肾损害中的作用
目的 研究Caspase-1激活的细胞因子在实验性重症急性胰腺炎(SAP)肾损害中的作用.方法 SD大鼠32只,随机分为正常对照组(HC组)、SAP6h组、SAP12h组、SAP18h组,每组8只.采用5%牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱发大鼠SAP模型.通过HITACHI-7150型自动生化分析仪检测大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr),ELISA法测定血清IL-1β水平,酶化学法测定肾组织髓过氧化物酶(MPO)活性,半定量RT-PCR检测肾内Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA的表达.结果 SAP造模后各组血清BUN、Cr和IL-1β水平显著升高,并伴有肾组织MPO显著增加,与HC组相比差异均具有统计学意义(P＜0.01).HC组肾内可见Caspase-1及IL-18 mRNA表达,但IL-1β mRNA表达较弱;SAP各组肾内Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA表达显著上调(P＜0.01).结论 Caspase-1激活、IL-1β及IL-18的过度表达可能与SAP肾损害有关.
关键词： 胰腺炎 急性坏死性 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 白细胞介素1 白细胞介素18 -
炎性体抗病毒信号通路与宫颈癌
炎性体是存在于免疫活性细胞内的大分子、多蛋白复合体,能够感受细菌、病毒等外在病原体的刺激激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1),促进白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18前体的加工成熟,参与机体炎性反应与免疫应答,诱导一种特殊的细胞死亡,即细胞焦亡(pyroptosis).细胞焦亡是一种不同于凋亡和坏死的程序性细胞死亡形式,其特点为细胞在死亡过程中发生渗透性崩解,释放大量的炎性细胞因子,对邻近细胞产生促炎效应,快速启动天然免疫,能够对抗肿瘤的形成.综述近年炎性体抗病毒信号通路与宫颈癌相关的研究进展.
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发酵虫草菌粉对糖尿病大鼠心肌NLRP3表达的影响
目的 探讨发酵虫草菌粉对糖尿病心肌病的治疗作用及其对心肌核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响.方法 雄性SD大鼠45只,随机分为正常对照组(CON组)、糖尿病组(DM组)和发酵虫草菌粉治疗组(CS组,1 g·kg-1·d-1),每组15只.DM组和CS组大鼠通过尾静脉注射链脲佐菌素(45 mg/kg)诱导糖尿病模型.CS组每日给予1次发酵虫草菌粉溶液灌胃,CON组和DM组给予相同体积生理盐水灌胃.灌胃18周后取材.HE染色观察心肌组织形态学改变;电镜观察心肌超微结构改变;Western blotting法检测心肌NLRP3的表达;免疫组化法检测各组大鼠心肌NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表达水平.结果 (1)电镜下,DM组大鼠出现局部心肌纤维变性坏死、部分线粒体损伤;CS组大鼠心肌病变较DM组明显减轻.(2)Western blotting结果显示,DM组和CS组大鼠心肌NLRP3表达均较CON组显著上升,CS组大鼠心肌NLRP3表达较DM组降低.(3)免疫组化结果显示,DM组和CS组大鼠心肌NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达均较CON组显著上升,CS组均较DM组降低.结论 发酵虫草菌粉能减轻糖尿病大鼠心肌病变,该作用可能与其抑制心肌NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表达有关.
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P2X7R拮抗剂对小鼠慢性胰腺炎的作用及机制研究
目的：探讨嘌呤能P2X7受体（P2X7R）拮抗剂——氧化三磷酸腺苷（OxATP）和亮蓝G（BBG）在抑制下游靶蛋白——核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NLRP3）炎性体活化和慢性胰腺炎（CP）胰腺纤维化进程中的作用及可能机制。方法40只C57BL/6小鼠随机均分为正常对照组、CP模型组、OxATP组和BBG组。除正常对照组腹腔注射与处理组等体积的生理盐水外，其余组均通过腹腔注射雨蛙素法制作CP小鼠模型（6周）。造模结束后，CP模型组、OxATP组和BBG组分别予以腹腔注射生理盐水、OxATP（20μL，300μmol/L）和BBG（20μL，10μmol/L）处理，连续注射2周。然后处死各组小鼠并取胰腺组织，行病理学检查，以HE染色对胰腺病理组织学（炎性细胞浸润、腺泡萎缩及纤维化程度）进行评分，天狼星红染色和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化染色分别对胰腺纤维化程度进行评估；免疫组化法检测胰腺P2X7R、NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）中的累积光密度（IOD）值。结果与正常对照组比，CP模型组炎症损伤组织学评分增加，胰腺纤维化程度显著增加，P2X7R、NLRP3和Caspase-1免疫组化IOD值显著升高（P<0.05）；与CP模型组相比，OxATP和BBG组炎症损伤组织学评分降低，HE染色纤维化评分、天狼星红染色和α-SMA免疫组化染色均显著减轻（P<0.05），胰腺P2X7R、NLRP3和Caspase-1 IOD值均明显降低（P<0.05）。结论 P2X7R拮抗剂OxATP 和BBG能够显著减轻CP小鼠模型的慢性炎症和纤维化程度，阻断P2X7R-NLRP3炎性体信号通路，这有望成为治疗CP及其纤维化进程的一种潜在新策略。
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hrHPV在宫颈癌中的感染状况及对Caspase-1和IL-1β表达的影响及意义
目的：探讨宫颈癌中高危人乳头瘤病毒（hrHPV）感染状况及对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-1和白细胞介素（IL）-1β表达的影响及临床意义。方法以102例宫颈癌患者（宫颈癌组）、60例宫颈上皮内瘤样病变（CIN组）及宫颈正常的患者30例（对照组）为研究对象，PCR-反向点杂交法结合DNA芯片技术对各组hrHPV DNA进行感染和分型检测。免疫组化SP法检测各组Caspase-1和IL-1β的表达。分析宫颈癌患者hrHPV感染者（阳性组）和阴性组、单一类型感染与多重感染中2指标的表达差异。考察Caspase-1和IL-1β表达与宫颈癌患者临床病理参数的关系。结果宫颈癌组hrHPV感染（阳性组）75例（73.5％），检出hrHPV 11种，其中单一类型和多重hrHPV感染分别为61例（81.3％）和14例（18.7％）。宫颈癌组hrHPV感染率高于CIN组及对照组（36.7％和6.7％）；Cas?pase-1和IL-1β阳性表达率（61.8%和51.0%）高于对照组（26.7%和23.3%），Caspase-1阳性表达率高于CIN组（40.0%，均P＜0.01）。宫颈癌患者hrHPV DNA表达阴性组的Caspase-1和IL-1β阳性表达率（77.8%和74.1%）均高于相应阳性组（56.0%和42.7%）。Caspase-1和IL-1β在hrHPV单一感染组与多重感染组中阳性表达率差异均无统计学意义（P＞0.05）。宫颈癌组的Caspase-1和IL-1β蛋白的表达与癌细胞分级、肿瘤大小、淋巴结转移及临床分期有关（P＜0.05或P＜0.01）。结论宫颈癌中存在hrHPV单一和多重感染，且感染率高；hrHPV可抑制Caspase-1和IL-1β的表达，促进宫颈癌进展。
关键词： 宫颈肿瘤 人乳头瘤病毒 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 白细胞介素1β 炎性体 -
PI3K/AKT信号通路在大鼠腹腔感染性脓毒症急性肾损伤中的作用
目的 探究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在大鼠腹腔感染性脓毒症急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)中的作用.方法 使用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)的方法制备大鼠腹腔感染性脓毒症模型,按照检测时间点(24、48、72 h)分组,于术后各时间点用全自动生化分析仪检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平;用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测大鼠肾脏组织PI3K mRNA及AKT mRNA的表达水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测大鼠肾脏组织Nod样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β及IL-18的表达水平.假手术组除不进行盲肠结扎及穿孔外,其余操作与CLP组相同.结果 与假手术组相比,CLP各组大鼠血Cr、BUN水平出现明显升高(P＜0.05),肾脏组织内PI3K及AKT mRNA表达水平明显升高(P＜0.01),且其下游NLRP3炎性小体蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),同时血清TNF-α、IL-1β及IL-18水平明显升高(P＜0.01).结论 PI3K/AKT信号通路在腹腔感染性脓毒症AKI中具有重要作用,其活化诱导下游NLRP3炎性小体活化增加,进而使炎症因子释放增加并加重脓毒症病情.
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脊髓caspase-1在大鼠切口痛中的作用
目的 评价脊髓caspase-1在大鼠切口痛中的作用.方法 取鞘内置管成功的成年雄性SD大鼠18只,体重250～ 280 g,采用随机数字表法分为3组(n=6):切口痛组(Ⅰ组)、切口痛+二甲基亚砜组(ID组)和切口痛+caspase-1抑制剂Ac-YVAD-CMK组(IA组).于切口痛模型制备前10min,Ⅰ组鞘内注射0.9％生理盐水20 μl;ID组鞘内注射二甲基亚砜20μl,然后用0.9％生理盐水10μl冲洗导管;IA组鞘内注射Ac-YVAD-CMK 1 nmol/μl(溶于20μl二甲基亚砜中),然后用0.9％生理盐水10μl冲洗导管.分别于鞘内置管前2h(T0)、鞘内置管后3 d(T1)、模型制备后2、6、24和48 h(T2-5)时测定术侧足机械缩足反应阈.于T5时痛阈测定结束后,处死大鼠,取脊髓腰膨大,采用West-ern blot法检测caspase-1(p20)表达,采用ELISA法检测IL-1β含量.结果 与To比较,Ⅰ组和ID组T2-5机械缩足反应阈降低(P＜0.05),IA组T1-5机械缩足反应阈差异无统计学意义(P＞0.05);与Ⅰ组和ID组比较,IA组T2-5机械缩足反应阈升高,脊髓caspase-1(p20)表达水平和IL-1β含量降低(P＜0.05);Ⅰ组和ID组各时点机械缩足反应阈、脊髓caspase-1 (p20)表达和IL-1β含量比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓caspase-1的活化可促进IL-1β的释放,从而参与大鼠切口痛的病理生理过程.
关键词： 疼痛 手术后 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 脊髓 -
半胱氨酸蛋白酶-1及其下游因子白细胞介素-18和33在类风湿关节炎患者血清中的表达
目的 检测类风湿关节炎(RA)患者血清半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)及其下游因子白细胞介素(IL)-18、IL-33水平,并探讨三者在RA中的作用.方法 收集56例RA患者及22名健康体检者血清及临床资料,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测caspase-1、IL-18及IL-33水平.采用Kruskal-Walls及Mann-Whitney U检验方法对血清caspase-1,IL-18和IL-33进行比较,并通过Spearman方法进行相关性分析.结果 RA患者caspase-1水平明显高于健康人群[(32±26) ng/ml与(15±6) ng/mL,P＜0.01],且活动组高于缓解组,未治疗者高于接受治疗者[(47±27)与(25±22) ng/mL,P＜0.01].RA患者IL-18和IL-33水平亦明显高于健康人群[分别为(121±121)与(58±33) ng/L,(1032±1011) ng/L与(510±231) ng/L,P＜0.05],且活动组高于缓解组,未治疗者高于接受治疗者[分别为(172±139) ng/L与(97±106) ng/L,(1468±1039) ng/L与(825±941) ng/L,P＜0.01].caspase-1与IL-18,IL-33呈正相关(r分别为0.824,0.854,P均＜0.01).IL-18与IL-33呈正相关(r=0.800,P＜0.01).caspase-1,IL-18及IL-33与病程、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、压痛关节数及肿胀关节数无相关性.结论 caspase-1及其下游因子IL-18、IL-33在RA患者中升高,且前者与后两者密切相关,caspase-1可能在RA中发挥重要作用.
关键词： 关节炎 类风湿 白细胞介素18 白细胞介素33 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 -
原发性痛风患者外周血单个核细胞半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1基因转录剪接体的研究
目的 了解原发性痛风(PG)患者的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(CASP1)基因及各转录剪接体mRNA表达水平及作用.方法 用半定量RT-PCR法检测96例PG患者和96名健康体检者(HC) PBMCs中CASP1基因及各转录剪接体mRNA表达水平.用蛋白印迹法检测PG患者和HCPBMCs中CASP1、NF-κB(p105/p50)蛋白表达水平.对各观察组间的mRNA表达水平采用Wilcoxon秩和检验,蛋白表达水平采用t检验.结果 PG组CASP1基因mRNA表达量显著高于健康体检组[0.199 7(0.634 5)和1.151 7(1.969 6),Z=-6.454,P=0.000],PG组CASP1基因转录剪接体6、7 mRNA表达量显著低于HC组[分别为4.448 7(5.029 6)和3.020 9(2.877 3)、4.930 1(4.8861)和3.456 4(2.655 6),Z均=-3.735,P均=0.000],CASP1基因转录剪接体α、β、γ、x mRNA表达在PG组与HC组差异无统计学意义[分别为2.083 1(4.404 5)和2.043 1(2.688 2)、2.249 5(3.328 0)和2.082 6(3.119 9)、2.911 3(4.287 1)和2.789 8(2.538 2)、2.413 5(4.712 4)和2.511 3(2.429 0),P均＞0.05];PG组CASP1蛋白表达显著低于HC组(64.82±10.76和0.78±0.24,t=76.379,P＜0.01),PG组NF-κB (p105/p50)蛋白表达显著高于HC组(0.127±0.008和0.263±0.106,t=-26.322,P＜0.01).结论 CASP1基因及各转录剪接体mRNA在PG患者中表达异常,提示在PG患者的炎症反应中CASP1基因及各转录剪接体可能发挥重要的介导作用;PG患者CASP1蛋白表达水平与CASP1基因部分转录剪接体mRNA表达趋势一致,提示若对CASP1部分基因转录剪接体进行有效的药物干预可能对PG患者的治疗起到一定的作用.
关键词： 痛风 基因 剪接体 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 -
细胞因子反应调节蛋白A对软骨细胞白细胞介素-1β转化酶表达的作用研究
目的 探讨壳聚糖(CS)介导细胞因子反应调节蛋白A(CrmA)对软骨细胞IL-1β转化酶(ICE)和IL-1β mRNA和蛋白的表达作用.方法 体外培养兔关节软骨细胞,分别加入PBS、10 μg/mlCS/pcDNA3.1(+)和CS/pcDNA3.1 (+)CrmA处理后,加入10 ng/ml IL-1β共培养,采用实时定量PCR方法检测软骨细胞ICE和IL-1β mRNA的表达.蛋白印迹法分析软骨细胞ICE和IL-1β蛋白的表达.结果 ICEmRNA在CS/pcDNA3.1 (+)CrmA组(0.52±0.09)软骨细胞中的表达显著低于CS/pcDNA3.1(+)组(0.84±0.11,t=4.42,P＜0.01)和PBS组(1.00±0.10,t=6.58,P＜0.01),软骨细胞ICE蛋白在CS/pcDNA3.1(+)CrmA组(0.20+0.03)的表达明显低于CS/pcDNA3.1(+)组(0.37±0.05,t=4.85,P＜0.01)和PBS组(0.44±0.07,t=6.68,P＜0.01),CS/pcDNA3.1(+)组软骨细胞ICE mRNA和蛋白的表达与PBS组比较差异无统计学意义.与CS/pcDNA3.1(+)组(0.69±0.06,t=3.50,P＜0.01)和PBS(0.99±0.04,t=11.12,P＜0.01)组比较,CS/pcDNA3.1 (+)CrmA组软骨细胞IL-1β t=3.50,(0.55±0.08) mRNA表达明显降低.软骨细胞IL-1β蛋白的表达在CS/.pcDNA3.1 (+)CrmA组(0.230±0.020)显著低于CS/pcDNA3.1(+)组(0.450±0.060,t=5.07,P＜0.01)与PBS组(0.610±0.090,t=8.70,P＜0.01),CS/pcDNA3.1(+)组与PBS组比较软骨细胞IL-1β mRNA和蛋白的表达差异有统计学意义(t=7.61,P＜0.01;t=3.63,P＜0.01).结论 壳聚糖介导CrmA能够显著抑制ICEmRNA和蛋白的表达,从而下调IL-1β mRNA和蛋白的表达,这可能成为CS/pcDNA3.1 (+)CrmA抑制OA软骨退变的作用机制之一.
关键词： 软骨细胞 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 细胞因子反应调节蛋白A -
血管性痴呆大鼠模型学习记忆障碍与海马半胱氨酸蛋白酶1蛋白的表达空白对照及量化盲法评估
目的:定量测定血管性痴呆大鼠的学习记忆成绩,同时观察海马半胱氨酸蛋白酶1蛋白在血管性痴呆大鼠海马中的表达及其意义.方法:实验于2004-01/11在中国医科大学动物实验室进行,取健康雄性SD大鼠100只,随机分正常对照组(n=28,仅分离双侧颈总动脉)、假手术组(n=28,仅麻醉,不做手术),和血管性痴呆组(n=44).采用血管阻断的方法,复制大鼠血管性痴呆模型,每组随机取10只大鼠,采用水迷宫实验进行行为学检测,定量测定其学习记忆成绩.每组剩余大鼠在缺血后24,48,72,96,120 h及7 d处死,用免疫组化方法检测海马区半胱氨酸蛋白酶1蛋白表达水平的变化.结果:100只大鼠死亡4只,进入结果分析96只.①水迷宫学习成绩:血管性痴呆组大鼠游完全程的时间、进入盲端的次数及时间[(3.78±1.65)min,(5.21±1.56)次,(1.90±1.38)min]明显多于正常对照组及假手术组[(0.68±0.12)min,(1.13±0.21)次,(0.21±0.08)min;(0.76±0.13)min,(0.98±0.32)次,(0.31±0.09)min].②水迷宫记忆成绩:血管性痴呆组大鼠游完全程的时间、进入盲端的次数及时间[(2.98±1.05)min,(5.62±2.11)次,(1.78±0.84)min]明显多于正常对照组及假手术组[(0.24±0.16)min,(0.48±0.73)次,(0.04±0.02)min;(0.35±0.20)min,(0.52±0.80)次,(0.10±0.02)min].③血管性痴呆组脑缺血后24 h半胱氨酸蛋白酶1蛋白表达,为(82±12)个/视野,第3天时达高峰[(198±20)个/视野],明显多于正常对照组和假手术组[(17±3),(20±3)个/视野].结论:血管性痴呆大鼠发生了明显的学习记忆功能障碍,在血管性痴呆大鼠海马脑区有大量半胱氨酸蛋白酶1蛋白表达.作为一种抑制细胞凋亡的基因,半胱氨酸蛋白酶1蛋白可能对血管性痴呆大鼠脑内与学习记忆密切相关的海马神经元有保护作用.
关键词： 痴呆 血管性 海马 记忆障碍 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 -
细胞焦亡及炎性小体在大鼠术后认知功能障碍中的作用
目的 探讨细胞焦亡及炎性小体在大鼠术后认知功能障碍(POCD)中的作用.方法 24只雄性SD大鼠,体重260 ～ 290 g,随机分成4组:NS组、POCD 2W组、POCD 4W组、POCD 6W组,每组6只.采用海马区注射Aβ1-40法制备大鼠POCD模型,NS组大鼠注射等量的生理盐水进行对照.分别于术后2、4、6周行水迷宫行为学测试后处死各组大鼠.采用Western blot法检测各组大鼠海马内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达情况,采用ELISA法测定大鼠海马IL-1β和IL-18的含量,采用吖啶橙/溴乙锭荧光比色测定海马内细胞焦亡情况.结果 与NS组相比,POCD 2W组大鼠上台前路程和逃避潜伏期变化差异均无统计学意义(P＞0.05),而POCD 4W组和POCD 6W组大鼠上台前路程和逃避潜伏期均延长(P＜0.05);与NS组和POCD 2W组相比,POCD 4W组和POCD 6W组大鼠海马内ASC、IL-1β和IL-18表达显著增强(P＜0.05).与NS组、POCD 2W组和POCD 4W组相比,POCD 6W组大鼠海马内caspase-1表达增强,OD值升高(P＜0.05).结论 大鼠术后认知功能障碍形成的部分机制可能与海马内炎性小体激活后所致的细胞焦亡有关.
关键词： 细胞焦亡 炎性小体 术后认知功能障碍 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 炎症反应 -
急、慢性布鲁菌病患者核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体观察
目的 比较急、慢性布鲁菌病(简称布病)患者治疗前外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18水平,了解急、慢性布病免疫特点,寻找布病临床治疗免疫靶点.方法 将2016年3-4月在乌兰察布市地方病防治中心治疗的急、慢性布病患者(急、慢性组)各42名作为研究对象,同时选取当地健康人群20名作为对照组.布病的诊断标准按《布鲁氏菌病诊断标准》进行.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定急、慢性组和对照组血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18水平.结果 急、慢性组和对照组血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18水平[(1 264.40±424.74)、(1 350.67±468.93)、(192.96±61.52),(162.74±54.23)、(172.44±60.56)、(120.10±61.52),(47.23±13.79)、(46.68±14.72)、(27.71±8.71),(202.23±65.24)、(169.19±54.33)、(108.62±41.39)ng/L]比较,差异均有统计学意义(F=61.96、6.26、16.68、18.31,P均＜0.01);与对照组比较,急、慢性组NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18水平均明显升高(P均＜0.05);与慢性组比较,急性组IL-18水平明显升高(P＜0.05),而急、慢性组NLRP3、Caspase-1、IL-1β水平无明显差异(P均＞0.05).结论 急、慢性布病患者通过NLRP3炎性小体发动的固有免疫应答相同,IL-18水平差异可能对急、慢性布病免疫应答产生了影响.
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黑素瘤缺乏因子2在乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎发病机制中的作用
目的 初步探讨黑素瘤缺乏因子2(AIM2)激活与表达在HBV相关性肾小球肾炎(HBV-GN)发病机制中的作用.方法 54例HBV-GN患者为研究组,25例慢性肾小球肾炎患者为阴性对照组,6例慢性乙型肝炎患者为阳性对照组.免疫组织化学法分别测定研究组、阴性对照组患者肾组织及阳性对照组患者肝组织中AIM2、Caspase-1、IL-1β的表达.组间比较采用卡方检验,相关性分析采用Spearman相关分析.结果 54例HBV-GN患者肾组织中AIM2的阳性表达率为81.4％,25例慢性肾小球肾炎组为4.0％,两组间差异有统计学意义(x2=38.746,P＜0.01).AIM2在6例慢性乙型肝炎患者肝组织中均有表达.HBV-GN组AIM2的表达强度与Caspase-1呈正相关(rs=0.444,P＜0.01),IL-1β的表达强度与Caspase-1也呈正相关(rs=0.515,P＜0.01).HBV-GN患者中血HBV DNA≥1×105拷贝/mL者AIM2的表达强度高于HBV DNA＜1×105拷贝/mL者(x2=6.097,P＜0.05).结论 AIM2的激活与HBV-GN有关,可能通过Caspase-1激活,释放炎性因子IL-1β.
关键词： 肝炎病毒 乙型 肾小球肾炎 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 白细胞介素1β -
NLRP3炎性体与肾脏疾病
炎性体(inflammasomes)是一类通过活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)来间接调控白细胞介素1β(IL-1β)与IL-18的成熟和分泌的蛋白复合体.除了作为机体固有免疫及应激系统的重要防御成分,炎性体还参与了多种疾病如动脉粥样硬化、糖尿病、淀粉样变性及其他自身免疫性疾病的发生和进展.近年来,炎性体在肾脏病中的作用备受关注,且随着研究的深入,其作用机制也逐渐明确.本文重点讨论炎性体的基本概念、调控机制及其与肾脏疾病发生发展的关系.
关键词： 肾脏疾病 炎性体 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 白细胞介素
