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结核特异性CD4+α/βTCR四聚体细胞株筛选技术的建立和应用
目的应用不同的 MTB 多肽以及不同的 HLA-DR 基因构建的膜表面表达结核抗原肽/HLA-DR 复合物的 S2恒定细胞株，即人工 APC 筛选、鉴定结核特异性 CD4+α/βTCR 四聚体。
方法以 PE 标记的 CD4+α/βTCR 四聚体、FITC 标记的抗 HLA-DR 抗体（L243），分别与未诱导表达或 CuSO4诱导表达后的膜表面表达结核抗原肽/HLA-DR 的果蝇 S2恒定细胞株，以及与无多肽或结合有结核多肽的、表达HLA-DR 的 S2细胞株共孵育，流式细胞技术检测分析TCR 四聚体与各种细胞株结合率的差异。
结果 TCR 四聚体6M、6N 均与2#细胞株，即C5/HLA-DRB1*0404（1.73%、5.93%）等具有较高的阳性结合率；结核抗原肽孵育后，一些人工 APC 的四聚体阳性结合率有所提高；所筛选的9个 TCR 四聚体均与2#细胞株有较高的结合率。
结论膜表达结核抗原肽/HLA-DR 的 S2细胞株，可以应用于结核特异性 CD4+α/βTCR 四聚体的筛选、鉴定；构建的9个 CD4+α/βTCR 四聚体均为结核特异性。 -
PLGA褶皱微粒合成及牛血清白蛋白负载研究
目的 建立聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)褶皱微粒的合成方法,并考察其对模型蛋白牛血清白蛋白(BSA)的负载,为人工抗原递呈细胞的制备提供科学依据.方法 利用复乳-溶剂挥发法联合致孔剂NH4HCO3合成PLGA褶皱微粒,探讨PLGA相对分子质量、致孔剂质量浓度以及复乳搅拌速度对PLGA微粒形貌的影响.将PLGA褶皱微粒与不同质量浓度的异硫氰酸荧光素(FITC)标记的BSA(FITC-BSA)溶液混合,采用激光扫描共聚焦显微镜、流式细胞仪和二喹啉甲酸法分别检测PLGA褶皱微粒负载BSA的水平,圆二色谱仪分析负载过程对BSA结构的影响.结果 当PLGA的相对分子质量为5 000时,制备得到了表面褶皱的PLGA微粒;当致孔剂NH4HCO3质量浓度低于10 g/L时,可维持PLGA褶皱微粒的形貌;当复乳搅拌速度由400 r/min改变为3 600 r/min时,PLGA褶皱微粒的平均粒径从35 μm降至9μm,符合人工抗原递呈细胞的尺寸要求.PLGA褶皱微粒的荧光强度与投入的BSA质量浓度成正比,且微粒对BSA的吸附不影响BSA结构.结论 PLGA的相对分子质量对微粒形貌具有重要影响,相对分子质量5 000的PLGA可用于制备具有褶皱拓扑结构的微粒,其可负载蛋白类生物大分子并保持蛋白活性,在人工抗原递呈细胞方面具有潜在应用价值.
