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复元胶囊及其主要成分淫羊藿苷、三七皂苷R1治疗骨关节炎的分子机制研究
目的:从尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)系统研究复元胶囊含药血清及其主要成分淫羊藿苷、三七皂苷R1治疗骨关节炎的分子机制.方法:原代培养兔软骨细胞,TNF-α诱导软骨细胞损伤,分为7组:空白组、模型组(TNF-α 10 μg·L-1组)、盐酸氨基葡萄糖25 g· L-1组、20%复元胶囊含药血清组、淫羊藿苷12.5 mg·L-1组、三七皂苷R1 125 mg·L-1组、淫羊三七组(12.5,125 mg·L-1),RT-PCR检测各组uPA,NF-κB( P65) mRNA的含量,EMSA检测NF-κB( P65)与DNA结合的活性,Western检测IκBα水平.结果:复元胶囊含药血清及其主要成分淫羊藿苷、三七皂苷R1均可显著降低uPA,NF-κB mRNA 表达量,降低NF-κB (P65)与DNA结合的活性,升高IκBα水平,与TNF-α组比较,统计学有显著差异(P＜0.01),各给药组间无明显差异.结论:复元胶囊含药血清及其主要成分淫羊藿苷、三七皂苷R1可通过降低NF-κB( P65)的活性,升高IκBα水平,从而降低uPA的表达,保护软骨细胞免受炎症因子的损伤.
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复元胶囊对气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响
目的:探讨复元胶囊诱导气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的作用及其分子机制.方法:采用缺口末端标记(Terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nicked labeling,TUNEL)法检测VSMCs凋亡,计算VSMCs凋亡指数(SMAI)、透射电镜检测细胞形态学变化;应用免疫组织化学法检测bcl-2和bax蛋白表达.结果:与正常对照组比较,模型组VSMCs中的bcl-2蛋白表达明显增强(P<0.05),SMAI明显减少(P<0.01),bax蛋白表达无显著改变(P>0.05);与模型组组比较,复元胶囊组VSMCs的bcl-2蛋白表达显著减少(P<0.05),bcl-2/bax比值下降,SMAI增加(P<0.05).结论:复元胶囊促进了气虚血瘀证大鼠的VSMCs凋亡,可能机制是通过调节VSMCs的bcl-2/bax蛋白表达平衡.
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复元胶囊对气虚血瘀证患者的临床疗效评价
目的:探讨复元胶囊对气虚血瘀证患者症状、血液流变学及心功能的影响.方法:54例气虚血瘀证患者分为治疗组和对照组各27例,对照组应用西药常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用复元胶囊治疗,每次5粒,每日3次,疗程1个月.分别观察两组治疗前后症状、血液流变学及心功能指标.结果:治疗组在治疗后症状、血液流变学及心功能指标均较对照组有显著改善(P＜0.05或P＜0.01).结论:复元胶囊对气虚血瘀证患者症状、血液流变学及心功能有显著改善.
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HPLC法测定复元胶囊三七皂苷R1及淫羊藿苷的含量
目的 采用HPLC法检测复元胶囊中主要成分三七皂苷R1和淫羊藿苷的含量.方法 取3个不同批次复元胶囊各5粒,经溶解、醇提、萃取、过滤等处理后采用HPLC检测其含量,以地高辛为内标,获得药品和内标曲线下面积之比,按照标准曲线计算出三七皂苷R1及淫羊藿苷的含量.结果 计算出每粒复元胶囊中三七皂苷R1的含量为12.18 mg/g,淫羊藿苷的含量为54.65 mg/g.结论 本实验HPLC方法可行,能准确检测复元胶囊中三七皂苷R1及淫羊藿苷的含量.
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复元胶囊对大鼠膝骨关节炎软骨中ADAMTS-4、5的影响
目的：观察复元胶囊（ FYJN）对实验性大鼠膝骨关节炎软骨组织蛋白聚糖酶1、2的影响。方法60只雄性成年 SD大鼠随机分为正常组，模型组，抗骨增生胶囊组，复元胶囊低、中、高剂量组，每组10只。除正常组外，其余各组采用Hulth法建立骨关节炎动物模型。造模1 w后，各组给予相应药物灌胃，正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃。治疗4 w 后提取各组胫骨平台软骨组织，HE 染色关节软骨 Mankin 评分，免疫组化法和蛋白印迹法检测关节软骨中蛋白聚糖酶1、2的蛋白表达量，并采用RT-PCR法测定组织中蛋白聚糖酶1、2的mRNA表达量。结果复元胶囊组和抗骨增生胶囊组软骨Mankin’s评分明显低于模型组（P＜0.01），复元胶囊高剂量组软骨组织中蛋白聚糖酶1、2的表达明显低于抗骨增生胶囊组（ P＜0.05）。结论复元胶囊显著降低大鼠膝关节软骨中ADAMTS-4和ADAMTS-5的表达，提示复元胶囊可能通过抑制蛋白聚糖酶，减少蛋白多糖的降解达到对早期骨关节炎防治作用。
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复元胶囊对气虚血瘀证模型大鼠血液高凝状态的影响
目的 研究复元胶囊对气虚血瘀证大鼠的血液高凝状态的调节作用及其机制.方法 将16月龄SD大鼠随机分为复元胶囊低、中、高剂量组、芪参胶囊组、模型组及空白对照组.采用疲劳、饥饿、高脂饮食及寒湿等方法建立气虚血瘀证大鼠模型.分别灌胃给药4 w后测定大鼠血浆纤维蛋白原(Fg)、血小板P-选择素(P-sel)及D-二聚体(D-D)含量.结果 模型组Fg、P-sel和D-D的含量较空白对照组为高(P＜0.05).与模型组比较,复元胶囊低、中、高三组Fg、P-sel和D-D的含量均显著偏低(P＜0.05),且偏低程度高于芪参胶囊组(P＜0.05).复元胶囊中剂量和高剂量组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 气虚血瘀证大鼠存在凝血与纤溶系统异常,复元胶囊有调节气虚血瘀证凝血与纤溶功能紊乱的作用.
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复元胶囊对气虚血瘀证模型大鼠血栓前状态的影响
目的 探讨复元胶囊对气虚血瘀证模型大鼠血栓前状态的影响.方法 将60只16月龄SD大鼠随机分为空白组、模型组、芪参胶囊组、复元胶囊低、中、高剂量组.采用疲劳、饥饿、寒冷多因素方法复制大鼠气虚血瘀证模型.各药物组用灌胃方式给药4 w.药物治疗后采用ELISA测定血浆血管性血友病因子(vWF)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)的含量.结果 模型组vWF和PAI的含量明显高于空白组(P＜0.05),与模型组比较,复元胶囊各组vWF、PAI含量明显降低,且低于芪参胶囊组(P＜0.05)；模型组t-PA的含量明显低于空白组(P＜0.05),与模型组比较,复元胶囊各组t-PA的含量明显升高(P＜0.05),且高于芪参胶囊组(P＜0.05)；复元胶囊中剂量组与低、高剂量组比较,vWF、t-PA、PAI三者变化有统计学意义(P＜0.05).结论 复元胶囊有调节气虚血瘀证大鼠血栓前状态的作用.
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复元胶囊对大鼠膝骨关节炎软骨iNOS及血清PGE2、NO的影响
目的 观察复元胶囊(FYJN)对实验性大鼠膝骨关节炎软骨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及血清一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)的影响.方法 Hulth法建立骨关节炎模型,随机分成正常组、模型组、塞来昔布(CE)组、FYJN低、中、高剂量组,各组分别予相应药物灌胃12 w.HE染色并光镜观察股骨内侧髁软骨病理形态,免疫组化检测软骨中iNOS表达,硝酸基还原酶法及酶联免疫吸附法分别测定血清NO、PGE2含量.结果 FYJN低、中、高剂量组软骨iNOS及血清NO、PGE2均低于模型组(P<0.05,P<0.01,P<0.001).结论 FYJN呈剂量依赖关系降低骨关节炎软骨中iNOS表达及血清中NO、PGE2含量,对减轻关节炎症有一定的作用.
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复元胶囊治疗气虚血瘀证类风湿关节炎的机制
目的 研究复元胶囊及其与甲氨蝶呤(MTX)联用对气虚血瘀证类风湿关节炎(RA)的治疗机制.方法 用Ⅱ型胶原诱导大鼠RA模型后,采用疲劳、饥饿、高脂饮食及寒湿等方法建立气虚血瘀证模型大鼠,设空白对照组、模型组、复元胶囊组、MTX组、复元胶囊联用MTX组(联用组).各组以相应的药物灌胃,于8w后,用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α),放射免疫法检测血清白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)水平.结果 与模型组相比,复元胶囊组、MTX组及联用组大鼠关节肿胀明显减轻,血清TNF-α、IL-1B、IL-6均有所下降(P＜0.05),其中以联用组较优(P＜0.05).结论 复元胶囊联用MTX可明显改善气虚血瘀证RA大鼠的症状,其作用机制可能与抑制大鼠TNF-α、IL-1B、IL-6等炎症介质的表达有关,由此为复元胶囊治疗气血血瘀证RA大鼠提供了科学依据.
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复元胶囊对膝骨关节炎大鼠IL-1β、OPG和OPGL mRNA表达的影响
目的：观察复元胶囊对膝骨关节炎（OA）大鼠关节软骨中白细胞介素（IL）1β、骨保护素（OPG）及其配体（OPGL）的影响。方法60只雄性SD大鼠随机分为6组：①正常组10只，不给予任何处理；②模型组10只，Hulth法造模后用生理盐水10 ml/d灌胃；③抗骨增生胶囊组10只， Hulth法造模后每日给予抗骨增生胶囊灌胃；④复元胶囊高、中、低组各10只，Hulth 法造模后用不同浓度复元胶囊灌胃。于给药第12周处死大鼠，取各组大鼠膝关节内踝关节软骨标本，观察大体结构并分级；HE染色，观察其镜下结构；反转录-多聚酶链式反应（ RT-PCR）法检测膝关节软骨中 IL-1β、OPG及OPGL mRNA的表达含量。结果动物模型造模成功，HE染色评分中，复元胶囊高、中剂量组及抗骨增生胶囊组软骨退变程度较模型组明显减轻（P＜0.01），复元胶囊组高剂量组OPG mRNA的表达量显著高于模型组（P＜0.01），IL-1βmRNA及OPGL mRNA的表达显著低于模型组（P＜0.05），OPG与OPGL比率显著高于模型组（P＜0.01）和正常组（P＜0.01）。结论复元胶囊能够上调软骨中 OPG mRNA 的表达，下调 IL-1βmRNA及OPGL mRNA的表达，使OPG与OPGL的比率上升，表明对软骨退变及软骨下骨的破坏有一定的预防作用。
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复元胶囊对膝骨关节炎模型血清软骨寡聚基质蛋白的影响
目的 观察复元胶囊对实验性膝骨关节炎(OA)模型病理形态及血清中软骨寡聚基质蛋白(COMP)的影响.方法 72只雄性SD大鼠随机分成正常组、模型组、壮骨关节丸组、复元胶囊组,每组18只.除正常组外,其余各组采用Hulth法建立膝OA动物模型.造模后,壮骨关节丸组、复元胶囊组分别给予壮骨关节丸、复元胶囊灌胃,而正常组、模型组给予生理盐水.灌胃后4、8、12 w分别随机选取6只进行X线摄片取材.通过X线摄片、肉眼观察、Mankin评分以及电镜检测评价复元胶囊治疗OA疗效,酶联免疫吸附法检测血清中COMP水平.结果 复元胶囊组膝关节x线积分、Mankin评分在4、8、12 w三个时间点均显著低于模型组(P<0.01),复元胶囊组血清COMP水平也低于模型组(P<0.01).结论 复元胶囊能降低血清软骨代谢标志物COMP水平,延缓OA软骨退变过程.
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复元胶囊对老年气虚血瘀证免疫功能的调节作用
目的 观察复元胶囊对老年气虚血瘀证患者外周血T淋巴细胞亚群和Th1类细胞因子IFN-γ,Th2类细胞因子IL-4的影响.方法 45例老年气虚血瘀证患者随机分为治疗组(24例)和对照组(21例),另设健康非老年组(20例).治疗组给予复元胶囊、对照组给予芪参胶囊治疗,疗程60 d,检测用药前后T淋巴细胞亚群、血清IFN-γ、IL-4的水平,并与对照组进行比较.结果 复元胶囊能明显提高老年气虚血瘀证患者CD3+、CD4+、CD8+亚群及IFN-γ的水平,对CD4+/CD8+和IL-4的水平无明显影响.结论 复元胶囊能增强老年气虚血瘀证患者的细胞免疫功能,改善处于劣势的Th1细胞的免疫应答.
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复元胶囊对膝骨关节炎的疗效及机制
目的 观察复元胶囊治疗膝骨关节炎(KOA)的临床疗效及机制.方法 将60例辨证为肝肾不足、筋脉瘀滞证的KOA患者随机分为两组,治疗组予以复元胶囊口服,随机对照组予以仙灵骨葆胶囊口服.在治疗前后评定KOA严重性指数(ISOA)及中医症候积分,观察临床疗效和不良反应.治疗前后收集血清,采用酶联免疫吸附试验检测透明质酸(HA)的表达变化.结果 治疗组、对照组均可明显缓解疼痛,改善膝关节功能.治疗组总有效率90.00％,对照组总有效率86.67％；两组治疗前后ISOA积分、中医症候积分均显著下降(P＜0.05),组间无显著性差异(P＞0.05).治疗前治疗组、对照组血清HA水平较健康组明显增高(P＜0.05)；治疗后治疗组和对照组血清HA水平较治疗前明显降低(P＜0.05).治疗过程中,患者未出现严重不良反应.结论 复元胶囊能有效缓解肝肾不足、筋脉瘀滞证KOA患者症状,可能通过降低HA的表达起作用.
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复元胶囊对骨关节炎软骨细胞凋亡中JNK/Bax信号通路的影响
目的 探讨复元胶囊对实验性骨关节炎软骨细胞凋亡影响的作用机制.方法 体外培养人软骨肉瘤细胞(SW1353),给予白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)刺激,复元胶囊含药血清和c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal kinase,JNK)的特异抑制剂SP600125干预,随机分为正常组、模型组、抑制剂组、复元胶囊组、复元胶囊+抑制剂组,流式细胞仪分别检测细胞周期百分率和细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞信号因子磷酸化c-Jun氨基末端活化蛋白激酶(p-JNK)和Bax的蛋白表达.结果 IL-1β诱导SW1353后,模型组G1期的百分比增加,S期及G2期的百分比减少,细胞凋亡率显著增高(P＜0.01);抑制剂组、复元胶囊组和复元胶囊+抑制剂组G1期的百分比减少,S期及G2期的百分比增加,细胞凋亡率显著降低,p-JNK和Bax表达明显减少(P＜0.05或P＜0.01),其中以复元胶囊+抑制剂组的各项指标变化显著(与模型组比较,P＜0.01).结论 复元胶囊可抑制骨关节炎软骨细胞中p-JNK及下游信号因子Bax的活化和表达,抑制细胞凋亡并促进增殖,可用于防治骨关节炎.
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复元胶囊对大鼠膝骨关节炎软骨Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白多糖的影响
目的 观察复元胶囊对大鼠膝骨关节炎(OA)软骨Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白多糖的影响,探讨其保护关节软骨的作用机理.方法 采用Hulth法建立OA模型,随机分为6组:正常组、模型组、四环素组及复元胶囊低、中、高剂量组.各药物组分别给不同剂量药物灌胃每天1次,持续12周.免疫组化检测软骨Ⅰ、Ⅱ型胶原表达,甲苯胺蓝染色软骨蛋白多糖含量.结果 复元胶囊各组软骨Ⅱ型胶原及蛋白多糖显著高于模型组(P<0.01),而Ⅰ型胶原低于模型组(P<0.05).结论 复元胶囊能增加大鼠膝骨关节炎软骨中Ⅱ型胶原表达及蛋白多糖水平,同时降低Ⅰ型胶原表达,对维持正常胶原表型、保护关节软骨有一定的作用.
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复元胶囊对晚期膝骨关节炎大鼠软骨中Ⅱ型胶原及基质金属蛋白酶1和3的影响
目的 观察复元胶囊对实验性大鼠晚期膝骨关节炎软骨组织中基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-3及Ⅱ型胶原的影响,探讨其治疗骨关节炎的作用机制.方法 成年雄性SD大鼠60只,随机分为六组,每组10只.除正常组外,其余各组均采用Huhh法建立晚期膝骨关节炎模型.手术后第2周开始,抗骨增生胶囊组予抗骨增生胶囊557 mg·kg-1·d-1,复元胶囊低、中、高剂量组分别给予复元胶囊371.65、743.30、2 229.90 mg·kg-1·d-1,正常组和模型组给予等体积生理盐水,每日灌胃1次,持续12周.12周后评价各组大鼠关节肿胀情况,并取大鼠胫骨平台的软骨组织.按Pelletier-JP标准评价关节软骨大体情况,并通过HE染色进行Mankin's评分.采用免疫组织化学法和Western blot法检测各组关节软骨中MMP-1、MMP-3及Ⅱ型胶原的蛋白表达量.结果 与正常组相比,模型组大鼠关节肿胀评分、Pelletier-JP标准和Mankin's评分均升高(P＜ 0.05或P＜ 0.01),而各给药组关节肿胀评分、Pelletier-JP标准和Mankin's评分均低于模型组(P＜ 0.05或P＜ 0.01).复元胶囊中、高剂量组Mankin's评分低于抗骨增生胶囊组(P＜ 0.05或P＜0.01).与正常组相比,模型组软骨组织中MMP-1、MMP-3表达量明显升高,Ⅱ型胶原表达量明显降低(P＜0.01).各给药组MMP-1、MMP-3表达量低于模型组,Ⅱ型胶原表达量高于模型组(P＜0.05或P＜0.01).复元胶囊高剂量组MMP-1、MMP-3的表达量低于抗骨增生胶囊组和复元胶囊低、中剂量组,Ⅱ型胶原表达量高于抗骨增生胶囊组和复元胶囊低、中剂量组(P＜0.05或P＜0.01).结论 复元胶囊能通过抑制MMPs的表达,减少胶原的降解,达到对晚期骨关节炎的防治作用.
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复元胶囊对实验性大鼠骨关节炎软骨中TNF-α和VEGF的影响
目的 观察复元胶囊对实验性大鼠骨关节炎软骨中的TNF-α和VEGF的影响.方法 56只SD大鼠随机分为:正常对照组6只,生理盐水灌胃;模型对照组10只,造模后生理盐水灌胃;四环素组,复元胶囊低、中、高剂量组各10只,造模后分别用四环素、复元胶囊不同剂量灌胃.治疗10周后分别取各组胫骨平台关节软骨,采用HE染色进行Mankin's评分,免疫组织化学染色法测定关节软骨中的TNF-α和VEGF表达的阳性细胞数.结果 正常对照组HE染色Mankin's评分与实验组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).各组关节软骨切片TNF-α和VEGF免疫组化染色分析,正常对照组TNF-α和VEGF与实验组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 复元胶囊可能通过调控TNF-α和VEGF抑制炎症和血管增生,从而达到延缓关节软骨退行性改变的作用.
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复元胶囊抑制骨关节炎大鼠软骨及血清白细胞介素-6的实验研究
目的 观察复元胶囊对大鼠骨关节炎(OA)软骨及血清白细胞介素(IL-6)的影响,探讨其抗OA的作用机制.方法 Hulth法建立OA模型,随机分为模型组,复元胶囊高、中、低剂量组,同时设对照组.于治疗第4,8,12周取软骨及血清标本,大体观察、Mankin's评分、免疫组化测定软骨中IL-6表达、酶联免疫吸附法测定血清中IL-6水平,并将软骨及血清IL-6含量与Mankin's评分指数进行相关分析.结果 复元胶囊各组关节软骨Mankin's评分、软骨及血清中IL-6水平均低于模型组(P﹤0.01);复元胶囊各组Mankin's评分差异具有显著性(P﹤0.05);模型组及复元胶囊各组软骨及血清中IL-6水平第8周高于4周(P﹤0.01)、12周高于8周(P﹤0.05);软骨及血清中IL-6水平与Mankin's评分指数呈正相关,相关系数分别为r=0.98(P﹤0.01),r=0.96(P﹤0.01).结论 复元胶囊对大鼠OA软骨及血清中IL-6具有剂量依赖的抑制作用;软骨及血清中IL-6水平与关节病理改变的Mankin's评分指数呈正相关.
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复元胶囊对大鼠骨折转化生长因子-β1、胰岛素样生长因子-1、骨钙素、Ⅰ型胶原表达的影响
目的 探讨复元胶囊对糖尿病骨折大鼠血清中转化生长因子-β1(TGF-β1)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、骨钙素及Ⅰ型胶原表达水平的影响.方法 随机抽样法将48只SD雄性大鼠分为复元胶囊组(A组,n=24,高、中、低剂量亚组各8只)、胰岛素组(B组,n=8)、模型组(C组,n=8)和空白对照组(D组,n=8).腹腔内注射链脲佐菌素诱导糖尿病(D组除外),建立左胫骨上段斜型骨折模型后复位夹板外固定干预;A组根据高、中、低剂量(1.23、0.82、0.41 g/kg)予以复元胶囊灌胃给药,B组用6～8U胰岛素治疗,C、D组等量生理盐水局部注射.建模后1、3、5周检测各组大鼠血清中TGF-β1、IGF-1、骨钙素及Ⅰ型胶原表达情况;建模5周处死大鼠,检查其主要脏器有无病理改变.结果 C组大鼠各时间点血清中TGF-β1[(116.52±10.55)、(117.25±10.37)、(117.82±10.24) ng/L]、IGF-1[(3.16±0.42)、(3.18±0.44)、(3.21±0.41) ng/ml]、骨钙素[(3.03±0.91)、(4.06±0.92)、(12.05±2.91) U/ml]及Ⅰ型胶原[(5.32±1.15)、(5.36±1.18)、(14.34±2.15) pg/ml]表达水平均明显低于其他组大鼠(F=10.369、16.836、20.583、9.364、9.025、10.352、9.684、18.364、22.536、8.365、14.834、16.286,P=0.014、0.000、0.000、0.019、0.020、0.014、0.018、0.000、0.000,0.022、0.000、0.000);建模1周时,B组、A组3个亚组大鼠血清中各指标表达水平均略高于D组,但比较差异无统计学意义(P =0.752、0.694、0.633、0.645、0.160、0.153、0.120、0.134、0.853、0.805、0.820、0.822、0.909、0.884、0.857、0.870);建模后3、5周时,B组、A组高剂量组大鼠血清中各指标表达水平虽明显高于D组(P=0.005、0.003、0.000、0.000、0.021、0.024、0.017、0.018、0.000、0.000、0.007、0.007、0.000、0.000、0.013、0.014),但显著低于A组中、低剂量组大鼠(P =0.032、0.030、0.045、0.042、0.033、0.030、0.036、0.034、0.016、0.016、0.015、0.016、0.020、0.023、0.017、0.020、0.002、0.001、0.001、0.001、0.021、0.022、0.020、0.021、0.003、0.004、0.003、0.003、0.010、0.011、0.010、0.010);A组中、低剂量组大鼠各时间点血清中各指标表达水平比较,差异均无统计学意义(P =0.988、0.979、0.978、0.964、0.966、0.932、1.000、0.995、0.985、0.987、0.946、0.985).连续给药5周后,除A组高剂量组中1只大鼠存在肾脏近曲小管上皮细胞局部轻度水肿改变外,剩余大鼠重要脏器均未见异常病理形态改变.结论 复元胶囊能有效调节糖尿病骨折大鼠血清中TGF-β1、IGF-1、骨钙素及Ⅰ型胶原表达,对于其骨折断端愈合有利.
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复元胶囊含药血清促进骨关节炎软骨细胞合成Ⅱ型胶原、蛋白多糖的机制研究
目的 观察复元胶囊是否通过调节smad 3磷酸化水平促进骨关节炎软骨细胞合成Ⅱ型胶原(COL2A1)及蛋白多糖(ACAN).方法 体外培养人软骨瘤细胞株(SW1353),随机分为3组:空白组、白介素1 β(IL-1β)组、IL-1β+复元胶囊组.以适浓度15％复元胶囊含药血清进行实验干预.CCK8法观察细胞的生长情况;流式细胞术检测细胞周期;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞COL2A1、ACAN mRNA合成水平;Western blot检测细胞smad 3磷酸化水平.结果 IL-1β组的细胞生长曲线,细胞增殖率(25.50±0.63),COL2A1 (0.523±0.009)、ACAN(0.201±0.035)mRNA及磷酸化smad 3(p-smad 3)(1.026±0.003)蛋白表达水平均低于空白组(P＜0.05);IL-1β复元胶囊组的细胞生长曲线,细胞增殖率(37.55±0.71),COL2A1 (0.701±0.068)、ACAN(0.901±0.230)mRNA及p-smad 3(1.527±0.003)蛋白表达水平均高于IL-1 β组(P＜0.01).结论 复元胶囊可以通过上调smad 3磷酸化水平,促进骨关节炎软骨细胞COL2A1及ACAN的合成,起到保护软骨细胞的作用.
