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肺结核患者环腺苷酸反应元件结合蛋白与γ-干扰素基因启动子区的关系
目的 研究活动性肺结核患者环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB)与γ-干扰素基因近端启动子的关系.方法 2007年1-12月北京胸科医院结核科收治的25例肺结核患者(肺结核组)和18例PPD阳性健康人(对照组)为研究对象.分离外周血中CD3+细胞,采用凝胶电泳迁移率变化(EMSA)和竞争性EMSA分析CREB及γ-干扰素基因近端启动子结合情况,染色质免疫共沉淀(ChIP)技术研究MTB抗原在体内状态下能否诱导CREB产生并与γ-干扰素基因近端启动子结合.Western blot法检测CREB表达水平及MTB抗原诱导CREB磷酸化.结果 肺结核组25例中有18例缺失低迁移率条带,说明其缺少与γ-干扰素基因近端启动子结合的蛋白,竞争性EMSA试验结果证实该蛋白复合体中含CREB;对照组中10例有204 bp的PCR产物,肺结核组中有12例缺失该产物,提示其缺少与γ-干扰素基因近端启动子结合的CREB;肺结核组有20例未见CREB表达,且所有病例CD3+T细胞在MTB抗原刺激时不能诱导磷酸化CREB蛋白的产生.结论 CREB蛋白可与γ-干扰素基因近端启动子区结合,肺结核患者缺少与γ-干扰素基因近端启动子结合的CREB蛋白.
关键词： 结核 肺 cAMP反应元件结合蛋白质 干扰素Ⅱ型 -
环腺苷酸应答元件结合蛋白在老年小鼠术后认知功能障碍发病机制中的作用
目的 探讨环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)与脑源性神经营养因子(BDNF)通路在老年小鼠术后认知功能障碍发病机制中的作用.方法 72只老年C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组、异氟醚组、手术组和异氟醚+手术组,每组18只,分别施以假手术、1.8％异氟醚吸入1.5h、局麻腹部手术和1.8％异氟醚吸入1.5h+局麻腹部手术.术后行条件恐惧行为学实验评估各组小鼠认知功能,并分别于术后第1、3、7天行Western blot实验检测各组小鼠海马组织CREB、Ser133位点磷酸化CREB(p-CREB)以及BDNF的表达情况.结果 与其他3组比较,手术组小鼠术后第3天场景测试和声音测试凝滞时间百分比降低,术后第1、7天场景测试凝滞时间百分比降低,且小鼠术后第1、3天海马p CREB/CREB比值降低,术后第3、7天BDNF表达减少(P＜0.05,P＜0.01).结论 腹部手术可致老年小鼠术后早期认知功能损害,异氟醚吸入全麻下行腹部手术有一定认知保护作用,CREB/BDNF通路受到抑制是老年小鼠术后认知功能障碍发病机制之一.
关键词： cAMP反应元件结合蛋白质 脑源性神经营养因子 认知障碍 异氟醚 突触 -
血小板活化因子对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制
目的 探讨血小板活化因子(PAF)对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制,为卵巢癌的治疗提供新的靶点.方法 (1)以100 nmol/L的PAF分别处理卵巢浆液性癌细胞株OVCA429细胞及卵巢黏液性癌细胞株RMUG-L细胞,均以仅加入二甲基亚砜(DMSO)为对照,采用体外侵袭实验检测其穿膜细胞数.(2)以不同浓度(分别为0、0.1、1、10、100、1000 nmol/L)的PAF处理后检测OVCA429细胞中环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(p-CREB)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达水平；以100 nmol/L的PAF处理不同时间(分别为0、5min、10 min、30 min、1h及12 h)后检测OVCA429细胞中有丝分裂原活化蛋白激酶p38蛋白(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、CREB及p-CREB蛋白的表达水平,上述各蛋白的表达水平均采用蛋白印迹法检测.(3) OVCA429细胞在加入PAF( 100 nmol/L)的基础上,分别加入各蛋白的抑制剂,即PAF受体(PAFR)抑制剂-WEB2076(50 μmol/L)、p-p38 MAPK抑制剂-SB203580(10 μmol/L)、CREB结合蛋白(CBP)-CREB相互作用抑制剂-217505(25 μmol/L).实验分为6组:PAF组、PAF+WEB2076组、PAF+ SB203580组、PAF+ 217505组、PAF+ SB203580 +217505组及空白对照组,采用蛋白印迹法检测各组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB、MMP-2蛋白的表达强度.结果 (1)体外侵袭实验显示,予PAF处理后,OVCA429细胞的穿膜细胞数[(118±23)个]明显多于其对照细胞[(36±8)个,P＜0.01],而RMUG-L细胞的穿膜细胞数[(45±13)个]与其对照细胞[(53±9)个]比较无明显变化(P＞0.05).(2)不同浓度的PAF处理后,OVCA429细胞中p-CREB、MMP-2蛋白的表达水平呈明显的剂量依赖性(P＜0.01),0.1 nmol/L的PAF即可引起p-CREB、MMP-2蛋白表达水平明显升高,至100 nmol/L时达高峰；而CREB蛋白的表达无明显变化.100nmoL/L的PAF处理不同时间后,OVCA429细胞中p38 MAPK、CREB蛋白表达无明显变化；而p-p38 MAPK、p-CREB蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),至处理10 min时达高峰,随后逐渐降低.(3)与空白对照组比较,PAF组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB及MMP-2蛋白的表达强度明显增强.与PAF组比较,PAF+ WEB2076组、PAF+SB203580组、PAF+ SB203580+ 217505组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB及MMP-2蛋白的表达强度明显减弱,但PAF+ SB203580+ 217505组与PAF+ WEB2076组及PAF+ SB203580组相比无明显差异；PAF +217505组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB蛋白的表达强度无明显变化,但其MMP-2蛋白的表达强度明显减弱.结论 PAF可促进卵巢浆液性癌OVCA429细胞的侵袭,这一作用可能是通过p38MAPK激活转录因子CREB,进一步上调MMP-2蛋白的表达而实现的.
关键词： 卵巢肿瘤 肿瘤浸润 血小板活化因子 cAMP反应元件结合蛋白质 基质金属蛋白酶2 -
散发性肌萎缩侧索硬化与运动神经元生存基因缺失的关系
目的 探讨我国散发性肌萎缩侧索硬化(SALS)与运动神经元生存基因(SMN)缺失之间的关系.方法 收集141例SALS患者和134名健康对照的外周静脉血并抽提DNA,应用聚合酶链反应.限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)进行SMN基因缺失筛查.缺失频率的比较采用卡方检验分析.结果 4例SALS患者和3名健康对照分别检出SMN2基因第7、8号外显子纯合缺失,缺失频率分别为2.84%(4/141)和2.24%(3/134),差异无统计学意义(χ2=0.0001,P=1.000).此外,所有研究对象均未检出SMN1基因纯合缺失.结论 SMN基因纯合缺失与我国SALS患者之间无明显相关性.
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p38 MAPK信号途径在高糖诱导的大鼠肾系膜细胞中激活的意义
目的 探讨高糖状态下肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号途径与其下游因子cAMP反应元件结合蛋白1(CREBI)、转化生长因子β1(TGF-β1)及细胞外基质表达的关系. 方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予低糖和/或甘露醇、高糖和/或SB203580(p38 MAPK特异性抑制剂)干预.采用免疫细胞化学法观察p38 MAPK蛋白的表达情况;Westernblotting检测p38 MAPK和CREB1及其磷酸化蛋白(p-p38 MAPK、p-CREB1)的表达;RT-PCR榆测TGF-N和FN mRNA的表达;放免法测定细胞上清液中层黏连接蛋白(LN)和Ⅳ型胶原的含量. 结果 与低糖组、低糖+甘露醇组相比,高糖刺激可使p38 MAPK蛋白发生核转移,p-p38 MAPK、p-CREB1表达明显上调,TGF-β1和FN mRNA的表达增强,LN和Ⅳ型胶原含量增加.SB203580能明显抑制p38 MAPK蛋白的核转移,降低p38 MAPK和CREB1的磷酸化,并抑制TGF-β1和FN mRNA表达,使LN和Ⅳ型胶原的分泌减少. 结论 高糖状态激活p38 MAPK信号途径参与了高糖诱导的肾小球系膜细胞TGF-β1的表达和细胞外基质的分泌.
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微波辐射对大鼠睾丸组织pCREB、CREM及CBP蛋白表达的影响
目的 探讨微波辐射对睾丸组织磷酸化环磷酸腺苷(cAMP)-反应元件结合蛋白(pCREB)、cAMP反应元件调节因子(CREM)及CREB结合蛋白(CBP)表达的影响及其意义.方法 将30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=5)和辐射组(n=25).辐射组接受30mW/cm2微波辐射5min,分别于辐射后6h,1、3、7、14d处死5只大鼠.对照组不接受辐射,于ld时活杀.采用免疫组织化学及Western blotting检测睾丸组织pCREB、CREM及CBP蛋白表达的变化.结果 pCREB、CREM和CBP均主要表达于睾丸生精小管精子细胞核.微波辐射后6h～14d(pCREB在1d时除外),pCREB和CBP蛋白表达明显下调(P＜0.05或P＜0.01),辐射后6h～7d CREM表达亦明显下调(P＜0.05或P＜0.01).结论 pCREB、CREM及CBP表达下调在微波辐射致生精细胞损伤中可能发挥重要作用.
关键词： 微波 辐射损伤 实验性 cAMP反应元件结合蛋白质 cAMP应答元件调节器 CREB结合蛋白质 睾丸 大鼠 -
复合疲劳对大鼠学习记忆能力的影响
目的 通过观察复合疲劳大鼠的空间学习、记忆能力及其海马区磷酸化环磷腺苷相应元件结合蛋白(phosphorylated cyclic adenosine monophosphate responsive element binding protein,p-CREB)的表达水平,探讨复合疲劳对大鼠学习记忆能力影响的机制. 方法 按随机数字表法,将24只成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠分为对照组、食物限制组和复合疲劳组3组,每组8只.运用Morris水迷宫实验方法测定各组大鼠的平均逃避潜伏期及平台所在象限的游泳时间百分比.运用蛋白质印迹(western blot)方法检测大鼠海马区p-CREB的表达.采用SPSS 17.0统计软件对3组大鼠的负重游泳时长、平均逃避潜伏期及平台所在象限的游泳时间百分比进行单因素方差分析. 结果 5d负重游泳实验结果显示,3组大鼠间游泳时长差异有统计学意义(F=40.28～66.04,P＜0.01)；与对照组和食物限制组相比,复合疲劳组大鼠的负重游泳时长明显缩短(P＜0.01).在Morris水迷宫定位航行实验中,3组大鼠之间第2、3、4天的逃避潜伏期差异有统计学意义(F=4.17～7.11,P＜0.05或0.01)；与对照组和食物限制组相比,复合疲劳组大鼠的逃避潜伏期明显延长(P＜0.05或0.01).在空间探索试验中,3组大鼠在平台所在象限的时间百分比差异有统计学意义(F=3.62,P＜0.05)；与对照组和食物限制组相比,复合疲劳组大鼠在平台所在象限的时间百分比明显降低(P＜0.05).3组大鼠海马区p-CREB的相对含量差异有统计学意义(F=730.07,P＜0.01)；复合疲劳组大鼠低于对照组和食物限制组(P＜0.01). 结论 复合疲劳对大鼠的空间学习、记忆能力具有损害作用,其机制可能与复合疲劳组大鼠海马区p-CREB的表达水平降低有关.
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外源性TGF-β3对大鼠肝星状细胞TGF-β3启动子活性和CREB-1的影响
目的 观察转化生长因子β3(TGF-β3)自反馈调节信号通路中正向调节因子的作用.方法 用外源性TGF-β3诱导大鼠肝星状细胞系(HSC-T6),在不同时间点用荧光素酶报告基因分析法检测TGF-β3的启动子活性,Western印迹法检测cAMP反应元件(CRE)结合蛋白1(CREB-1)和磷酸化CREB-1的表达,实时荧光定量PCR法检测CREB-1 mRNA的表达情况.结果 外源性TGF-β3处理HSC-T6后,TGF-β3启动子活性表现出时间依赖性增高,并于诱导后24 h达峰值[10.68±0.57,2.2倍于对照组(4.83±0.56)].TGF-β3启动子的基础活性下降了85%(0.73±0.03,P＜0.05).外源性TGF-β3可在短时间内上调磷酸化CREB-1的表达,与对照组(比值为1)相比,15 min即可见明显增加(1.5倍于对照组),1 h时其表达量达到大值(2.0倍于对照组),12 h略见下降(1.9倍于对照组,均P＜0.05).外源性TGF-β3对HSC-T6中CREB-1 mRNA和CREB-1蛋白的表达均无影响(均P＞0.05).结论 外源性TGF-β3可促进TGF-β3启动子活性增强,且CRE位点在外源性TGF-β3介导的TGF-β3启动子活性中发挥重要作用;外源性TGF-β3可活化CREB-1,但不能促进CREB-1蛋白及mRNA的表达.
关键词： 肝硬化 转化生长因子β3 cAMP反应元件结合蛋白质 -
脑缺血再灌注损伤大鼠CREB信号通路调控及电针足三里作用机制
目的 探讨脑缺血再灌注损伤大鼠环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element bind-ing protein,CREB)信号通路调控及电针足三里作用机制.方法 选择100只健康雄性SPF级Wistar大鼠,随机分为假手术组、模型组、电针组、电针+阻断剂组,每组各25只.电针+阻断剂组造模前注射H-89阻断剂,模型组、电针组、电针+阻断剂组均行脑缺血再灌注损伤模型,假手术组和模型组不予电针干预,电针组、电针+阻断剂组电针足三里干预7d.评估大鼠神经行为学评分,观察脑梗死体积,检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、CREB和磷酸化CREB(p-CREB)的表达水平,记录CREB和VEGF的基因表达水平.结果 与假手术组比较,造模2h、干预7d模型组、电针组和电针+阻断剂组大鼠神经行为学评分均明显升高,脑梗死体积均明显增大,差异有统计学意义(P<0.05);与本组造模2 h比较,干预7 d模型组、电针组和电针+阻断剂组神经行为学评分均明显降低,电针组干预7d脑梗死体积减小,差异有统计学意义(P<0.05);与电针组比较,模型组、电针+阻断剂组干预7 d神经行为学评分升高,脑梗死体积增大,差异有统计学意义(P<0.05).与电针组比较,假手术组、模型组、电针+阻断剂组VEGF表达量均减少,差异有统计学意义(P<0.05).与假手术组比较,模型组、电针组、电针+阻断剂组p-CREB和p-CREB/CREB蛋白表达水平与VEGF基因表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与电针组比较,模型组、电针+阻断剂组p-CREB和p-CREB/CREB蛋白表达水平与VEGF基因表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 电针足三里可改善脑缺血神经行为学功能,其机制可能与激活CREB通路,刺激下游VEGF表达,进而促进神经血管再生有关.
关键词： 脑缺血 穴 足三里 cAMP反应元件结合蛋白质 -
七氟醚对不同性别大鼠海马神经元p-CREB1表达的影响
目的 评价七氟醚对不同性别大鼠海马神经元磷酸化cAMP反应元件结合蛋白1(p-CREB1)表达的影响.方法 健康成年雌性SD大鼠30只,3月龄,体重180～220 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组(n＝15):对照组(Fc组)和七氟醚组(Fs组)；健康成年雄性SD大鼠28只,3月龄,体重380-440 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组(n＝14):对照组(Mc组)和七氟醚组(Ms组).Fc组和Mc组吸入95％氧气(流量4 L/min)2 h,Fs组和Ms组吸入3％七氟醚2h.于停止吸入七氟醚后2d时行避暗实验；于停止吸入七氟醚后3～7d时行Morris水迷宫实验,第7天认知功能测定结束后处死大鼠,取脑组织,剥离海马,采用Western blot法检测海马组织p-CREB1及Bcl-2、caspase-8的表达水平.结果 与Fc组比较,Fs组停止吸入七氟醚后3d时逃避潜伏期延长,游泳总路程增加,海马组织p-CREB1和Bcl-2表达下调,caspase-8表达上调(P<0.05)；与Mc组比较,Ms组停止吸入七氟醚后3～6d时逃避潜伏期延长,游泳总路程增加,海马组织p-CREB1和Bcl-2表达下调,caspase-8表达上调(P<0.05)；与Fs组比较,Ms组停止吸入七氟醚后4～6d时逃避潜伏期延长,游泳总路程增加,海马组织p-CREB1和Bcl-2表达下调(P<0.05).结论 七氟醚可通过抑制海马神经元CREB1蛋白磷酸化,上调caspase-8蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,促进神经元凋亡,导致大鼠认知功能减退,且对雄性大鼠的效应更明显.
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异丙酚麻醉对新生大鼠海马PKA-CREB信号通路的影响
目的 评价异丙酚麻醉对新生大鼠海马蛋白激酶A(PKA)-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响.方法 雄性SD大鼠175只,7日龄,体重8～15g,采用随机数字表法,将其分为5组(n=35):对照组(C组)、异丙酚25 mg/kg(E组)、异丙酚50 mg/kg(P2组)、异丙酚100mg/kg(B组)和异丙酚200 mg/kg(P4组).E组和P2组为单次腹腔注射异丙酚25或50 mg/kg;P3组和n组首次腹腔注射异丙酚50 mg/kg,待翻正反射恢复后,追加异丙酚50 mg/kg,直至给完总量.每组取5只大鼠,于苏醒后即刻抽取动脉血样行血气分析.分别于苏醒后2h和饲养9周时,电镜下观察海马神经元超微结构,采用RT-PCR法测定海马组织PKA mRNA和CREBmRNA的表达,采用Westernblot法测定PKA蛋白和pCREB蛋白的表达.结果 5组动脉血气指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).P2组、P3组和P4组海马神经元出现核肿胀、碎裂,染色质边集、凋亡小体,突触数量减少,间隙增宽.与C组相比,E组、P2组、R组和P4组苏醒后2h和饲养9周时海马组织PKA mRNA、CREBmRNA、PKA蛋白和pCREB蛋白表达均下调(P＜0.05).结论 异丙酚麻醉对新生大鼠产生神经毒性的机制可能与抑制海马组织PKA-CREB信号通路的激活有关.
关键词： 二异丙酚 婴儿 新生 环AMP依赖性蛋白激酶类 cAMP反应元件结合蛋白质 海马 -
七氟醚麻醉对发育期大鼠海马神经元p-CREB表达的影响
目的 评价七氟醚麻醉对发育期大鼠海马神经元磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)表达的影响.方法 清洁级健康雄性SD大鼠32只,7日龄,体重10～ 15 g,采用随机数字表法分为2组(n=16):对照组(C组)吸入30％氧气6h;七氟醚麻醉组(Sev组)吸入30％氧气和3％七氟醚的混合气体6h.于吸氧或七氟醚麻醉结束后各组随机处死8只大鼠,取海马组织,采用Western blot法检测神经元p-CREB的表达.其余大鼠于2月龄时行Morris水迷宫实验,随后处死大鼠取海马组织,采用Western blot法检测神经元p-CREB的表达水平.结果 与C组比较,Sev组大鼠逃避潜伏期和游泳总路程延长,原平台穿越次数减少,第Ⅱ象限停留时间百分比降低,海马神经元p-CREB表达下调(P＜0.05).结论 七氟醚麻醉对发育期大鼠产生神经毒性作用的机制与其抑制海马神经元p-CREB表达有关.
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异氟醚麻醉对老龄大鼠海马β淀粉样蛋白生成、c-Jun氨基末端激酶和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白磷酸化的影响
目的 探讨异氟醚麻醉对老龄大鼠海马β淀粉样蛋白(Aβ)生成、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化的影响.方法 雄性SD大鼠96只,18月龄,体重450～500 g,采用随机数字表法,将其分为3组:正常对照组(C组)、1％异氟醚麻醉组(S1组)和2％异氟醚麻醉组(S2组).S1组和S2组分别吸入1％和2％异氟醚4h.每组取12只大鼠,麻醉后1d行Morris水迷宫实验,每组分别于麻醉后1 d(T1)、7 d(T7)取12只大鼠,行旷场反应实验,旷场反应实验结束后,处死大鼠,取海马组织,采用Western blot法测定Aβ、磷酸化JNK(p-JNK)和磷酸化CREB(p-CREB)的表达.结果 与C组比较,S1组和S2组逃避潜伏期延长,原平台象限探索时间比减少,S1组T1时总运动距离、离开边界距离和内环内距离延长,海马组织Aβ表达上调,p-CREB表达下调,T7时离开边界距离和内环内距离延长,海马组织Aβ表达上调,S2组T1时总运动距离、快速运动距离、离开边界距离延长和内环内距离延长,海马组织Aβ表达上调,p-JNK表达上调,p-CREB表达下调,T7时总运动距离、快速运动距离、离开边界距离延长和内环内距离延长,海马组织Aβ表达上调(P＜ 0.05或0.01).结论 异氟醚麻醉导致老龄大鼠认知功能减退的原因与其促进海马Aβ生成、JNK激活和抑制CREB激活有关.
关键词： 异氟醚 海马 淀粉样β蛋白 丝裂原激活蛋白激酶类 cAMP反应元件结合蛋白质 老年人 -
七氟醚对老龄大鼠海马CaMKⅡ/CREB信号通路的影响
目的 评价七氟醚对老龄大鼠海马钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)/cAMP应答元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响.方法 清洁级健康老龄雄性SD大鼠60只,18月龄,体重600～750 g,采用随机数字表法分为2组(n=30):对照组(C组)和七氟醚组(Sev组).Sev组吸入50％空氧混合气体(2 L/min)和2％七氟醚4h,C组吸入50％空氧混合气体(2 L/min)4 h.于麻醉前6d和麻醉后1d时进行Morris水迷宫实验,记录老龄大鼠逃避潜伏期、游泳距离、原平台穿越次数和第Ⅱ象限平台停留时间,于麻醉后1、3和7d时处死大鼠取海马,采用Western blot法测定CaMKⅡ、磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)、CREB及磷酸化CREB(p-CREB)的表达.结果 与C组比较,Sev组训练第5天和麻醉后1d逃避潜伏期和游泳距离延长,原平台穿越次数减少,第Ⅱ象限平台停留时间减少,麻醉后海马CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB及p-CREB表达下调(P＜0.05).结论 七氟醚通过抑制海马CaMKⅡ/CREB信号通路导致老龄大鼠认知功能降低.
关键词： 麻醉药 吸入 老年人 海马 钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型 cAMP反应元件结合蛋白质 认知 -
七氟醚对老龄大鼠海马cAMP-PKA-CREB信号通路的影响
目的 评价七氟醚对老龄大鼠海马环磷酸腺苷-蛋白激酶A-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP-PKA-CREB)信号通路的影响.方法 健康老龄雄性SD大鼠60只,18月龄,体重600～750 g,采用随机数字表法分为2组(n=30):对照组(C组)和七氟醚组(Sev组).Sev组吸入2％七氟醚4h,C组吸入50％空氧混合气体(2 L/min)4 h.于麻醉前1～6d(训练期)及麻醉结束后1d时(C组于相应时点)行Morris水迷宫实验.于麻醉结束后1、3和7d时(C组于相应时点)处死大鼠后取海马组织,采用ELISA法检测海马cAMP含量,Western blot法检测海马CREB、磷酸化CREB(p-CREB)及PKA表达,计算p-CREB/CREB比值.结果 与C组比较,Sev组麻醉结束后1d时逃避潜伏期和游泳距离延长,原平台穿越次数减少,原平台象限停留时间缩短,麻醉结束后1、3及7d时海马cAMP和PKA表达下调,麻醉结束后1d时CREB和p-CREB表达下调,p-CREB/CREB比值降低(P＜0.05).结论 七氟醚诱发老龄大鼠认知功能障碍的机制可能与抑制海马cAMP-PKA-CREB信号通路活性有关.
关键词： 环AMP 环AMP依赖性蛋白激酶类 cAMP反应元件结合蛋白质 麻醉药 吸入 认知障碍 -
骨癌痛小鼠脊髓神经元miR-212与CREB磷酸化的关系
目的 探讨骨癌痛小鼠脊髓神经元微小RNA-212(miR-212)与cAMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化的关系.方法 SPF级雄性C3H/HeJ小鼠32只,4～6周龄,体重20～ 25 g,采用随机数字表法将小鼠分为4组(n=8):假手术组(S组)、骨癌痛组(BCP组)、骨癌痛+鞘内注射阴性对照锁核酸组(BC组)和骨癌痛+鞘内注射miR-212反义锁核酸组(BL组).经股骨远端骨髓腔内注射含2× 105个NCTC 2472细胞的α-小必需培养基20μl以制备骨癌痛模型.于接种后14d时,BL组和BC组分别鞘内注射miR-212反义锁核酸和阴性对照锁核酸12 pmol/5 μl,1次/d,连续7d.S组及BCP组鞘内注射等容量无核酸酶水.于接种前1d、接种后4、7、10、14、21 d时测定自发抬足次数(NSF)和机械缩足反应阈(MWT).于接种后21d痛行为学测定结束后,取脊髓组织,采用Westernblot法测定脊髓磷酸化CREB(p-CREB)和CREB的表达水平.结果 与S组相比,BCP组、BC组及BL组接种后7-21 d时MWT降低,NSF增加,脊髓p-CREB表达上调(P＜0.05).与BCP组相比,BL组接种后21d时MWT升高,NSF减少,脊髓p-CREB表达下调(P＜0.05),BC组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).4组脊髓CREB表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓神经元miR-212可能通过促进CREB磷酸化参与小鼠骨癌痛的维持.
关键词： 骨肿瘤 疼痛 微RNAs cAMP反应元件结合蛋白质 脊髓 -
鞘内注射右美托咪啶对骨癌痛大鼠脊髓背角磷酸化cAMP反应元件结合蛋白表达的影响
目的 探讨右美托咪啶对骨癌痛大鼠脊髓背角磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)表达的影响.方法清洁级健康成年雌性Wistar大鼠64只,体重200～240 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=16):假手术组(S组)、骨癌痛组(BP组)、生理盐水组(NS组)和右美托眯啶组(D组).BP组、Ns组和D组采用胫骨骨髓腔注射10μl含Walker 256乳癌细胞2×106个缓冲液的方法制备大鼠骨癌痛模型,S组和BP组不作鞘内注射,NS组和D组于模型制备成功后7 d分别鞘内注射生理盐水10μl、右美托咪啶5μg/kg.分别于鞘内注射前1 d(T0)、注射前即刻(T1)、注射后1、6、12、24 h(T2-5,)时各组随机取10只大鼠,采用von Frey丝测定机械痛阈,各组余6只大鼠T4时处死取脊髓,采用免疫组化法测定脊髓背角p-CREB的表达.结果 与S组比较,BP组、NS组和D组T2～5时机械痛阈降低,T4时脊髓背角p-CREB表达上调(P＜0.05);与BP组比较,D组T2～5时机械痛阈升高,T4时脊髓背角p-CREB表达下调(P＜0.05),NS组机械痛阈和脊髓背角p-CREB表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 鞘内注射右美托咪啶可通过抑制大鼠脊髓背角CREB磷酸化减轻骨癌痛.
关键词： 右美托咪啶 骨肿瘤 cAMP反应元件结合蛋白质 脊髓 -
脊髓神经元ERK5/CREB信号通路在吗啡依赖大鼠戒断反应中的作用
目的 评价脊髓神经元细胞外信号调节蛋白激酶5/cAMP反应元件结合蛋白(ERK5/CREB)信号通路在吗啡依赖大鼠戒断反应中的作用.方法 取鞘内置管成功的成年雄性SD大鼠96只,体重200～ 250 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=24):正常对照组(A组)、吗啡戒断组(B组)、二甲基亚砜+吗啡戒断组(C组)和ERK5抑制剂BIX02188+吗啡戒断组(D组).B组、C组和D组皮下注射吗啡,第1天剂量10 mg/kg,第2～5天剂量每天增加10 mg/kg,第6天剂量50 mg/kg,建立大鼠吗啡依赖模型,A组给予等容量生理盐水.B组和D组于末次注射吗啡后4h腹腔注射纳洛酮4mg/kg,建立吗啡戒断模型,D组给予纳洛酮前1h鞘内注射BIX02188 10 μg,C组给予等容量二甲基亚砜.给予纳洛酮后1h内进行戒断反应评分和戒断反应诱发痛觉过敏评分.处死大鼠,取L4.5节段脊髓组织,测定CREB和磷酸化CREB(p-CREB)的表达水平.结果 与A组比较,B组、C组和D组戒断反应评分和痛觉过敏评分升高,脊髓p-CREB表达上调(P＜0.05);与B组比较,D组戒断反应评分和痛觉过敏评分降低,脊髓p-CREB表达下调(P＜0.05),C组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓神经元ERK5/CREB信号通路参与了吗啡依赖大鼠戒断反应.
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异丙酚对内脏痛大鼠PSDC神经元NK-1受体内化和CREB磷酸化的影响
目的 评价异丙酚对内脏痛大鼠脊髓突触后背柱(PSDC)神经元神经激肽-1(NK-1)受体内化和环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)磷酸化的影响.方法 成年雄性SD大鼠,体重300～ 350 g,行鞘内置管和PSDC神经元逆行预标记术.取鞘内置管成功的大鼠30只,采用随机数字表法分为3组(n=10):对照组(C组)、内脏痛组(VP组)和异丙酚组(P组).VP组和P组直肠给予10％辣椒素溶液50 μl制备内脏痛模型,C组直肠给予生理盐水50μl;直肠给药前10 min时C组和VP组鞘内注射二甲基亚砜10μl,P组鞘内注射异丙酚20 μg(用二甲基亚砜稀释至10μl).记录直肠给药后30 min内内脏疼痛评分,然后深麻醉状态下取腰骶段脊髓组织,采用免疫荧光组化检测脊髓PSDC神经元NK-1受体和磷酸化CREB(p-CREB)的表达水平.结果 与C组比较,VP组和P组内脏痛评分升高,脊髓PSDC神经元NK-1受体和p-CREB的表达上调(P＜0.05或0.01);与VP组比较,P组内脏痛评分降低,脊髓PSDC神经元NK-1受体和p-CREB的表达下调(P＜0.01).结论 异丙酚减轻大鼠内脏痛的机制可能与抑制PSDC神经元NK-1受体内化和CREB磷酸化有关.
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ERK-CREB信号通路在糖皮质激素受体介导大鼠慢性吗啡耐受中的作用
目的 评价细胞外信号调节激酶-cAMP反应元件结合蛋白(ERK- CREB)信号通路在糖皮质激素受体介导大鼠慢性吗啡耐受中的作用.方法 健康雄性SD大鼠,体重280～320 g,月龄2月,经枕骨大孔行鞘内置管.取36只鞘内置管成功的大鼠,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=6):对照组(C组)、慢性吗啡耐受组(M组)、吗啡+地塞米松组(MD组)、吗啡+RU38486组(MR组)、地塞米松组(D组)和RU38486组(R组).分别鞘内注射生理盐水10 μl、吗啡10腭、吗啡10 μg+地塞米松4 μg、吗啡10 μg+ RU38486 2 μg、地塞米松4.μg、RU38486 2 μg,2次、d,连续6d.于给药前1d测定热甩尾潜伏期(TFL)基础值,随后于给药1、3、5d首次给药后30 min及后1次给药后1 d(T1～4)测定TFL,计算大镇痛效应百分比(MPE).后1次测定TEL后取脊髓,采用免疫荧光染色法测定脊髓背角磷酸化ERK(pERK)和磷酸化CREB(pCREB)的表达.结果 与T1时比较,M组和MD组T3.4时MPE降低(P＜0.05).与C组比较,M组MPE升高,脊髓背角pERK和pCREB的表达上调(P＜0.05或0.01),R组和D组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).与M组比较,MR组MPE升高,脊髓背角pERK和pCREB表达上调,MD组脊髓背角pERK和pCREB表达下调,MPE降低(P＜0.05或0.01).结论 糖皮质激素受体介导大鼠慢性吗啡耐受的机制可能与抑制ERK-CREB信号通路有关.
关键词： 细胞外信号调节MAP激酶类 cAMP反应元件结合蛋白质 受体 糖皮质激素 药物耐受性 吗啡
