首页 > 文献资料
-
脊髓NMDA受体在大鼠糖尿病神经病理性痛中的作用
目的 评价脊髓NMDA受体在大鼠糖尿病神经病理性痛中的作用.方法 雌性Wistar大鼠,月龄3月,体重180～220 g,腹腔注射链脲菌素65 mg/kg制备糖尿病大鼠神经病理性痛模型.取模型制备成功的大鼠96只,随机分为3组(n=32):糖尿病神经病理性痛组(D组)、p38MAPK抑制剂组(I组)和NMDA受体阻断剂组(M组),另取32只正常大鼠作为对照组(C组).模型制备成功后每周一上午,I组和M组分别腹腔注射p38MAPK抑制剂SB203580 1 mg/kg、NMDA受体阻断剂MK-8011 mg/kg,1次/周,直至处死大鼠.各组分别于模型制备成功后第1、3、5、7周(T1～4)末随机取8只大鼠,采用yon Frey纤维丝测定双后足机械缩足反应阚值(MWT),采用肌电图仪测定左侧坐骨神经传导速度(NCV)后处死大鼠;取L3～6的背根神经节和脊髓,采用免疫组化法和Western blot法检测p38MAPK磷酸化水平,采用RT-PCR法检测NMDA受体1(NR1)mRNA表达.结果 与C组比较,D组、I组和M组T1～4时MWT降低,NCV减慢,p38MAPK磷酸化水平升高,NR1 mRNA表达上调(P<0.05);与D组比较,I组和M组MWT升高,NCV加快,T2～4时I组和M组p38MAPK磷酸化水平降低,M组NR1 mRNA表达下调(P<0.05).结论 脊髓NMDA受体激活可能通过p38MAPK信号通路参与大鼠糖尿病神经病理性痛的维持.
关键词： 受体 N-甲基-D-天冬氨酸 p38丝裂原活化蛋白激酶类 糖尿病神经病变 神经痛 -
脊髓背角COX-1和COX-2在p38MAPK诱发大鼠切口痛中的作用
目的 评价脊髓背角环氧化酶-1(COX-1)和COX-2在p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)诱发大鼠切口痛中的作用.方法 雄性SD大鼠,体重250～300 g,选择鞘内置管成功的大鼠112只,随机分为4组(n=28):假手术组(S组)、切口痛组(IP组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和p38MAPK特异性抑制剂SB203580组(SB203580组).S组鞘内注射0.9%生理盐水20 μl后,吸入异氟烷(呼气末浓度1.4%)min,不做手术;IP组术前10 min鞘内注射0.9%生理盐水20 μl;DMSO组和SB203580组术前10 min分别鞘内注射2%DMSO(SB203580的溶媒)10 μl和SB203580 30 μg(10 μl),然后用0.9%生理盐水10 μl冲洗导管.于鞘内置管后5 d,制备大鼠左后足切口痛模型.各组于术前1 h、术后2、3、6 h和1、2、3、5 d时,测定机械缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL).各组于术后2、3、6 h和1、2、3、5 d痛阈测定结束后各处死4只大鼠,采用Western blotting法测定脊髓背角COX-1和COX-2的表达水平.结果 与S组比较,IP组和DMSO组术后2 h～2 d时MWT降低,术后2 h～3 d时TWL缩短,IP组、DMSO组和SB203580组术后3 h～3 d脊髓背角COX-1表达上调(P<0.05);与IP组和DMSO组比较,SB203580组术后2 h～1 d时MWT升高,术后2 h～2 d时TWL延长,术后6 h～2 d脊髓背角COX-1表达下调(P<0.05);4组术后各时点脊髓背角COX-2表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 p38MAPK诱发大鼠切口痛与脊髓背角COX-1有关,与COX-2无关.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 前列腺素内过氧化物合酶 疼痛 脊髓 -
鞘内注射GDNF对神经病理性痛大鼠脊髓背角p38MAPK蛋白表达的影响
目的 评价鞘内注射胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对神经病理性痛大鼠脊髓背角p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白表达的影响.方法 取鞘内置管成功的健康雄性SD大鼠120只,周龄6周,体重180～200 g,随机分为4组(n=30):对照组(C组)、假手术组(S组)、神经病理性痛组(P组)和GDNF组.采用结扎L5.6脊神经的方法建立大鼠神经病理性痛模型.C组不给予任何处理;S组只暴露脊神经,但不结扎;P组脊神经结扎后鞘内注射生理盐水10μl,隔日1次,连续14 d;GDNF组脊神经结扎后鞘内注射GDNF 2μg,用生理盐水稀释至10μl,隔日1次,连续14 d.分别于脊神经结扎后3、7和14 d时,取10只大鼠,测定机械痛阈,然后处死,取脊髓背角,分别采用免疫组化法和蛋白质印迹法测定p38MAPK蛋白的表达水平.结果 与S组比较,P组和GDNF组机械痛阈降低,脊髓背角p38MAPK蛋白表达上调(P＜0.05或0.01);与P组比较,GDNF组机械痛阈升高,脊髓背角p38MAPK蛋白表达下调(P＜0.05或0.01).结论 鞘内注射GDNF可通过抑制脊髓背角p38MAPK蛋白的表达减轻大鼠神经病理性痛.
关键词： 胶质细胞源性神经营养因子 注射 脊髓 神经痛 p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
p38丝裂原活化蛋白激酶在糖尿病大鼠神经病理性痛中的作用
目的 探讨 p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在链脲菌素诱导的糖尿病大鼠神经病理性痛中的作用.方法 雌性Wistar大鼠31只,3月龄,体重180～220 g,随机分为3组:对照组(C组,n=10)、糖尿病神经病理性痛组(D组,n=11)和p38MAPK抑制剂组(I组,n=10).D组、I组单次腹腔注射链脲菌素65 mg/kg制备糖尿病模型.糖尿病模型制备成功后,I组尾静脉注射p38MAPK抑制剂SB203580 0.5 mg/kg,1次/周,连续4周;C组和D组尾静脉注射等体积的生理盐水.给药4周后,测定机械缩足反应阈值(MWT)、左侧坐骨神经传导速率(NCV)、背根神经节(DRG)和脊髓的磷酸化p38MAPK水平.结果 与C组比较,D组、I组MWT下降,NCV减慢,伴有脱髓鞘现象,DRG和脊髓的磷酸化p38MAPK水平升高;与D组比较,I组MWT升高,NCV增快,脱髓鞘程度减轻,DRG和脊髓的磷酸化p38MAPK水平下降.结论 p38MAPK信号转导通路参与了糖尿病大鼠神经病理性痛的形成.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 糖尿病神经病变 神经痛 -
肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂诱导成纤维样滑膜细胞合成基质金属蛋白酶-1机制的研究
目的 通过研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂(TWEAK)诱导类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)合成基质金属蛋白酶(MMP)-1过程中的作用,探讨TWEAK参与RA发病的机制.方法 将重组TWEAK与FLS共培养,对经或未经SB203580预处理的FLS,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养液中MMP-1水平;应用Western-blot法检测FLS中p-p38MAPK和P65的表达.结果 100 ng/ml的TWEAK能够明显诱导RAFLS合成MMP-1;SB203580能够部分抑制TWEAK诱导RA FLS合成的MMP-1;TWEAK作用于RAFLS,能够使D38MAPK磷酸化,并使细胞核内P65蛋白表达增加.结论 TWEAK诱导RA FLS合成MMP-1过程中,p38MAPK信号通路处于激活状态,并诱导核因子(NF)-κB的表达.
关键词： 关节炎 类风湿 间质胶原酶1 p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
抑制P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对急性重症胰腺炎大鼠大脑皮层诱导型一氧化氮合酶表达的影响
目的 观察P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制剂SB203580对急性重症胰腺炎(SAP)大鼠大脑皮层诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响.方法 将45只SD大鼠按随机数字法分3组.模型组:将5％牛磺胆酸钠经胰胆管逆行注入胰腺制备;抑制剂组:造模后于大鼠尾静脉注射SB203580;对照组开腹后翻动胰腺数次立即缝合腹壁,尾静脉注射0.9％氯化钠注射液.造模成功后24 h,检测血清淀粉酶;应用免疫组织化学、蛋白印迹法观察及检测各组神经元中iNOS和磷酸化P38表达的变化,并进行图像分析和统计学处理.结果 模型组大鼠p-P38、iNOS阳性神经元显著增加及蛋白水平升高;给予注射SB203580后,抑制剂组较模型组均明显减轻(P＜0.05).结论 P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制剂SB203580具有调控SAP大鼠大脑皮层iNOS蛋白表达的作用,减轻神经元的变性丢失,对于SAP大鼠大脑起到保护作用.
关键词： 胰腺炎 脑损伤 p38丝裂原活化蛋白激酶类 一氧化氮合酶 -
丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制
目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号转导通路在脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia/reperfusion,I/R)中的作用及机制.方法 将大鼠随机分为6组:未使用p38MAPK抑制剂SB203580的假手术组(Sham组)、使用抑制剂的假手术组(Sham/SB组)、未使用抑制剂再灌注24h组(I/R24h组)、未使用抑制剂再灌注48 h组(I/R 48 h组)、使用抑制剂再灌注24 h组(SB 24 h组)和使用抑制剂再灌注48 h组(SB 48 h组).采用大脑中动脉线栓法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)复制大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,使用抑制剂的各组于造模前30 min经腹腔注射SB203580(5 mg /kg,溶于5 mg/ml DMSO).采用免疫荧光双标法检测大鼠大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)和脑微血管(microvascular,Mic.V)周围IgG的渗出;Western blot和RT-PCR法检测大鼠脑组织中p38、一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase,MMP-9)、胶原Ⅳ型(collagenⅣ)蛋白和基因表达的变化.结果 随着再灌注时间的延长,大鼠脑血管内IgG渗出量增加(P＜0.01);经p38MAPK抑制剂预处理后,IgG的渗出程度有所减轻.脑缺血再灌注后,大鼠脑组织中p38、iNOS、MMP-9蛋白的表达水平和基因mRNA的转录水平均明显升高(P＜0.05),经p38MAPK抑制剂预处理后,能显著抑制p38、iNos、MMP-9蛋白的表达水平和基因mRNA的转录水平(P＜0.05);collagenⅣ蛋白的表达水平和基因mRNA的转录水平随着缺血时间的延长而逐渐下降(P＜0.05),经p38MAPK抑制剂预处理后,其下降程度有所减轻(P＜0.05).结论 MAPK通路中的关键蛋白p38、iNOS、MMP-9在脑缺血时表达显著增加,其过度表达直接导致血脑屏障的破坏,抑制其表达,从而遏制对血脑屏障的破坏,有望为I/R的治疗提供新的途径.
-
p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在紫外线诱导表皮细胞凋亡中的作用
大量流行病学调查及分子生物学实验研究表明:紫外线可通过诱导活性氧及细胞因子产生DNA损伤和基因表达的改变导致细胞凋亡,这个过程非常复杂,有多个信号转导途径参与.由于细胞凋亡与皮肤癌的发生密切相关,近年来UVB诱导表皮细胞凋亡引起了人们广泛的关注.p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)是细胞内重要的信号传导系统之一,参与细胞生长、发育、分化和凋亡等一系列生理、病理过程.p38MAPK可被紫外线激活,并在紫外线诱发的细胞应答过程中发挥重要的作用.
关键词： 紫外线 p38丝裂原活化蛋白激酶类 细胞凋亡 -
白芍总苷对TNBS诱导的大鼠实验性结肠炎的影响
白芍总苷(TGP)具有抗炎、免疫调节等作用,其对炎症性肠病是否具有治疗作用尚不清楚.目的:探讨TGP对大鼠实验性结肠炎的影响及其可能机制.方法:50只大鼠以三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溶液灌肠诱导结肠炎模型,分为结肠炎模型组、低、中、高剂量TGP组(25、50、100 mg/kg TGP)和阳性药物对照组(100 mg/kg奥沙拉秦).10只大鼠作为正常对照组(0.9% NaCl溶液灌肠).实验期间评估各组疾病活动指数(DAI);干预2周后行结肠大体损伤指数(CMDI)和组织学损伤指数(TDI)评分,以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)水平,以免疫组化方法检测结肠组织磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)表达.结果:与结肠炎模型组相比,高剂量TGP组实验期间DAI均值显著降低(P<0.01);中、高剂量TGP组CMDI和TDI显著降低,血清TNF-α水平降低,IL-10水平升高,结肠组织p-p38MAPK表达降低(P<0.05).高剂量TGP的疗效与奥沙拉秦无明显差异.结论:TGP可能通过抑制p38MAPK激活,抑制TNF-α分泌,促进IL-10分泌,改善免疫调节紊乱,从而减轻TNBS诱导的大鼠实验性结肠炎的症状和结肠炎性损伤.
-
不分型流感嗜血杆菌上调人类MUC5AC黏液素的基因表达
目的 探索不分型流感嗜血杆菌(NTHi)上调人类MUC5AC黏液素基因表达的细胞分子机制.方法 通过反转录套式-PCR及实时荧光定量PCR分析NTHi所诱导的MUC5AC mRNA的表达,免疫沉淀及Western印迹法检测NTHi对表皮生长因子受体(EGFR)及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的激活,采用p38 MAPK或EGFR特异性抑制剂,共转染EGFR显性失活质粒,判断在转录水平对NTHi所诱导的MUC5AC表达的影响,并研究EGFR特异性抑制剂对NTHi所诱导p38MAPK激活的影响.结果 在人结肠上皮细胞株(HM3)细胞中,NTHi在mRNA及转录水平上调人类MUC5AC黏液素基因的表达,NTHi能使EGFR或p38MAPK磷酸化.p38MAPK、EGFR特异性抑制剂或共转染EGFR显性失活质粒,可显著抑制NTHi所诱导的MUC5AC的表达,EGFR特异性抑制剂对NTHi所诱导p38MAPK磷酸化有抑制作用.结论 不分型流感嗜血杆菌可通过EGFR-p38MAPK信号通路,上调人类MUC5AC黏液素基因表达.
-
抑制腹腔巨噬细胞胱天蛋白酶募集域蛋白9对大鼠重症急性胰腺炎炎性反应的影响
目的 研究腹腔巨噬细胞中的胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)表达对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)的影响及其作用机制.方法 将60只雄性Sprague Dawley大鼠分成对照组(6只)、SAP组(18只)、小干扰对照组(18只)和小干扰CARD9组(18只).建立SAP大鼠模型,造模后3、6、12 h收集腹水并行腹腔灌洗,分离、培养腹腔巨噬细胞.采用实时荧光定量 PCR法检测腹腔巨噬细胞中CARD9、NF-κB、p38MA PK的mRNA水平.采用 ELISA 法检测大鼠外周血中 TNF-α、IL-1β、IL-6的水平.统计学分析采用LSD检验或Tamhane's T2法.结果 造模后3、6、12 h,SAP组大鼠腹腔巨噬细胞中的 CA RD9 mRNA水平分别为1.63 ± 0.05、1.68 ± 0.24、2.61 ± 0.02,均高于对照组的1.01 ± 0.23,差异均有统计学意义(t=25.97、6.86、131.59,P均<0.05);小干扰CARD9组的 CA RD9 mRNA水平分别为1.45 ± 0.02、1.24 ± 0.03、1.63 ± 0.03,分别低于SAP组同一时间点的水平,差异均有统计学意义(t= -7.81、-4.46、-62.13,P均<0.05).造模后3、6、12 h,SAP组大鼠腹腔巨噬细胞中 N F-κB和p38MA PK的mRNA水平分别为1.51 ± 0.08、1.81 ± 0.10、2.30 ± 0.05和1.37 ± 0.13、1.69 ± 0.18、2.42 ± 0.23,分别高于对照组的1.00 ± 0.01和1.03 ± 0.08,差异均有统计学意义(tNF-κB=15.10、19.95、60.36,tp38MAPK=5.37、8.34、14.11;P均<0.05);小干扰CARD9组 NF-κB mRNA水平分别为1.38 ± 0.05、1.57 ± 0.06、1.76 ± 0.09,分别低于SAP组同一时间点的水平,差异均有统计学意义(t= -3.32、-5.07、-12.70,P均<0.05);造模后6和12 h,小干扰CARD9组 p38MA PK mRNA水平分别为1.50 ± 0.10、2.00 ± 0.09,分别低于SAP组,差异均有统计学意义(t= -2.30、-4.17,P均<0.05).造模后3、6、12 h,SAP组外周血中TNF-α、IL-1β和IL-6的水平分别为(53.49 ± 21.64)、(108.62 ± 22.76)、(139.00 ± 15.35)pg/mL,(43.86 ± 18.30)、(87.51 ± 17.10)、(117.27 ± 14.57)pg/mL,(78.38 ± 32.70)、(156.39 ± 30.56)、(209.56 ± 26.09)pg/mL,分别高于对照组的(2.79 ± 1.17)、(7.13 ± 4.52)、(12.73 ± 8.08)pg/mL,差异均有统计学意义(tTNF-α=5.73、11.37、21.69,tIL-1β=4.77、11.13、17.68,tIL-6=4.77、11.32、17.68;P均<0.05);造模后6和12 h,小干扰CARD9组 TNF-α、IL-1β和IL-6水平分别为(75.73 ± 16.93)、(108.23 ± 14.02)pg/mL,(63.05 ± 11.98)、(91.56 ± 14.28)pg/mL,(112.67 ± 21.40)、(163.62 ± 25.51)pg/mL,分别低于SAP组,差异均有统计学意义(tTNF-α= -2.84、-3.63,tIL-1β= -2.88、-3.09, tIL-6= -2.88、-3.09;P均< 0.05).结论 SAP 大鼠腹腔巨噬细胞存在 CARD9相关的 NF-κB、p38MAPK信号通路,干扰腹腔巨噬细胞中CARD9的表达,在SAP早期阶段进行干预,能减轻炎性反应和胰腺损伤,为SAP的治疗提供新思路.
关键词： 巨噬细胞 腹腔 NF-κB p38丝裂原活化蛋白激酶类 RNA 小分子干扰 大鼠 胰腺炎 重症急性 胱天蛋白酶募集域蛋白9 -
p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在诱导Barrett食管发生中的作用
目的 探讨脱氧胆酸在Barrett食管发生中的作用.方法 用无血清的角朊细胞培养基体外培养人正常食管黏膜上皮细胞,应用不同浓度的脱氧胆酸及p38丝裂原活化蛋白激酶特异抑制剂SB203580干预细胞培养,用Western印迹法检测总p38、磷酸化p38和同源异型框转录因子(CDX2)蛋白的表达变化,评估磷酸化p38和CDX2表达变化的相关性.多组均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法.结果 Western印迹分析显示,培养24 h后与对照组(磷酸化p38为13.7％±1.0％、CDX2蛋白为0)相比,随着脱氧胆酸浓度的逐渐增高,磷酸化p38的水平和CDX2蛋白的表达量逐渐增多,在500 μmol/L时均达高水平(分别为44.0％±1.7％和8.59±1.25),差异有统计学意义(P＜0.05).应用SB203580预处理2h后,再用含500 μmol/L脱氧胆酸的培养基培养24 h,磷酸化p38的水平(28.3％±2.2％)和CDX2蛋白的表达量(0.94±0.13)较脱氧胆酸组(分别为50.5％±9.5％和2.31±0.41)均下降.结论 脱氧胆酸可以诱导人正常食管黏膜上皮细胞CDX2表达,且与p38的活化有关,p38的磷酸化激活可能参与了Barrett食管的发生.
-
p38丝裂原活化蛋白激酶在大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型中的表达
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)在慢性非细菌性前列腺炎(CNP)大鼠模型中的表达,与细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧合酶-2(COX-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的关系及它们在发病机制中可能的作用.方法 将成年雄性SD大鼠去势后皮下注射苯甲酸雌二醇连续4周建模,对照组不做任何处理.HE染色,光镜下观察两组前列腺组织的病理学表现,免疫组化检测两组TNF-á、MMP-9、COX-2、磷酸化p38(P-p38)蛋白的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测p38 mRNA的水平变化.结果 光镜下对照组前列腺组织无炎症反应,模型组表现为明显的炎症反应.对照组前列腺组织TNF-α、MMP-9、COX-2、p-p38蛋白表达量极少,而模型组明显增加,两组差异有统计学意义(P＜0.05).对照组p38 mRNA的表达为模型组的37.3%.结论 在大鼠CNP中p38 MAPK信号转导途径被激活,细胞因子TNF-α、MMP-9、COX-2的表达可能是通过p38 MAPK调节.这为CNP的研究和治疗提供了一条新的途径.
关键词： 前列腺炎 p38丝裂原活化蛋白激酶类 模型 动物 -
17 β雌二醇通过丝裂原活化蛋白激酶抑制前列腺癌细胞系PC3增殖
目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶在17 β雌二醇(E2)抑制前列腺癌PC3细胞生长中的作用.方法 检测不同浓度E2作用不同时间后PC3细胞生长抑制率.流式细胞仪分析细胞周期分布,TUNEL染色检测凋亡.Western blot检测ERK1/2,JNK和p38活性.RT-PCR法检测雌激素受体(ER)α、ER β、P21WAF1和cyclinD1的表达.结果 E2抑制PC3细胞增殖,并且可以激活ERK1/2、JNK和p38.处理因素作用48h后,对照组、E2、E2+PD98059、E2+SP600125、E2+SB203580组细胞的凋亡率分别为(0.9±0.1)%;(23.0±1.4)%;(30.0±1.2)%;(10.6±0.8)%和(14.6±0.7)%,(P＜0.05).E2使细胞阻滞在G1期,PD98059、SP600125、SB203580分别预处理1h后细胞分别进一步阻滞在G1期;轻度阻滞在G1期和进入S期.RT-PCR发现PC3细胞表达ER α和ER β,E2、E2+PD98059、E2+SP600125、E2+SB203580组中cyclinD1、P21WAF1基因表达分别为对照组的(0.42±0.03)、(3.13±0.02)倍;(0.21±0.03)、(3.08±0.05)倍;(0.43±0.01)、(1.31±0.04)倍;(2.81±0.02)、(3.14±0.02)倍(P＜0.05).结论 E2激活JNK增加P21WAF1基因表达,并激活p38抑制cyclinD1表达,使细胞阻滞在G1期,JNK和p38通路还介导E2引起PC3细胞凋亡.同时E2又可激活ERK1/2,轻度拮抗上述作用.
关键词： 前列腺肿瘤 雌二醇 p38丝裂原活化蛋白激酶类 细胞周期 细胞凋亡 -
二甲双胍通过抑制p38MAPK信号通路逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐药性
目的:探讨二甲双胍是否能够逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐药性,以及其可能的作用机制.方法:CCK-8法检测二甲双胍作用后卵巢癌细胞顺铂耐药株C13K和CP70细胞对顺铂的耐药性变化,以及转染针对切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complemention 1,ERCC1)的特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)后C13K和CP70细胞耐药性的变化.实时荧光定量PCR法检测不同浓度二甲双胍作用后,C13K和CP70细胞中ERCC1基因表达的变化.蛋白质印迹法检测二甲双胍作用后C13K和CP70细胞中腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路的激活和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)信号通路的抑制情况,以及联合或不联合AMPK信号通路阻断剂Compound C作用后ERCC1蛋白的表达情况.同时,蛋白质印迹法检测p38MAPK信号通路抑制剂SB203580作用后耐药细胞中ERCC1蛋白表达的变化,以及二甲双胍作用联合p38MAPK siRNA转染前后耐药细胞中ERCC1蛋白的表达变化.结果:二甲双胍能够逆转C13K和CP70细胞对顺铂的耐药性(P＜0.05).二甲双胍作用能够降低C13K和CP70细胞中ERCC1 mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.05),并激活AMPK信号通路(P＜0.05);而联合应用AMPK信号通路阻断剂Compound C可以阻断二甲双胍的这种作用(即ERCC1蛋白表达水平升高)(P＜0.01).p38MAPK信号通路抑制剂SB203580作用后,C13K和CP70细胞中ERCC1蛋白表达水平降低(P＜0.05);而二甲双胍作用可降低p38MAPK的磷酸化水平(P＜0.01),抑制p38MAPK信号通路.二甲双胍作用转染了p38MAPK siRNA的C13K和CP70细胞后,ERCC1蛋白的表达水平无明显变化(P＞0.05).结论:二甲双胍可能逆转卵巢癌顺铂耐药株对顺铂的耐药性,并且这一作用可能是通过抑制p38MAPK信号通路和降低细胞中ERCC1的表达而实现的.
关键词： 卵巢肿瘤 二甲双胍 抗药性 肿瘤 顺铂 DNA修复 p38丝裂原活化蛋白激酶类 切除修复交叉互补基因1 -
肺癌条件培养液对人脐血来源的间充质干细胞增殖及其磷酸化p38MAPK表达的影响
目的:探讨肺癌A549细胞条件培养液对人脐血间充质干细胞(umbilical cord blood-mesenchymal stem cells,UCB-MSCs)增殖特性以及磷酸化p38有丝分裂原激活蛋白激酶(phospho-p38 mitogen activated protein kinase,p-p38MAPK)表达的影响.方法:建立人脐带血来源的原代UCB-MSCs培养体系,将UCB-MSCs分成对照组(用UCB-MSCs培养液培养)、低浓度条件培养液组(用50％ A549细胞条件培养液和50％ UCB-MSCs培养液培养)和高浓度条件培养液组(用100％ A549细胞条件培养液培养),MTT法和细胞划痕愈合实验检测各组细胞的增殖和迁移情况,FCM法检测各组细胞的细胞周期改变,蛋白质印迹法检测各组细胞p-p38MAPK蛋白的表达情况.结果:成功分离和培养了UCB-MSCs.与对照组细胞比较,低浓度条件培养液组和高浓度条件培养液组细胞的增殖和迁移能力明显增强(P＜0.05);高浓度条件培养液组G0/G1期细胞所占比例低于对照组,而G2/M期细胞所占比例高于对照组(P均＜ 0.05),低浓度条件培养液组和高浓度条件培养液组S期细胞所占比例高于对照组(P＜0.05);低浓度条件培养液组和高浓度条件培养液组UCB-MSCs p-p38MAPK蛋白的表达水平明显上调(P＜0.05).结论:肺癌A549细胞条件培养液能促进人UCB-MSCs的增殖和迁移,且能上调其p-p38MAPK蛋白的表达水平.
关键词： 肺肿瘤 脐血 间充质干细胞 细胞增殖 p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
嗜铁蛋白对血管内皮细胞的损伤作用及葛根素的保护机制
目的 探讨葛根素对嗜铁蛋白诱导EA.hy926型血管内皮细胞损伤的保护作用及机制.方法 嗜铁蛋白以不同作用时间(0、24、48、72 h)及浓度(0、5、10、20 μmol· L-1)刺激EA.hy926细胞,MTT法及流式细胞术分别测细胞增殖及凋亡,比色法测乳酸脱氢酶(LDH)活性、ELISA测高敏C反应蛋白(hs-CRP)及单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)水平,Western blot测p-p38 MAPK、t-p38 MAPK、Bax、Bcl-2蛋白表达,加入葛根素(10、50、100 μmol· L-1)和p38 MAPK抑制剂SB203580(20 μmol· L-1)检测葛根素的干预作用及机制.结果 与空白组比较,10 μmol· L-1嗜铁蛋白作用48 h可显著抑制EA.hy926细胞增殖,上调p-p38 MAPK及Bax蛋白表达促进细胞凋亡,诱导分泌hs-CRP及MCP-1,并增加LDH活性(P＜0.05);50、100 μmol· L-1葛根素均可显著减轻嗜铁蛋白诱导的EA.hy926细胞增殖抑制、下调p-p38 MAPK及Bax蛋白表达以抑制细胞凋亡、减少嗜铁蛋白诱导EA.hy926细胞分泌hs-CRP及MCP-1并降低LDH活性(均P＜0.01),且较SB203580更为显著(均P＜0.05).结论 嗜铁蛋白可诱导血管内皮细胞损伤,葛根素可抑制p38 MAPK通路减轻嗜铁蛋白诱导的血管内皮细胞损伤.
关键词： 葛根素 嗜铁蛋白 p38丝裂原活化蛋白激酶类 内皮细胞 -
依达拉奉抗单肺通气患者炎性反应时的p38丝裂原活化蛋白激酶表达
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在依达拉奉抗单肺通气患者炎性反应中的作用.方法 择期拟行肺叶切除术肺癌患者40例,随机分为两组,每组20例.常规麻醉诱导后,依达拉奉组给予依达拉奉0.5 mg·kg-1加入氯化钠注射液100 mL,静脉滴注;对照组给予等容量氯化钠注射液.两组麻醉维持用药相同,均在麻醉后切皮前(T1)、膨肺后60 min (T2)、术后1 h(T3)测定血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)浓度和磷酸化p38 MAPK (p-p38 MAPK)、p38 MAPK表达水平,以p-p38 MAPK/p38 MAPK反映p38 MAPK激活程度.结果 两组手术时间、单肺通气时间均无显著差异(P＞0.05),围手术期血流动力学平稳.与T1时比较,两组T2、T3时TNF-α、IL-6血浆浓度和p38 MAPK、p-p38 MAPK表达水平及p38 MAPK激活程度均上升(P＜0.05);依达拉奉组TNF-α、IL-6血浆浓度和p38 MAPK、p-p38 MAPK表达水平及p38 MAPK激活程度均低于对照组(P＜0.05).结论 依达拉奉可抑制机体TNF-α和IL-6的生成和释放,p38 MAPK信号通路参与了其抗单肺通气患者炎症反应过程.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 依达拉奉 单肺通气 肿瘤坏死因子α 白细胞介素6 -
Neu-p11对脓毒症大鼠心肌抑制的改善作用
目的 观察Neu-p11对脓毒症大鼠心肌抑制的影响及其机制.方法 45只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、脓毒症组和Neu-p 11组,每组15只.采用盲肠结扎穿刺法制作脓毒症大鼠模型,Neu-p11组术前7d每日腹腔注射Neu-p11 15 mg·kg-1.造模成功12 h后经右颈总动脉左心室内插管监测各组大鼠左心室功能指标,同时检测血清心肌肌钙蛋白Ⅰ (cTnI)、脑钠素(BNP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的含量,Western blotting法测定心肌组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白表达.结果 与假手术组比较,脓毒症组左心室收缩压(LVSP)降低、左心室舒张末期压(LVEDP)升高、左心室等容收缩期压力大上升/下降速率(±dp/dtmax)降低,血清cTnI、BNP、TNF-α、IL-6含量和心肌p38MAPK表达均升高(P＜0.05或P＜0.01).与脓毒症组相比,Neu-pl1组LVSP和±dp/dtmax升高、LVEDP降低,血清cTnI、BNP、TNF-α、IL-6含量和心肌p38MAPK表达均降低(P＜0.05或P＜ 0.01).结论 Neu-p1 1可改善脓毒症状态下心脏功能,其机制可能与降低血清TNF-α、IL-6以及抑制心肌p38MAPK活化有关.
-
亚硒酸钠对肾缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡的影响
目的 研究亚硒酸钠对肾缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的影响.方法 18只SD大鼠随机分成3组,假手术组、缺血再灌注组和亚硒酸钠组.采用双侧夹闭大鼠肾蒂的方法制备动物模型,亚硒酸钠组大鼠术前连续3 d腹腔注射亚硒酸钠(0.5 mg·kg-1).观察大鼠肾功能、肾脏病理改变,TUNEL及流式细胞术检测肾脏细胞凋亡情况,Western blot分析c-Jun N端蛋白激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)、原癌基因c-Jun(c-Jun)的激活和表达.结果 缺血再灌注组大鼠血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平,细胞凋亡率及凋亡细胞数量,以及JNK、p38、c-Jun活性明显高于假手术组(P<0.01).亚硒酸钠组大鼠血清Scr和BUN,细胞凋亡率,凋亡细胞数量,以及JNK、p38、c-Jun活性低于缺血再灌注组,差异有显著意义(P<0.05,P<0.01).结论 亚硒酸钠可能通过下调JNK、p38通路的激活,拮抗肾缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡,从而改善缺血再灌注损伤.
