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NLRP3基因单核苷酸多态性TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立
目的 建立以TaqMan探针实时荧光PCR技术为基础的核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(Nucleotide-binding oligomerization domain,Leucine rich Repeat and Pyrin domain containing,NLRP3)基因单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)检测方法.方法 以20份健康人血液样本为对象,选择NLRP3基因的两个SNP位点(rs3806265和rs35829419),针对每个位点分别设计1对PCR引物和2条TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增,对SNP位点进行分型.用常规PCR和基因测序的方法对TaqMan探针实时荧光PCR分型的结果进行验证.结果 用建立的TaqMan探针实时荧光PCR分型法对20份样本进行检测,其中rs3806265位点发现Tr基因型3份,TC基因型8份,CC基因型9份;rs35829419位点发现CC基因型20份,无AC和AA基因型.分型结果与常规PCR及基因测序分型方法完全一致.结论 基于TaqMan探针技术的实时荧光PCR方法简单、快速,可实现对NLRP3基因位点的分型检测.
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化瘀解毒方对梗阻性肾病大鼠肾脏NLRP3、Caspase1、 IL-1β表达的影响
目的 观察化瘀解毒方对梗阻性肾病大鼠肾脏核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3[NOD(nucleotide-binding oligomerization domain)-like receptor protein 3,NLRP3]、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1 (Caspase-1)、IL-1β表达的影响.方法 将40只清洁级SD大鼠随机分为假手术组(1 0只)、造模组(30只),采用单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)手术复制梗阻性肾病模型,成功后随机分为模型组、西药组和中药组,每组各10只.西药组给予依普利酮100 mg/(kg·d),中药组给予化瘀解毒方13.7g/(kg ·d),假手术组和模型组给予等量生理盐水,连续给药10天.检测各组血清IL-1β含量,检测肾脏NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达,检测肾脏TUNEL阳性细胞率.结果 假手术组NLRP3表达不明显,Caspase-1及IL-1β呈弱表达,仅见少量TUNEL阳性细胞.与假手术组比较,模型组血清IL-1β含量升高(P＜0.01),肾组织NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白及mRNA表达升高(P＜0.01);NLRP3主要表达于肾间质巨噬细胞及肾小管上皮细胞,Caspase-1及IL-1β主要见于肾小管上皮细胞胞浆;TUNEL阳性细胞增多,以间质扩张的远端小管上皮细胞为主(P＜0.01).与模型组比较,两个给药组血清IL-1β含量降低(P＜0.01),NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白及mRNA表达降低,TUNEL阳性细胞率降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 化瘀解毒方可下调NLRP3、Caspase-1、IL-1 β蛋白及mRNA表达,减轻肾组织炎症损伤.
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重症溃疡性结肠炎患者血清NOD样受体蛋白3、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1和核因子κB mRNA表达水平及临床意义
目的 探讨重症溃疡性结肠炎(UC)患者血清NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(CASP1)和核因子κB(NF-κB)mRNA表达水平及临床意义.方法选取温州市中西医结合医院消化内科收治的重症UC患者116例作为重症UC组,同期健康体检者50例作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测受试者血清NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测所有受试者血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18表达水平,采用Pearson相关分析重症UC组患者血清NLRP3、CASP1、NF-κB mRNA与IL-1β、IL-18表达的相关性.结果重症UC组患者血清NLRP3[(6.3±1.1)vs.(1.2±0.3)]、CASP1[(5.4±1.1)vs.(1.1±0.3)]和NF-κB[(6.73±1.13)vs.(0.51±0.15)mRNA表达水平均显著高于对照组(t=32.016、27.873、38.710,P均<0.001).重症UC组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级患者NLRP3[(2.4±0.6)、(4.5±1.1)、(6.8±1.2)]、CASP1[(2.2±0.4)、(3.9±1.0)、(5.9±1.1)]及NF-κB[(2.5±0.6)、(5.4±1.2)、(7.2±1.4)]mRNA表达水平比较,差异均有统计学意义(F=49.852、43.224、33.293,P均<0.001).进一步两两比较发现,Ⅱ级、Ⅲ级重症UC患者NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA的表达水平均显著高于Ⅰ级患者(P均<0.05),Ⅲ级重症UC患者NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA的表达水平均显著高于Ⅱ级患者(P均<0.05).重症UC组患者血清IL-1β[(90±7)ng/L vs.(69±7)ng/L]、IL-18[(121±4)ng/L vs.(102±6)ng/L]表达水平较对照组均显著升高(t=16.555、24.249,P均<0.001).重症UC患者血清NLRP3 mRNA与CASP1、及NF-κB mRNA表达均呈正相关(r=0.767、0.676,P均<0.001),而CASP1 mRNA与NF-κB mRNA表达无相关性(r=0.263,P=0.175).重症UC患者血清NLRP3、CASP1、NF-κB mRNA与IL-1β表达均呈正相关(r=3.372、3.724、3.424,P=0.035、0.011、0.026),与IL-18表达亦均呈正相关(r=2.963、3.513、3.312,P=0.043、0.018、0.023).结论重症UC患者血清NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA表达水平均显著升高,且NLRP3 mRNA与CASP1、NF-κB mRNA表达呈正相关.NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA参与重症UC病理过程,临床上可通过检测NLRP3、CASP1和NF-κB表达水平判断UC病程进展.
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槲皮素对尿酸性肾病大鼠肾脏NLRP3和TLRs表达的影响
目的 研究槲皮素对尿酸性肾病大鼠模型的干预作用及其分子机制.方法 设对照组,模型组,槲皮素低、中、高剂量(25、50、100 mg/kg)组和别嘌呤醇(5 mg/kg)阳性对照组.除对照组外,其他组大鼠每天ig给予腺嘌呤100 mg/kg+乙胺丁醇250 mg/kg 1次,连续给予3周造模.每天给予造模药物后1h,槲皮素组和别嘌呤醇组ig相应药物1次,连续给药3周.观察大鼠肾脏组织病理学变化,检测血清和尿液中尿酸(Sur和Uur)及肌酐(Scr和Ucr)的水平,检测血清尿素氮(BUN)水平,计算分级尿酸排泄系数(FEUA);RT-PCR和Western blotting法检测肾脏NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症体各组分NLRP3、细胞凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1和TLRs信号通路关键因子Toll样受体2(TLR2)、TLR24基因和蛋白表达.结果 与模型组比较,槲皮素各剂量组和别嘌呤醇组大鼠血清中Sur、Scr水平显著降低,24 h的Uur、Ucr排泄量升高,并能恢复FEUA.模型组大鼠肾脏中NLRP3、ASC、Caspase-1、TLR2、TLR4基因和蛋白表达显著上调,而槲皮素和别嘌呤醇能够逆转上述指标的改变.结论 NLRP3炎症体和TLRs信号通路的激活参与尿酸性肾病的发病过程,槲皮素可通过对其的调控缓解尿酸性肾病.
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SIRT1基因沉默在辐射诱导的NLRP3和IL-1β表达中的作用研究
目的 研究沉默信息调节因子1 (SIRT1)基因沉默对间充质干细胞(MSCs)受照后Nod样受体蛋白3(NLRP3)和IL-1β表达的影响,探讨SIRT1激活剂——白藜芦醇的辐射防护作用及其机理.方法 将MSCs分为空白对照组、单纯照射组、RNA干扰组、白藜芦醇组和RNA干扰+白藜芦醇组.采用酶联免疫吸附测定、Western blot和RT-PCR等方法检测IL-1β、SIRT1和NLRP3在蛋白和mRNA水平的表达.结果 辐射可导致MSCs细胞外IL-1β分泌水平明显升高,给予白藜芦醇后,细胞IL-1β分泌水平较单纯照射组显著下降(t=21.68,P＜0.01),NLRP3和IL-1β mRNA水平较单纯照射组明显降低(t=14.44,P＜0.01;t=12.35,P＜0.01),SIRT1基因沉默后,NLRP3和IL-1β的mRNA水平回升至单纯照射组水平(t=14.86,P＜0.01;t=11.12,P＜0.01),即使再给予白藜芦醇,NLRP3和IL-1β的mRNA水平仍明显高于白藜芦醇组(t=11.31,P＜0.01;t=10.54,P＜0.01).结论 SIRT1基因沉默减弱了白藜芦醇对辐射诱导的NLRP3和IL-1β的抑制作用,说明白藜芦醇可能通过激活SIRT1、抑制NLRP3、降低IL-1β的表达,从而减轻辐射引起的细胞损伤.
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PI3K/AKT信号通路在大鼠腹腔感染性脓毒症急性肾损伤中的作用
目的 探究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在大鼠腹腔感染性脓毒症急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)中的作用.方法 使用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)的方法制备大鼠腹腔感染性脓毒症模型,按照检测时间点(24、48、72 h)分组,于术后各时间点用全自动生化分析仪检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平;用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测大鼠肾脏组织PI3K mRNA及AKT mRNA的表达水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测大鼠肾脏组织Nod样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β及IL-18的表达水平.假手术组除不进行盲肠结扎及穿孔外,其余操作与CLP组相同.结果 与假手术组相比,CLP各组大鼠血Cr、BUN水平出现明显升高(P＜0.05),肾脏组织内PI3K及AKT mRNA表达水平明显升高(P＜0.01),且其下游NLRP3炎性小体蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),同时血清TNF-α、IL-1β及IL-18水平明显升高(P＜0.01).结论 PI3K/AKT信号通路在腹腔感染性脓毒症AKI中具有重要作用,其活化诱导下游NLRP3炎性小体活化增加,进而使炎症因子释放增加并加重脓毒症病情.
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NLRP3炎症小体在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注时细胞焦亡中的作用
目的 评价NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注时细胞焦亡中的作用.方法 SPF级雄性SD大鼠,6～8周龄,体重210～230 g,取1型糖尿病造模成功的大鼠42只,采用随机数字表法分为4组:假手术组(DS组,n=6)、心肌缺血再灌注组(DI/R组,n=12)、心肌缺血再灌注+caspase-1抑制剂Ac-YVAD-CMK组(DI/R+Ac组,n=12)和心肌缺血再灌注+NLRP3抑制剂BAY1 1-7082组(DI/R+BAY组,n=12);取非糖尿病大鼠18只,采用随机数字表法分为2组:假手术组(S组,n=6)和心肌缺血再灌注组(I/R组,n=12).1型糖尿病造模成功后8周时采用结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型.于再灌注前10 min时DI/R+Ac组和DI/R+BAY组分别腹腔注射Ac-YVAD-CMK 1.5 mg/kg和BAY11-7082 5 mg/kg.于再灌注结束即刻采用TTC法检测心肌梗死面积百分比,采用ELISA法检测血清CK-MB和LDH活性,透射电镜观察心肌超微结构,采用Western blot法检测心肌NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和IL-1β的表达水平.结果 与S组或DS组比较,I/R组或DI/R组血清CK-MB和LDH活性升高,心肌NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、ASC和IL-1β表达上调(P＜0.05).与DI/R组比较,I/R组心肌梗死面积百分比、血清CK-MB和LDH活性降低,心肌NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、ASC和IL-1β表达下调;DI/R+Ac组心肌梗死面积百分比、血清CK-MB和LDH活性降低,心肌pro-caspase-1、ASC和IL-1β表达下调;DI/R+BAY组心肌梗死面积百分比、血清CK-MB和LDH活性降低,心肌NLRP3、procaspase-1、caspase-1、ASC和IL-1β表达下调(P＜0.05),心肌病理学损伤减轻.结论 糖尿病大鼠心肌 缺血再灌注时细胞焦亡的机制可能与NLRP3炎症小体活化有关.
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NLRP3炎性体在原发性高尿酸血症患者中的表达
目的：研究NOD样受体蛋白（NLRP）3信号通路在原发性高尿酸血症（HUA）患者中的表达情况。方法利用 Western印迹检测实验组与对照组NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（caspase）-1的蛋白表达水平，应用酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组血浆白细胞介素（ IL）-1β、IL-18、IL-4、IL-10的表达情况。结果各实验组NLRP3、ASC、caspase-1的蛋白表达水平，血浆IL-1β、IL-18、IL-4、IL-10表达水平均显著高于对照组（ P＜0.05）。结论原发性HUA患者外周血单个核细胞中炎性体 NLRP3各基因蛋白及相关致感染和抗感染因子表达异常，NLRP3参与原发性HUA患者的炎症反应，可能通过调节免疫反应参与病程的发生与发展。
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TLR4与NLRP3的交叉调控信号在高尿酸血症炎症反应中的作用
目的 研究Toll样受体(TLR)4和NOD样受体蛋白(NLRP)3调控的信号通路在原发性高尿酸血症(HUA)炎症反应中的作用.方法 HUA患者75例为HUA组,健康对照45例为HC组,提取两组外周血单个核细胞,利用Western印迹检测两组TLR4、NLRP3、核因子(NF)-κB、白细胞介素(IL)-1β的蛋白表达情况,酶联免疫吸附(ELISA)实验检测两组血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平.结果 HUA组TLR4、NLRP3、NF-κB、IL-1β蛋白表达水平明显高于HC组,血浆IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性细胞因子表达显著高于HC组(均P<0.05).结论 原发性HUA患者外周血单个核细胞中TLR4、NLRP3调控的关键信号蛋白表达上调,血浆炎性细胞因子明显增多,TLR4、NLRP3可能通过调节炎症反应参与原发性HUA疾病进程.
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NOD样受体蛋白3炎症小体在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征中的作用机制研究进展
急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)是由多种非心源性肺内外因素引起的急性进行性呼吸衰竭,发病核心为过度放大或失控的炎症反应,目前没有特效的治疗药物.NOD样受体蛋白3(nucleotide-binding domain (NOD)-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体是细胞受到刺激时形成的多蛋白复合体,活化后导致细胞焦亡及IL-1β、IL-18等产生,在多种感染性、炎症性疾病中起重要作用.引起肺损伤的多种因素均可导致NLRP3炎症小体形成、活化,有研究提示,与ALI/ARDS中的过度炎症反应有关.因而深入研究NLRP3炎症小体在ALI/ARDS中的作用,对于进一步阐明ALI/ARDS的发病机制有重要意义,甚至有望成为治疗ALI/ARDS的新靶点.
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补中益气丸对溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜mRNA表达的影响
目的 研究补中益气丸(黄芪、白术、陈皮等)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠黏膜NOD样受体蛋白3(Nlrp3)、凋亡相关的斑点样蛋白(Asc)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)mRNA表达的影响,评估其对UC的预防作用.方法 将60只C57BL/6小鼠随机分为空白组,模型组,柳氮磺砒啶(SASP)对照组,补中益气丸高、中、低剂量组,每组10只.除正常组外,其余各组予3％葡聚糖硫酸钠(DSS)造模;正常组、模型组每日给予蒸馏水0.01 mL/g;阳性对照组每日给予柳氮磺砒啶1.33 g/kg;补中益气丸高、中、低剂量组每日分别给予补中益气丸12、6、3 g/kg,连续给药7d后,提取结肠样本,观察小鼠结肠病理变化,实时荧光定量-聚合酶链式反应检测结肠粘膜Nlrp3、Asc、caspase-1的mRNA表达水平.结果 模型组小鼠病理检测显示结肠上皮糜烂、出血、多病灶浅溃疡、大量炎细胞浸润,而给药组均不同程度地改善上述症状.与空白组、柳氮磺砒啶对照组比较,模型组Nlrp3表达显著增高(P＜0.05);与补中益气丸各组比较,没有明显差异(P＞0.05);与其它各组比较,模型组Asc、caspase-1 mRNA表达均显著增高(P＜0.05).结论 补中益气丸对DSS诱导小鼠UC有一定预防作用,其虽未能抑制Nlrp3表达,却能明显抑制Asc、caspse-1表达,提示其对小鼠UC预防作用机制可能与抑制结肠黏膜Asc、caspase-1表达,阻断Nlrp3炎性体装配有关.
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老年糖尿病肾病患者外周血NLRP3炎性体与肾损伤指标的相关性分析
目的 探讨老年糖尿病肾病中NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性体在外周血中的表达及与肾损伤指标的关系.方法 采用实时PCR技术检测60例老年糖尿病肾病患者和40例老年健康人组外周血中NLRP3炎性体基因,同时检测尿微量白蛋白、转铁蛋白、免疫球蛋白G、α1-微球蛋白和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的水平.分析NLRP3炎性体与肾损伤指标之间的相关性.结果 与老年健康组比较,NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)以及Caspase-1在老年糖尿病肾病组中表达均明显升高(均P＜0.05);与老年健康组比较,早期肾损伤指标尿微量白蛋白(mAlb)、转铁蛋白(TRF)、免疫球蛋白(IgG)、α1-微球蛋白(α1-MG)和N-乙酰基β-D-葡萄糖苷酶(NAG)在老年糖尿病肾病组中表达均明显升高(P＜0.05).60例糖尿病肾病患者的NLRP3与mA1b呈正相关(r=0.880,P＜0.05)、与TRF呈中度正相关(r=0.560,P＜0.05)、与α1-MG呈低度正相关(r=0.332,P＜ 0.05).结论 NLRP3炎性体可能与老年糖尿病患者肾损伤密切相关,为老年糖尿病患者肾损伤的诊断提供新依据.
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NLRP3基因多态性与哈萨克族老年原发性高血压的关系
目的 探讨Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体基因多态性与新疆哈萨克族老年高血压的关系.方法 随机选取2016年2月至2017年3月在新疆医科大学第一附属医院住院的新疆哈萨克族原发性高血压患者230例(高血压组),及同期哈萨克族健康体检者220例(对照组).采用TaqMan探针法测定所有对象的NLRP3rs10754558、rs3806268位点的基因型和等位基因,分析各位点基因型及等位基因的分布在两组间的差异.结果 NLPR3基因rs10754558位点GG基因型在高血压组明显高于对照组(17.4％vs9.1％,P=0.040),等位基因G频率明显高于对照组(43.1％ vs 34.5％ P=0.010),两组在隐性模型(GG vs GC+ CC)的分布差异有统计学意义(P=0.010).rs3806268位点高血压组与对照组基因型分布及显性模型(AA vs AG+ GG)、隐性模型(GG vs AA+ AG)、相加模型(AG vs AA+ GG)的分布差异均无统计学意义(P均＞0.05).采用Logistic校正了混杂因素干扰后,rs10754558的GG基因型仍为高血压病的危险因素(OR=2.436,95％CI:1.238 ～4.792,P=0.01).结论 NLRP3rS10754558位点基因多态性与哈萨克族高血压遗传易感性相关.NLRP3 rs3806268位点基因多态性与哈萨克族高血压发生无相关性.
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Nod样受体蛋白3(NLRP3)在大鼠原代皮质神经元坏死样凋亡中的表达
目的 探讨Nod样受体蛋白3 (NLRP3)在大鼠原代皮质神经元坏死样凋亡中的表达情况.方法 SD大鼠原代皮质神经元细胞培养12天,Q-VD-Oph预处理30 min后缺糖缺氧刺激诱导坏死样凋亡.①将细胞分为正常对照组、缺糖缺氧组(缺糖缺氧2 h,复氧12 h)、实验组(缺糖缺氧2 h,复氧3、6、12、24 h,均用Q-VD-Oph处理),Western blot检测NLRP3蛋白表达,生化分析仪检测乳酸脱氢酶(LDH)水平;②将细胞分为正常对照组、缺糖缺氧组(缺糖缺氧2 h,复氧12 h)、实验组(缺糖缺氧0.5、1、1.5、2、3 h,复氧12 h,均用Q-VD-Oph处理),再次进行NLRP3及LDH测定;③细胞缺糖缺氧2 h、复氧12 h(用Q-VD-Oph处理)后免疫荧光观察NLRP3的表达.结果 缺糖缺氧2 h后,随着复氧时间的延长,NLRP3在12 h表达量高,24 h表达量较12 h下降(P<0.05),LDH在12 h的表达量高.缺糖缺氧时间不同,各组均复氧12 h时,NLRP3在缺糖缺氧 2 h表达量高,3 h蛋白表达量较2 h下降(P<0.05),LDH在2 h的表达量高.在缺糖缺氧2 h、复氧12 h,细胞免疫荧光强度高.结论 NLRP3在原代皮质神经元细胞坏死样凋亡中有表达,且随着NLRP3表达量升高,细胞受损程度相应增高.
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NLRP3在胎膜早破患者胎膜及胎盘组织中的表达及其临床意义
目的 检测NOD样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein-3,NLRP3)在胎膜早破患者胎膜及胎盘组织中的表达水平,探讨其在胎膜早破发病中的作用.方法 选择住院分娩的胎膜早破患者60例;其中,未足月胎膜早破患者30例(未足月胎膜早破组,发病孕周28周～36+6周),足月胎膜早破患者30例(足月胎膜早破组,发病孕周≥37周).另选择同期孕妇60例,根据孕周不同分为未足月对照组(孕周28 ～ 36+6周)30例和足月对照组(孕周≥37周)30例.利用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP)检测胎膜及胎盘组织中NLRP3的表达水平;利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测胎膜及胎盘组织中NLRP3 mRNA的表达水平.结果 NLRP3主要定位于胎膜上皮细胞、间充质细胞的细胞质和胎盘合体滋养细胞的细胞质.足月胎膜早破组NLRP3表达显著高于未足月胎膜早破组、未足月对照组及足月对照组(P＜0.05);未足月胎膜早破组高于未足月对照组(P＜0.05);未足月对照组与足月对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).RT-PCR结果提示:足月胎膜早破组高于未足月胎膜早破组、未足月对照组及足月对照组(P＜0.05);未足月胎膜早破组高于未足月对照组(P＜0.05);未足月对照组与足月对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 胎膜及胎盘组织中NLRP3的表达升高可能与胎膜早破的发生发展有关;未足月胎膜早破和足月胎膜早破的炎症发生机制可能不同.
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依达拉奉对大鼠脑栓塞后炎症体Nod样受体蛋白3及血脑屏障相关蛋白的影响
目的 脑缺血时,自由基大量生成并激活炎症体Nod样受体蛋白3(NLRP3)从而加重脑损伤,但其与依达拉奉神经保护作用的关系报道少.文中旨在研究依达拉奉对大鼠脑栓塞后的神经保护作用及对脑内炎症体NLRP3及血脑屏障相关蛋白的影响.方法 将60只大鼠随机数字表法分成3组:假手术组、脑栓塞组、依达拉奉组,每组20只.假手术组的大鼠只分离颈部血管,不注入血栓;依达拉奉组于造模时、造模后4 h给予静脉注射依达拉奉(3 mg/kg).造模24 h使用mNSS评估大鼠神经功能,TTC染色测量梗死体积,Western blot检测炎症体NLRP3、血脑屏障相关蛋白occludin、ZO-1表达,免疫组化法观察IgG渗透情况.结果 栓子注入24 h,脑栓塞组mNSS评分、脑梗死体积较假手术组明显增高(P<0.05),脑内炎症体NLRP3表达上升(P<0.05),occludin、ZO-1血脑屏障相关蛋白表达下降(P<0.05),IgG渗透增加.依达拉奉组较脑栓塞组大鼠的神经功能评分减少[(4.50±2.12)分vs(6.50±1.35)分,P<0.05]、梗死体积减少[(19.29±11.92)％vs(29.99±7.56)％,P<0.05],且炎症体NLRP3表达下降(0.97±0.47 vs 1.58±0.86,P<0.05),occludin、ZO-1表达增高[(1.04±0.19)vs(0.53±0.09),(0.66±0.05)vs(0.30±0.04),P<0.05],IgG渗透减少.结论 炎症体NLRP3与脑梗死密切相关,依达拉奉对脑梗死有保护作用,其机制可能与抑制脑卒中后过度表达的炎症体NLRP3及保护血脑屏障有关.
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NLRP3炎症小体及其在消化系统疾病中的作用
Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体是固有免疫系统的重要组成部分,其通过与下游的效应蛋白组装形成炎性小体而发挥作用,白细胞介素-1β(IL-1β)是其发挥作用的主要细胞因子.NLRP3炎性小体能被多种病原微生物以及内源性分子激活,从而使得组织中IL-1β的表达上调,其介导的炎性反应在消化系统疾病的发生发展中发挥着一定的作用.文章就NLRP3炎症小体的活化机制及其与消化系统疾病的关系作一综述.
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NLRP3和TLR4调控的细胞焦亡在痛风性关节炎中的作用
细胞焦亡是一种强烈促炎性的程序性细胞死亡过程,由半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)介导,NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体和Toll样受体蛋白4(TLR4)信号通路共同调控,其在痛风性关节炎发病过程中扮演了重要角色.本文对痛风性关节炎中细胞焦亡的调控机制进行系统阐述,为新药研究提供方向.
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针灸通过NOXs-ROS-NLRP3信号通路治疗大鼠溃疡性结肠炎的实验研究
目的 探讨针灸对大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用及作用机制.方法 将SD雄性SPF级大鼠40只,随机分成正常组、模型组、电针组、隔药灸组,每组10只.除正常组外,其余各组大鼠均给予2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)-25％乙醇0.25 ml混合液灌肠建立UC模型,空白组大鼠给予等量生理盐水灌肠.隔药灸组、电针组选取“天枢”(双)和“气海”进行隔药灸或电针穴位治疗,连续治疗14d,正常组、模型组不予处理.观察大鼠精神状态及死亡情况,计算大鼠的疾病活动指数(DAI),采集结肠组织,计算结肠黏膜损伤指数(CMDI)、检测大鼠结肠组织中NLRP3 mRNA及IL-1β mRNA相对表达量,采取腹主动脉血,检测血清中NLRP3、NOXs、ROS及IL-1β的表达量.结果 除正常组外,各模型组造模后均有明显的溃疡性结肠炎临床症状和病理学改变(P＜0.05);模型组、电针组、隔药灸组NLRP3 mRNA、IL-1βmRNA表达量,NOXs、ROS、NLRP3及IL-1β表达量高于正常组(P＜0.05);电针组、隔药灸组NLRP3mRNA及IL-1βmRNA表达量,NOXs、ROS、NLRP3及IL-1β表达量均明显低于模型组(P＜0.01).结论 电针、隔药灸可能通过影响NOXs-ROS-NLRP3信号传导通路发挥治疗UC的作用.
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NLRP3在大鼠急性心肌缺血再灌注免疫损伤中的作用
目的:研究NOD样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素-6(IL-6)在大鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤模型中的表达变化.方法:选择雄性SD大鼠60只,设置IR组30只和假手术组30只.IR组在呼吸机辅助呼吸的前提下,开胸挤出心脏,结扎前降支主干1h,再灌注1h,建立大鼠IR模型.假手术组穿线但不结扎前降支主干,余操作同IR组.造模成功后将心脏组织进行免疫组织化学检测NLRP3的含量,ELISA检测心肌IL-6表达情况.结果:IR组NLRP3较假手术组明显升高,差异有统计学意义(t=55.138,P＜0.05);IR组IL-6样本浓度较假手术组明显升高,差异有统计学意义(t=68.106,P＜0.05);对于2个变量进行线性相关分析,差异有统计学意义(R=0.989,P＜0.05),两者存在正相关性.结论:大鼠心肌IR损伤后NLRP3炎性体表达增加,激活先天免疫系统,促进IL-6的表达增多.
关键词： 心肌缺血/再灌注损伤 NOD样受体蛋白3 白细胞介素-6
