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氟伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞核因子κB活性的影响
目的 观察氟伐他汀对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)内核因子(NF)κB活性的影响.方法 将NRK-52E细胞分为(1)对照组;(2)不同浓度及时间AngⅡ组;(3)AngⅡ(10-6mol/L)+SB203580(10 μmol/L)组;(4)AngⅡ(10-6mol/L)+不同浓度氟伐他汀(10-7、10-6、10-5mol/L)组;(5)Ang Ⅱ(10-6mol/L)+氟伐他汀(10-5mol/L)+甲羟戊酸(10-4mol/L)组.电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测NF-κB活性变化.Western印迹方法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化水平.RT-PCR方法检测单核细胞趋化因子(MCP-1)mRNA表达.结果 Ang Ⅱ呈剂量依赖性上调NF-κB DNA结合活性、p38MAPK的磷酸化水平以及MCP-1 mRNA表达(P<0.01).Ang Ⅱ(10-6 mol/L)刺激5 min即可增加p38MAPK蛋白磷酸化水平(P<0.01).AngⅡ刺激30 min后NF-κB活性显著升高(P<0.01),2 h达高峰(P<0.01).p38MAPK特异性抑制剂SB203580可阻断AngⅡ对NF-κB的激活作用(P<0.01).氟伐他汀可呈剂量依赖性下调Ang Ⅱ诱导的NRK-52E细胞内p38MAPK磷酸化和NF-κB活化,以及其下游趋化因子MCP-1表达(P<0.05).甲羟戊酸(10-4 mol/L)可逆转氟伐他汀的作用(P<0.05).结论 氟伐他汀可能通过抑制p38MAPK信号转导通路,下调AngⅡ诱导的NRK-52E细胞内NF-κB的活化.甲羟戊酸可部分逆转氟伐他汀的作用.
关键词： 血管紧张素Ⅱ NF-κB p38丝裂原活化蛋白激酶类 氟伐他汀 -
p38丝裂原活化蛋白激酶介导抵抗素调节高糖刺激下人肾小球系膜细胞增殖的作用
目的 观察巨噬细胞因子抵抗素过度表达对高糖刺激作用下人肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,探讨抵抗素调控肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质积聚的作用机制.方法 通过转染携带野牛型抵抗素基因的腺病毒载体(Ad-resistin)构建过度表达抵抗素的人巨噬细胞模型,并与高糖刺激后的人肾小球系膜细胞共培养.3H-氚标胸腺嘧啶掺入法检测.肾小球系膜细胞增殖.免疫细胞化学法检测系膜细胞激活蛋白1(AP-1)的表达.免疫荧光检测细胞外基质层粘连蛋白(LN)的表达.Western印迹检测系膜细胞内p38MAPK、转化牛长因子(TGF)IM的表达并测定Smad2的磷酸化水平.结果 Ad-resistin转染后,人巨噬细胞抵抗素mRNA水平及蛋白表达均显著升高(P<0-01).与对照组比较,与过度表达抵抗素的人巨噬细胞共培养后,人肾小球系膜细胞p38MAPK、TGF-β1的蛋白表达显著增强;细胞内Smad2的磷酸化水平显著升高(P<0.05);肾小球系膜细胞出现明显的增殖(P<0.01);细胞外基质的合成增多(P<0.05).结论 巨噬细胞因子抵抗素的过度表达可能通过p38MAPK信号通路,促进高糖刺激作用下肾小球系膜细胞的增殖及细胞外基质的异常积聚.
关键词： 抵抗素 肾小球系膜细胞 p38丝裂原活化蛋白激酶类 增殖 -
斯伐他汀对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞p38信号通路的影响
目的 研究糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达及斯伐他汀对其的影响.方法 分别以高糖、糖基化终产物(AGE)及过氧化氢孵育糖尿病大鼠肾小球系膜细胞(RMC),Western印迹法检测RMC的p38MAPK和TGF-β蛋白表达,p38MAPK特异性抑制剂SB203580及斯伐他汀预处理对其影响.结果 高糖、AGE及过氧化氢均可单独激活p38MAPK,增加RMC的磷酸化(p)p38MAPK和TGF-β的蛋白表达;SB203580显著抑制TGF-β的蛋白表达(P＜0.05);斯伐他汀抑制p38MAPK的活化并减少TGF-β的蛋白表达(P＜0.05).结论 p38MAPK可能是糖尿病肾病发生的始动信号之一.斯伐他汀可能通过抑制p38MAPK磷酸化而减少TGF-β的蛋白表达.
关键词： 斯伐他汀 糖尿病肾病 转化生长因子β p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
低盐诱导的致密斑细胞环氧化酶2表达与p38丝裂素激活蛋白激酶信号通路
目的 探讨低盐(LS)培养对小鼠致密斑细胞(MMDD1)环氧化酶2(COX-2)表达、前列腺素E2(PGE2)释放的诱导作用及p38丝裂素激活蛋白激酶(MAPK)信号通路的调控作用.方法 采用RT-PCR和免疫印迹方法检测正常盐(NS)与LS培养对MMDD1细胞COX-2表达的影响.用ELISA法检测上清液PGE2的含量.用免疫印迹检测细胞内p-p38 MAPK表达的变化.结果 与NS培养相比,LS培养均能诱导MMDD1细胞COX-2 mRNA和蛋白表达增加(16h时高峰mRNA 0.94±0.12比0.26±0.09,28 h时高峰蛋白0.59±0.02比0.25±0.07,P均＜0.01);PGE2分泌各时间点均显著升高,于24 h达高峰[(644.33±26.54)ng/L比(224.0±18.33)ng/L,P＜0.01].LS培养后,MMDD1细胞内p38MAPK的磷酸化程度显著上调,180 min时较高(从0.17±0.01升至0.28±0.01,P＜0.01).20 μmol/L p38抑制剂SB-203580下调LS诱导的COX-2蛋白表达(从0.58±0.01降至0.19±0.02,P＜0.01).结论 低盐培养促进MMDD1细胞COX-2的表达和PGE2的分泌.p38 MAPK激活介导了低盐诱导的MMDD1细胞COX-2表达.
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转化生长因子β1在大鼠腹膜间皮细胞中的促炎作用
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)中的促炎作用及机制.方法 用TGF-β1(10 μg/L)刺激体外培养的RPMC,观察其对RPMC中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响.体外转染Smad7和pcDNA3空载体至RPMC后,观察TGF-β1(10 μg/L)对RPMC MCP-1和p38表达的影响.用p38抑制剂SB203580(10 μmol/L)预处理RPMC后,加入TGF-β1(10 μg/L),观察阻断p38信号通路对MCP-1表达的影响.结果 RT-PCR结果显示,3 h、6 h、12 h、24 h TGF-β1刺激组腹膜间皮细胞MCP-1表达均显著高于0 h对照组(P<0.05),6 h刺激组MCP-1表达达高峰(P<0.01).ELISA结果显示,6 h、12 h、24 h、48 h TGF-β1刺激组MCP-1表达增多(P<0.05),48 h表达达高峰(P<0.01).上调表达Smad7和p38抑制剂SB203580都能明显抑制TGF-β1刺激RPMC产生和分泌MCP-1的作用,与pcDNA3空载体组比较,Smad7治疗组MCP-1的表达显著下调(P<0.05);与TGF-β1刺激组比较,SB203580治疗组MCP-1的表达显著下调(P<0.01).TGF-β1能活化p38磷酸化的过程,上调Smad7可抑制TGF-β1对它们的激活反应;与正常对照组比较,TGF-β1刺激组磷酸化(P)-p38的表达显著上调(P<0.05);与TGF-β1刺激组比较,Smad7治疗组p-p38的表达显著下调(P<0.05).结论 TGF-β1能促进RPMC MCP-1的表达,其促炎作用可能是通过激活p38MAPK信号通路介导的.
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拓朴替康诱导K562细胞凋亡时p38MAPK的变化
目的:探讨拓朴替康诱导K562细胞凋亡的相关信号转导途径.方法:0.1μmol/L的拓朴替康处理K562细胞24 h时,通过流式细胞仪(FCM)和片段DNA含量检测研究拓朴替康对靶细胞的促凋亡活性;采用免疫印迹法和γ-32P掺入法测定拓朴替康对p38MAPK含量及其活性的影响.结果:FCM检测发现在K562细胞周期图中出现一凋亡峰,凋亡细胞比率为16.9%,凋亡细胞特有的片段DNA含量为(45.9±1.0)%;p38MAPK含量及其活性明显升高,分别为对照组的4.9倍和4.1倍.结论:拓朴替康诱导K562细胞凋亡可能通过激活p38MAPK来实现.
关键词： K562细胞 托泊替坎 p38丝裂原活化蛋白激酶类 细胞凋亡 -
高牵张促进烧伤血清复合缺氧条件下心肌细胞p38磷酸化
目的:探讨高负荷对烧伤血清复合缺氧条件下心肌细胞p38表达、磷酸化的影响.方法:采用原代培养的乳鼠心肌细胞,分别给予正常血清(SN组)、烧伤血清+缺氧(SH组)、烧伤血清+缺氧+10%轴向静态牵张(SHS组)3种处理,采用Western blotting和免疫荧光检测磷酸化p38(p-p38)于心肌细胞内的表达情况.结果:SHS组较SH组p38表达、磷酸化增强,且磷酸化高峰提前,免疫荧光分析证实SH组、SHS组心肌细胞内p-p38水平明显提高.结论:高牵张上调烧伤血清复合缺氧条件下心肌细胞p38的表达和磷酸化水平,后者可能是高负荷对心肌细胞损伤的主要方式.
关键词： 烧伤 心肌 p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
油酸通过磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶途径调节水通道蛋白3和9的表达
目的 研究油酸在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中诱导水通道蛋白3 (AQP3)和AQP9表达改变的相关信号转导机制.方法 采用油酸干预人肝癌HepG2细胞构建非酒精性脂肪变性肝细胞模型,油红O染色及吸光度值测定分析其脂肪变性程度,通过实时定量聚合酶链反应与Western blot检测AQP3和AQP9表达改变情况；以常规培养的细胞为对照组,联合油酸及不同信号通路抑制剂诱导HepG2细胞,实时定量聚合酶链反应和Western blot方法检测AQP3和AQP9在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中表达改变的相关信号分子机制.多组间数据比较采用单因素方差分析,两组间数据比较采用独立样本t检验. 结果 随着油酸刺激浓度的升高(0、250、500μmol/L),肝细胞内脂肪变性程度增加,AQP3 mRNA表达逐渐下降,而AQP9 mRNA水平逐渐升高,油酸500μmol/L刺激下二者变化均为明显,分别为0.47±0.18和1.57±0.21,与0 μmol/L组比较,差异均有统计学意义(t值分别为4.5450和3.0306,P值均＜0.05)；蛋白质水平检测结果与之一致.油酸联合磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂LY294002处理后,AQP9 mRNA水平升高到4.55±0.62,与对照组的1.00±0.10、油酸单独干预组的2.43±0.53和LY294002单独干预组的1.90±0.16相比,差异均有统计学意义(t值分别为9.7909、4.5018和7.1683,P＜0.01或P＜ 0.05).p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580干预可使被油酸抑制的AQP3 mRNA水平恢复到与对照组相近水平(1.27±0.11),AQP9 mRNA则从油酸明显上调的水平下降到0.38±0.09,与干预前相比,差异均有统计学意义(t值分别为5.7455和6.5727,P值均＜0.01).细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059和c-Jun N端激酶抑制SP600125干预对AQP3和AQP9的蛋白和基因水平均无明显作用.油酸诱导后,磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶蛋白相对表达水平从0.21±0.02下降到0.13±0.03,磷酸化p38蛋白相对表达水平从0.58±0.06升高到1.02±0.10,差异均有统计学意义(t值分别为3.8431和12.5289,P＜0.01或P＜0.05).结论 油酸通过激活p38 MAPK信号通路下调AQP3的表达,而通过抑制磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶途径并激活p38MAPK途径刺激AQP9表达升高.
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肿瘤坏死因子α调节人肝癌MHCC-97H细胞中白细胞介素8的分泌
目的 研究肿瘤坏死因子(TNF)α诱导人肝癌细胞系MHCC-97H分泌白细胞介素8(IL-8)及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核因子-κB (NF-κ B)信号通路对其的调节作用.方法 酶联免疫吸附法检测不同浓度的TNF α(0、1、5 ng/ml)干预人肝癌细胞MHCC-97H 24 h和相同浓度的TNFα(1 ng/ml)干预不同时间后,细胞上清液中IL-8的浓度; Western blot和免疫荧光方法检测TNFα(1 ng/ml)刺激MHCC-97H细胞后,p38 MAPK磷酸化蛋白的表达及其分布;非放射性NF-κ B p50/p65转录因子活性试剂盒检测TNFα干预MHCC-97H细胞后核蛋白中活性NF-κB p65蛋白的含量.多组均数比较采用单因素方差分析,多个样本均数间两两比较用q检验.结果 TNFα明显促进肝癌细胞分泌IL-8,具有显著的时间和浓度依赖性:TNFα干预0、6、12、18、24h,IL-8的浓度分别为(47.45±9.78)pg/ml、(497.41±52.83)pg/ml、(694.14±44.43)pg/ml、(909.35±97.22) pg/ml、(1093.59±75.72) pg/ml (F=144.04,P＜0.01);TNFα0、1、5、10 ng/ml干预24h,IL-8浓度分别为(47.45±9.12) pg/ml、(1093.59±75.72)pg/ml、(1372.77±85.10) pg/ml和(1614.55±153.52) pg/ml(F=364.14,P＜0.01).TNFα刺激肝癌细胞后,p38 MAPK磷酸化蛋白表达明显上调,给予p38 MAPK通路特异性抑制剂(SB203580)可以显著抑制TNFα诱导的IL-8的分泌(P值均＜0.01)且呈浓度依赖性(F=165.92,P＜0.01).免疫荧光结果显示TNFα促进肝癌细胞NF-κ B p65的核转位,且呈浓度依赖性(TNF α0、1、5、10 ng/ml处理肝癌细胞1h后细胞核蛋白表达NF-κ B p65对应吸光度值分别为0.52±0.04、2.75±0.15、3.13±0.18、3.81±0.14 (F=1266.42,P＜0.05),而SB203580则可以部分抑制NF-κB p65的核转位(F=141.20,P＜0.05).结论 TNFα通过p38 MAPK-NF-κB信号途径调节人肝癌细胞系MHCC-97分泌IL-8.
关键词： 癌 肝细胞 白细胞介素8 肿瘤坏死因子α p38丝裂原活化蛋白激酶类 -
P38MAPK信号通路在急性肺损伤中作用的研究进展
急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是住院患者急性呼吸道症状的主要原因,据统计,有超过10％的ALI患者需进入重症监护病房治疗[1],在美国每年有接近20 000例发生ALI[2].而我国ALI的发病率为38/10万,且病死率高达32％～55％,近年来还有逐步增高的趋势[3].ALI的病理生理机制是肺泡上皮细胞和毛细血管内皮细胞的损伤,使肺泡屏障通透性增加,造成弥漫性的肺间质和肺泡水肿及炎性反应,表现为弥漫性的渗出和严重的低氧血症[4].丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)细胞信号转导通路可将胞外刺激信号传导至胞内乃至其核内来调控基本的细胞生理过程,在细胞的生长、增殖、凋亡及分化等生理过程中扮演重要角色.其中,P38 MAPK是MAPK家族中的重要成员之一,在ALI发生、发展中起重要作用[5],已成为研究ALI发病机制的热点之一.因此,本文对P38 MAPK在ALI发病过程中的作用机制综述如下.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 呼吸窘迫综合征 成人 炎症 细胞凋亡 -
Aβ25～35通过激活p38MAPK信号通路促进大鼠心肌细胞凋亡
目的 观察β淀粉样蛋白25～35 (Aβ25～35)对培养大鼠心肌细胞的毒性作用,并阐明可能的机制.方法 体外培养大鼠心肌细胞,给予不同浓度Aβ25～35刺激,采用流式细胞术检查细胞凋亡率,采用Western blot方法测定凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平.观察Aβ25～35对p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化的影响,并进一步评估p38MAPK特异性抑制剂对Aβ25～35诱导心肌细胞凋亡的影响.结果 Aβ25～35可以诱导体外培养大鼠心肌细胞凋亡,升高促凋亡蛋白Bax的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,且呈现浓度依赖的关系.同时发现给予Aβ25～35后p38MAPK磷酸化水平增加,而给予p38MAPK特异性抑制剂SB203580减少心肌细胞的凋亡.结论 Aβ25～35可以导致体外培养的大鼠心肌细胞发生凋亡,而p38MAPK信号通路可能参与了该过程.本研究探索阿尔兹海默病(AD)患者心肌损伤的可能发病机制,为将来有效防治AD相关性心肌损伤提供新思路.
关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶类 阿尔兹海默病 细胞凋亡 -
HBeAg对小鼠骨髓源性树突状细胞成熟的影响
目的 探讨HBeAg对LPS诱导小鼠骨髓源性树突状细胞(DC)成熟的影响.方法 体外诱导C57BL/6小鼠骨髓细胞分化成未成熟树突状细胞,经CD11c磁珠分选纯化后将DCs随机分为空白对照组、LPS刺激组、HBeAg+LPS刺激组.流式检测DC表型变化,混合淋巴反应(MLR)检测DC促T淋巴细胞增殖能力,酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液中IL-12的分泌水平,Western blot检测p38磷酸化水平,并设置SB203580组为阳性对照探讨细胞IL-12分泌的可能调节机制.结果 LPS刺激未成熟DC引起细胞表面MHC-Ⅱ、CD86表达升高,刺激同种异体淋巴细胞增殖能力增强,IL-12分泌量增高.HBeAg可抑制LPS促进DC表面MHC-Ⅱ、CD86表达升高和促淋巴细胞增殖能力增强的作用.LPS刺激DC可引起p38磷酸化水平升高,并呈时间依赖性;HBeAg或SB203580预处理细胞再予LPS刺激,磷酸化p38表达和IL-12分泌较单纯LPS刺激组明显下降.结论 HBeAg对LPS引起的树突状细胞的成熟有一定的抑制作用,且HBeAg可能通过抑制p38MAPK信号通路下调LPS诱导的树突状细胞IL-12的产生.
关键词： 肝炎e抗原乙型 树突状细胞 脂多糖 p38丝裂原活化蛋白激酶类 白细胞介素-12 -
G蛋白偶联受体91对早期糖尿病大鼠血视网膜屏障的影响及机制
目的 观察G蛋白偶联受体91(GPR91)对早期糖尿病大鼠血视网膜屏障(BRB)的影响及可能的作用机制.方法 构建GPR91小发夹RNA(shRNA)慢病毒载体pGCSIL-GFP-shGPR91及相应的慢病毒空载体pGCSIL-GFP-shScrambled.健康雄性Sprague-Dawley大鼠60只,随机分为对照组(A组)、糖尿病链脲佐菌素(STZ)组(B组)、空病毒LV.shScrambled组(C组)、病毒LV.shGPR91组(D组),每组均为15只大鼠.大鼠STZ腹腔注射2周后,C组大鼠玻璃体腔注射浓度为1×108 TU/ml的空载体病毒1μl;D组大鼠玻璃体腔注射浓度为1×108 TU/ml的pGCSIL-GFP-shGPR91慢病毒1 μl.注射后12周,免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠视网膜中GPR91及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达和激活情况.苏木精-伊红染色和伊凡思蓝(EB)渗漏试验观察大鼠视网膜微血管结构改变和渗漏情况.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)表达情况.结果 免疫组织化学染色可见GPR91主要表达于大鼠视网膜神经节细胞层;Western blot检测结果显示,D组GPR91表达较C组显著降低,差异有统计学意义(F=39.31,P＜0.01).光学显微镜观察发现,B、C组大鼠视网膜内层毛细血管较A组大鼠视网膜内层毛细血管明显扩张,D组大鼠视网膜内层扩张的毛细血管显著改善.EB渗漏试验结果显示,D组大鼠视网膜EB渗漏量较C组下降(33.8±4.11)％,差异有统计学意义(F=30.35,P＜0.05).ELISA检测结果显示,B、C组大鼠视网膜VEGF蛋白表达较A组明显增加;D组大鼠视网膜VEGF蛋白表达较C组显著下降,差异有统计学意义(F=253.15,P＜0.05).Westernblot检测结果显示,B组大鼠视网膜细胞外信号调节激酶(ERK) 1/2、c-jun氨基末端激酶、p38 MAPK通路均激活,B组各比值与A组比较,差异有统计学意义(q=6.38、2.94、3.45,P＜0.05).D组中p-ERK1/2与t-ERK1/2的比值较C组显著降低,差异有统计学意义(F=22.50,P＜0.05).结论 GPR91受体shRNA玻璃体腔注射可改善早期糖尿病大鼠视网膜BRB损伤;GPRg1受体可能通过激活ERK1/2信号通路参与调控早期糖尿病视网膜中VEGF的表达及BRB的损伤.
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丝裂原活化蛋白激酶信号通路与眼底新生血管性疾病相关性的研究进展
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中主要存在3种亚型,分别为细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38 MAPK.它们在各亚群内部均存在着类似的、相互独立的三级级联反应,在适当刺激因素下作用于不同的底物可产生不同的细胞生物学效应.眼底新生血管是多种致盲眼病的病理基础,是多种因子相互作用导致促血管生成因子和抗血管生成因子间的平衡失调的结果；而有关多种因子发挥生物效应的MAPK信号通路在眼底新生血管发生发展过程中的作用越来越引起注意.MAPK信号通路在糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、老年性黄斑变性、视网膜静脉阻塞等疾病的新生血管形成中发挥重要的调控作用.通过对MAPK信号通路在眼底新生血管作用机制的探索,有助于深入详尽地了解眼部疾病的形成和发展规律,为预防和控制眼底新生血管形成和发展提供新的思路和方案.在未来,针对MAPK信号通路的靶向治疗将成为有效抑制眼底新生血管形成的重要治疗方案之一.
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复元胶囊对软骨细胞凋亡P38丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的影响
目的:观察复元胶囊含药血清对体外培养软骨细胞凋亡及P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路(P38MAPK)的影响.方法: 建立体外原代软骨细胞培养体系,制备复元胶囊含药血清,采用硝普钠(SNP)诱导软骨细胞凋亡,并用复元胶囊含药血清以及P38MAPK的特异阻断剂SB203580干预.透射电镜观察软骨细胞凋亡的超微结构,流式细胞仪检测软骨细胞凋亡率的变化,比色法观察Caspase-3活性变化,免疫印迹技术(Western Blot)检测磷酸化P38,P53蛋白表达水平.结果: ①电镜下可观察到典型的凋亡细胞形态;⒐窍赴蛲雎?29.18±0.81)%比模型组(39.73±0.55)%显著降低,中药+抑制剂组软骨细胞凋亡率(25.85±0.85)%也比抑制剂组(27.27±0.78)%低,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05);③中药组凋亡执行因子Caspase-3的活性为(1.69±0.31)μg/μL,低于模型组(2.78±0.19)μg/μL,中药+抑制剂组(0.95±0.06)μg/μL与抑制剂组(1.17?.13)μg/μL比较,Caspase-3的活性也降低,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05);④中药组p-P38蛋白表达(0.84±0.06)与模型组(1.98±0.19)比较显著降低.差异有统计学意义(P<0.01);而中药+抑制剂组p-P38表达(0.32±0.03)与抑制剂组(0.36±0.04)比较无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);⑤P53蛋白在中药组(2.78±0.34)表达明显降低,与模型组(5.50±0.54)比较,差异均有统计学意义(P<0.01);中药+抑制剂组(0.92±0.02)与抑制剂(1.41±0.09)组比较,P53蛋白表达也降低.结论: 复元胶囊含药血清能通过抑制磷酸化P38表达、调节P38信号通路下游靶基因P53和凋亡执行因子Caspase-3而抑制SNP诱导的软骨细胞凋亡.
关键词： 软骨细胞 细胞凋亡 p38丝裂原活化蛋白激酶类 复元胶囊 -
p38丝裂原活化蛋白激酶在大鼠视网膜缺血再灌注损伤后的磷酸化及其意义
目的:观探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的磷酸化及其意义.方法:采用升高眼内压的方法,制作实验性视网膜缺血再灌注大鼠模型.将30只Wistar大鼠随机分为正常组(n=6)和缺血再灌注组(n=24),其中缺血再灌注组又分为再灌注后2,12,24,72 h等4个时间段(每时间段6只).应用Western Blot法检测视网膜组织中p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK (p-p38 MAPK)蛋白的表达变化.结果:p38 MAPK在缺血再灌注组各时间点的视网膜组织内的表达保持相对恒定,与正常对照组相比无统计学上的变化(P＞0.05).p-p38 MAPK的表达水平在缺血再灌注组12 h时即有明显升高,24 h时达到高峰,72 h时仍维持较高的表达水平,与正常对照组相比有统计学著差异(P＜0.01).结论:p38 MAPK信号通路的激活可能与缺血再灌注所造成的视网膜损伤有密切关系.
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烧伤血清作用下心肌细胞蛋白激酶B和p38丝裂原活化蛋白激酶通路的交叉对话研究
目的 了解在烧伤血清刺激下大鼠心肌细胞内是否存在磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK,以下简称p38)信号通路的交叉对话,探讨此二通路在烧伤后心肌细胞损伤中的作用. 方法建立烧伤血清刺激下的大鼠心肌细胞模型.(1)检测体积分数10%的烧伤血清刺激不同时间后,心肌细胞内磷酸化p38(p-p38)和磷酸化Akt(p-Akt)的表达水平.(2)检测在不同体积分数(5%、10%、20%)的烧伤血清或体积分数10%烧伤血清+胰岛素(1×10-6、1×10-7、1×10-8mol/L)作用下,心肌细胞内p-p38和p-Akt的表达水平,并测定细胞培养上清液中肌酸激酶(CK)的含量.(3)采用p38MAPK通路抑制剂SB203580、PI3K/Akt通路抑制剂LY294002进行阻断实验,测定心肌细胞内p-p38和p-Akt的表达水平及细胞培养上清液中CK的含量. 结果 (1)体积分数10%烧伤血清作用1、3、6、12、24 h时,心肌细胞p-p38水平分别为4.0±0.8、3.6±0.8、5.1±1.6、2.4±0.5、3.0±0.6,较作用0 h时(加入血清后即刻)的水平(1.0)明显增高(P<0.01);而p-Akt表达水平分别为0.15±0.07、0.64±0.10、0.26±0.08、0.38±0.11、0.59±0.13,较作用0 h时水平(1.00)明显降低(P<0.01).(2)不同浓度烧伤血清或烧伤血清+胰岛素作用下,p-p38和p-Akt的表达水平呈相反变化趋势;心肌细胞CK的释放量随烧伤血清浓度升高而增高,胰岛素对此有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01).(3)LY294002能够升高烧伤血清导致的低P-p38水平,抵消胰岛素的保护作用(P<0.01);SB203580能使烧伤血清所致的低p-Akt水平得以回升(P<0.01),抑制烧伤血清引起的CK释放. 结论烧伤血清作用下的心肌细胞存在PI3K/Akt和p38信号通路的交叉对话,并可能对心肌细胞产生调控作用.
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X染色体骨髓酪氨酸激酶在内毒素/脂多糖诱导RAW264.7小鼠单核巨噬细胞促炎性细胞因子产生中的作用及机制
目的 探讨X染色体骨髓酪氨酸激酶(BMX)在LPS诱导小鼠单核巨噬细胞产生TNF-α和IL-1β中的作用及相关机制. 方法 将RAW264.7小鼠单核巨噬细胞接种于6孔板中,常规培养,用于以下实验.(1)取细胞,按随机数字表法分为空白对照组、LPS对照组及75、750、7 500、75 000 nmol/L BMX-IN-1预处理组,每组8孔.空白对照组细胞常规培养25 h;LPS对照组细胞常规培养24 h后,用终质量浓度(下同)为0.1μg/mL LPS刺激1h;后4组细胞分别用终物质的量浓度(下同)为75、750、7 500、75 000 nmol/L的BMX-IN-1处理24 h后,用0.1 μg/mL LPS刺激1h.实时荧光定量RT-PCR法检测各组细胞中TNF-α mRNA表达量,筛选BMX-IN-1佳作用浓度.(2)取细胞,按随机数字表法分为LPS对照组及BMX-IN-1预处理2、4、8、12、18h组,每组8孔.LPS对照组细胞用0.1 μg/mL LPS刺激1h;后5组细胞用佳作用浓度的BMX-IN-1分别处理2、4、8、12、18h后,用0.1 μg/mL LPS刺激1h.实时荧光定量RT-PCR法检测各组细胞中TNF-α mRNA表达量,筛选BMX-IN-I佳作用时间.(3)取细胞,按随机数字表法分为空白对照组、BMX-IN-1对照组、LPS对照组和BMX-IN-I+ LPS组,每组16孔.空白对照组细胞常规培养佳作用时间加1 h;BMX-IN-1对照组细胞用佳作用浓度BMX-IN-1处理佳作用时间后,常规培养1h;LPS对照组细胞常规培养佳作用时间后,用0.1 μg/mL LPS刺激1 h;BMX-IN-1 +LPS组细胞用佳作用浓度BMX-IN-1处理佳作用时间后,用0.1 μg/mL LPS刺激1h.采用实时荧光定量RT-PCR法检测各组细胞中TNF-α和IL-1 β mRNA表达量,蛋白质印迹法检测各组细胞中BMX和p38MAPK活性,样本数均为8.对数据行单因素方差分析和LSD检验. 结果 (1)与空白对照组比较,其余5组细胞中TNF-α mRNA表达量显著增高(P值均小于0.01).与LPS对照组比较,各BMX-IN-1预处理组细胞中TNF-α mRNA表达量均下降,但仅75 000 nmol/L BMX-IN-1预处理组细胞中TNF-α mRNA表达量显著降低(P＜0.05).BMX-IN-1佳作用浓度为75 000 nmol/L.(2)与LPS对照组比较,BMX-IN-1预处理2、4h组细胞中TNF-α mRNA表达量无明显变化(P值均大于0.05),BMX-IN-1预处理8、12、18 h组细胞中TNF-α mRNA表达量显著降低(P＜0.05或P＜0.01).其中,BMX-IN-1预处理12 h组细胞中TNF-α mRNA表达量低.BMX-IN-1佳作用时间为12h.(3)BMX-IN-1对照组细胞中TNF-α和IL-1β mRNA表达量分别为0.97 ±0.13、0.98 ±0.06,与空白对照组的1.00相近(P值均大于0.05).LPS对照组细胞中TNF-α和IL-1 β mRNA表达量分别为2.97 ±0.17和3.07 ±0.60,BMX-IN-1+ LPS组细胞中TNF-α和IL-1β mRNA表达量分别为2.31 ±0.94和2.55 ±0.73,均显著高于空白对照组(P值均小于0.01).BMX-IN-1+ LPS组细胞中TNF-α和IL-1 β mRNA表达量明显低于LPS对照组(P值均小于0.05).BMX-IN-1对照组细胞中BMX和p38MAPK活性分别为0.95 ±0.19和0.98±0.18,均与空白对照组的1.00 ±0.14和1.00±0.22相近(P值均大于0.05);LPS对照组细胞中BMX和p38MAPK活性分别为1.98 ±0.33和2.05±0.34,均显著高于空白对照组(P值均小于0.01).BMX-IN-1+ LPS组细胞中BMX和p38MAPK活性分别为1.00 ±0.17和1.67 ±0.27,明显低于LPS对照组(P＜0.05或P＜0.01). 结论 BMX可促进LPS诱导小鼠单核巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1 β的产生,该作用可能与BMX活化p38MAPK途径有关.
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非受体型酪氨酸激酶Tec在内毒素/脂多糖诱导巨噬细胞促炎性细胞因子产生中的作用
目的 探讨非受体型酪氨酸激酶Tec在LPS诱导巨噬细胞产生TNF-α和IL-1β中的作用和相关机制. 方法 按随机数字表法将培养于6孔板的RAW264.7小鼠单核巨噬细胞分为4组,每组24孔.空白对照组细胞用含体积分数10％ FBS的DMEM培养液常规培养2 h;LFM-A13组细胞先用75 μmol/L的Tec特异性抑制剂LF M-A 13处理1h,再同前常规培养1 h;LPS组细胞先同前常规培养1h,再用0.1 μg/mL LPS刺激1 h;LPS+ LFM-A13组细胞先用75 μmol/L的LFM-A 13处理1h,再用0.1μg/mL LPS刺激1h.培养结束后,采用ELISA法测定细胞培养上清液中TNF-α和IL-1 β的含量,实时荧光定量RT-PCR法检测细胞内TNF-α和IL-1 β mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞内Tec、转化生长因子激活激酶1(TAK1)和p38 MAPK的活性.对数据行单因素方差分析、LSD检验. 结果 LFM-A13组与空白对照组细胞培养上清液中的TNF-α、IL-1 β含量相近(P值均大于0.05),2组细胞内TNF-α、IL-1 β mRNA表达量亦相近(P值均大于0.05).LPS组细胞培养上清液中的TNF-α、IL-1 β含量分别为(1 213±154)、(636±90) pg/mL,显著高于空白对照组的(330 ±44)、(211±31) pg/mL(P值均小于0.01);其细胞内TNF-α和IL-1β mRNA表达量分别为1.57±0.22、1.44 ±0.24,显著高于空白对照组的1.00 ±0.18、1.00 ±0.19(P值均小于0.01).LPS+ LFM-A13组细胞培养上清液中的TNF-α、IL-1β含量分别为(787±109)、(453±64) pg/mL,显著低于LPS组(P值均小于0.05);其细胞内TNF-α和IL-1β mRNA表达量分别为1.21 ±0.15、1.21 ±0.22,也显著低于LPS组(P值均小于0.05).LFM-A13组与空白对照组细胞内Tec、TAK1以及p38 MAPK活性相近(P值均大于0.05).LPS组细胞内Tec、TAK1、p38 MAPK活性分别为2.69 ±0.41、3.99 ±0.65、2.07 ±0.31,明显高于空白对照组的1.00 ±0.17、1.00 ±0.16、1.00 ±0.18(P值均小于0.01);LPS+ LFM-A13组细胞内Tec、TAK1和p38 MAPK活性分别为1.02 ±0.17、1.18 ±0.20、1.58 ±0.28,较LPS组显著下降(P ＜0.05或P＜0.01). 结论 Tec通过TAK1—p38 MAPK途径,促进了LPS诱导巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的产生和释放.
关键词： 脂多糖类 巨噬细胞 细胞因子类 p38丝裂原活化蛋白激酶类 TEC 转化生长因子激活激酶 -
严重烧伤大鼠肝脏p38丝裂原活化蛋白激酶对肿瘤坏死因子α表达的调控及其在肝损伤中的作用
目的观察大鼠严重烧伤后肝脏p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)对肿瘤坏死因子(TNF)α表达的调控及其在肝损伤中的作用.方法将健康成年雄性SD大鼠随机分为假伤组;烧伤+SB203580组:30%TBSAⅢ度烫伤(以下称烧伤)后15 min和12 h静脉注射p38MAPK的特异性抑制剂SB203580(10 mg/kg);烧伤对照组:同前致伤后给予等量等渗盐水,每组8只.测定3组大鼠伤后24 h血清天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性的变化,并分别采用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白印迹(Western blot)法检测肝脏TNF-α mRNA及p38MAPK、磷酸化p38MAPK的表达水平.结果烧伤对照组大鼠血清AST和ALT活性及肝脏TNF-α mRNA的表达水平均显著高于假伤组(P＜0.05或0.01);烧伤+SB203580组此3项指标均显著低于烧伤对照组(P＜0.05或0.01),但与假伤组比较差异无统计学意义(P＞0.05).3组大鼠肝脏p38MAPK表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05);其磷酸化p38MAPK表达水平之比--假伤组:烧伤对照组:烧伤+SB203580组为1.00:3.90:1.10,烧伤+SB203580组与假伤组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),与烧伤对照组比较明显偏低(P＜0.01).结论大鼠严重烧伤后,肝脏中活化的p38MAPK促进了TNF-α mRNA的表达,并参与了肝损伤的发生.
关键词： 烧伤 p38丝裂原活化蛋白激酶类 肿瘤坏死因子α 肝 信号转导
