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木犀草素对哮喘大鼠气道炎症的影响机制
目的：探讨木犀草素对哮喘大鼠气道炎症的影响机制。方法 SPF级雄性SD大鼠48只，用随机数字表法随机平均分为对照组、哮喘组、木犀草素组3组：哮喘组、木犀草素组复制大鼠哮喘模型，即在第1、8天腹腔注射卵白蛋白/氢氧化铝混合液，2周后以1％的卵白蛋白生理盐水溶液雾化激发，每周3次，持续8周。对照组参照上述方法，但以生理盐水代替卵白蛋白/氢氧化铝混合液及卵白蛋白生理盐水。每次激发后30 min，对照组与哮喘组予生理盐水腹腔注射；木犀草素组予1 mg/kg的木犀草素腹腔注射。光镜观察肺组织病理变化，检测支气管肺泡灌洗液（ BALF）中细胞数和白细胞介素4（IL-4）水平，免疫组化法检测各组过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）蛋白和p38丝裂原活化蛋白激酶（ p38MAPK）蛋白相对表达量；逆转录（ RT）-PCR分别检测PPARγmRNA、p38MAPK mRNA的相对表达量。结果哮喘组大鼠支气管管壁厚度、平滑肌厚度分别为（93.3±7.4）、（34.9±2.3）μm，均显著高于对照组的（61.9±8.2）、（19.3±1.5）μm及木犀草素组的（76.6±6.7）、（25.4±4.6）μm（均P＜0.05）；哮喘组BALF中细胞总数、中性粒细胞数、嗜酸粒细胞数和IL-4水平分别为（5.61±0.63）×109/L、（1.83±0.09）×109/L、（0.59±0.09）×109/L和（78.23±12.73） pg/ml，均显著高于对照组的（1.53±0.31）×109/L、（0.45±0.21）×109/L、（0.07±0.03）×109/L和（21.21±2.53）pg/ml（均P＜0.01）及木犀草素组的（3.24±0.25）×109/L、（1.54±0.10）×109/L、（0.33±0.05）×109/L和（43.24±8.65）pg/ml（均P＜0.05）；哮喘组p38MAPK蛋白相对表达量均显著高于对照组、木犀草素组（0.362±0.008比0.143±0.017、0.251±0.021，均P＜0.01）；对照组、木犀草素组PPARγ蛋白相对表达量均显著高于哮喘组（0.331±0.056、0.442±0.031比0.247±0.034，均P＜0.05）；对照组、木犀草素组p38MAPK mRNA相对表达量均显著低于哮喘组（0.312±0.052、0.426±0.067比0.718±0.064，均P＜0.01）；对照组、木犀草素组PPARγmRNA相对表达量均显著高于哮喘组（0.573±0.042、0.687±0.054比0.266±0.036，均P＜0.01）。结论木犀草素可能是通过影响PPARγ表达及p38MAPK信号通路，抑制哮喘大鼠气道炎症的作用。
关键词： 哮喘 木犀草素 过氧化物酶体增殖物激活受体 p38丝裂原活化蛋白激酶类 大鼠 -
p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580对糖皮质激素敏感性的影响机制
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580对糖皮质激素敏感性的影响机制.方法 在体内实验中,Wistar大鼠60只随机分为正常对照组、哮喘组、烟雾暴露哮喘组及SB203580干预组各15只.经荧光定量PCR检测大鼠肺组织糖皮质激素受体(GR)、热休克蛋白90( HSP90)和p38 MAPK mRNA的表达,经Western印迹检测大鼠肺组织GR、HSP90和p38MAPK蛋白的表达.在体外实验中,培养人肺腺癌A549细胞,将其平均分为4组并进行如下处理:A组:空白对照组；B组:加用地塞米松(1μmol/L)；C组:加用地塞米松+尼古丁(均为1μmol/L)；D组:加用地塞米松+尼古丁+ SB203580(均为1μmol/L).采用免疫荧光染色技术分析GR亚细胞定位.结果 烟雾暴露哮喘组和SB203580干预组大鼠肺组织GR mRNA表达分别为0.671 ±0.002和0.595 ±0.061 (P =0.065),GR蛋白表达分别为0.700±0.033和0.628 ±0.091(P =0.148).两组大鼠肺组织HSP90 mRNA表达分别为0.558±0.009和0.377 ±0.046(P =0.000),HSP90蛋白表达分别为0.507±0.030和0.402±0.050(P=0.005)；p38 MAPK mRNA表达分别为0.971±0.012和0.278±0.049(P =0.000),p38 MAPK蛋白表达分别为0.982±0.038和0.338±0.042(P =0.000).C组A549细胞GR的核质比(0.077±0.047)明显低于D组(0.592±0.249)(P=0.000).结论 p38 MAPK抑制剂SB203580通过促使GR核转位提高糖皮质激素敏感性.
关键词： 哮喘 糖皮质激素类 p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
人重组骨形成蛋白2作用下人牙周膜细胞Osterix的表达变化
目的 观察人重组骨形成蛋白2(rhBMP-2)作用下,人牙周膜细胞内Osterix(Osx)mRNA和蛋白的表达变化,初步探讨牙周膜细胞成骨分化过程中BMP-2与Osx的信号传递途径.方法 组织块法培养人牙周膜细胞至3代.用含rhBMP-2的培养液,按照不同浓度、不同时间分组进行培养,后采用实时定量反转录(Real-time RT)-PCR和Western印迹法分别检测各组细胞Osx mRNA和蛋白表达变化.选用SB203580抑制细胞p38磷酸化,检测rhBMP-2诱导过程中磷酸化p38(pp38)蛋白、Osx mRNA表达及细胞矿化反应变化.结果 在rhBMP-2持续作用下,人牙周膜细胞内Osx mRNA表达明显升高并具有时效性；Osx蛋白表达从无到有,并逐渐增强.当rhBMP-2浓度≤200μg/L时,Osx mRNA和蛋白表达呈现为剂量依赖性增强；当rhBMP-2＞ 200 μg/L时,Osx表达趋于平缓.在p38抑制剂SB203580干扰下,rhBMP-2对p-p38及Osx的诱导增强作用被显著抑制(OsxmRNA表达:0.378±0.034比0.134±0.027,Osx蛋白表达:0.353±0.024比0.155±0.031,均P＜0.01),矿化结节形成亦相对较少且滞后.结论 BMP-2对Osx具有显著正向调控作用,p38途径是此信号传递过程中的一个重要环节,BMP-2/p38/Osx通路可能是牙周膜细胞成骨分化过程中的一条重要信号通路.
关键词： 骨形态发生蛋白质类 p38丝裂原活化蛋白激酶类 牙周膜 成骨分化 Osterix -
P38αMAPK在雌性生殖系统中的研究进展
丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPK）是真核生物长期进化过程中高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，MAPK在许多生物中发挥着重要作用，包括细胞生长、分化、凋亡、炎症反应、细胞骨架重排及应激刺激等。 P38MAPK是其中重要的一个亚家族，其中P38α是P38MAPK中重要的亚型，在雌性生殖系统中有着重要的作用。卵巢在受到体内激素或者外界因素等信号刺激时，通过激活P38αMAPK信号通路，表达各种细胞调控因子以调控颗粒细胞活动及卵母细胞减数分裂，进而影响生殖细胞的生长发育。激活颗粒细胞中P38αMAPK信号通路可以调控激素分泌及相关细胞因子的释放，从而有助于卵母细胞的成熟；P38αMAPK可能参与了卵母细胞的减数分裂过程，下调P38α的表达，可能导致成熟卵母细胞数目减少或者非整倍体卵母细胞的产生。
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 卵母细胞 粒层细胞 减数分裂 生长和发育 -
p38MAPK信号传导通路与卵巢癌关系研究进展
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是一类丝/苏氨酸蛋白激酶,这个级联反应几乎存在于所有生物细胞内,其亚族主要包括细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶/应激激活蛋白激酶(JNK)和p38MAPK.它们主要是作为细胞外信号转入细胞核内的重要信号通路,在细胞生长和细胞增殖过程有着重要的作用.近年研究发现,p38MAPK可介导应激、炎性细胞因子及细菌产物等多种刺激引起细胞反应,也可以通过转录因子磷酸化而改变基因的表达水平,对细胞的功能调节具有重要作用,参与卵巢癌细胞的凋亡、侵袭、转移和耐药等过程,故阐明p38MAPK通路的作用机制,将为卵巢癌的诊治提供新的思路和方法.综述p38MAPK信号通路在卵巢癌发展中的作用、卵巢癌相关p38MAPK耐药机制以及p38MAPK相关新药的研究进展.
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丝裂原活化蛋白激酶信号通路与子宫内膜异位症关系的研究进展
子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)是子宫内膜腺体和基质种植于子宫腔以外的雌激素依赖性疾病,系育龄妇女常见病.异位内膜的侵袭性种植是一个多因素参与的复杂过程,涉及多条信号转导通路,其中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路起了非常重要的作用.MAPK信号通路与雌激素受体(estrogen receptor,ER)调控关系密切,两者的相互作用在促异位内膜细胞增殖、促炎症因子生成和促血管生成方面均起了重要作用.就MAPK信号通路与EMs的关系作一综述,为更好地理解EMs的发病机制提供新的思路.
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p38 MAPK抑制剂SB202190对血管性痴呆大鼠海马中多种氨基酸含量的影响
目的 探讨p38 MAPK抑制剂SB202190对血管性痴呆(VD)大鼠海马中谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、牛磺氨酸(Tau)、甘氨酸(Gly)以及γ-氨基丁酸(GABA)含量的影响.方法 24只清洁级健康雄性3个月龄SD大鼠随机分为假手术组、VD模型组和抑制剂组,各8只.VD模型组采用永久性结扎双侧颈总动脉法建立VD大鼠模型,假手术组剥离双侧颈总动脉但不结扎,抑制剂组为大鼠建立VD模型后给予侧脑室注射p38 MAPK抑制剂SB202190.应用Morris水迷宫检测建模大鼠学习记忆功能,采用微量透析法采集大鼠海马DG区样本并检测其多种氨基酸含量.结果 假手术组和抑制剂组一般行为学和水迷宫检测学习记忆功能明显优于VD模型组大鼠,其平台潜伏期时间短于VD模型组,停留平台象限时间和穿越原平台次数均显著高于VD模型组(均P<0.05).与假手术组相比,VD组和抑制剂组Glu、Gln及Tau含量明显下降,Gly和GABA含量明显升高;与VD模型组比较,抑制剂组Glu、Gln及Tau含量明显升高,Gly和GABA含量明显下降(均P<0.05).结论 p38 MAPK抑制剂对VD海马功能损伤具有保护作用,可能与其能够有效调节VD导致的氨基酸代谢异常,调控多种氨基酸的分泌功能有关.
关键词： 痴呆 血管性 海马 氨基酸类 p38丝裂原活化蛋白激酶类 大鼠 Sprague-Dawley -
p38抑制剂对辐射损伤小鼠中免疫细胞的作用
探讨利用p38抑制剂SB203580(SB)抑制p38通路对6Gy受照小鼠免疫细胞辐射损伤的作用.方法:取雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为对照组、照射组和SB组,每组10只.SB组和照射组小鼠接受以6Gy137Csγ射线的全身照射.SB组小鼠照射24 h后腹腔注射SB( 15 mg/kg),每2 d1次,共给药5次,其余2组小鼠腹腔注射对照溶液.小鼠受照10d后处死,取外周血计数,流式细胞仪检测CD4、CD8、B220表达,取骨髓细胞测定ROS水平.结果:照射组外周血白细胞(WBC)、CD8、B220细胞比例较对照组明显下降,骨髓ROS水平升高(P＜0.01).SB组外周血CD8比例较照射组上升,骨髓ROS水平下降(P＜0.01).结论:SB对小鼠6 Gy照射后造血免疫损伤有一定的缓解作用,其机制可能与其降低照射后骨髓细胞ROS水平有关.
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硫化氢在SB203580影响肝星状细胞增殖、凋亡中的作用
目的：探讨H2S在P38丝裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）阻断剂SB203580影响大鼠肝星状细胞（HSC）-T6增殖、凋亡中的作用及对Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达的影响。方法设对照组（HSC加含10%胎牛血清的DMEM培养液）、二甲基亚砜（DMSO）组（对照组基础上加DMSO）、NaHS组（对照组基础上加NaHS至适浓度）、SB组（DMSO组基础上加SB203580至适浓度）、SB+NaHS组。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定SB203580及H2S对HSC的增殖抑制率（IR）；Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术（FCM）检测HSC凋亡率；逆转录PCR法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达。结果 SB组（7.64±2.46）、SB+NaHS组（12.71±2.73）细胞凋亡率高于对照组（1.70±0.88），且SB+NaHS组高于SB组（均P＜0.05）；DMSO组（2.07±1.18）、NaHS组（2.56±1.23）与对照组差异无统计学意义。Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA在各组细胞中均表达，其中NaHS组表达高于对照组（P＜0.05），且表达量多，条带亮、宽， SB组与SB+NaHS组表达低于对照组和NaHS组（P＜0.05），表达量较少，条带较暗。结论 H2S激活P38MAPK信号通路，且SB203580特异性阻断P38MAPK信号通路后，H2S刺激的HSC增殖受到抑制，凋亡得到促进。
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七叶皂苷钠对肠缺血再灌注肺损伤p38MAPK信号转导通路的影响
探讨七叶皂苷钠对肠缺血再灌注(IR)肺损伤p38MAPK信号转导通路的影响.方法:24只SD大鼠随机均分为3组.对照组只分离出肠系膜上动脉(SMA),不夹闭SMA；模型组用无创伤血管夹夹闭SMA,阻断该动脉血运1h后松夹,恢复血流后观察1h,造成肠IR模型；治疗组于缺血前、再灌注前、再灌注后30 min尾静脉推注七叶皂苷钠0.9μg/g.测量各组肺表面活性物质卵磷脂(PC)、总磷脂(TPL)及肺湿/干质量比(W/D),测量血浆和肺组织中黄嘌呤氧化酶(XOD)、丙二醛(MDA)及髓过氧化物酶(MP0)水平,采用免疫组化法检测各组肺组织中p38MAPK和Bax蛋白的表达水平.结果:(1)模型组和治疗组的肺组织PC、TPL含量均低于对照组,肺W/D高于对照组；治疗组的肺组织PC、TPL含量高于模型组,肺W/D低于模型组.差异均有统计学意义(P＜0.01).(2)血浆和肺组织XOD、MPO活性及MDA含量模型组高于对照组和治疗组,且治疗组高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).(3)模型组肺组织p38MAPK和Bax蛋白的表达水平明显高于对照组和治疗组(P＜0.01).(4)模型组肺组织MPO、MDA及Bax蛋白表达水平与肺组织细胞p38MAPK蛋白表达水平呈正相关(r分别为0 897、0.902和0.912).结论:七叶皂苷钠可减轻肠IR肺损伤,其机制可能是通过抑制氧自由基的产生、白细胞的活化来调控p38MAPK信号转导通路,从而抑制肺组织细胞的凋亡.
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双特异性磷酸酶2对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制研究
目的 探讨双特异性磷酸酶2(DUSP2)基因对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制.方法 首先利用在线分析工具KM plotter分析876例胃癌患者DUSP2表达高低对其总体生存率的影响,并在多种胃癌细胞株(MKN-45、SGC-7901、HGC-27、N-87)中检测DUSP2的表达.进一步构建DUSP2过表达慢病毒载体,包装病毒感染MKN-45细胞,筛选出DUSP2稳定过表达的胃癌细胞株,以空载慢病毒转染并筛选后的胃癌细胞为对照.采用MTS细胞增殖实验检测DUSP2上调表达对胃癌细胞增殖能力的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式检测细胞凋亡变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测DUSP2、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、p-ERK(Thr202/Tyr204)、P38、p-P38等蛋白表达水平.结果 高表达DUSP2的胃癌患者较低表达者有明显的生存优势,并且DUSP2在多株胃癌细胞中呈低表达.Western blot结果显示DUSP2稳定过表达的胃癌细胞(实验组)中DUSP2表达较对照组明显上调,DUSP2稳定过表达的胃癌细胞株构建成功.MTS实验结果表明,实验组细胞活力较对照组明显下降.实验组细胞凋亡率明显高于对照组.Western blot结果表明,实验组细胞中p-ERK(Thr202/Tyr204)及p-P38表达较对照组显著下调.结论 上调DUSP2的表达可显著抑制胃癌细胞的增殖,并促进其凋亡,其机制与DUSP2抑制了ERK、P38的磷酸化水平有关.
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整合素αvβ8、p38及ERK1/2在胆道闭锁患儿肝脏中的表达及意义
目的：研究转化生长因子（TGF）-β1通路相关调节蛋白整合素αvβ8、p38及细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）蛋白在胆道闭锁（BA）患儿肝脏中的表达情况及在肝纤维化进程中的作用。方法选取天津市儿童医院普外科收治的BA患儿15例为Kasai组，胆管扩张症患儿10例为胆扩组；天津市第一中心医院小儿器官移植科行Kasai手术后因肝功能衰竭行肝移植的BA患儿10例为肝移植组。取患儿肝右叶前缘标本，行HE染色观察肝纤维化程度，行免疫组化染色检测αvβ8、p38及ERK1/2在肝组织中的表达情况。结果 HE染色示，胆扩组偶见纤维细胞增生；Kasai组汇管区增宽，纤维组织增生、桥接纤维化现象普遍，可见假小叶形成；移植组汇管区明显增宽，纤维组织增生较重，广泛桥接纤维组织形成，假小叶明显。免疫组化染色示，胆扩组αvβ8和ERK1/2表达为弱阳性，p38为阴性表达；Kasai组αvβ8、p38及ERK1/2蛋白均在肝细胞胞质、汇管区胆管上皮细胞胞质及血管内皮细胞胞质中强阳性表达；肝移植组αvβ8、p38及ERK1/2蛋白皆为强阳性表达。Kasai组和肝移植组αvβ8、p38及ERK1/2表达水平明显高于胆扩组（均P＜0.05），Kasai组与肝移植组比较差异无统计学意义。结论αvβ8、p38及ERK1/2表达在BA肝纤维化过程中明显增高，αvβ8、p38及ERK1/2可能参与并促进BA肝纤维进程。
关键词： 胆道闭锁 肝硬化 p38丝裂原活化蛋白激酶类 丝裂原活化蛋白激酶1 肝纤维化 αvβ8 P38 ERK1/2 -
活血化瘀通络方对5/6肾切除大鼠肾功能及肾组织p38MAPK信号转导途径的干预作用
目的 从p38MAPK信号转导途径观察5/6肾切除大鼠肾组织中P38MAPK表达及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)改变,以初步探讨活血化瘀通络方(抗纤灵方)延缓肾纤维化的作用机制.方法 将40只SD大鼠中10只为正常组,30只行5/6肾切除,造模成功后随机分为模型组、抗纤灵组、氯沙坦组,各10只,各组干预12周后检测各组肾功能(血清尿素氮、肌酐)以及Western Blot检测肾组织Collagen Ⅰ、p38MAPK、α-SMA.结果 干预12周后抗纤灵组、氯沙坦组较模型组肌酐、尿素氮有所下降,抗纤灵组、氯沙坦组p38MAPK、α-SMA、CollagenⅠ的分子表达较模型组明显减轻(P＜0.05),抗纤灵组较氯沙坦组p38MAPK、Collagen Ⅰ分子表达减少(P＜0.05).结论 抗纤灵方可明显改善5/6肾切除大鼠的肾功能,可能通过抑制p38MAPK信号转导通路,减少α-SMA、Collagen Ⅰ的表达,减轻肾组织的损害.
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p38MAPK/iNOS/HO-1信号通路在赤芍减轻大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用
目的 评价p38MAPK/iNOS/HO-1信号通路在赤芍减轻大鼠内毒素性急性肺损伤(AL1)中的作用.方法 健康清洁级雄性Wistar大鼠40只,随机分为5组(n=8):生理盐水对照组(C组)、内毒素组(L组)、赤芍组(R组)、赤芍预处理组(PR组)和SB203580组(S组).气管内滴注脂多糖(LPS)制备大鼠ALI模型.L组气管内滴注1 ml LPS溶液(2.5 mg/kg);C组滴注等容量生理盐水;R组、PR组分别于气管内滴注LPS后、滴注前2 h,经股静脉输注赤芍注射液15 mg·kg-1·h-1 2 h;S组于气管内滴注LPS前3 h,经股静脉输注SB203580溶液2.5 μmol·kg-1·h-1 3 h.于气管内滴注LPS后6 h时,经颈动脉采血样2 ml,行血气分析及测定血清NO浓度;颈动脉放血处死大鼠,测定支气管肺泡灌洗液蛋白浓度,计数中性粒细胞及细胞总数,检测肺组织MDA含量,p38MAPK、HO-1及iNOS的表达.观察肺组织病理学结果 .结果 与C组比较,其余各组肺组织p38MAPK、iNOS及HO-1表达上调,支气管肺泡灌洗液中性粒细胞计数比、蛋白浓度、肺组织MDA含量及血清NO浓度升高.PaO2和HCO1浓度降低(P<0.01);与L组比较,R组、PR组和S组p38MAPK及iNOS表达下调,HO-1表达上调.支气管肺泡灌洗液中性粒细胞计数比、蛋白浓度、肺组织MDA含量及血清NO浓度降低,PaO2和HCO3-升高(P<0.05);R组、PR组和S组肺组织损伤程度较L组减轻.结论 赤芍可减轻大鼠内毒素性急性肺损伤,可能与抑制p38MAPK/iNOS/HO-1信号通路有关.
关键词： 赤芍 p38丝裂原活化蛋白激酶类 一氧化氮合酶 血红素氧化酶(脱环) 呼吸窘迫综合征 成人 内毒素类 -
p38 MAPK在沙土鼠前脑缺血再灌注损伤及缺血预处理中的作用
目的 研究p38 MAPK在沙土鼠前脑缺血再灌注损伤及缺血预处理中的作用.方法 雄性蒙古沙土鼠384只,体重50～80 g,随机分为6组,每组64只.假手术组(SH组):仅游离双侧颈总动脉但不阻断;缺血再灌注组(I/R组):夹闭双侧颈总动脉,前脑缺血5min后恢复灌注;缺血预处理组(IP组):前脑缺血3 min后恢复灌注,24 h后再行前脑缺血5 min;P组:于前脑缺血前20 min侧脑室内注射0.8 μg p38 MAPK特异性激动剂P79350;SB组:于前脑缺血前20 min侧脑室内注射0.4 μg p38MAPK特异性抑制剂SB202190;溶剂对照组(VE组):于前脑缺血前20 min侧脑室内注射1%二甲基亚砜4 μl.各组于再灌注15min、2 h、4 h、6 h分别取8只沙土鼠,测定海马CA1区p-p38 MAPK的表达,再灌注1、3、5、7 d分别取8只沙土鼠,采用开阔法观察行为学,然后测定海马CA1区存活神经元计数、凋亡神经元计数及p-p38 MAPK、HSP27、Bcl-2、Bax的表达.结果 I/R组再灌注期p-p38 MAPK表达上调,IP组及SB组再灌注各时点p-p38 MAPK表达水平低于I/R组,P组再灌注各时点高于I/R组、IP组及SB组(P＜0.05);IP组、SB组较I/R组及VE组沙土鼠探索活动减少,CA1区再灌注期凋亡神经元数减少,HSP27、Bax表达下调,存活神经元数增加,Bcl-2表达上调(P＜0.05);P组再灌注1 d探索活动增加,再灌注各时点p38 MAPK及HSP27表达均较I/R组上调(P＜0.05).结论 沙土鼠脑缺血再灌注损伤及神经元凋亡与p38 MAPK的激活有关;缺血预处理可通过抑制p38 MAPK的激活,下调HSP27及Bax的表达、上调Bcl-2的表达.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 缺血预处理 脑缺血 再灌注损伤 海马 -
小窝蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞TLR4/p38MAPK信号通路激活中的作用
目的 评价小窝蛋白-1(Cav-1)在盐酸戊乙奎醚抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞Toll样受体4/p38丝裂原活化蛋白激酶(TLR4/p38 MAPK)信号通路激活中的作用.方法 将小鼠巨噬细胞接种于6 cm培养皿(5 ml/个)中,采用随机数字表法分为5组(n=20):Scr-siRNA对照组(S组)、Scr-siRNA+LPS组(LPS组)、Scr-siRNA+LPS+盐酸戊乙奎醚组(LPS+P组)、Cav-1-siRNA+LPS组(C+LPS组)和Cav-1-siRNA+LPS+盐酸戊乙奎醚组(C+LPS+P组).S组、LPS组和LPS+P组经Scr-siR-NA转染24 h,C+LPS组和C+LPS+P组经Smart pool Cav-1 siRNAs转染24 h;转染结束后LPS组、LPS+P组、C+LPS和C+LPS+P组加入终浓度为1μg/ml的LPS孵育2 h;LPS+P组和C+LPS+P组于LPS孵育2h后加入终浓度为2μg/ml的盐酸戊乙奎醚孵育2h.采用Western blot法检测Cav-1和TLR4的表达水平,采用免疫荧光法检测p38 MAPK表达水平,采用ELISA法检测培养液TNF-α浓度,采用比色法检测髓过氧化物酶(MPO)活性.结果 与S组比较,其余4组TLR4和p38 MAPK表达上调,培养液TNF-α浓度和细胞MPO活性升高,LPS组和C+LPS组Cav-1表达下调(P＜0.05),LPS+P组Cav-1表达差异无统计学意义(P＞0.05);与LPS组比较,LPS+P组Cav-1表达上调,TLR4和p38 MAPK表达下调,培养液TNF-α浓度和细胞MPO活性降低,C+LPS组Cav-1表达下调,TLR4和p38 MAPK表达上调,培养液TNF-α浓度和细胞MPO活性升高(P＜0.05);与LPS+P组比较,C+LPS+P组Cav-1表达下调,TLR4和p38 MAPK表达上调,培养液TNF-α浓度和细胞MPO活性升高(P＜0.05);与C+LPS组比较,C+LPS+P组Cav-1表达上调,TLR4和p38 MAPK表达下调,培养液TNF-α浓度和细胞MPO活性降低(P＜0.05).结论 盐酸戊乙奎醚抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞TLR4/p38 MAPK信号通路激活的机制与上调Cav-1表达有关.
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p38MAPK信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用
目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 健康新生SD大鼠,日龄1～3 d,处死后取心室肌组织,培养心肌细胞,随机分为7组:对照组(C组)于CO2培养箱中持续培养3 h;缺氧复氧组(AR组)细胞缺氧2 h,复氧1 h;七氟烷后处理组(SP组)细胞缺氧2 h,复氧开始即刻更换为3%七氟烷饱和的DMEM培养液,孵育20 min,再更换为无血清DMEM培养液,继续复氧40 min;七氟烷后处理+SB203580组(SP+SB组)于七氟烷后处理同时加入SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)至5 μmol/L,孵育20 min;七氟烷后处理+二甲亚砜组(SP+DMSO组)于七氟烷后处理同时加入0.1%DMSO,孵育20 min;SB203580组(SB组)于复氧开始时加入SB203580至5 μmol/L,孵育20 min;二甲亚砜组(DMSO组)于复氧开始即刻加入0.1%DMSO,孵育20 min.各组细胞分别接种于24孔培养板(1 ml/孔)、35 mm培养皿(5 mlnd/皿)和50 ml培养瓶(8 ml/瓶)中,每组12孔、6皿和6瓶.于复氧结束后,采用比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用台盼蓝排斥实验测定细胞存活率;采用流式细胞仪测定细胞凋亡率;采用Western blot法测定磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达水平.结果 与C组比较,其余各组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,AR组、SP组、SP+SB组、SP+DMSO组和DMSO组p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与AR组比较,SP组、SP+SB组和SP+DMSO组LDH活性降低,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与SP组比较,SP+SB组、SB组和DMSO组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,p-p38MAPK表达下调(P<0.05).结论 七氟烷后处理可通过激活p38MAPK信号转导通路减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 麻醉药 吸入 缺血后处理 心肌再灌注损伤 -
戊乙奎醚预处理对脓毒症小鼠肺损伤时MAPK信号转导通路的影响
目的 探讨戊乙奎醚(PHC)预处理对脓毒症小鼠肺损伤时丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的影响.方法 健康雌性昆明小鼠105只,体重20～25 g,随机分为3组(n=35):假手术组(S组)、脓毒症(CLP)组和戊乙奎醚(PHC)组.采用盲肠结扎并穿孔法制备脓毒症模型.PHC组于造模前1 h腹腔注射戊乙奎醚0.45 mg/kg,s组和CLP组于造模前1 h注射等容量生理盐水.于造模后即刻测定肺微血管通透性;造模后12 h时进行动脉血气分析,观察肺组织病理结果,测定肺组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK1/ERK2)和c-jun氨基末端蛋白激酶(JNK)表达.结果 与S组比较,CLP组PaO2、PaO2/FiO2和pH值降低,肺微血管通透性和肺组织MDA含量升高,SOD活性降低,磷酸化的p38MAPK、ERK1/ERK2和JNK表达上调(P<0.05或0.01);与CLP组比较,PHC组PaO2、PaO2/FiO2和pH值升高,肺微血管通透性和肺组织MDA含量降低,SOD活性升高,磷酸化的p38MAPK和ERK1/ERK2表达下调(P<0.05或0.01).结论 戊乙奎醚预处理可通过抑制MAPK信号转导通路(p38MAPK和ERK1/ERK2)的激活,从而减轻脓毒症小鼠肺损伤.
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p38丝裂原活化蛋白激酶在肠缺血再灌注损伤大鼠炎性反应中的作用
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在肠缺血再灌注损伤大鼠炎性反应中的作用.方法 健康成年雄性Wistar大鼠30只,随机分为3组(n=10):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和p38MAPK抑制剂SB203580组(SB组).采用夹闭肠系膜上动脉(SMA)的方法制备肠缺血再灌注损伤模型.I/R组和SB组夹闭SMA 1 h再灌注6 h,SB组缺血前30 min经股静脉注射p38MAPK特异性抑制剂SB203580 100 μg/kg.于再灌注6 h时,处死大鼠,测定血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度、双胺氧化酶(DAO)活性及小肠组织TNF-α含量、p38MAPK、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达水平,在光镜下观察小肠组织病理学,并进行小肠组织损伤程度评分.结果 与S组比较,I/R组血浆TNF-α浓度、DAO活性及小肠组织p38MAPK、ICAM-1表达、TNF-α含量、小肠组织损伤程度评分升高,SB组血浆DAO活性、小肠组织ICAM-1表达、TNF-α含量及小肠组织损伤程度评分升高(P＜0.05);与I/R组比较,SB组血浆TNF-α浓度、DAO活性及小肠组织p38MAPK、ICAM-1表达和TNF-α含量、小肠组织损伤程度评分降低(P＜0.05).结论 p38MAPK参与了肠缺血再灌注损伤大鼠炎性反应.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 再灌注损伤 肠 炎症 -
1,6-二磷酸果糖对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的探讨1,6-二磷酸果糖对脑缺血再灌注损伤大鼠MAPK信号转导通路的影响.方法雄性SD大鼠180只,随机分为3组:假手术组(C组)、缺血再灌注组(Ⅰ组)、1,6-二磷酸果糖组(F组),每组60只,每组随机分为6个亚组(再灌注2、6、12、24、48、72h)(n=10).I、F组制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型,凝断双侧椎动脉24h时夹闭双侧颈总动脉5min重新开放,C组只暴露椎动脉和颈总动脉,F组再灌注开始时静脉注射1,6-二磷酸果糖1.5 ml/kg,I、C组均给予等量生理盐水.再灌注2、6、12、24、48、72 h时,每组随机处死5只大鼠,取新鲜脑组织,测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;余下5只采用免疫组织化学染色方法测定P38、Ref-1的表达,并用TUNEL细胞原位凋亡检测法计数神经细胞凋亡数目.结果与C组比较,Ⅰ组再灌注各时点脑组织SOD活性降低,MDA含量增高,P38、Ref-1表达增强,凋亡细胞数增多(P＜0.05);1,6-二磷酸果糖减弱了缺血再灌注引起的上述指标的改变.结论MAPK细胞信号转导通路参与了1,6-二磷酸果糖对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用.
关键词： 果糖二磷酸盐类 脑缺血 再灌注损伤 p38丝裂原活化蛋白激酶类
