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p38信号通路与缺血性脑卒中
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)广泛存在于各种动物细胞中,是细胞内信号传递的交汇点,可将细胞外信息传递至细胞核,直接调节转录因子活性,调控基因表达.p38是MAPK信号通路的重要成员,在全身性炎性反应、休克、细胞迁移、细胞凋亡、心血管疾病等方面发挥着重要作用[1-2].近研究发现,p38信号通路与脑缺血性损伤有密切关系[3].本研究就p38信号通路,在脑缺血再灌注损伤中的作用机制作一综述.
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榄香烯对胃癌细胞p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响
目的 探讨榄香烯对人胃癌SGC-7901细胞株增殖的影响,以及与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的关系.方法 用不同浓度的榄香烯处理胃癌SGC-7901细胞,MTT法检测细胞增殖情况;光镜和透射电镜观察形态学改变;Western blot方法检测P38和磷酸化P38(P-P38)的表达.结果 榄香烯抑制胃癌细胞SGC-7901增殖,并呈浓度和时间依赖性;在光镜和透射电镜下可以观察到典型的细胞凋亡形态学改变;经0.08 mg/ml榄香烯作用4 h后,胃癌SGC-7901细胞中p38MAPK通路被激活,p-P38表达与对照组相比升高3.72倍,差异有统计学意义(P＜0.01),而P38总蛋白量未发生明显变化.预先应用p38MAPK通路抑制剂SB203580作用24 h与单用榄香烯作用组比较,p-P38表达下降54.12%,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 榄香烯可以抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖,诱发细胞凋亡,其机制可能与p38MAPK通路有关.
关键词： 胃肿瘤 p38丝裂原活化蛋白激酶类 细胞凋亡 -
子痫前期对滋养细胞脂肪酸氧化的影响及其与p38MAPK信号通路的相关性
目的 探讨重度子痫前期对胎盘滋养细胞线粒体长链脂肪酸氧化酶——长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶(LCHAD)表达的影响及其与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的相关性.方法 体外培养胎盘滋养细胞,分别用早发型重度子痫前期、晚发型重度子痫前期、重度子痫前期伴发HELLP综合征及正常妊娠妇女的血清刺激胎盘滋养细胞(分别命名为早发组、晚发组、HELLP组、正常对照组),每组再分别加入DMEM/F12培养基、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶抑制剂(NADPH-Ⅰ)和p38MAPK抑制剂(p38-Ⅰ)处理细胞.采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测各组滋养细胞LCHAD mRNA和蛋白的表达.结果 (1)LCHAD mRNA的表达:正常对照组+培养基、早发组+培养基、早发组+ NADPH-Ⅰ、早发组+p38-Ⅰ、晚发组+培养基、晚发组+NADPH-Ⅰ、晚发组+p38-Ⅰ、HELLP组+培养基、HELLP组+NADPH-Ⅰ、HELLP组+p38-Ⅰ滋养细胞LCHAD mRNA的相对表达量分别为1.00±0.03、0.14±0.08、0.95±0.20、1.43±1.02、0.37±0.18、1.51 ±0.36、1.60±0.31、0.10 ±0.04、0.49 ±0.10、0.44±0.21.早发组+培养基、晚发组+培养基、HELLP组+培养基与正常对照组+培养基比较,LCHAD mRNA的相对表达量均明显降低,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);与正常对照组比较,晚发组+ NADPH-Ⅰ、晚发组+p38-Ⅰ LCHADmRNA的相对表达量均有明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05),而HELLP组LCHAD mRNA的相对表达量均有明显降低,差异也有统计学意义(P＜0.05).(2) LCHAD蛋白的表达:正常对照组+培养基、早发组+培养基、早发组+ NADPH-Ⅰ、早发组+p38-Ⅰ、晚发组+培养基、晚发组+NADPH-Ⅰ、晚发组+ p38-Ⅰ、HELLP组+培养基、HELLP组+NADPH-Ⅰ、HELLP组+p38-Ⅰ组LCHAD蛋白的相对表达量分别为19.4±2.2、10.7±1.1、17.9±3.3、19.1 ±2.9、16.4±2.3、20.3±2.3、20.9 ±4.3、12.4±2.3、17.6±2.6、17.7 ±2.0.与正常对照组比较,早发组+培养基、晚发组+培养基及HELLP组LCHAD蛋白的相对表达量均明显降低,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),而早发组+NADPH-Ⅰ、早发组+p38-Ⅰ、晚发组+NADPH-Ⅰ、晚发组+p38-Ⅰ LCHAD蛋白的相对表达量无明显变化(P＞0.05).早发组、晚发组、HELLP组中,NADPH-Ⅰ亚组、p38-Ⅰ亚组与培养基亚组比较,LCHAD蛋白的相对表达量均有明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 重度子痫前期对胎盘滋养细胞中的脂肪酸氧化代谢有一定的影响,尤其以HELLP综合征为明显.NADPH-Ⅰ、p38-Ⅰ能缓解早、晚发型重度子痫前期和HELLP综合征中的脂肪酸氧化代谢障碍,p38MAPK信号通路可能参与了该过程.
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人类白细胞抗原G基因表达对滋养细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响
目的 探讨人类白细胞抗原G(HLA-G)基因表达变化对滋养细胞侵袭力、滋养细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达的影响.方法 对滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞进行体外培养并分组,将细胞分为实验组[转染HLA-G小分子干扰RNA(siRNA)]、阴性对照组(转染阴性对照siRNA)和空白对照组(仅转染脂质体2000).分别用逆转录(RT)PCR技术测定转染后细胞中HLA-G mRNA的表达;蛋白印迹法测定HLA-G蛋白的表达来验证核糖核酸干扰(RNAi)敲减效率;穿膜小室侵袭实验检测细胞的侵袭力;蛋白印迹法检测p-p38MAPK积分吸光度(IA)与p38MAPK IA的比值;检测加入抑制剂SB203580后穿膜小室的侵袭细 胞数.结果 (1)HLA-G mRNA表达:实验组为0.26±0.08,阴性对照组为0.71±0.11,空白对照组为0.79±0.07.实验组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);实验组HLA-G mRNA表达抑制率为(69.8±6.3)%,阴性对照组HLA-G mRNA表达抑制率为(14.9±2.2)%,空白对照组为0.(2)HLA-G蛋白表达:实验组为0.20±0.15,阴性对照组为0.75±0.12,空白对照组为0.76±0.21.实验组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);实验组HLA-G蛋白表达抑制率为(81.1±14.4)%,阴性对照组HLA-G蛋白表达抑制率为(18.0±7.7)%,空白对照组为0,实验组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)穿膜小室下室的侵袭细胞数:实验组为(57±38)个,阴性对照组为(364±79)个,空白对照组为(260±84)个.实验组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(4)p-p38MAPK与p38MAPK蛋白比值:实验组为0.74±0.04,阴性对照组为0.47±0.09,空白对照组为0.36±0.21.实验组比值明显高于其他两组,差异有统计学意义(P＜0.01).(5)加入抑制剂前、后p-p38MAPK与p38MAPK蛋白比值:实验组分别为0.89±0.09、0.16±0.04,阴性对照组分别为0.76±0.08、0.14±0.03,空白对照组分别为0.51±0.05、0.03±0.01,各组加入抑制剂SB203580前、后p-p38MAPK与p38MAPK比值分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(6)加入抑制剂前、后穿膜小室下室的滋养细胞侵袭力:实验组分别为(51±13)和(90±21)个,前后比较,差异有统计学意义(P＜0.01);阴性对照组分别为(290±52)和(298±33)个,前后比较,差异无统计学意义(P＞0.05);空白对照组分别为(290±73)和(264±64)个,前后比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HLA-G基因可能通过p38MAPK信号通路调节滋养细胞的侵袭力.提示滋养细胞HLA-G低表达可导致病理妊娠的发生.
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表皮生长因子对人滋养细胞中基质金属蛋白酶9表达的影响及其调控机制的研究
目的 探讨表皮生长因子(EGF)对人滋养细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响及其调控MMP-9的机制.方法 (1)在JEG-3滋养细胞中分别加入不同浓度的EGF(0、1、10、20 ng/ml),培养24 h后收集细胞待测.(2)JEG-3滋养细胞中加入含10 ng/ml的EGF,分别培养0、4、12、24 h后收集细胞待测.(3)根据JEG-3滋养细胞中所加成分不同分组,即无EGF组、EGF刺激组、EGF+抑制剂干预[分别加入p38丝裂原活化激酶(p38MAPK)特异性抑制剂SB203580(EGF+SB203580组)或细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)特异性抑制剂U0126(EGF+U0126组)]、抑制剂干预(分为SB203580干预组和U0126干预组).于1%的血清DMEN培养基中培养24 h,收集各组细胞待测.逆转录(RT)PCR技术检测JEG-3滋养细胞中MMP-9 mRNA的表达,蛋白印迹法检测JEG-3滋养细胞中MMP-9、NF-κB、p38MAPK、P-p38MAPK、ERK及p-ERK蛋白表达.结果 (1)JEG-3滋养细胞中MMP-9 mRNA的表达:经不同浓度EGF处理后,JEG-3滋养细胞中MMP-9 mRNA表达水平随着EGF浓度的升高而增加,其中1、10、20 ng/ml浓度EGF处理的细胞中MMP-9 mRNA表达水平(分别为0.567±0.056、1.392±0.133、1.971±0.067)与0 ng/ml(0.166±0.015)分别比较,差异有统计学意义(P<0.05).经10 ng/ml EGF处理细胞不同时间后,细胞中/MMP-9 mRNA表达水平随着培养时间的延长而增加,其中培养4、12、24 h的细胞中MMP-9 mRNA表达水平(分别为0.470±0.026、1.061±0.115、1.453±0.180)与0 h(0.253±0.044)分别比较,差异有统计学意义(P<0.05).(2)JEG-3滋养细胞中MMP-9蛋白的表达:经不同浓度EGF处理后,JEG-3滋养细胞中MMP-9蛋白表达水平随着EGF浓度的升高而增加,其中1、10、20 ng/ml浓度EGF处理的细胞中MMP-9蛋白表达水平(分别为0.043±0.012、0.085±0.008、0.142±0.015)与0 ng/ml(0.004±0.001)分别比较,差异有统计学意义(P<0.05).经10 ng/ml EGF处理细胞不同时间后,细胞中MMP-9蛋白表达水平随着处理时间的延长而增加,其中培养4、12、24 h的细胞中MMP-9蛋白表达水平(分别为0.137±0.010、0.240±0.010、1.240±0.061)与0 h(0.030±0.009)分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)EGF对JEG-3滋养细胞中p-p38MAPK、p-ERK水平的影响:①p-p38MAPK:与无EGF组(234.1±4.1)比较,EGF刺激组的p-p38MAPK水平(260.9±2.5)显著增加(P<0.05);与EGF刺激组比较,EGF+SB203580组的P-p38MAPK水平(227.9±2.4)显著下降(P<0.05).②P-ERK:与无EGF组(453.4±5.8)比较,EGF刺激组的p-ERK水平(812.2±3.5)显著增加(P<0.05);与EGF刺激组比较,EGF+U0126组的p-ERK水平(71.0±1.2)显著下降(P<0.05).(4)阻断p38MAPK通路对EGF处理的JEG-3滋养细胞中MMP-9和NF-κB蛋白表达的影响:与EGF刺激组(分别为1.476±0.452及0.959±0.017)比较,ECF+SB203580组的MMP-9和NF-κB蛋白表达水平(分别为0.645±0.270及0.530±0.026)均显著下降(P<0.05).(5)阻断ERK通路对EGF处理的JEG-3滋养细胞中MMP-9和NF-κB蛋白表达的影响:与EGF刺激组(分别为2.112±0.056及0.939±0.153)比较,EGF+U0126组的MMP-9和NF-κB蛋白表达水平(分别为0.623±0.030及0.325±0.082)均显著下降(P<0.05).结论 EGF以剂量依赖和时间依赖的方式上调人滋养细胞中MMP-9的表达;EGF通过活化p38MAPK和ERK信号通路调控滋养细胞中MMP-9的表达.
关键词： 滋养层 基质金属蛋白酶9 表皮生长凶子 p38丝裂原活化蛋白激酶类 先兆子痫 -
子痫前期胎盘中生长阻滞和DNA损伤45α基因及p38丝裂原活化蛋白激酶的表达
目的 探讨子痫前期胎盘组织中生长阻滞和DNA损伤45α(growth arrest and DNA damage-inducible 45 alpha,Gadd45α)基因和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号分子的表达,及其与血清中可溶性血管内皮生长因子受体-1(soluble vascular endothelial growth factor receptor-1,sFlt-1)和可溶性endoglin(soluble endoglin,sEng)的相关性分析.方法 选择2009年9月至2010年3月在重庆医科大学附属第一医院住院分娩的孕妇54例为研究对象,按病情分为子痫前期轻度组20例、子痫前期重度组16例,以足月择期剖宫产孕妇18例为对照组.采用免疫组织化学SP法检测Gadd45α及磷酸化p38 MAPK(phospho-p38 MAPK,p-p38 MAPK)蛋白在各组胎盘组织中的定位;实时荧光定量PCR检测各组胎盘组织中Gadd45α mRNA水平;Western印迹法检测各组胎盘组织中Gadd45α蛋白的表达水平、p38 MAPK及p-p38 MAPK的蛋白表达差异;双抗体夹心酶联免疫吸附法检测各组孕妇血清样本中sFlt-1及sEng的含量,并进行单因素方差及LSD-t检验分析.结果 (1)免疫组织化学检测Gadd45α与p-p38 MAPK蛋白均定位于胎盘滋养层细胞胞质及胞核、血管内皮细胞胞核及少量间质细胞胞核.(2)子痫前期重度及轻度组Gadd45α mRNA相对表达水平(3.33±0.13和2.10±0.11)较正常对照组(1.01±0.18)明显上调,且子痫前期重度组高于轻度组,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)Western 印迹法检测正常对照组、子痫前期轻度组及重度组患者胎盘组织中Gadd45α蛋白表达水平分别为0.22±0.11、0.65±0.15、1.34±0.17;p-p38 MAPK蛋白的表达水平分别为0.32±0.08、0.72±0.12、1.45±0.21,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05);p38 MAPK蛋白水平组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).(4)子痫前期轻度组、重度组孕妇血清sFlt-1、sEng水平明显高于正常对照组,且子痫前期重度组高于轻度组,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).(5)各组Gadd45α蛋白水平与孕妇血清中的sFlt-1、sEng含量呈正相关(r分别为0.88和0.87,P均＜0.05).结论 Gadd45α在子痫前期患者胎盘组织中的表达明显升高,其可能通过调控p38 MAPK信号转导通路,诱使循环中的sFlt-1、sEng释放增加,从而加重胎盘血管重铸障碍和抑制滋养细胞浸润,参与子痫前期的发病.
关键词： 先兆子痫 核蛋白质类 细胞周期蛋白质类 p38丝裂原活化蛋白激酶类 血管内皮生长因子受体1 受体 细胞表面 抗原 Cd -
烟酸对p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路介导的内皮细胞功能障碍的早期干预研究
目的 探讨烟酸对p38MAPK通路介导的内皮细胞功能障碍的早期干预作用及可能机制.方法 人脐静脉内皮细胞株(HUVECs),用Medium200培养基培养,实验分组:①阴性对照组:培养基；②溶血磷脂酰胆碱(LPC)不同作用时间组:培养基中加入终浓度为20 μmol/L的LPC,分别培养10 min、8h、24 h；③LPC+ p38MAPK的抑制剂(SB203580)组:培养基中加入SB203580 10 μmol/L培养1h,再分别加入LPC培养10 min、8h、24 h；④LPC+不同剂量烟酸组:培养基中分别加入终浓度为0.25、0.5、1 mmol/L烟酸培养18h,再加入LPC培养10 min、8h及24 h.应用Western blot定量分析检测内皮细胞磷酸化的p38 MAPK(pp38 MAPK)、细胞间黏附分子(ICAM-1)蛋白含量,实时定量PCR方法检测内皮细胞ICAM-1 mRNA表达,细胞免疫荧光方法检测LPC诱导的ICAM-1蛋白表达.结果 ICAM-1的蛋白表达LPC 24 h组为0.786±0.021,LPC+烟酸(1 mmol/L)组培养24 h为0.487±0.015,LPC+ SB203580组培养24 h为0.461±0.011,LPC+烟酸组和LPC+ SB203580组均低于LPC 24 h组,差异有统计学意义(F=6.3,P＜0.01),但均未达到阴性对照组水平(0.134±0.012).pp38MAPK蛋白在LPC 10 min组高,为0.47±0.02,烟酸能降低pp38MAPK,LPC+烟酸(1 mmol/L)组为0.07±0.02,LPC+ SB203580为0.11±0.02,均低于LPC 10 min组(F=91.91,P＜0.01).加入LPC培养8h后,ICAM-1 mRNA的表达(8.16±0.15),高于阴性对照组(1.00±0.02),差异有统计学意义(t=24.34,P＜0.01)；与LPC培养8h比较,烟酸降低LPC诱导的ICAM-1 mRNA的表达,LPC+烟酸(1 mmol/L)组为3.85±0.14(F =8.06,P＜0.01),而SB203580则不能有效的降低ICAM-1的mRNA的表达(8.09±0.11).结论 在LPC诱导的HUVECs中,ICAM-1的蛋白与mRNA的表达均明显增强,pp38MAPK蛋白明显增强,烟酸干预可降低ICAM-1的蛋白与mRNA的表达,同时亦可降低pp38 MAPK的蛋白表达,p38MAPK的抑制剂SB203580仅能降低ICAM-1的蛋白的表达,而不能影响其mRNA表达,其作用机制有待进一步研究.
关键词： 内皮细胞 p38丝裂原活化蛋白激酶类 烟酸类 -
肾上腺髓质素和升压素在左向右分流肺血管重构中的变化及作用途径研究
目的 探讨肾上腺髓质素(ADM)及肾上腺升压素(ADT)在左向右分流肺血管重构中的变化及作用途径.方法 健康雄性Wistar大鼠21只,分为实验组(n=9)和对照组(n=12),实验组大鼠右侧颈总动脉与颈外静脉用套管连接,对照组行假手术.术后12周,测取大鼠肺动脉平均压(mPAP),右心室/(室间隔+左心室)[RV/(Lv+SP)]重量比,中等肺动脉壁厚度所占管径百分比(MT%).免疫组化和Western blotting测定ADM、ADT在大鼠肺组织的分布及相对含量.RT-PCR检测大鼠肺组织ADM、ADT、应力活化蛋白激酶(SAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK1)基因表达.结果 ①实验组大鼠术后mPAP、RV/(LV+SP)和MT%比例明显高于对照组(P均＜0.001).②累积光密度(A)结果显示实验组大鼠肺内ADM含量高于对照组而ADT含量低于对照组(P均＜0.001).③实验组大鼠肺组织ADM、SAPK、ERKlmRNA表达高于对照组(P＜0.01和P＜0.001),ADTmRNA表达低于对照组(P＜0.001).结论 ①左向右分流肺血管重构过程中存在来自同一前体的ADM与ADT之间的分子内调控现象;②左向右分流肺血管重构中激活了丝裂原活化蛋白激酶信号途径,ADM可能通过抑制丝裂原活化蛋白激酶信号途径来延缓肺动脉高压的形成和发展.
关键词： 肾上腺髓质素 肺动脉 p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
导痰汤对人脐静脉内皮细胞间黏附分子1mRNA和p38表达的影响
目的 探讨导痰汤通过对p38丝裂原活化蛋白激酶的调节而干预内皮细胞间黏附分子1(ICAM-1) mRNA的表达,以明确导痰汤治疗动脉粥样硬化的机制.方法 取新生儿脐带,分离脐静脉内皮细胞(HUVEC),传代培养的1-3代用于实验.含药血清的置备:将导痰汤按照0.9g·kg-1·d-1剂量给SD大鼠灌胃后10d,经腹主动脉采血,分离血清.实验共分7组:HUVEC为空白对照组,含药血清(20%)处理HUVEC为导痰汤对照组,肿瘤坏死因子α (TNF-α)预处理HUVEC为TNF-α诱导组,先采用5%,10%,20%含药血清预处理HUVEC,再与TNF-α共培养为5%,10%,20%导痰汤组,使用p38特异性阻滞剂SB203580处理HUVEC为SB203580阻滞组.通过实时定量PCR和Western blot等方法,观察导痰汤对TNF-α刺激脐静脉内皮细胞培养内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达和p38表达的影响.结果 ①TNF-α诱导组ICAM-1 mRNA的表达(1.17±0.26)和p38的表达(0.77±0.19)显著高于空白对照组和导痰汤对照组,差异有统计学意义(P<0.01);使用导痰汤含药血清或SB203580处理后,5%导痰汤组ICAM-1 rnRNA的表达为0.97±0.15;10%导痰汤组为0.85±0.17;20%导痰汤组为0.73±0.10; SB203580阻滞组为0.64±0.19;②5%导痰汤组p38的表达为0.69±0.21;10%导痰汤组为0.59±0.27;20%导痰汤组为0.47±0.11;SB203580阻滞组为0.36±0.09,表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);p38活性与ICAM-1 mRNA水平呈显著正相关(r=0.706,P<0.01).结论 导痰汤可以通过调节p38表达而抑制TNF-α刺激所致的脐静脉内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达,故能起到治疗动脉粥样硬化的作用.
关键词： 脐静脉 内皮细胞 胞间黏附分子1 p38丝裂原活化蛋白激酶类 导痰汤 -
p38丝裂原活化蛋白激酶和核因子κB在鼻黏膜炎症上皮细胞的表达意义
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)和核因子κB (nuclear factorkappa B,NF-κB)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致炎鼻黏膜上皮细胞中的表达意义.方法 采用蛋白印迹法检测LPS加入培养的鼻黏膜上皮细胞后活化的p38MAPK(磷酸化p38MAPK)表达的变化,及加入p38MAPK特异性阻断剂SB203580对其活性的抑制作用;应用凝胶电泳迁移率分析法检测SB203580对NF-κB DNA结合活性的抑制作用.结果 随着LPS浓度的增加(0.01 mg/L,0.1mg/L),鼻黏膜上皮细胞中磷酸化p38MAPK的表达升高(0.2±0.059,0.243±0.059),但无统计学差异(t=0.908,P=0.424;t=0.116,P=0.99);当LPS的刺激浓度为1 mg/L时表达高(0.851±0.108) (t=9.484,P＜0.01);浓度为10 mg/L时不再继续升高(0.83±0.122) (t=7.916,P＜0.01).在加入LPS之前30 min加入SB203580可抑制p38MAPK活性(0.248±0.055)(t=8.741,P＜0.01).LPS刺激鼻黏膜上皮细胞后NF-κB的DNA结合活性升高(2.116±0.037),可被SB203580部分抑制(1.323±0.038) (t=10.662,P＜0.01).结论 p38MAPK在LPS致炎的鼻黏膜上皮细胞中被激活,且可能部分调控NF-cB转录因子的活性.
关键词： 鼻黏膜 p38丝裂原活化蛋白激酶类 NF-κB -
p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制剂在慢性间歇性缺氧大鼠软腭重构作用的研究
目的：探讨p38MAPK抑制剂SB203580对慢性间歇性缺氧大鼠软腭重构的保护作用。方法总数60只雌性SD大鼠，被随机分为3组：对照组、缺氧组和缺氧+SB203580干预组。缺氧组和缺氧+SB203580干预组大鼠在自动控制间歇性缺氧试验箱饲养，均饲养35 d后，取大鼠软腭组织HE染色，免疫组化方法测定p38MAPK的表达，Western blot检测软腭组织p38MAPK和p-p38MAPK的表达。结果缺氧组软腭组织厚度增加明显，缺氧+SB203580干预组软腭组织厚度增加程度减轻；缺氧组软腭组织中p38MAPK表达增高明显，缺氧+SB203580干预组p-p38MAPK减低明显。结论p38抑制剂SB203580通过减轻软腭组织中p-p38的表达，从而减轻慢性间歇性缺氧大鼠软腭的损伤。
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EphA2经p38 MAPK通路调控头颈部鳞状细胞癌血管内皮生长因子表达的研究
目的 阐明促红细胞生成素产生肝细胞受体A2(erythropoietin-producing hepatocellular receptor,EphA2)蛋白可经p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号通路调控头颈部鳞状细胞癌血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达.方法 采用脂质体2000将EphA2蛋白过表达载体pEGFP-N1-EphA2和空白载体pEGFP-N1分别转染头颈鳞状细胞癌Tu686细胞,酶联免疫吸附法检测EphA2蛋白上调后VEGF蛋白的表达,Western blot法检测p38 MAPK信号通路有无激活；进一步利用不同浓度(0、5、10 μmol/L)小分子抑制剂SB203580特异性阻断p38MAPK通路,酶联免疫吸附法检测VEGF蛋白的表达改变有无逆转.结果 Tu686细胞EphA2蛋白上调后,VEGF蛋白在空白载体组和亲本细胞组中的表达(x±s)分别为(400.99±33.50) pg/ml和(385.30±33.50) pg/ml,而在实验组中的表达显著升高为(535.31±45.71) pg/ml,差异有统计学意义(F=17.091,P＜0.01)；同时,实验组Tu686细胞磷酸化p38 MAPK的表达上调.不同浓度(0、5、10 μmol/L) SB203580作用EphA2蛋白过表达的Tu686细胞后,磷酸化p38 MAPK的表达则被梯度抑制,且VEGF蛋白的表达逐渐降低,分别为(643.75±52.00) pg/ml、(513.52±54.05) pg/ml、(302.85±13.93) pg/ml,三组间差异有统计学意义(F=45.761,P＜0.01).结论 EphA2蛋白对p38MAPK信号通路具有调控作用,并经该通路影响VEGF蛋白的表达.
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维拉帕米对糖基化终产物诱导人晶状体上皮细胞凋亡的保护作用
目的 研究维拉帕米对糖基化终产物(AGE)诱导人晶状体上皮细胞(HLEC)凋亡的保护作用.方法 实验研究.培养HLEC系SRA01/04,传至第3代.实验分为4组,A组为对照组LEC细胞;B组为AGE组,LEC细胞用20 μmol/L AGE处理;C组为AGE+SB202190组,15 μmol/L SB202190预处理2h后的LEC细胞用AGE处理;D组为AGE+维拉帕米组,50 μmol/L维拉帕米预处理2h后的细胞用AGE处理.应用MTT法检测各组细胞活力,Annexin V试剂盒处理细胞后用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,通过Western blot法检测各组细胞p-p38、Caspase 3的表达情况.统计学方法为单因素方差分析,组间的两两比较均采用LSD-t检验.结果 作用24 h后,HLEC活力AGE组为0.28±0.08,较对照组的0.97±0.05明显下降(LSD-t检验,P=0.008),AGE+SB202190组(0.79±0.06)及AGE+维拉帕米组(0.62±0.07)较AGE组(0.28±0.08)明显增加(F=34.52,P=0.001);细胞凋亡率AGE组为(19.9±1.1)％,较对照组的(2.5±0.6)％明显上升(LSD-t检验,P=0.003),AGE+SB202190组(4.2±1.2)％及AGE+维拉帕米组(5.8±1.8)％较AGE组(19.9±1.1)％明显减少(F=371.61,P＜0.01);LEC p-p38、Caspase 3蛋白表达量AGE组分别为223.35±20.15及256.77± 19.88,较对照组106.44± 10.74及100.26±18.65升高,AGE+SB202190组两种蛋白表达量为139.17±19.10,142.75±23.36,AGE+维拉帕米组则为154.79±21.87,139.79±25.73,较对照组降低(F=248.01,F=76.68;P＜0.01).结论 维拉帕米可干预p38细胞通路,部分抑制AGE诱导晶状体上皮细胞凋亡作用.
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白花丹素对舌鳞状细胞癌细胞上皮间质转化的作用及机制研究
目的 探讨白花丹素对舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)细胞上皮间质转化的作用及其可能机制,为白花丹素治疗TSCC提供理论依据.方法 甲基噻唑基四唑法检测0.1、1.0、5.0、10.0、20.0μmol/L白花丹素对TSCC细胞增殖的抑制作用,并计算12、24、48 h时白花丹素的半数抑制浓度(IC50).0(对照)、0.1、0.5、1.0 μmol/L白花丹素作用细胞24 h后,Transwell实验计数穿膜细胞数量、划痕实验测量细胞迁移率.流式细胞仪检测空白对照组、白花丹素组(1.0 μmol/L、24 h)和谷胱甘肽联合组(活性氧清除剂谷胱甘肽+白花丹素)细胞内活性氧水平;蛋白质印迹法检测3组上皮钙黏素、波形蛋白、锌指转录因子(Slug)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated proteinkinase,p38MAPK)和磷酸化p38MAPK (phospho-p38MAPK,p-p38MAPK)的蛋白表达.蛋白质印迹法分别检测空白对照组、白花丹素组、激动剂联合组(p38MAPK激动剂+白花丹素)、抑制剂联合组(p38MAPK抑制剂+白花丹素)上皮钙黏素、波形蛋白、Slug的蛋白表达.结果 白花丹素作用TSCC细胞12、24、48 h的IC50分别为10.3、3.1、1.5 μmol/L;1.0 μmol/L白花丹素作用TSCC细胞24h后,穿膜细胞数量[(50±13)个]较对照[(204±6)个]显著下降(P＜0.05),细胞迁移率[(18.2±2.3)％]也较对照[(49.3±1.2)％]显著下降(P＜0.05).与空白对照组(2.32±0.52)相比,白花丹素组活性氧(902.20±10.69)显著增加(P＜0.05);而谷胱甘肽联合组活性氧(2.18±0.15)比白花丹素组显著下降(P＜0.05).与空白对照组相比,白花丹素组上皮钙黏素显著增加(P＜0.05),波形蛋白、Slug、p-p38MAPK/p38MAPK显著减少(P＜0.05);而谷胱甘肽联合组上皮钙黏素较白花丹素组显著减少(P＜0.05),波形蛋白、Slug、p-p38MAPK/p38MAPK均较白花丹素组显著增加(P＜0.05).激动剂联合组上皮钙黏素较白花丹素组显著减少(P＜0.05),波形蛋白和Slug均较白花丹素组显著增加(P＜0.05).抑制剂联合组上皮钙黏素较白花丹素组显著增加(P＜0.05),波形蛋白和Slug均较白花丹素组显著减少(P＜0.05).结论 白花丹素可抑制TSCC细胞的上皮间质转化,活性氧/p38MAPK信号通路参与了这一进程.
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口颌面部炎性疼痛对大鼠三叉神经脊束核p38信号转导的影响
目的 观察口颌面部炎性疼痛对大鼠中枢p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 mitogenactivated protein kinase,p38MAPK)活性的影响.方法采用标准的福尔马林实验方法,在大鼠上唇皮下组织内注射2.5％福尔马林50μl建立福尔马林致口颌面部炎性疼痛模型,设正常对照组(对照组)、福尔马林组(FOR组)、福尔马林+生理盐水组(FOR+ NS组)和福尔马林+抑制剂阻断组(FOR+SB组).后两组大鼠小脑延髓池内置管,于造模前20 min 给予生理盐水或p38MAPK抑制剂(SB203580),观察动物行为变化.免疫荧光和蛋白质印迹法检测各组大鼠注射福尔马林20、60、120和180 min 时三叉神经脊束核尾侧亚核(Vc核)c-fos表达和p38MAPK、磷酸化p38 MAPK( p-p38)含量的变化.结果各组Vc核总p38MAPK水平差异无统计学意义(P＞0.05),但FOR组和FOR+ NS组20 min时p-p38水平[分别为(0.66±0.04)和(0.64±0.04)]比对照组(0.12±0.01)明显增加(P＜0.001).各组p-p38在福尔马林注射后20 min达高峰,之后逐渐下降.与FOR组和FOR+NS组相比,FOR+ SB组大鼠由福尔马林引发的第Ⅱ期疼痛行为反应明显受到抑制(P＜0.05)；同时,Vc核的c-fos表达也减弱,在120 min 时减弱明显(P＜0.01).结论福尔马林致口颌面部炎性疼痛模型中p38MAPK活化水平增加,参与病理性疼痛的形成；p38MAPK抑制剂可明显缓解疼痛,进一步证实了p38MAPK在口颌面部炎性疼痛中的作用.
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p38丝裂原活化蛋白激酶在周期性牵张力诱导人增生性瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞分化中的作用
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK)在周期性牵张力诱导人增生性瘢痕成纤维细胞(fibroblast,FB)向肌成纤维细胞(myofibroblast,MFB)分化中的信号转导机制,为临床防治增生性瘢痕提供新的思路.方法 取原代培养的对数生长期瘢痕FB,采用简单随机抽样法分为对照组和阻断组(每组样本量为3).阻断组预先给予p38MAPK特异性抑制剂SB203580,对照组不处理.两组细胞均施加0、6、12h的0.5 Hz 10％细胞形变的周期性牵张力.蛋白质印迹法检测两组平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和磷酸化p38MAPK(P-p38MAPK)蛋白表达的变化,反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测α-SMA mRNA和转化生长因子(transforming growth factor β1,TGF-β1)mRNA表达的变化.结果 对照组加力6hα-SMA、P-p38MAPK、TGF-β1 mRNA、α-SMA mRNA的表达量(0.152 ±0.014、0.287±0.016、0.288±0.011、0.277±0.013)均显著高于0h(0.134±0.011、0.239±0.015、0.214 ±0.018、0.252±0.010)(P＜0.05)；加力12h上述4个指标的表达量(0.172±0.017、0.320±0.017、0.335±0.013、0.297±0.006)均比0、6h显著增高(P＜0.05).阻断组α-SMA、P-p38MAPK、TGF-β1 mRNA、α-SMA mRNA的表达量,加力6h分别为0.116±0.017、0.128±0.016、0.134 ±0.014、0.163±0.009,加力12h分别为0.149±0.013、0.136±0.018、0.144±0.013、0.187±0.010,均显著弱于对照组相应时间点(P＜0.05).结论 p38MAPK信号转导通路参与了周期性牵张力诱导的瘢痕FB向MFB分化的过程.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 应力 物理 成纤维细胞 细胞转分化 -
趋化因子CCL2对血小板p38MAPK-HSP27通路的影响
目的 探讨CC趋化因子配体2(CCL2)在残余血小板高反应中的作用及其调控血小板的可能机制.方法 纳入ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者40例,采用VerifyNow法检测P2Y12反应单元(PRU),根据检测结果将40例患者分为残余血小板高反应组(高反应组,n=24)和残余血小板正常反应组(正常反应组,n=16).ELISA检测两组患者血浆中CCL2的表达,Western blotting检测血小板中CCL2和CCR2的表达,ARY003B蛋白芯片筛选经外源性CCL2刺激后血小板中磷酸化水平发生变化的激酶.Western blotting验证经CCL2刺激,或经CCR2拮抗剂(RS 102895)、p38MAPK信号通路抑制剂(SB 203580)预处理后血小板中p38MAPK和HSP27的磷酸化变化.结果 高反应组血浆中CCL2浓度、血小板中CCL2和CCR2表达均明显高于正常反应组.经外源性CCL2刺激后,芯片筛选发现p38α、HSP27的磷酸化水平增高.在CCL2刺激前,应用RS 102895或SB 203580预处理血小板,Western blotting检测显示p38MAPK和HSP27的磷酸化水平下降.结论 CCL2以自分泌/旁分泌的方式参与残余血小板高反应,CCL2可能通过p38MAPK-HSP27通路调控血小板.
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前列腺炎SB203580镇痛模型大鼠脊髓p38MAPK的表达变化及意义
目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)活性抑制剂SB203580鞘内注射对前列腺炎镇痛模型大鼠脊髓p38MAPK表达的影响.方法 45只SPF级雄性国大鼠随机分为3组:对照组(5只)、前列腺炎组(IO只)和前列腺炎SB203580鞘内注射镇痛组(镇痛组,30只).镇痛组再均分3个亚组,通过前列腺注射完全弗氏佐剂(CFA),并经脊髓鞘内分别注射SB2035800.5、2.5和12.5μg/10μl.前列腺炎组和各镇痛亚组分别于给药或建模后5、10d处死5只大鼠,采用Western blotting和ELISA法检测各组大鼠L5-S2脊髓背角组织磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、神经胶质酸性蛋白(GFAP)蛋白含量及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)水平和一氧化氮合酶(iNOS)的活性变化.结果 前列腺炎组大鼠L5-S2脊髓背角中p-p38MAPK、GFAP、TNF-α、NO水平和iNOS活性在5d和10d均明显高于对照组,并随时间延长增高(P<0.01).镇痛组大鼠L5-S2脊髓背角中p-p38MAPK、GFAP、TNF-α、NO水平和iNOS活性在5d和10d均低于前列腺炎组,且呈剂量依赖效应(P<0.01).结论 脊髓p38MAPK信号通路参与了大鼠前列腺炎发生后的脊髓痛觉传导及SB203580镇痛机制,阻断p38MAPK信号通路可有效降低脊髓炎性因子水平.
关键词： 前列腺炎 脊髓 p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
p38 MAPK信号途径在高糖诱导的大鼠肾系膜细胞中激活的意义
目的 探讨高糖状态下肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号途径与其下游因子cAMP反应元件结合蛋白1(CREBI)、转化生长因子β1(TGF-β1)及细胞外基质表达的关系. 方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予低糖和/或甘露醇、高糖和/或SB203580(p38 MAPK特异性抑制剂)干预.采用免疫细胞化学法观察p38 MAPK蛋白的表达情况;Westernblotting检测p38 MAPK和CREB1及其磷酸化蛋白(p-p38 MAPK、p-CREB1)的表达;RT-PCR榆测TGF-N和FN mRNA的表达;放免法测定细胞上清液中层黏连接蛋白(LN)和Ⅳ型胶原的含量. 结果 与低糖组、低糖+甘露醇组相比,高糖刺激可使p38 MAPK蛋白发生核转移,p-p38 MAPK、p-CREB1表达明显上调,TGF-β1和FN mRNA的表达增强,LN和Ⅳ型胶原含量增加.SB203580能明显抑制p38 MAPK蛋白的核转移,降低p38 MAPK和CREB1的磷酸化,并抑制TGF-β1和FN mRNA表达,使LN和Ⅳ型胶原的分泌减少. 结论 高糖状态激活p38 MAPK信号途径参与了高糖诱导的肾小球系膜细胞TGF-β1的表达和细胞外基质的分泌.
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硫化氢抑制p38MAPK和NF-κB p65信号通路活性改善糖尿病心肌纤维化的作用和机制
目的 研究外源性硫化氢(H2S)对糖尿病心肌病小鼠心肌纤维化的改善作用及其机制.方法 24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(ALX组)、低剂量NaHS治疗组(ALX+LDNaHS组)、高剂量NaHS治疗组(ALX+HDNaHS组),每组6只.采用四氧嘧啶(ALX)200mg/kg腹腔注射建立糖尿病小鼠模型,造模成功后,NC组和ALX组每天自由饮用自来水,ALX+LDNaHS组和ALX+HDNaHS组自由饮用浓度分别为30μmol/L和90μmol/L的NaHS(H2S供体)溶液.喂养8周后取材,采用HE染色观察心肌组织形态学变化,Real-time PCR检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65) mRNA的表达,Western blotting检测p-p38MAPK、p-NF-κB p65和Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果 与NC组比较,ALX组心肌组织胶原表达量增加,心肌间质出现纤维化,p38MAPK、NF-κB p65 mRNA表达明显增加(P＜0.01),同时p-p38MAPK、p-NF-κB p65和Ⅰ型胶原蛋白表达也明显增高(P＜0.01).经硫化氢干预后糖尿病小鼠心肌纤维平行排列,心肌组织胶原表达量明显减少,心肌间质有少量结缔组织;p38MAPK、NF-κB p65 mRNA表达明显减少(P＜0.01),p-p38MAPK、p-NF-κB p65和Ⅰ型胶原蛋白表达明显下降(p＜0.01),且ALX+HDNaHS组较ALX+LDNaHS组明显改善(P＜0.05).结论 H2S可改善糖尿病小鼠心肌纤维化,可能与调节p38MAPK和NF-κB p65介导的炎症反应有关.
关键词： 硫化氢 糖尿病心肌病 p38丝裂原活化蛋白激酶类 NF-κB P65 胶原Ⅰ型
