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LPS和NNK对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响
目的 观察炎性刺激因子脂多糖(LPS)、4-(甲基亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)及LPS联合NNK对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及核因子κB(NF-κB)、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响.方法 应用全骨髓贴壁法体外培养纯化BMSCs.采用MTT法检测不同浓度的炎性因子对BMSCs增殖的影响,选择佳刺激浓度.应用免疫细胞化学法检测炎性刺激对BMSCs中NF-κB、CUGBP1蛋白表达的影响,采用Western blot法检测炎性刺激对BMSCs中NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响.结果 不同浓度的炎性因子均能促进大鼠BMSCs增殖,其中以12.5 mg/L LPS、10 mg/L NNK、12.5 mg/L LPS联合10 mg/L NNK对大鼠BMSCs增殖的促进作用为明显.免疫细胞化学法检测显示,炎性刺激后BMSCs中NF-κB、CUGBP1蛋白的表达量显著增加,差异有显著性(F=165.1～481.8,P＜0.01).Western blot法检测显示,炎性刺激后NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白的表达量增加,差异有统计学意义(F=38.1～1 531.0,P＜0.01).结论 炎性因子可能通过激活P38MAPK和NF-κB信号途径促进大鼠BMSCs的增殖.长时间的炎性因子刺激,促进了NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白在细胞核中的表达.
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雪莲强筋壮骨方对膝骨关节炎软骨细胞p38丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的影响
目的:探讨雪莲强筋壮骨方对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)软骨细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activa-ted protein kinase,MAPK)信号传导通路的影响.方法:将24只3月龄雄性新西兰大白兔随机分为空白组、模型组、p38阻断剂组及含药血清组,每组6只.除空白组外,其余各组均采用改良Hulth法行KOA造模.造模成功后含药血清组以雪莲强筋壮骨方水煎剂灌胃(10 g·kg-1),其余各组均以等量生理盐水灌胃,每天2次,连续干预7 d后静脉采血,分别制成10％含药血清和10％空白血清的DMEM培养液保存备用.血清制备完成后处死动物,分离膝关节软骨进行软骨细胞培养.空白组和模型组以空白血清进行干预,p38阻断剂组以空白血清和SB203580进行干预,含药血清组以含药血清进行干预.血清干预结束后,分别采用免疫荧光技术和蛋白免疫印迹法检测各组软骨细胞磷酸化p38MAPK水平.结果:免疫荧光检测结果显示,模型组磷酸化p38MAPK表达呈强阳性,p38阻断剂组和含药血清组次之,空白组弱.蛋白免疫印迹检测结果显示,空白组磷酸化p38MAPK表达弱,模型组磷酸化p38MAPK表达强,p38阻断剂组和含药血清组磷酸化p38MAPK表达水平相当,介于空白组和模型组之间.经扫描定量检测,空白组、模型组、p38阻断剂组和含药血清组条带的光密度值分别为0.31±0.06、0.83±0.11、0.58±0.45、0.55±0.56,差异有统计学意义(F=3.872,P=0.034).空白组的光密度值小于模型组、p38阻断剂组及含药血清组(P=0.007,P=0.031,P=0.038);模型组的光密度值大于p38阻断剂组和含药血清组(P=0.038,P=0.028);p38阻断剂组和含药血清组的光密度值比较,差异无统计学意义(P=0.066).结论:雪莲强筋壮骨方能阻滞KOA软骨细胞p38MAPK信号传导通路,其效果与p38MAPK阻断剂SB203580相当.
关键词： 骨关节炎 雪莲强筋壮骨方 软骨细胞 p38丝裂原活化蛋白激酶类 信号传导 -
牛膝含药血清对骨关节炎软骨细胞P38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路的影响
目的:探讨牛膝含药血清对骨关节炎软骨细胞P38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路的影响.方法:将20只雄性新西兰大白兔随机分为空白对照组、模型组、P38阻断剂组及含药血清组,每组5只.分组后含药血清组大白兔以牛膝水煎剂灌胃(2.5 g· kg-1),其余各组以等量生理盐水灌胃,每天2次,共3d.3d后静脉采血,分别配成10％含药血清和10％空白血清的DMEM培养液保存备用.除空白对照组外,其余各组大白兔均采用Hulth法行兔膝骨关节炎造模,空白对照组行假手术.造模成功后处死实验兔分离兔膝关节软骨进行软骨细胞培养,对空白对照组、模型组的第3代软骨细胞以空白血清进行干预,P38阻断剂组以SB203580进行干预,含药血清组以牛膝含药血清进行干预.血清干预结束后,分别采用免疫荧光技术和Western Blot技术检测各组软骨细胞磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶及Ⅱ型胶原蛋白含量.结果:①免疫荧光检测结果.各组细胞均有磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶阳性表达,其中模型组呈强阳性表达,P38阻断剂组及含药血清组略弱,空白对照组弱；各组细胞均有Ⅱ型胶原蛋白阳性表达,其中空白对照组呈强阳性表达,P38阻断剂组及含药血清组略弱,模型组弱.②Western Blot检测结果.各组磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶含量比较,差异有统计学意义(F =3.872,P=0.038).进一步两两比较,空白对照组(0.463±0.007)小于模型组(0.856 ±0.007)、P38阻断剂组(0.576±0.005)及含药血清组(0.508±0.004),差异有统计学意义(P =0.008；P=0.036；P=0.042)；模型组大于P38阻断剂组和含药血清组(P =0.025；P=0.019)；P38阻断剂组与含药血清组比较,差异无统计学意义(P=0.058).各组细胞Ⅱ型胶原蛋白含量比较,差异有统计学意义(F=3.963,P=0.034).进一步两两比较,空白对照组(0.884±0.007)大于模型组(0.434±0.007)、P38阻断剂组(0.616±0.003)及含药血清组(0.565±0.008),差异有统计学意义(P =0.007;P =0.031；P =0.038)；模型组小于P38阻断剂组和含药血清组(P =0.035；P=0.028)；P38阻断剂组与含药血清组比较,差异无统计学意义(P =0.066).结论:牛膝含药血清能阻断骨关节炎软骨细胞P38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路,进而保护软骨细胞,其效果与SB203580相当.
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独活寄生汤对腰椎间盘纤维环细胞P38信号转导通路的影响
目的:从P38细胞信号转导通路的角度探讨独活寄生汤治疗腰椎间盘源性腰痛的作用机制.方法:将20只3月龄雄性新西兰大白兔随机分为正常对照组、模型组、独活寄生汤组及P38阻断剂组,每组5只.除正常对照组外,其余3组均采用纤维环体表穿刺法建立兔腰椎间盘退变模型.造模8d后提取各组实验兔含药血清低温保存备用,于造模8周后分别用这些血清刺激培养的椎间盘纤维环细胞,并采用Western Blot法检测各组细胞的P38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化水平.结果:各组纤维环细胞P38丝裂原活化蛋白激酶总量比较,差异无统计学意义(F=1.819,P=0.085).各组纤维环细胞磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶/138丝裂原活化蛋白激酶总量比较,差异有统计学意义(F=5.437,P=0.007),进一步两两比较:模型组大于独活寄生汤组、P38阻断剂组及正常对照组(P =0.009,P=0.005,P=0.003)；独活寄生汤组大于P38阻断剂组及正常对照组(P=0.007,P=0.004)；P38阻断剂组大于正常对照组(P=0.007).结论:独活寄生汤可通过降低纤维环细胞P38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化水平,抑制炎性因子的产生,减缓由P38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路介导的软骨细胞凋亡进程,从而达到治疗腰椎间盘源性腰痛的目的.
关键词： 腰痛 椎间盘 独活寄生汤 p38丝裂原活化蛋白激酶类 动物实验 -
电磁场作用下大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化与增殖
目的 研究15 Hz l mT的正弦波电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的细胞外信号调节激酶(ERK)和丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK) p38的激活规律及相互作用特点,探讨ERK和p38 MAPK信号通路在电磁场促成骨效应中的作用.方法 选取第3代体外分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞,分为对照组、曝磁组、曝磁+ PD98059组和曝磁+SB202190组四个大组.曝磁组细胞置于带有电磁发生器的培养箱中培养,曝磁+ PD98059组和曝磁+SB202190组细胞分别加入ERK信号通路阻断剂PD98059和p38 MAPK信号通路阻断剂SB202190后再置入带有电磁发生器的培养箱中培养,对照组细胞正常培养.用免疫印迹(Western blot)法检测ERK和p38 MAPK的蛋白表达及磷酸化水平变化.按照细胞碱性磷酸酶(ALP)试剂盒说明书操作步骤对各组细胞ALP活性进行检测,其活性变化可间接反映细胞的分化成骨活性;用噻唑蓝比色法检测各组细胞的增殖活性变化.结果 ①电磁场作用下,骨髓间充质干细胞内p38 MAPK信号通路可被快速激活,曝磁15 min后出现p38磷酸化水平升高(P＜0.05);加用SB202190后,再行电磁场刺激,细胞内p38磷酸化水平仍然维持在较低水平,与曝磁组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).②与对照组比较,曝磁5d后细胞内ALP活性显著升高(P＜0.05),SB202190可明显阻断该效应(P＜0.05).③与对照组比较,曝磁3d后骨髓间充质干细胞的增殖活性明显升高(P＜0.05),SB202190不能阻断该效应(曝磁+SB202190组与曝磁组比较,P ＞0.05).④SB202190阻断p38 MAPK信号通路并曝磁5 min后,ERK MAPK磷酸化水平明显强化(P＜0.05);PD98059阻断ERK MAPK信号通路并曝磁30 min后,p38 MAPK磷酸化水平明显强化(P＜0.05).结论 ERK和p38 MAPK信号通路分别参与了电磁场对骨髓间充质干细胞增殖和分化成骨过程的调节,并在电磁场作用下两通路表现出串扰现象.
关键词： 电磁场 间质干细胞 丝裂原激活蛋白激酶类 p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
甲泼尼龙对机械通气相关性肺损伤大鼠肺组织水通道蛋白5表达的影响
目的 探讨甲泼尼龙(Mp)对机械通气相关性肺损伤大鼠肺组织水通道蛋白5(AQP5)表达影响及其作用机制.方法 将100只SD大鼠随机分为5组:正常对照组(C组)、机械通气组(V组)和不同剂量甲泼尼龙组(Mp1,Mp2,MP3组).C组不行机械通气,自然呼吸空气;V组:大潮气量机械通气4h,吸入氧浓度为21％;MP1,Mp2,Mp3组:机械通气前10 min分别静脉注射Mp 2,10,30 mg·kg-1.于插管即刻,机械通气1,2和4 h(t1-4)时采集股动脉血样,进行动脉血气分析,计算氧合指数(OI).机械通气4h后放血处死大鼠,检测肺通透指数(LPI)与肺湿干重(W/D)比;Western blotting法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)和水通道蛋白5(AQP5)的表达水平,计算p-p38MAPK/p38MAPK比值;采用RT-PCR法测定AQP5 mRNA表达;光镜下观察各组肺组织病理变化,计算肺泡损伤率(IAR).结果 与C组比较,V组和Mp1组OI降低,肺组织W/D比、LPI和IAR升高(P＜0.05),p-p38MAPK表达水平和p-p38MAPK/p38MAPK比值升高(P＜0.05),AQP5和AQP5 mRNA表达水平下降(均P＜0.05),MP2和Mp3组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与V组比较,Mp2和Mp3组OI升高,肺组织W/D比、LPI和IAR降低(P＜0.05),肺组织p-p38MAPK表达水平和p-p38MAPK/p38MAPK比值下降(P＜0.05),AQP5和AQP5 mRNA表达水平升高(P＜0.05),Mp2和Mp3组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).Mp2和Mp3组肺组织病理学损伤较V组减轻.结论 Mp可减轻大鼠机械通气相关性肺损伤,其机制与抑制p38MAPK磷酸化、上调AQP5表达有关,中等剂量甲泼尼龙为较合适的肺保护剂量.
关键词： 甲泼尼龙 肺损伤 机械通气相关性 p38丝裂原活化蛋白激酶类 水通道蛋白5 -
丁苯酞对阿尔茨海默病大鼠VEGF、P38MAPK表达的影响
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)、P38MAPK在阿尔茨海默病(AD)模型大鼠中的发病机制及丁苯酞对AD模型大鼠海马组织VEGF、P38MAPK表达的影响.方法 32只SD大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、丁苯酞低剂量组和高剂量组,每组8只.采用凝聚态Aβ1-42双侧注射大鼠海马区制作AD模型,通过Morris水迷宫检测行为学改变,应用Western Blot技术测定大鼠海马VEGF、P38MAPK蛋白的表达.结果 造模1周后,4组大鼠逃避潜伏期不同(F=66.658,P＜0.05),穿越平台次数不同(F =6.884,P＜0.05),模型组和药物干预组较空白组逃避潜伏期明显增长(P＜0.05),穿越平台次数明显减少(P＜0.05)；药物干预4周后,VEGF在4组大鼠海马区表达差异有统计学意义(F=171.064,P＜0.05),模型组较空白组明显降低(P＜0.05),药物干预组较模型组明显增多(P＜0.05),且高剂量组较低剂量组增多(P＜0.05)；P38MAPK在4组大鼠海马区表达差异无统计学意义(P＞0.05),P-P38MAPK在4组大鼠海马区表达差异有统计学意义(F=104.395,P ＜0.05),模型组和药物干预组较空白组海马组织P-P38MAPK表达升高(P＜0.05),药物干预组较模型组表达明显降低(P＜0.05),且高剂量组较低剂量组降低更明显(P＜0.05).结论 丁苯酞能明显提高AD模型大鼠VEGF的表达,降低P-P38MAPK在AD大鼠海马组织的表达.
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p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用
目的 研究P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用.方法 采用大鼠内毒素ALI模型,48只Wistar大鼠随机分为假手术对照组(A组)、内毒素组(B组)、SB203580组(C组),16只/组.观察肺组织中p38MAPK、肺泡灌洗液中性粒细胞比、蛋白含量、血清NO浓度、肺组织MDA含量的变化,于LPS滴注后6h取动脉血行血气分析.同时观察肺组织病理形态学改变.结果 与A组比较,B组、C组p38MAPK显著升高(P<0.01);与B组相比,C组p38MAPK显著降低(P<0.05);与A组比较,B组、C组肺泡灌洗液中性粒细胞比、蛋白含量、血清N0浓度、肺组织MDA显著增加,而PaO2和HCO3-明显降低(P<0.01);与B组比较,C组以上指标显著降低而PaO2和HCO3-明显升高(P<0.05或P<0.01).病理学检查显示C组肺组织损伤程度较B组明显减轻.结论 p38MAPK信号转导通路的活化可能是内毒素性急性肺损伤的重要发病机制之一.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 呼吸窘迫综合征 成人 内毒素类 -
P38MAPK介导Ghrelin对肿瘤坏死因子-α诱导的HepG2细胞纤溶酶原激活物抑制剂-1分泌的影响
目的 探讨Ghrelin对TNF-α诱导的HepG2细胞PAI-1分泌的影响及p38MAPK的作用.方法 HepG2细胞培养,加入TNF-α,ELISA法测定上清PAI-1的含量;免疫印迹法检测磷酸化p38的表达.Ghrelin预处理1 h,检测TNF-α变化.结果 TNF-α浓度依赖地增高PAI-1分泌;Ghrelin组PAI-1减少;TNF-α组p-p38增加,Ghrelin组较TNF-α组减少.结论 TNF-α可能通过p-p38介导HepG2 PAI-1的表达;Ghrelin可能通过抑制p-38通路抑制PAI-1的表达.
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家兔颈动脉内膜损伤后血管平滑肌细胞表型转化及p38的表达变化
目的 观察动脉内膜损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化及其与p38表达的关系.方法 分别用HE染色、免疫组化和免疫印迹(Western blot)方法检测家兔假损伤组(S组)和损伤组损伤后不同时间点血管形态学改变及血管壁中增殖细胞核抗原(PCNA)、平滑肌α肌动蛋白(SMα-actin)和p38蛋白表达的变化.结果 ⑴内膜损伤后1 d血管中膜管腔侧、3 d管腔内表面可见增殖的VSMC,5～7 d新生内膜(NI)形成并逐渐增厚,14～35 d NI进行性增厚.各组中膜均有增殖的VSMC向腔面集聚.⑵S组动脉中膜VSMC及内皮细胞PCNA为阴性.中膜于损伤后1～14 d,NI于5～14 d PCNA阳性细胞率逐渐增加,14 d达高峰,28 d后开始逐渐减少,且NI阳性率略高于中膜.⑶S组动脉中膜SMα-actin表达为阳性,内皮细胞为阴性.SMα-actin阳性面积于损伤后1 d开始减少,3 d为明显,5 d后开始逐渐增加,NI阳性表达略低于中膜.⑷S组动脉中膜p38较少或无表达,损伤后1～35 d呈持续高表达,以3～14 d为明显,NI阳性表达略高于中膜.损伤后p38表达变化与PCNA表达变化呈正相关,且早于SMα-actin表达减少.结论 内膜损伤后VSMC增殖能力与其表型转化密切相关,p38参与了损伤后VSMC表型转化的信号转导.
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p38信号通路对白蛋白诱导肾小管上皮细胞骨调素mRNA的表达
目的探讨p38信号通路(p38MAPK)在白蛋白介导的大鼠肾小管上皮细胞表达骨调素(OPN)中的作用.方法应用Western印迹法检测p38MAPK在白蛋白诱导的肾小管上皮细胞中的活化程度,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察白蛋白及p38MAPK特异性阻断剂SB203580对肾小管上皮细胞促炎症介质骨调素OPN mRNA的影响.结果白蛋白以时间依赖性刺激NRK-52E引起的p38MAPK 活化,并明显上调肾小管上皮细胞OPN mRNA的表达.SB203580能显著抑制OPN mRNA的表达.结论 p38MAPK在白蛋白介导的肾小管上皮细胞上调表达黏附因子OPN中起重要作用.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 白蛋白类 肾小管 骨钙素 -
p38丝裂原活化蛋白激酶在低氧鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的表达
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在低氧引起的鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用.方法 采用细胞培养方法,免疫印迹技术,流式细胞仪方法测定在低氧情况下p38 MAPK的表达及其细胞周期的变化.结果 低氧情况下细胞中p38 MAPK表达增加,细胞呈现增殖性变化.结论 p38 MAPK在低氧情况下参与了鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,具有重要的病理生理学意义.
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高糖环境下趋化素与其受体ChemR23通过活化p38 MAPK促进肾小球内皮细胞炎性因子IL-6、TNF-α的表达
目的 观察趋化素(Chemerin)及其受体ChemR23在高糖刺激肾小球内皮细胞(GEnC)中的作用及机制.方法 使用高糖体外刺激小鼠GEnC,分为正常对照组、20.0 mmol/L高糖组、40.0 mmol/L高糖组及渗透压对照组,检测培养上清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)的浓度,及细胞内Chemerin、ChemR23、IL-6和TNF-α的蛋白和mRNA的表达.应用慢病毒转染干扰ChemR23表达,并分别给予Chemerin及高糖刺激细胞,检测IL-6及TNF-α上清中的浓度和胞内mRNA的表达,及高糖刺激下p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化水平.在高糖刺激前加入p38 MAPK特异性抑制剂,检测培养上清IL-6、TNF-α的浓度,及其胞内mRNA的表达.各因子在培养上清中的浓度采用ELISA检测,Western印迹检测胞内蛋白表达和磷酸化水平,实时定量PCR检测胞内mRNA的表达.结果 与对照组比较,20.0 mmol/L和40.0 mmol/L高糖组IL-6、TNF-α的表达及Chemerin蛋白和mRNA表达均增加(均P＜ 0.05),而ChemR23表达均无明显变化(均P＞0.05),Chemerin刺激组IL-6、TNF-α上清表达和胞内mRNA表达均增加(均P＜0.05).应用慢病毒干扰ChemR23表达后,Chemerin或高糖诱导的IL-6及TNF-α过表达均受到抑制(均P＜0.05).同时,高糖组p38 MAPK的磷酸化水平高于对照组(P＜0.05),而干扰ChemR23表达后,高糖刺激的p38 MAPK磷酸化水平降低(与高糖组比较P＜ 0.05).加入p38 MAPK抑制剂,高糖诱导的IL-6、TNF-α过表达均降低(与高糖组比较均P＜ 0.05).结论 高糖刺激可诱导GEnC合成Chemerin,并通过其受体ChemR23引起p38 MAPK信号通路的活化,从而诱导炎性因子IL-6、TNF-α的表达,促进GEnC的炎性反应.
关键词： 炎症趋化因子类 p38丝裂原活化蛋白激酶类 炎症 糖尿病肾病 肾小球内皮细胞 -
支架蛋白JLP对人肾小管上皮细胞转分化的影响
目的 观察支架蛋白JLP对人肾小管上皮细胞(HK-2)间充质转分化的影响,探讨p38 MAPK信号通路在其中的作用.方法 构建敲除jlp基因的细胞模型,细胞被分为阴性对照(Ctrl-shRNA)组、jlp基因敲除(jlp-shRNA)组、阴性对照+成纤维细胞生长因子(FGF-2)组和jlp基因敲除+成纤维细胞生长因子(jlp-shRNA+ FGF-2)组.Western印迹法检测各组细胞JLP、E钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子(TGF)β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达;免疫荧光法检测FGF-2诱导24 h后,α-SMA、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)的表达.结果 与Ctrl-shRNA组比较,FGF-2组JLP蛋白表达量明显下调(P＜0.05);与FGF-2组比较,jlp-shRNA+ FGF-2组TGF-β1、α-SMA、p38 MAPK蛋白表达量明显上调,E-cadherin蛋白表达量明显下调(P＜0.05);与FGF-2组比较,jlp-shRNA+FGF-2组α-SMA、COL-Ⅰ、FN的荧光表达明显上调.结论 支架蛋白JLP在促纤维化环境形成中可抑制HK-2细胞间充质转分化,其机制可能与JLP负调控p38 MAPK信号通路有关.
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球形脂联素抑制高糖环境下肾小管上皮细胞单核趋化蛋白-1的高表达
目的 探讨高糖环境下球形脂联素(globular adiponectin,gAd)对大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)单核趋化蛋白-1 (MCP-1)表达的影响以及其与脂联素受体(AdipoR)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的关系.方法 体外培养NRK-52E细胞,分为六组:正常对照组(NG,5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,25 mmol/L葡萄糖)、gAd处理组1～3(gAd 1～3,分别用2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L gAd+25 mmol/L葡萄糖)、p38MAPK抑制剂组(SB,10 μmol/LSB203580+25 mmol/L葡萄糖).分别采用RT-PCR和Real-time PCR法检测MCP-1和AdipoR1/AdipoR2的mRNA表达;Western印迹法检测磷酸化p38MAPK(p-p38 MAPK)、总p38MAPK(t-p38 MAPK)、MCP-1和AdipoR1/AdipoR2的蛋白表达.结果 与NG组相比,HG组MCP-1的mRNA和蛋白表达、p-p38MAPK蛋白表达均明显升高(均P＜0.05),t-p38 MAPK无明显变化.gAd处理组及p38MAPK抑制剂组p-p38MAPK、MCP-1的mRNA和蛋白表达明显降低(均P＜0.05).AdipoR1及AdipoR2在NG组均有表达,且AdipoR1的mRNA和蛋白表达均明显高于AdipoR2,差异有统计学意义(均P＜ 0.01).与NG组比较,HG组及AdipoR2的mRNA和蛋白表达稍低,但差异均无统计学意义(P＞0.05).与HG组比较,gAD处理组AdipoR1的mRNA和蛋白表达均增加(均P＜ 0.01),但AdipoR2的mRNA及蛋白表达无改变(P＞0.05).结论 gAd剂量依赖性抑制高糖诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞MCP-1的高表达,且这种肾脏保护作用是AdipoR1及p38MAPK介导的.
关键词： 脂联素 受体 趋化因子CCL2 p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
尿酸通过激活p38信号通路上调大鼠肾小球系膜细胞前列腺素E2的表达
目的 探讨p38信号通路(p38MAPK)在尿酸(UA)上调大鼠肾小球系膜细胞(GMC)表达前列腺素E2(PGE2)中的作用及其可能机制.方法 体外培养GMC,应用不同浓度的UA(50、100、300 μmol/L)刺激或应用p38MAPK特异性抑制剂SC68376(10 μmol/L)预处理30 min后,再加入UA(50、100、300 μmol/L),分别于1h、2h、6h、24 h收集细胞.分别应用RT-PCR、ELISA法检测环氧化酶2(COX-2)、PGE2的表达,Western印迹法检测细胞内p38MAPK的磷酸化水平.结果 与对照组相比,UA显著促进GMC的PGE2、COX-2 mRNA表达及p38MAPK的磷酸化(均P＜0.05).予p38MAPK特异性抑制剂SC68376后,UA诱导GMC的COX-2、PGE2表达和p38MAPK磷酸化均受到抑制.结论 UA可促进GMC表达PGE2,其机制可能与UA激活p38MAPK信号通路,引起COX-2的合成增加,进而上调PGE2表达有关.
关键词： 尿酸 系膜细胞 地诺前列酮 p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
色素上皮衍生因子对高糖诱导人肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶-cAMP反应元件结合蛋白通路及纤连蛋白的影响
目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)对高糖条件下人肾小球系膜细胞( HMC )p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)及细胞外基质成分纤连蛋白(FN)的影响.方法 体外予正常糖(5.6 mmol/L)、甘露醇(24.4 mmol/L)、高糖(30 mmol/L)、高糖+PEDF(30 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L、40 nmol/L、100 nmol/L PEDF)培养基培养HMC 24 h,观察p38MAPK、CREB活性(Western印迹)及FN mRNA( RT-PCR)和蛋白( ELISA)的变化.结果 与正常糖及甘露醇组相比,高糖组p-p38MAPK、p-CREB、FN的表达均显著升高(均P＜ 0.01)；与高糖组相比,PEDF干预组上述指标的表达均显著下降(均P＜0.05).结论 PEDF可能通过p38MAPK-CREB通路抑制糖尿病肾病的纤维化.
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低渗非离子造影剂对肾小管上皮细胞凋亡的作用及其机制
目的 探讨低渗非离子型造影剂碘必乐诱导体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)凋亡的作用及机制.方法 体外培养的HK-2细胞,分为阴性对照组、不同剂量(1.16、4.63、18.5、74、296 gl/L)的碘必乐作用组(作用时间为6 h).通过流式细胞仪、Hoechst 33258染色观察细胞凋亡的比例和形态学变化;Western印迹方法检测凋亡蛋白天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达水平,并选取作用强的剂量(296 gl/L)刺激2、4、6、12 h,观察caspase-3表达变化.选取不同剂量碘必乐作用1 h,与阴性对照组比较,观察细胞外信号调节激酶(ERK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路磷酸化水平的变化,并观察不同剂昔p38MAPK抑制剂SB203580对碘必乐诱导的cagpase-3和Bcl-2表达的影响.结果 流式细胞仪检测结果示74、296 gl/L碘必乐作用下细胞凋亡率较阴性对照显著升高(均P＜0.05).Hoechst 33258染色结果示296 gl/L碘必乐可致明显的细胞凋亡形态学改变,凋亡细胞核呈致密浓染或核碎裂.Western印迹检测方法表明,碘必乐以剂量和时间依赖方式诱导细胞内caspase-3表达,以296 gl/L作用12 h表达强;各剂量碘必乐作用下细胞内ERK1/2磷酸化水平与阴性对照组的差异均无统计学意义(均P＞0.05),而一定剂镀的碘必乐处理组细胞内p38MAPK磷酸化水平较阴性对照组显著升高(均P＜0.05).应用p38MAPK特异性抑制剂(30 μmol/L)预处理2 h可以阻断细胞内p38MAPK信号通路的磷酸化,抑制碘必乐诱导的细胞内caspase-3表达并部分上调Bcl-2表达,与碘必乐阳性对照组的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 低渗非离子型造影剂碘必乐以剂量和时间依赖方式诱导体外培养的HK-2细胞凋亡,其机制可能与上调caspase-3和下调抗凋亡蛋白Bcl-2有关,而p38MAPK信号通路的激活可能参与了该过程的调控.
关键词： 造影剂 肾功能不全 细胞凋亡 p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
罗格列酮对多囊肾囊肿衬里上皮细胞p38促分裂原活化蛋白激酶信号通路的影响
目的 探讨罗格列酮对多囊肾囊肿衬里上皮细胞p38促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的作用.方法 分别用罗格列酮(RGZ,10 μmol/L)、过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)抑制剂GW9662(10 μmol/L)、RGZ(10 μmol/L)+GW9662(10 μmol/L)、p38MAPK特异性抑制剂SB203580(10 μmol/L)、SB203580(10 μmol/L)+RGZ(10 μmol/L)处理体外培养的多囊肾囊肿衬里上皮细胞(PKD细胞)2 h后,再用表皮生长因子(EGF)刺激不同时间,另设置空白对照组和单独EGF刺激组.采用Western印迹方法检测p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38)、增殖细胞核抗原(PCNA)表达;RT-PCR检测p38 mRNA表达;免疫细胞化学检测c-fos和c-jun的表达.结果 (1)与空白对照组相比,EGF显著上调p-p38、PCNA、c-fos和c-jun的表达(P<0.01).(2)与EGF单独刺激相比,RGZ显著降低p38活化和基因表达(均P<0.01).RGZ组、SB203580+RGZ组p-p38、PCNA、c-fos、c-jun表达明显下调(P<0.01),两组间差异无统计学意义.(3)与RGZ组相比,RGZ+GW9662组部分阻断RGZ的下调作用(P<0.05).结论 罗格列酮抑制多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖的作用机制可能与其降低p38MAPK活性,继而抑制PCNA、c-fos及c-jun表达有关.这种抑制作用是部分非PPARγ依赖的.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 多囊肾 常染色体显性 表皮生长因子 罗格列酮 -
12-脂氧化酶对糖尿病肾病鼠肾小球p27Kip1表达的影响
目的 探讨12-脂氧化酶(12-LO)对糖尿病肾病肾小球内p27Kip1表达的影响.方法 在有或无p38 MAPK(p38)抑制剂(SB203580,1 μmol/L)的条件下,用12-LO作用产物12羟二十烷四烯酸[12(S)-HETE,10-7mmol/L]刺激系膜细胞24 h.雄性SD大鼠分为普通饮食对照组、普通饮食+12-LO抑制剂(CDC,8 mg/kg,3次/周,皮下注射)处理组、高脂饮食结合小剂量链脲菌素(STZ,35 mg/kg,腹腔注射)诱导2型糖尿病组、高脂饮食结合小剂量STZ诱导2型糖尿病+CDC处理组,连续皮下注射CDC 1个月.野生型和12-LO基因敲除C57BL/6小鼠随机分成野生型对照组、12-LO基因敲除组、野生型STZ(200 mg/kg,腹腔注射)诱导1型糖尿病组、12-LO基因敲除STZ诱导1型糖尿病组,饲养16周.实验结束后收集尿、血液、提取肾脏,用系列过筛方法 分离肾小球.Western印迹和免疫组织化学方法 检测p38活性和p27Kip1蛋白表达的变化.结果 抑制p38活性可有效阻断12(S)-HETE诱导的系膜细胞内p27Kip1的表达(P<0.01).CDC可抑制2型糖尿病大鼠肾小球体积增大,降低尿白蛋白量(24 h),阻止肾小球内p38活性和p27Kip1蛋白表达增加,与CDC未处理2型糖尿病大鼠比较差异均有统计学意义(均P<0.01).与野生型糖尿病小鼠比较,12-LO基因敲除糖尿病小鼠p38活性、p27Kip1蛋白表达及细胞外基质积聚显著减少,差异有统计学意义(均P<0.01).结论 12-LO可通过p38通路上调糖尿病肾小球内p27Kip1的表达.
