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基于计算机辅助水解的中药大豆寡肽的ETA拮抗活性预测
中药寡肽是中药发挥药效的关键组分之一,系统地研究中药寡肽的组成及其药效是中药物质基础及作用机制研究的关键.该研究拟基于计算机辅助水解和分子对接等模拟技术,以中药大豆为研究载体,解析其降压寡肽成分,并预测其潜在的内皮素受体A(endothelin receptor A,ETA)拮抗活性.该文通过收集大豆中的储存蛋白序列,基于计算机辅助水解方法进行蛋白的模拟消化水解,并将水解获得的寡肽构建虚拟结构数据库.随后该研究构建了ETA肽类拮抗剂的药效团模型,包括1个疏水特征、1个负电中心、1个芳环特征和5个排除体积.同时,利用同源模建方法构建ETA的蛋白三维结构模型,并将其用于分子对接研究,采用一致性打分评价化合物的ETA拮抗活性.通过构建ETA肽类拮抗剂的药效团模型、同源模建的三维蛋白结构以及分子对接模型,共预测获得27条可能具有潜在ETA拮抗活性的寡肽分子.该文进一步分析关键氨基酸GLN165,并结合文献,说明其对拮抗剂活性的重要性.计算机辅助水解方法可以高效地对已知序列结构的中药蛋白进行模拟水解,结合分子模拟模型,能进一步辨识中药寡肽潜在的生物学活性.该研究为快速、高效开展中药来源的肽类物质的活性机制研究提供了方法学依据.
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内皮素-1-内皮素受体A通路在高血糖导致心肌损伤中的记忆效应
目的 研究内皮素-1-内皮素受体A通路在高血糖导致的心肌损伤中发挥的作用.方法 利用大鼠乳鼠原代心肌细胞构建高糖损伤模型.利用实时RT-PCR和细胞免疫荧光染色分别检测BNP在基因和蛋白水平的表达量.通过TMRM染色评价线粒体膜电位和氧化应激反应.通过免疫荧光染色测量心肌细胞面积,反映心肌细胞损伤状态.结果 高糖培养导致心肌细胞表面积增大,线粒体膜电位增加,BNP在基因水平和蛋白水平表达上调,同时导致ETA表达上调,且恢复低糖培养后心肌损伤和ETA上调均不能完全恢复,但ETA受体波生坦能够逆转高糖造成的心肌损伤.结论 高糖能够造成心肌细胞损伤,并产生代谢记忆效应,ETA在高糖刺激后的持续高表达可能是造成代谢记忆效应的重要原因.
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芥子气中毒早期肝组织ET-1及ETAR转录表达的研究
目的:探讨芥子气中毒早期肝组织内皮素-1(ET-1)、内皮素A型受体(ETAR)的变化和意义.方法:应用免疫组化及RT-PCR技术,观测大鼠芥子气中毒后肝组织ET的含量及ET-1,ETAR mRNA水平的变化,以及该变化与肝组织损伤的关系.结果:中毒后肝组织ET的含量先下降后增加,12 h达峰值;中毒后肝prepro ET-1 mRNA的表达在2～6 h低于对照组,12 h增加达峰值;ETAR mRNA的表达没有明显的变化.结论:ET-1及其受体ETAR在芥子气中毒后肝的病理生理过程中可能起着重要作用.
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蛛网膜下腔出血兔脑组织内皮素受体A表达的研究
目的 探讨蛛网膜下腔出血(SAH)后脑组织内皮素受体A(ETRA)的表达与延迟性神经功能障碍(DND)之间的关系.方法 将31只日本大耳白兔随机分组:SAH组15只,盐水对照组10只,穿刺对照组与正常对照组各3只,SAH组和盐水对照组再均分为制模后1 h、3 d、5 d、7 d、10 d共5个亚组,采用枕大池二次注血法制备兔SAH模型.按各时间点将兔进行灌注,处死后取其被血液浸泡的基底动脉中段脑干组织制成切片,进行苏木素一伊红(HE)染色及ETRA免疫组化染色;光镜下观察延髓组织病理学变化,采用阳性细胞计数法对ETRA进行半定量分析.结果 穿刺对照组、正常对照组兔脑组织中神经元细胞和胶质细胞胞质内均有少量ETRA表达[(10.6±3.9)个/视野,(10.0±2.8)个/视野];盐水对照组内有个别细胞表达ETRA,对各亚组间阳性细胞计数进行方差分析,结果显示差异无统计学意义[低(12.3±2.1)个/视野,高(13.3±2.6)个/视野,P>0.05];SAH组制模后1 h ETRA表达的阳性细胞计数有轻微升高C(20.1>3.5)个/视野],3 d表达强烈[(48.8±6.7)个/视野],5、7、10 d呈缓慢下降的趋势[分别为(23.1±2.9)、(22.5±4.2)、(19.1±2.8)个/视野],方差分析结果显示差异有统计学意义(P<0.05),且制模后各时间点ETRA阳性细胞数明显高于盐水对照组(P均<0.05).结论 SAH后兔脑组织ETRA呈高度表达;ETRA可能在DND的发病机制中起到重要的作用.
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内皮素受体B对培养鼠肝星状细胞收缩功能的影响
目的 观察内皮素受体B(ETB)激动后对培养鼠肝星状细胞收缩功能以及胞内钙(Ca2+)的影响.方法 分离培养大鼠HSC, 采用胶原晶格法观察ETA和ETB受体激动剂ET-1及选择性ETB受体协同剂IRI-1620对肝星状细胞收缩的影响.采用Fura-2/AM钙荧光指示剂测定HSC细胞内Ca2+浓度,并观察ETB对其影响.结果 选择性内皮素B受体协同剂IRL-1620在1 μmol/L浓度时即能明显抑制较低浓度的ET-1引起的肝星状细胞的收缩同时导致HSC细胞内Ca2+浓度的下降(P<0.05).结论 ETB被激动后可以抑制HSC的收缩,这种效应与ETB降低HSC细胞内Ca2+浓度有关.
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一种人内皮素受体B受体-配体结合检测体系的建立
为寻找ETBR特异性激动剂/拮抗剂,需建立一种灵敏度高、操作简单的受体-配体结合检测体系.从人肺腺癌细胞系A549中克隆人ETBR基因,将其连接至pTag-liteTM-SNAP质粒内,成功构建真核表达载体pTag-hteTM-SNAP-ETBR,并将其转染至CHO-K1细胞内,加入SNAP-tag荧光底物后,通过荧光显微镜检测发现SNAP-ETBR融合蛋白在细胞中有效表达,使得运用Tag-lite技术进行受体-配体结合检测并发现ETBR激动剂/拮抗剂得以实现,为后期研究奠定基础.
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环孢素A改善异丙肾上腺素所致心肌损害和纤维化可能由抑制内皮素通路所介导
目的:研究环孢素A(Cyclosporine A,CsA)对异丙肾上腺素(isoproterenol,Iso)诱导心肌损害和纤维化的改善,探讨内皮素通路在其过程中的作用.方法:SD大鼠给予Iso(2 mg·kg-1·d-1,s.c.)10 d,建立大鼠心肌损害和纤维化病变.CsA治疗组预先给予CsA(25 mg/kg,s.c.)一次.结果:Iso损害心肌,引起心功能下降,使左室心肌中羟脯氨酸(hydroxypmline,Hyp)含量增高,内皮素-1(ET-1)及受体(ETAR)、结缔组织生长因子(CT-GF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)HlRNA和蛋白表达上调.CsA明显改善心功能,降低Hyp含量,减轻升高的mRNA和蛋白表达.结论:CsA改善Isn引起的大鼠心功能损害和纤维化,与抑制内皮素通路相关.
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泛影葡胺对糖尿病肾病大鼠心肌细胞内皮素受体A表达的影响
目的:观察造影剂泛影葡胺对糖尿病肾病大鼠心肌细胞内皮素受体A (endothelin receptor A,ETAR)表达的影响.方法:应用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立SD大鼠糖尿病肾病模型.设对照组、模型组、泛影葡胺组, BQ123+泛影葡胺组,利用RT-PCR和western blot方法检测心肌组织ETAR表达的变化.结果:与对照组比较,各组糖尿病大鼠心肌ETAR表达上调,CM组上调尤为明显(P＜0.05),注射BQ123后,可见其表达下调.结论:有糖尿病肾病基础病史时, 泛影葡胺可引起心肌组织ETAR表达变化,从而影响心脏功能;预防性使用选择性ETAR拮抗剂BQ123,可下调ETAR蛋白表达,改善心脏功能.
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子痫前期患者内皮素受体A基因G-231A多态性的研究
目的:探讨内皮素受体A(EDNRA)G-231A基因多态性与子痫前期有无关联.方法:用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP),对成都地区220例子痫前期患者(其中轻度71例,重度149例)和270例健康对照组孕妇EDNRA基因G-231A多态性进行检测.结果:子痫前期组和正常孕妇组EDNRA基因G-23lA位点A等位基因频率分别为35.9%、31.3%,两组之间等位基因频率分布无显著差异(P＞0.05);重度子痫前期组与轻度子痫前期组比较,A等位基因频率分别为36.3%、35.2%,二者无.显著差异(P＞0.05).此外,子痫前期组和正常孕妇组不同基因携带者收缩压和舒张压水平无统计学差异(P＞0.05).结论:本研究未发现EDNRA基因G-231A多态性与子痫前期发病有关联.
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内皮素-1及其受体A在子宫肌瘤中的表达及其意义
目的 检测子宫肌瘤组织中内皮素-1(ET-1)及其受体A(ETA)的表达,探讨ET-1及ETA在子宫肌瘤的发生、发展中的作用.方法 应用免疫组织化学SABC法检测30例子宫肌瘤组织中ET-1及ETA的表达,并与邻近的正常子宫肌组织进行比较.结果 ET-1和ETA在子宫肌瘤组织和正常子宫肌组织中均有程度不同的表达.其阳性颗粒均定位于细胞浆中,其中ETA在子宫肌瘤组织中的表达以++、+++为主,占73.3%;在正常子宫肌组织中的表达以+以下为主,占66.7%,两者比较差异有显著性(P＜0.05).在子宫肌瘤组织中,ETA的表达在分泌期强于增生期,差异有显著性(P＜0.05);ET-1在子宫肌瘤组织中的阳性表达占83.3%,正常子宫肌组织中的阳性表达为73.3%,两者比较差异无显著性(P＞0.05).结论 (1)子宫肌瘤组织及正常子宫肌组织均具有分泌ET-1和ETA的功能.(2)ETA在子宫肌瘤细胞中呈高表达,提示ETA的高表达与子宫肌瘤的发生有关.(3)ETA在子宫肌瘤组织中分泌期高于增生期,提示孕激素可能促进ETA的合成.
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选择性内皮素受体A拮抗剂改善高血压大鼠脑白质病变
目的:观察选择性内皮素受体A(endothelin receptor A,ETRA)拮抗剂是否能够改善高血压大鼠脑白质病变的严重程度,并探讨其机制.方法:33只Sprague-Dawley 大鼠随机分为假手术(sham)组(n=9)、治疗(treatment)组(n=12)和溶剂对照(placebo)组(n=12),其中治疗组和溶剂对照组复制易卒中型肾血管性高血压改良的2VO(stroke-prone renovascular hypertensive rats-modified 2 vessel occlusion, RHRSP-modified 2VO)大鼠模型, 17~20周分别给予安倍生坦和安慰剂灌胃并每周监测收缩压,20周对大鼠进行Morris水迷宫实验检测认知功能, ELISA法定量分析各组大鼠皮层、胼胝体和尾壳核的内皮素1(endothelin-1,ET-1)的蛋白表达水平,组织病理学检测是否存在脑白质病变并评价严重程度,同时用免疫荧光法观察内皮素1与血管的关系.结果:与溶剂对照组比较,治疗组收缩压的差异不明显,逃避潜伏期缩短(P<0.05),穿越平台次数增多(P<0.05),胼胝体和尾壳核的ET-1蛋白表达水平均下降(P<0.05),脑白质病变严重程度降低(P<0.05),ET-1与血管结合程度降低.结论:选择性拮抗血管平滑肌上的ETRA能够减轻高血压大鼠的脑白质损伤,并改善认知功能.
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内皮素受体A表达与鼻咽癌预后的关系
背景与目的:内皮素受体A(endothelin A receptor,ETAR)激活参与肿瘤的生长及转移,包括细胞增殖、细胞凋亡、血管生成与肿瘤转移等作用.本研究探讨鼻咽癌组织中ETAR的表达与临床特征及预后的关系.方法:采用ETAR单克隆抗体对153例鼻咽癌组织中ETAR的表达进行免疫组化SABC技术检测.结果:鼻咽癌ETAR的阳性率为73.9%.ETAR的表达与性别、年龄、T分期、N分期及临床TNM分期无明显相关性(P＞0.05).ETAR阴性组和阳性组的3年总生存率分别为87.5%和73.2%(P=0.029),3年无瘤生存率分别为80.0%和57.3%(P=0.009),3年无局部区域复发生存率分别为86.9%和80.2%(P=0.228),3年无远处转移生存率分别为89.9%和70.4%(P=0.012).Cox模型多因素分析显示ETAR表达、性别、年龄、T分期和N分期是影响总生存、无瘤生存及远处转移的独立预后因素.结论:ETAR的表达与鼻咽癌患者的远处转移风险有关,其高表达提示患者预后不良.
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低温低氧对新生鼠肺组织内皮素受体表达的影响
目的:研究低温低氧因素对新生鼠肺组织内皮素受体A mRNA(endothelin receptor A mRNA,ETA mRNA)和内皮素受体B mRNA(endothelin receptor B mRNA,ETB mRNA)表达的影响,并探讨两种受体在肺出血发生过程中的作用.方法:日龄5~7 d的Wistar新生鼠,随机分为正常组(C)、低氧组(H1)、低温组(H2)和低温低氧组(H3).C组置室温空气中,H1组给予低氧干预(FiO25%~6%)6 h,H2组置低温环境中[温度(10±1) ℃]6 h,H3组置低温低氧环境中6 h(干预条件同上).各组开胸取肺,观察大体改变,切片HE染色观察病理学改变,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法检测肺组织中ETA mRNA、ETB mRNA的表达情况.结果:与C组比较,ETA mRNA在H1组、H2组、H3组表达增强(H1、H2组P<0.05,H3组P<0.01);ETB mRNA在H1组、H2组、H3组表达也增强(与C组比较,H1、H3组P<0.01,H2组P<0.05).结论:在低温和(或)低氧下,ETA通过表达增强加重了内皮素-1(ET-1)的损伤作用,而ETB通过表达增强减轻ET-1的损伤作用,两者分别通过损伤和保护机制参与了肺出血的发生.
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EDNRA基因rs5335多态性与aSAH后迟发性脑血管痉挛的关联性研究
目的 探讨动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aSAH)后迟发性脑血管痉挛(DCVS)与内皮素受体 A(EDNRA)基因rs5335多态性的关系.方法 选择2015年1月~2017年1月在宝鸡市中心医院神经外科治疗的133例 aSAH 患者纳入研究,按照是否并发DCVS分为DCVS组78例和对照组55例,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测EDNRA基因 rs5335位点多态性.结果 DCVS组和对照组基因型分布均符合 Hardy-Weinberg遗传平衡(χ2=0.295,P=0.863;χ2=0.652,P=0.722).在等位基因模型和显性基因模型下,DCVS组和对照组比较,rs5335 位点等位基因、基因型分布频率差异均具有统计学意义(χ2=4.213,P=0.040;χ2=4.790,P=0.029),隐性基因模型下两组基因型差异无统计学意义(χ2=1.299,P=0.254).多因素 Logistic回归法分析结果显示对于 aSAH患者,携带等位基因 C可降低 DCVS发生风险(OR=0.572,95% CI 0.401~0.872,P=0.021).结论 EDNRA基因 rs5335位点多态性与 aSAH 患者发生 DCVS相关.
关键词： 内皮素受体A 动脉瘤性蛛网膜下腔出血 迟发性脑血管痉挛 基因多态性 -
降钙素基因相关肽与内皮素受体A在兔实验性蛛网膜下腔出血后基底动脉的表达
目的 探讨蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管内皮细胞降钙素基因相关肽(CGRP)及内皮素受体A(ETRA)的表达与迟发性脑血管痉挛(DCVS)之间的关系.方法 日本大耳白家兔60只,随机分为SAH模型组25只,盐水组25只,穿刺组5只,正常组5只.采用枕大池二次注血法制作SAH模型,灌注处死后取基底动脉制成切片.进行CGRP及ETRA的免疫组化和HE染色,观察CGRP与ETRA的免疫表达和病理结构变化,并用图像分析方法 测量血管周长,使用方差分析进行统计学检验.结果 基底动脉周长在SAH后均发生明显缩窄,其中在5 d时缩小强烈.CGRP与ETRA免疫阳性标记颗粒在SAH组的基底动脉组织中均有表达,其动态变化规律为CGRP的表达在1 h时明显,在3、5d依次表达减少,5d达到低点,7 d后开始逐渐升高,10d时表达相对比较明显,但未能达到正常水平,CGRP在穿刺组、正常对照组和盐水组也有散在不规则表达.在正常组、穿刺组和盐水组的基底动脉内ETRA有表达;SAH组基底动脉内ETRA在3d组和5d组表现为高表达,以3d组为强,而其中血管内皮细胞表达强烈,平滑肌也有表达,10 d组的表达仍然较强.结论 在SAH后脑血管内皮细胞CGRP和ETRA的表达呈现明显的动态改变,但二者的变化趋势并不同步;CGRP和ETRA在DCVS的发生发展中起重要的作用.
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内皮素-1及其受体在心肌梗死心脏组织中分布的研究
目的内皮素-1(ET-1)在心肌梗死的发生发展和病理性重构中发挥重要的病理生理作用.但是,ET-1及其受体A(ETA)在正常及心梗后心脏各房室中的分布情况目前还不完全清楚.本研究旨在探索这一问题.方法以成年西双版纳微型猪为实验对象,实验组(n=6)开胸并结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,对照组(n=5)模拟开胸手术过程,但不结扎冠状动脉.4周后取出心脏,分部位用免疫组化及图像分析检测心肌组织ET-1和ETA水平.结果1.对照组ET-1和ETA以右房分布多,左室分布少(P＜0.0001);2.心肌梗死后受累左室ET-1明显增多,ETA显著上调(P＜0.0001);3.在梗死中心区的血管内皮细胞、成纤维细胞、浆细胞和淋巴细胞检测出ET-1.结论ET-1在心肌梗死后的心脏重构、血管增生、炎症反应、组织修复及疤痕形过程中可能发挥重要的作用.
