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槐果碱治疗小鼠实验性结肠炎的机制研究
研究槐果碱对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠急性结肠炎的防治作用,探讨槐果碱对小鼠肠道组织中Toll样受体4(TLR4)/促分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)和蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响.采用2.5％ DSS饮用6d诱导小鼠急性结肠炎模型,实验前1天及实验全程中槐果碱组给予腹腔内注射槐果碱30 mg·kg-1·d-1,每日进行疾病活动指数(DAI)评分,HE染色观察小鼠结肠黏膜大体形态和组织病理学损伤情况;Real-time RT-PCR法检测各组小鼠肠黏膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β)及白介素-6(IL-6) mRNA表达情况;Western blot检测各组小鼠肠黏膜组织中TLR4/MAPKs及JAK2/STAT3信号通路中重要蛋白激酶P38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK),c-Jun氨基端激酶1/2(JNK1/2),细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2),JAK2及STAT3变化情况.结果显示,模型组小鼠体重,DAI,结肠长度及组织病理学变化较正常对照组差异有统计学意义(P＜0.05),槐果碱干预组上述指标则均较模型组明显改善(P＜0.05).模型组TNF-α,IL-1β,IL-6较正常组明显上升(P＜0.05),槐果碱干预后不同程度下调(P＜0.05).正常组中TLR4蛋白表达量少,P38,JNK1/2,JAK2,STAT3蛋白磷酸化水平低下,模型组中TLR4蛋白表达上调,P38,JNK1/2,JAK2,STAT3蛋白磷酸化水平升高,槐果碱干预组TLR4表达较模型组减少,P38,JNK1/2,JAK2,STAT3磷酸化水平较模型组明显下调.结果表明,槐果碱能抑制TLR4/MAPKs,JAK2/STAT3信号通路活化,减少肠道组织中促炎细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6表达,减轻炎性反应,从而有效防治实验性结肠炎.
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慢性ITP患者外周血T淋巴细胞JAK2/STAT3mRNA的表达及意义
目的:检测慢性特发性血小板减少性紫癜(chronic idiopathic thrombocytopenic purpura,CITP)患者外周血T细胞中JAK2/STAT3 mRNA信号转导通路的基因表达,探讨JAK2/STAT3 mRNA变化与CITP之间的相关性.方法:设立CITP患者组与健康对照组,用RT-PCR、琼脂糖电泳等方法检测CITP组及对照组外周血T细胞中JAK2/STAT3 mRNA基因的表达水平.结果:经PCR及RT-PCR实验证实,JAK2/STAT3 mRNA表达有清晰条带,熔解曲线峰值单一,CITP组JAK2 mRNA表达水平明显高于对照组(P＜0.0004);STAT3 mRNA表达水平也明显高于对照组(P＜0.0001);这表明CITP患者的JAK2/STAT3 mRNA表达水平明显升高.结论:CITP组中JAK2/STAT3 mRNA均有表达,且与对照组相比明显升高,其升高与患儿CITP发生有关.
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IL-33调控JAK/STAT通路对狼疮肾炎肾小管损伤的影响
目的 探讨白细胞介素33(IL-33)在狼疮性肾炎小鼠肾小管损伤中的作用及相关机制.方法 12周龄雌性MRL/lpr鼠作为狼疮性肾炎的模型小鼠,随机分为模型组、IL-33组和溶剂对照组,同龄雌性MRL/MP鼠作为正常对照组,每组各10只.IL-33组每次腹腔注射100μl含2μg重组鼠IL-33的磷酸盐缓冲液(PBS),每天一次,连续14d,对照组和模型组腹腔注射等量PBS液.14周龄时处死小鼠,分离血清检测肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)浓度,收集24 h尿液检测尿蛋白肌酐比值及尿蛋白定量,Western blot法检测肾组织E-钙黏素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及JAK/STAT通路信号蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)、磷酸化蛋白酪氨酸激酶2 (p-JAK2)、信号转导与转录活化因子1(STAT1)、p-STAT1蛋白的表达水平.结果 IL-33组小鼠的BUN、尿蛋白肌酐比值及尿蛋白水平均高于模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);IL-33组小鼠肾小管上皮细胞α-SMA表达高于模型组,其差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,IL-33组小鼠肾小管上皮细胞E-cadherin表达减少,p-JAK2、p-STAT1蛋白表达增加,差异均有统计学意义(均P＜0.05);与模型组比较,IL-33组JAK2、STAT1蛋白水平无明显变化,差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 IL-33可导致狼疮鼠肾小管间质病变,其机制可能与刺激JAK/STAT通路活化有关.
关键词： 狼疮性肾炎 肾小管间质病变 蛋白酪氨酸激酶2 信号转导与转录活化因子1 -
Pyk2在结直肠癌中作用机制的初步研究
目的：探讨富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2（Pyk2）在人类结直肠癌中的作用机制。方法构建有正义Pyk2 cDNA和反义Pyk2 cDNA的质粒pcDNA4．1／Zeocin稳定转染结直肠癌sw480细胞系，利用流式细胞技术（FCM ）检测转染组与对照组细胞在凋亡和细胞周期s期细胞分布的差异。结果转染正义Pyk2 cDNA质粒的sw480细胞凋亡水平明显高于对照组，s期细胞数显著减少；转染反义Pyk2质粒的sw480细胞凋亡水平明显低于对照组，s期细胞数显著增多。结论 Pyk2可能是通过提高结直肠癌细胞的凋亡水平，降低其增殖水平而发挥作用。
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蛋白酪氨酸激酶2对人大肠癌细胞生长和肺转移能力的影响
目的 观察富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2( Pyk2)对人大肠癌细胞生长和肺转移能力的影响.方法 利用人大肠癌细胞株SW480,通过正义及反义cDNA稳定转染技术,分别构建Pyk2高表达和低表达的细胞SW480-Pyk2+和SW480-Pyk2-,并以未转染质粒和转染空质粒的SW480细胞作为对照.分别建立裸鼠皮下种植瘤和肺转移模型.6周后,切取皮下种植瘤体并称重；切取肺转移标本,在显微镜下计数转移灶数目.结果 Western blot法证实Pyk2高表达、低表达及空质粒细胞构建成功；SW480-Pyk2+组(Mean Rank=6.19)皮下种植瘤质量明显低于SW480组( Mean Rank=18.69)和SW480-Vector组(Mean Rank=14.12),而SW480-Pyk2-组(Mean Rank=27.00)明显高于SW480组和SW480-vector组,差异有统计学意义(X2=20.646,P＜0.05)；SW480-Pyk2+组(Mean Rank=6.62)肺转移灶数目明显少于SW480组(Mean Rank=16.06)和SW480-vector组(Mean Rank=14.94),SW480-Pyk2-组( Mean Rank=28.38)肺转移灶数目明显多于SW480组和SW480-vector组,差异有统计学意义(X2=21.948,P＜0.05)；并且种植瘤质量和肺转移灶数与Pyk2的表达量均呈明显负相关(r=-0.776,-0.777,P＜0.05).结论 Pyk2在裸鼠体内能够抑制大肠癌细胞的生长和肺转移能力.
