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p38MAPK-HSP27通路在右美托咪定减轻小鼠内毒素性急性肺损伤中的作用
目的 评价p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)-热休克蛋白27(HSP27)(p38MAPK-HSP27)通路在右美托咪定减轻小鼠内毒素性急性肺损伤中的作用.方法 健康昆明种雄性小鼠40只,体重20～ 25 g,2月龄,采用随机数字表法,将其分为4组:正常对照组(C组)、脂多糖(LPS)组、低剂量右美托咪定+LPS组(D1组)和高剂量右美托咪定+LPS组(D2组).D1组和D2组分别腹腔注射右美托咪定25、50 μg/kg,1h后腹腔注射LPS 5 mg/kg.注射LPS后6h,进行左肺支气管肺泡灌洗,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定蛋白、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的浓度;取右肺,光镜下观察病理学结果,计算肺组织湿重/干重(W/D)比值,检测肺组织磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、p38MAPK、磷酸化丝裂原激活蛋白激酶激活的蛋白激酶-2(p-MAPKAPK-2)、MAPKAPK-2、磷酸化HSP27(p-HSP27)和HSP27表达,并计算p-p38MAPK与p38MAPK表达的比值(p-p38MAPK/p38MAPK)、p-MAPKAPK-2与MAPKAPK-2表达的比值(p-MAPKAPK-2/MAPKAPK-2)和p-HSP27与HSP27表达的比值(p-HSP27/HSP27).结果 与C组比较,LPS组肺W/D比值、BALF中蛋白、TNF-α和IL-1β的浓度升高,肺组织p-p38MAPK/p38MAPK、p-MAPKAPK-2/MAPKAPK-2及p-HSP27/HSP27升高(P＜0.05);与LPS组比较,D1组和D2组肺W/D比值、BALF中蛋白、TNF-α和IL-1β的浓度降低,肺组织p-p38MAPK/p38MAPK、p-MAPKAPK-2/MAPKAPK-2及p-HSP27/HSP27降低(P＜0.05);D1组和D2组肺组织病理学损伤明显轻于LPS组.结论 右美托咪定可能通过抑制p38MAPK-HSP27通路减轻小鼠内毒素性急性肺损伤.
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JNK信号通路和p38MAPK信号通路在吗啡预处理减轻心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用
目的 评价c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在吗啡预处理减轻心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠,200～ 230 g,尾静脉注射盐酸多柔比星2 mg/kg,1次/周,连续6周,建立大鼠慢性心力衰竭模型.于第8周末,取成功制备慢性心力衰竭模型的45只大鼠,采用随机数字表法分为5组(n=9):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、吗啡预处理组(MPC组)、JNK抑制剂SP600125+吗啡预处理组(MSP组)和p38MAPK抑制剂SB203580+吗啡预处理组(MSB组).采用结扎冠状动脉左前降支30 min,再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型;MPC组于缺血前股静脉输注吗啡0.1 mg/kg,输注5 min后停止输注5 min,重复3次进行预处理;MSP组和MSB组于吗啡预处理前10 min时股静脉注射SP600125 0.5 mg/kg或SB203580 0.2 mg/kg.于再灌注120 min时处死大鼠,取心肌组织,计算左心室与右心室总体积(LV +RV),测定缺血危险区体积(AAR)和梗死区体积(IS),计算IS/AAR比值;采用免疫组化法测定心肌组织蛋白激酶δ(PKC δ)的表达水平.结果 5组间LV+RV和AAR比较差异无统计学意义(P＞0.05);与S组比较,I/R组和MSB组IS和IS/AAR比值升高,心肌组织PKC δ表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,MPC组和MSP组IS和IS/AAR比值降低,心肌组织PKC δ表达下调(P＜0.05),与MPC组比较,MSB组IS和IS/AAR比值升高,心肌组织PKC δ表达上调(P＜0.05),MSP组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 p38MAPK信号通路的激活参与了吗啡预处理减轻心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制与下调PKC δ的表达有关;JNK信号通路无此作用.
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吡那地尔超极化停搏对大鼠离体心脏缺血再灌注时p38MAPK表达的影响
目的 评价吡那地尔超极化停搏对大鼠离体心脏缺血再灌注时p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠48只,体重250～300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=8):自然停搏组(A组)、St.Thomas组(B组)、吡那地尔超极化停搏组(C组)、5-羟葵酸(5-HD)组(D组)、HMR-1098组(E组)和5-HD+HMR-1098组(F组).采用Langendorff离体心脏灌注模型,K-H液平衡灌注15 min后,A组阻断主动脉,不予停搏液灌注,使其自然停搏；B组灌注St.Thomas停搏液；C组灌注吡那地尔超极化停搏液；D组、E组和F组K-H液平衡灌注10 min后,分别灌注含5-HD、HMR-1098、5-HD+ HMR-1098的K-H液5min,再灌注吡那地尔超级化停搏液.心脏停跳缺血60 min后,K-H液再灌注30 min.于平衡灌注15 min和再灌注20 min时记录冠脉流量(CF)、心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室收缩压(LVSP)和左室压力瞬时大变化率(dp/dtmax)；于再灌注30 min时取心肌组织,采用Western blot法测定心肌磷酸化p38MAPK和非磷酸化p38MAPK的表达.结果 与C组相比,A组、B组、D组、E组和F组再灌注20min时CF、HR、LVSP、LVDP及dp/dt/dymax降低,再灌注30 min时磷酸化p38MAPK表达下调,非磷酸化p38MAPK表达上调(P＜0.05)；与E组相比,D组和F组再灌注20 min时CF、HR、LVSP、LVDP及dp/dtmax降低,再灌注30 min时磷酸化p38MAPK表达下调,非磷酸化p38MAPK表达上调(P＜0.05).结论 吡那地尔超极化停搏可改善大鼠离体缺血再灌注心脏功能,其机制与上调磷酸化p38MAPK表达,下调非磷酸化p38MAPK表达有关,而这种调控作用与线粒体ATP敏感性钾通道关系更密切.
关键词： 吡那地尔 心脏停搏 p38丝裂原活化蛋白激酶类 心肌再灌注损伤 -
p38丝裂原活化蛋白激酶在全脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元DNA修复中的作用
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)在全脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元DNA修复中的作用.方法 清洁级雄性SD大鼠108只,采用四血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,随机分为3组(n=36):假手术组(S组)仅暴露双侧颈总动脉和椎动脉;缺血再灌注组(IR组)侧脑室注射1%DMSO溶液5μl,30 min后行全脑缺血再灌注;p38 MAPK抑制剂SB203580干预组(SB组)侧脑室注射SB203580溶液5 μl(溶于1%DMSO溶液),30 min后行全脑缺血再灌注.分别于再灌注2、6、12、24、48和72 h时各组处死6只大鼠,提取海马组织观察神经元病理学结果,计算神经元凋亡指数(AI),测定磷酸化的p38 MAPK蛋白及Ku70蛋白表达水平.结果 与S组比较,IR组和SB组各时点AI升高,p-p38 MAPK蛋白表达上调,p-Ku70蛋白表达下调(P(0.05或0.01),病理损伤明显;与IR组比较,SB组各时点AI降低,p-p38 MAPK蛋白表达下调,p-Ku70蛋白表达上调(P<0.01),病理损伤程度减轻.结论 p38 MAPK可能通过下调DNA修复酶Ku70蛋白的表达,使海马神经元DNA修复功能受损,导致神经元凋亡,参与全脑缺血再灌注损伤.
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p38MAPK信号通路在内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织HO-1表达上调中的作用
目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织血红素加氧酶-1(HO-1)表达上调中的作用.方法 雄性SD大鼠48只,8周龄,体重180～ 200g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12):对照组(C组)、内毒素性休克组(LS组)、内毒素性休克+ p38MAPK特异性抑制剂SB203580组(LSS组)和SB203580组(SB组).C组和SB组股静脉注射生理盐水0.5 ml;LS和LSS组股静脉注射LPS 10 mg/kg(溶于0.5ml生理盐水)；2h内MAP下降至基础值的75％时,C组和IS组股静脉输注10％二甲基亚砜0.1ml；LSS组和SB组股静脉输注SB203580 5 μmol/kg(溶于0.1 ml 10％二甲基亚砜),输注速率0.01 ml/min.给予LPS或生理盐水后6h时采集动脉血样,进行血气分析,计算氧合指数(PaO2/FiO2)；然后处死大鼠取肺组织,光镜下观察病理学结果,并进行病理学损伤评分,计算肺含水率,测定SOD活性、MDA含量、HO-1 mRNA及其蛋白、p38MAPK蛋白和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达.结果 与C组比较,IS组和LSS组氧合指数和SOD活性降低,病理学损伤评分、肺含水率和MDA含量升高,肺组织HO-1 mRNA及其蛋白和p-p38MAPK蛋白的表达上调(P＜0.05),p38MAPK蛋白表达差异无统计学意义,SB组各指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与LS组比较,LSS组氧合指数和SOD活性升高,病理学损伤评分、肺含水率和MDA含量降低,肺组织HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,p-p38MAPK蛋白表达下调(P＜0.05),p38MAPK蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 抑制p38MAPK信号通路可导致内毒素性休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织HO-1表达上调.
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M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高中的作用:与MAPK信号通路的关系
目的 评价M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高中的作用及其与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的关系.方法 将人肺微血管内皮细胞以1×105个/ml的密度接种于6孔板(2 ml/孔)或培养瓶(4 ml/瓶)中,采用随机数字表法分为6组(n=5):空白对照组(C组)、M3受体shRNA转染组(shRNA组)、脂多糖组(LPS组)、盐酸戊乙奎醚+脂多糖组(P+LPS组)、脂多糖+M3受体shRNA转染组(LPS+shRNA组)和盐酸戊乙奎醚+脂多糖+M3受体shRNA转染组(P+LPS+shRNA组).shRNA组、LPS+shRNA组和P+LPS+shRNA组以含2.5 nmol/L M3受体shR-NA的质粒转染细胞.LPS组和LPS+shRNA组于孵育24 h时加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1h;P+LPS组和P+LPS+shRNA组于孵育24 h时加入终浓度为2μg/ml的盐酸戊乙奎醚,孵育1h后加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS再孵育1h.采用Transwell法测定肺微血管内皮细胞通透性,采用Western blot法测定磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK 1/2)的表达水平,采用免疫荧光染色法测定热休克蛋白27 (HSP27)的表达水平,采用实时定量PCR法测定M3受体mRNA的表达.结果 与C组比较,shRNA组M3受体mRNA表达下调,LPS组细胞通透性增高,p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27、和M3受体mRNA表达上调(P＜0.05);与LPS组比较,P+LPS组、LPS+shRNA组和P+LPS+shRNA组细胞通透性降低,p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27和M3受体mRNA表达下调(P＜0.05);与LPS+shRNA组比较,P+LPS+shRNA组细胞通透性降低,p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27和M3受体mRNA表达下调(P＜0.05).结论 盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高的机制与其下调M3受体表达后抑制MAPK信号通路激活有关.
关键词： 受体 毒蕈碱M3 胆碱能药 内皮细胞 毛细血管 肺 内毒素血症 p38丝裂原活化蛋白激酶类 细胞外信号调节MAP激酶类 -
机械牵张诱导大鼠PMVECs黏附能力增强时内皮素-1与p38MAPK和PI3K/Akt信号通路的关系
目的 评价机械牵张诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)黏附能力增强时内皮素-1(ET-1)与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的关系.方法 将PMVECs以0.5×105个/ml的密度接种于培养板(2 ml/孔),采用随机数字表法分为5组(n=24):正常对照组(C组)、机械牵张组(MS组)、机械牵张+PI3K特异性抑制剂LY294002组(LY组)、机械牵张+p38 MAPK特异性抑制剂SB203580组(SB组)、机械牵张+ET受体A阻断剂BQ123组(BQ组).机械牵张:拉伸幅度20％,频率0.3 Hz,波形为正弦波,时间4h.LY组、SB组和BQ组在机械牵张后分别加入终浓度均为10 μmol/L的LY294002、SB203580和BQ123,孵育10 min;随后加入提取的PMNs(5×105/孔)作用30 min.采用ELISA法检测培养液ET-1和IL-6浓度.采用Western blot法测定磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)和磷酸化Akt(p-Akt)表达水平.采用免疫组化法确定PMNs黏附率.采用real-time PCR法测定P-选择素mRNA的表达水平.结果 与C组比较,其余4组培养液IL-6和ET-1浓度升高,p-p38 MAPK、p-Akt和P-选择素mRNA表达上调,PMNs黏附率升高(P＜0.05).与MS组比较,LY组、SB组和BQ组培养液IL-6浓度降低,p-Akt和P-选择素mRNA表达下调,PMNs黏附率降低,BQ组培养液ET-1浓度降低,SB组和BQ组p-p38 MAPK表达下调(P＜0.05).结论 ET-1介导大鼠PMVECs机械牵张后黏附能力增强的信号机制可能与激活p38 MAPK和PI3K/Akt信号通路有关.
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p38MAPK信号转导通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用.方法 成年雄性SD大鼠60只,体重180～230 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组:对照组(C组,n=6)、急性肺损伤组(ALI组,n=24)、p38MAPK特异性抑制剂SB203580+ALI组(SB+ALI组,n=24)和SB203580组(SB组,n=6).ALI组尾静脉注射内毒素5 mg/kg制备大鼠急性肺损伤模型,C组给予等容量生理盐水,SB+ALI组于注射内毒素前30 min经尾静脉注射SB20358010 mg/kg.ALI组和SB+ALI组于注射内毒素后1、3、6 h(T1-3)时随机取8只大鼠,C组和SB组分别于给予生理盐水、SB203580后1 h处死取肺组织,检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达.T3时回收支气管肺泡灌洗液(BALF),测定蛋白浓度.计算细胞凋亡指数,观察肺组织病理学结果.另取32只大鼠,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组(n=16):ALI组和SB+ALI组,观察48 h内大鼠生存情况.结果 与C组相比,ALI组和SB+ALI组BALF中蛋白浓度、细胞凋亡指数、肺组织p-p38MAPK蛋白表达水平升高(P＜0.05);与ALI组相比,SB+ALI组上述指标降低(P＜0.05).SB+ALI组病理学损伤程度较ALI组明显减轻.ALI组大鼠生存率较SB+ALI组降低(P＜0.01).结论 p38MAPK信号转导通路参与了大鼠内毒素性急性肺损伤的发生和发展,可能与肺组织细胞凋亡有关.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 呼吸窘迫综合征 成人 内毒素血症 -
异丙酚后处理对大鼠氧糖缺失-复氧复糖皮质神经元促凋亡蛋白活性的影响:与p38MAPK信号通路的关系
目的 评价异丙酚后处理对大鼠氧糖缺失-复糖复氧皮质神经元促凋亡蛋白Bid、Bim、Puma活性的影响及其与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的关系.方法 出生24 h内的SD大鼠,体外培养其皮质神经元并按种于6孔板(2 ml/孔),采用随机数字表法将皮质神经元分为4组(n=42):对照组(C组)、氧糖缺失-复糖复氧组(OGD/R组)、异丙酚后处理组(P组)和异丙酚后处理+p38MAPK抑制剂组(PS组).采用氧糖缺失90 min,复氧复糖24 h的方法制备皮质神经元氧糖缺失-复糖复氧损伤模型.P组和PS组于复氧复糖即刻于培养基中加入异丙酚孵育2h,终浓度50 μmol/L;PS组于氧糖缺失前1h时于培养基中加入SB202190,终浓度50 μmol/L.采用Annexin V-FITC/PI双染色法测定神经元凋亡率,采用MTT法测定神经元存活情况,采用比色法测定LDH漏出情况;采用JC-1荧光法测定线粒体膜电位(MMP)水平,采用Western blot法测定Bid、Bim和Puma 的表达.结果 与C组比较,OGD/R组、P组和PS组神经元凋亡率和LDH漏出率升高,神经元存活率和MMP水平降低,Bid、Bim和Puma的表达上调(P＜0.05);与OGD/R组比较,P组和PS组神经元凋亡率和LDH漏出率降低,神经元存活率和MMP水平升高,Bid、Bim和Puma的表达下调(P＜0.05);与P组比较,PS组神经元凋亡率和LDH漏出率升高,神经元存活率和MMP水平降低,Bid、Bim和Puma的表达上调(P＜0.05).结论 异丙酚后处理可通过激活p38MAPK信号通路,抑制促凋亡蛋白Bid、Bim和Puma的活性,减轻大鼠皮质神经元氧糖缺失-复糖复氧损伤.
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p38MAPK信号通路在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素诱导人脐静脉内皮细胞损伤中的作用
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素诱导人脐静脉内皮细胞损伤中的作用.方法 培养人脐静脉内皮细胞,以1×104/ml密度接种于96孔培养板(100μl/孔)或24孔培养板(3 ml/孔),以1×106/ml密度接种于培养瓶(5 ml/瓶),采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=23):正常对照组(C组)、脂多糖(LPS)组(L组)、盐酸戊乙奎醚组(P组)和盐酸戊乙奎醚+LPS组(PL组),P组和PL组加入终浓度为2μg/ml的盐酸戊乙奎醚,L组和PL组加入终浓度为1 μg∥ml的LPS,PL组于加入盐酸戊乙奎醚后1h加入LPS.加入LPS后24h时,收集细胞,测定磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)和p38 MAPK的表达水平,以二者比值反映p38 MAPK激活程度,并测定细胞活力、NO含量和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达.结果 与C组比较,L组细胞活力降低,NO、p-p38 MAPK和p38 MAPK激活程度升高,iNOS表达上调(P＜0.01),P组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与L组比较,PL组细胞活力升高,NO、p-p38 MAPK和p38 MAPK激活程度降低,iNOS表达下调(P＜0.05或0.01).结论 p38 MAPK信号通路参与了盐酸戊乙奎醚减轻内毒素诱导人脐静脉内皮细胞损伤的作用.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 胆碱能拮抗剂 内毒素血症 内皮 血管 -
p38MAPK信号通路在电针减轻内毒素休克诱发兔急性肺损伤中的作用:与Nrf2的关系
目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在电针减轻内毒素休克诱发兔急性肺损伤中的作用及其与核因子E2相关因子2(Nrf2)的关系.方法 健康雄性新西兰大白兔70只,2月龄,体重1.5 ～ 2.5 kg,采用随机数字表法分为7组(n=10):对照组(C组)、内毒素休克诱发急性肺损伤模型组(A组)、p38MAPK抑制剂组(SB组)、模型+p38MAPK抑制剂组(A-SB组)、模型+电针组(A-EA组)、模型+电针非穴位组(A-NEA组)和模型+电针穴位+p38MAPK抑制剂组(A-EA-SB组).模型制备前1～4d及模型制备过程中,A-EA组和A-EA-SB组电针刺激穴位,采用疏密波2/100 Hz,强度以出现轻微肌颤为宜,30 min/次,1次/d,A-NEA组采用同样的频率以及强度电针刺激穴位旁开0.5 cm处,A组、A-SB组、A-EA组、A-NEA组和A-EA-SB组静脉注射内毒素5 mg/kg,C组和SB组给予等容量生理盐水.模型制备成功后SB组、A-SB组和A-EA-SB组静脉注射p38MAPK抑制剂5μmol/kg,C组给予等容量生理盐水,其余各组给予等容量无水乙醇.静脉注射内毒素或生理盐水后6h,取颈动脉血样行血气分析后放血处死动物,取肺组织行病理学观察并进行肺损伤评分,计算肺湿重/干重(W/D)比值,测定肺组织MDA含量及SOD活性,检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)及Nrf2表达水平.结果 与C组比较,A组、A-SB组、A-EA组、A-NEA组和A-EA-SB组肺损伤评分、W/D比值、肺组织MDA含量、p-p38MAPK及Nrf2表达水平升高,SOD活性降低(P＜0.05);与A组比较,A-EA组和A-EA-SB组肺损伤评分、W/D比值、肺组织MDA含量降低,SOD活性、p-p38MAPK及Nrf2表达水平升高(P＜0.05);与A-EA组比较,A-EA-SB组肺损伤评分、W/D比值、肺组织MDA含量升高,SOD活性、p-p38MAPK及Nrf2表达水平降低(P＜0.05).结论 p38MAPK信号通路介导了电针减轻内毒素休克诱发兔急性肺损伤,其机制与其上调Nrf2表达有关.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 电刺激疗法 休克 脓毒性 呼吸窘迫综合征 成人 NF-E2相关因子2 -
电针对内毒素性急性肾损伤兔肾组织Nrf2表达的影响:与p38MAPK信号通路的关系
目的 探讨电针对内毒素性急性肾损伤兔肾组织NF-E2相关因子2(Nrf2)表达的影响及其与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的关系.方法 健康雄性新西兰大白兔70只,体重1.5～ 2.0 kg,2月龄,采用随机数字表法分为7组(n=10):正常对照组(C组)、内毒素性急性肾损伤组(AKI组)、电针+内毒素性急性肾损伤组(EA组)、非穴位+内毒素性急性肾损伤组(SA组)、电针+内毒素性急性肾损伤+ p38MAPK特异性阻断剂SB203580组(EAS组)、SB203580组(S组)和无水乙醇组(A组).EA组和EAS组电针双侧足三里穴和肾俞穴15 min(刺激强度以兔下肢微颤为宜,疏密波,频率2/100 Hz,刺激电流1～2 mA,波宽0.2 ～ 0.6 ms),1次/d,连续5 d;SA组以相同电针参数刺激足三里穴及肾俞穴旁开0.5 cm处.后一次电针后24 h,AKI组、EA组、SA组和EAS组静脉注射脂多糖5 mg/kg制备内毒素性急性肾损伤模型,其余各组给予等容量生理盐水.模型制备前30 minEAS组及S组静脉注射SB203580 5μmol/kg(溶于0.5ml无水乙醇),A组静脉注射0.5 ml无水乙醇,其余组给予等容量生理盐水.给予脂多糖或生理盐水后6h时,采集动脉血样,测定血清BUN和Cr浓度,处死兔取肾组织,进行肾组织损伤评分,采用Western blot法测定肾组织Nrf2蛋白表达及p38MAPK磷酸化水平,采用荧光定量PCR法测定Nrf2 mRNA的表达.结果 与C组比较,AKI组、EA组、SA组及EAS组肾组织损伤评分及血清BUN和Cr浓度升高,肾组织Nrf2 mRNA及蛋白表达上调,AKI组、EA组及SA组p38MAPK磷酸化水平升高(P＜0.05),S组及A组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与AKI组比较,EA组及EAS组肾组织损伤评分及血清BUN和Cr浓度降低,肾组织Nrf2 mRNA及蛋白表达上调,EA组p38MAPK磷酸化水平升高,EAS组p38MAPK磷酸化水平降低(P＜0.05),SA组上述各指标差异无统计学意义(P＞ 0.05);与EA组比较,EAS组肾组织损伤评分及血清BUN和Cr浓度升高,肾组织Nrf2 mRNA及蛋白表达下调,p38MAPK磷酸化水平降低(P＜0.05).结论 电针减轻兔内毒素性急性肾损伤的机制可能与激活p38MAPK信号通路从而上调肾组织Nrf2表达的有关.
关键词： 电针 NF-E2相关因子2 p38丝裂原活化蛋白激酶类 内毒素血症 肾 -
p38丝裂原活化蛋白激酶通路在电针减轻兔内毒素休克诱发急性肺损伤中的作用
目的 评价p38MAPK通路在电针减轻兔内毒素休克诱发急性肺损伤中的作用.方法 健康清洁级雄性新西兰大白兔70只,体重1.5 ～ 2.0kg,2月龄,采用随机数字表法,将其分为7组(n=10):正常对照组(C组)、无水乙醇组(A组)、p38MAPK特异性阻断剂SB203580组(SB组)、内毒素休克诱发急性肺损伤组(ALI组)、电针+ALI组(EA组)、假电针+ALI组(SEA组)、电针+ALI +SB组(EAS组).EA、EAS组于模型制备前1～4d及模型制备过程中电针双侧足三里和肺俞穴,参数设置:疏密波,频率2/100 Hz,波宽0.2 ～ 0.6 ms,刺激强度2～3 mA,以兔出现轻微肌颤为宜,1次/d,30min/次.SEA组以同样方法电针刺激足三里穴和肺俞穴旁开0.5 cm处.ALI组、EA组、SEA、EAS组采用静脉缓注射脂多糖5 mg/kg的方法制备内毒素性休克诱发急性肺损伤模型,C组、A组和SB组给予等容量生理盐水.模型制备成功后SB组、EAS组静脉输注SB203580 5 μmol/kg,输注速率0.05ml/min,C组给予等容量生理盐水,其余组给予等容量无水乙醇.静脉注射LPS或生理盐水后6h时,采集动脉血样,检测血清TNF-α和IL-10浓度；处死后取肺组织,观察病理学结果,并进行病理学评分,测定肺组织p38MAPK的磷酸化水平.结果 与C组比较,ALI组、SEA组、EA组和EAS组肺组织病理学评分、血清TNF-α、IL-10浓度升高,ALI组、SEA组、EA组肺组织p38MAPK磷酸化水平升高(P＜0.05),A组和SB组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与ALI组比较,EA组肺组织病理学评分和血清TNF-α浓度降低,血清IL-10浓度和肺组织p38MAPK磷酸化水平升高,EAS组肺组织病理学评分、血清TNF-α浓度和肺组织p38MAPK磷酸化水平降低(P＜0.05),SEA组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与EA组比较,EAS组肺组织病理学评分、血清TNF-α浓度升高,肺组织p38MAPK磷酸化水平降低(P＜0.05).结论 p38MAPK通路介导了电针减轻兔内毒素休克诱发急性肺损伤的作用.
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异丙酚对机械通气相关肺损伤大鼠肺组织p38MAPK信号通路的影响
目的 探讨异丙酚对机械通气相关肺损伤大鼠肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响.方法 雄性清洁级Wistar大鼠30只,体重230～300 g,2～3月龄,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=10):对照组(C组)保留自主呼吸；机械通气组(V组)和异丙酚组(P组)行机械通气4h,P组在机械通气开始时静脉注射异丙酚5 mg/kg,机械通气期间以10mg·kg-1 ·h-1的速率静脉输注异丙酚.于机械通气15 min、1h、2h和4h时记录MAP,并采集股动脉血样,进行动脉血气分析,记录PaO2；机械通气结束时,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白、TNF-α和巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)的浓度；取肺组织,测定湿干重比(W/D比)、MDA含量、SOD活性、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达水平,计算p-p38MAPK/p38MAPK,并观察病理学结果,进行肺损伤评分.结果 与C组比较,V组和P组肺损伤评分、W/D比、肺组织MDA含量、ICAM-1表达、BALF中总蛋白浓度、TNF-α和MIP-2浓度和肺组织p-p38MAPK蛋白表达水平和p-p38MAPK/p38MAPK升高,V组肺组织SOD活性降低(P＜0.05),P组SOD活性差异无统计学意义(P＞0.05)；与V组比较,P组肺损伤评分、W/D比、肺组织MDA含量、ICAM-1表达、BALF中总蛋白浓度、TNF-α和MIP-2浓度和肺组织p-p38MAPK蛋白表达和p-p38MAPK/p38MAPK降低,肺组织SOD活性、MAP和PaO2升高(P＜0.05).三组肺组织p38MAPK蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异丙酚可能通过抑制p38MAPK信号转导通路的活化减轻大鼠机械通气相关肺损伤.
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JNK和p38 MAP K信号通路在吗啡后处理减轻大鼠心肌再灌注损伤中的作用：离体实验
目的：评价c?Jun氨基末端激酶（ JNK）和p38丝裂原活化蛋白激酶（ p38MAPK）信号通路在吗啡后处理减轻心肌再灌注损伤中的作用。方法健康成年雄性SD大鼠，体重180～240 g，采用Langendorff灌注装置建立大鼠离体心脏灌注模型。平衡灌注15 min后，取离体心脏52个，采用随机数字表法分为4组（ n＝13）：对照组（ C组） K?R液持续灌注105 min；缺血再灌注组（ I∕R组）停止K?R液灌注造成全心缺血45 min，恢复K?R液灌注60 min；吗啡后处理组（ MP组）缺血45 min，再灌注即刻灌注含3．0μmol∕L吗啡的 K?R液10 min，然后灌注K?R液50 min；吗啡后处理＋茴香霉素组（ MP＋A组）缺血45 min，再灌注即刻灌注含3．0μmol∕L 吗啡和1．0μmol∕L 茴香霉素（ JNK 和p38MAPK的激动剂）的K?R液10 min，然后灌注K?R液50 min。再灌注60 min时每组取8个心脏，测定心肌CK?MB释放量，观察心肌梗死情况，计算心肌梗死体积。再灌注20 min每组取5个心脏，采用Western blot法测定心肌组织磷酸化JNK（ p?JNK）、磷酸化p38MAPK（ p?p38MAPK）和细胞色素c （ Cyt c）的表达水平，分光光度法检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ NAD＋）含量。结果与C组比较，I∕R组、MP组和MP＋A组心肌梗死体积和心肌CK?MB释放量增加，心肌组织p?JNK、p?p38MAPK和Cyt c的表达上调，NAD＋含量降低（ P＜0．05）；与I∕R组比较，MP组和MP＋A组心肌梗死体积和心肌CK?MB释放量减少，MP组心肌组织p?JNK、p?p38MAPK和Cyt c表达下调，NAD＋含量升高（ P＜0．05）；与MP组比较，MP＋A组心肌梗死体积和心肌CK?MB释放量增加，心肌组织p?JNK、p?p38MAPK和Cyt c的表达上调，NAD＋含量降低（ P＜0．05）。结论吗啡后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制与抑制JNK和p38MAPK信号通路的激活有关。
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p38丝裂原活化蛋白激酶在罗哌卡因致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用
目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在罗哌卡因致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用,以探讨罗哌卡因诱发神经毒性的机制.方法 采用随机数字表法,将SH-SY5Y细胞随机分为4组(n=18):正常对照组(C组)、10 μmol/L p38MAPK特异性抑制剂SB203580组(SB组)、3 mmol/L罗哌卡因组(R组)、10 μmol/L SB203580+3 mmol/L罗哌卡因组(SB+R组).C组在细胞培养液中继续培养；SB组在含10 μmol/L SB203580培养液中孵育；R组在含3 mmol/L罗哌卡因的培养液中孵育；SB+R组在含10 μmol/L SB203580的培养液中孵育30 min后,用含3mmol/L罗哌卡因的培养液继续孵育.各组细胞培养或罗哌卡因孵育4 h后采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平和细胞凋亡率,采用Western blot法检测p38MAPK和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)的表达,采用MTT法检测细胞活力.结果 与C组比较,R组和SB+R组ROS水平升高,p-p38MAPK表达上调,细胞活力降低,细胞凋亡率升高(P＜0.01),SB组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与R组比较,SB组p-p38MAPK表达下调,细胞活力升高,细胞凋亡率降低(P＜0.01).四组p38MAPK表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 罗哌卡因致SH-SY5Y细胞凋亡作用的机制部分与p38MAPK的激活有关.
关键词： 酰胺类 p38丝裂原活化蛋白激酶类 细胞凋亡 -
p38MAPK信号通路在吗啡预处理减轻心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用:离体实验
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在吗啡预处理减轻心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 成年雄性SD大鼠,体重200～ 230 g,6～7周龄,尾静脉注射盐酸多柔比星2 mg/kg,1次/周,连续6周,制备大鼠慢性心力衰竭模型.第8周末取成功制备慢性心力衰竭模型的大鼠30只,采用随机数字表法分为5组(n=6):假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、吗啡预处理组(MPC组)、p38MAPK抑制剂SB203580+吗啡预处理组(SBM组)和SB203580对照组(SB组).采用Langendorff离体心脏灌注及结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.MPC组平衡后灌注含1μmol/L吗啡的K-H液5 min,间隔5 min,共3个循环,随后制备心肌缺血再灌注损伤模型.SBM组于吗啡预处理前10 min灌注含5μmol/L SB203580的K-H液至缺血5 min,共45 min;SB组不实施吗啡预处理,仅于缺血前40 min至缺血5 min持续灌注含5μmol/L SB203580的K-H液.于心脏稳定灌注15 min、再灌注5和10 min时收集冠脉流出液,采用化学比色法检测LDH活性.再灌注10 min时Sham组、I/R组和MPC组采用Western blot法检测心肌磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)的表达水平;再灌注120 min时,测量缺血危险区体积(AAR)、左心室与右心室总体积(LV+RV)、梗死区体积(IS)及IS/AAR比值.结果 与Sham组比较,其余各组再灌注时冠脉流出液LDH活性升高,IS和IS/AAR比值增大,I/R组和MPC组心肌p-p38MAPK表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,MPC组再灌注时冠脉流出液LDH活性降低,心肌p-p38MAPK表达上调,IS和IS/AAR比值减小(P＜0.05),SBM组和SB组冠脉流出液LDH活性、IS和IS/AAR比值差异无统计学意义(P＞0.05);与MPC组比较,SBM组再灌注时冠脉流出液LDH活性升高,IS和IS/AAR比值增大(P＜0.05).结论 吗啡预处理减轻慢性心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制与激活p38MAPK信号通路有关.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 心力衰竭 心肌再灌注损伤 吗啡 缺血预处理 -
右美托咪啶对神经病理性痛大鼠脊髓嘌呤受体P2X4mRNA和p38丝裂原活化蛋白激酶mRNA表达的影响
目的 评价右美托咪啶对神经病理性痛大鼠脊髓嘌呤受体P2X4(P2XR)mRNA和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)mRNA表达的影响.方法 雄性SD大鼠72只,体重180～220 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=24):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和右美托咪啶组( DEX组).采用坐骨神经慢性压迫性损伤法建立神经病理性痛模型.DEX组于术后即刻开始每天腹腔注射右美托咪啶50 μg/kg,S组和NP组腹腔注射等容量生理盐水.于术前1d、术后1、3、7和14 d时测定机械痛阈(MWT)和热痛阈(TWL).术后测定痛阈后随机取6只大鼠,断头处死,取损伤侧L4～6脊髓组织,采用RT-PCR法测定P2X4R mRNA和p38 MAPK mRNA表达.结果 与S组比较,NP组和DEX组术后MWT及TWL降低,脊髓P2X4R mRNA和p38 MAPK mRNA表达上调(P＜0.05).与NP组比较,DE组术后MWT及TWL升高,脊髓P2X4R mRNA和p38 MAPK mRNA表达下调(P＜0.05).与术后7d时比较,NP组和DEX组于术后1、3、14 d时MWT和TWL升高,P2X4R mRNA和p38MAPK mRNA表达下调(P＜0.05).结论 右美托咪啶减轻大鼠神经病理性痛的机制与抑制P2X4RmRNA和p38 MAPK mRNA的表达有关.
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神经病理性疼痛大鼠鞘内注射SB203580的镇痛作用
目的观察神经病理性疼痛大鼠鞘内注射p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580的镇痛作用,探讨p38MAPK信号转导通路在慢性神经病理性疼痛中的作用.方法雄性SD大鼠,体重220～250 g,建立坐骨神经结扎性损伤(CCI)疼痛模型,第一部分40只CCI大鼠,随机分为5组,对照组、SB0.1μg组、SB0.5 μg组、SB2.5μg组和SB5μg组,(n=8),CCI后7 d,鞘内注射2%二甲基亚砜或不同剂量的SB203580(0.1、0.5、2.5、5μg)10μl,在给药前和给药后0.5、3、6、12、24 h用yon Frey丝测定大鼠术侧后爪机械缩足反射阈值(MWT);另外36只大鼠,随机分为6组(n=6):Sham组、CCI组、DMSO组、SB0.1、0.5、5μg组,CCI后7 d鞘内注射相应剂量SB203580 10μl,给药后6 h取L4,5脊髓,用免疫组织化学方法检测脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)的表达.结果CCI后大鼠产生了机械痛敏,鞘内注射SB203580剂量依赖性地提高了MWT.CCI后脊髓背角pCREB阳性神经元增加,鞘内注射SB 0.5、5μg抑制了CCI引起的脊髓背角pCREB表达增加(P＜0.01).结论鞘内注射SB203580能减轻CCI引起的痛敏,抑制脊髓背角CREB的磷酸化,p38MAPK信号通路参与慢性神经病理性疼痛.
关键词： 神经痛 p38丝裂原活化蛋白激酶类 注射 脊髓 -
脊髓胶质细胞p38有丝分裂原活化蛋白激酶在大鼠持续性术后痛形成中的作用:与Toll样受体4的关系
目的 评价脊髓胶质细胞p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在大鼠持续性术后痛形成中的作用及其与Toll样受体4(TLR4)的关系.方法 鞘内置管成功的大鼠120只,体重200～250 g,2月龄,采用随机数字表法,将其分为5组(n=24):假手术组(S组)、皮肤/肌肉切口和牵拉组(SMIR组)、SMIR+二甲基亚砜(DMSO)组(DMSO组)、SMIR+ p38MAPK抑制剂SB203580组(SB203580组)和SMIR+ TLR4小干扰RNA(TLR4siRNA)组(TLR4siRNA组).制备SMIR诱发持续性术后痛模型,DMSO组和SB203580组于术前30 min和术后1-12 d分别鞘内注射2％DMSO 10μl和SB203580(5 μg),TLR4siRNA组于术前1d和术后1-12 d鞘内给予TLR4siRNA(2 μg),1次/d.分别于术前1d及术后1、3、7、12、22 d时测定机械缩足反应阈(MWT),各时点MWT测定结束后处死4只大鼠,取L4-6节段脊髓,采用Western blot法测定磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达.结果 与S组比较,SMIR组和DMSO组术后MWT降低,脊髓p-p38MAPK表达上调(P＜0.05);与SMIR组比较,SB203580组和TLR4siRNA组术后MWT升高,脊髓p-p38MAPK表达下调(P＜0.05),DMSO组各时点MWT和脊髓p-p38MAPK表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓胶质细胞TLR4通过激活p38MAPK参与了大鼠持续性术后痛的形成.
