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4株乳腺癌细胞中内皮素受体B基因的甲基化状态及对MCF-7细胞增殖的影响
目的 探讨内皮素受体B(EDNRB)基因在4株乳腺癌细胞中的表达、甲基化状态以及恢复EDNRB表达对MCF-7细胞增殖的影响.方法 采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)和亚硫酸盐测序法(BSP)分析4株乳腺癌细胞中EDNRB的甲基化状态;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测EDNRB mRNA的表达水平;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验检测EDNRB表达恢复对MCF-7细胞增殖的影响.结果 EDNRB在乳腺癌细胞MCF-7和ZR-75-1中表达缺失,并呈高甲基化状态;而在EDNRB表达高的MDA-MB-231细胞中其启动子呈低甲基化,表明乳腺癌细胞中EDNRB基因启动子甲基化状态与其表达成负相关.5-氮杂胞苷(5-Aza-CR)能够反转EDNRB基因的表达,EDNRB表达恢复后MCF-7细胞的增殖受到抑制.结论 EDNRB基因启动子区CpG岛频繁甲基化可能在乳腺癌发生发展中发挥重要作用,EDNRB有望成为乳腺癌早期诊断的新的分子标志物.
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内皮素受体B的基因多态性与COPD的相关性研究
目的 探讨内皮素受体B(endothelin B receotor,EDNRB)基因的第4外显子-30G/A处单核苷酸多态性与慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)易感性之间关系.方法 采用PCR-RFLP技术,检测并分析EDNRB基因-30G/A(L277L)单核苷酸多态性位点在COPD组和健康对照组中的基因型频率、等位基因频率,同时分析该突变位点是否与COPD患者肺功能的下降程度相关.结果 研究发现EDNRB基因-30G/A处基因型频率在COPD组和对照组之间的分布存在统计学差异(P＜0.05),但等位基因频率的分布在两组之间无统计学差异存在(P＞0.05).此外,COPD患者组中AA基因型组的大呼气中段流速值(maximal mid-expiratory flow,MMEF)(0.51±0.44)明显小于GG基因型组(1.49±1.70),且三组之间的差异存在统计学意义(P＜0.05).结论 EDNRB-30G＞A位点处的基因多态性可能与COPD的易感性相关,同时AA基因型与较低的MMEF值相关.
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内皮素受体B对培养鼠肝星状细胞收缩功能的影响
目的 观察内皮素受体B(ETB)激动后对培养鼠肝星状细胞收缩功能以及胞内钙(Ca2+)的影响.方法 分离培养大鼠HSC, 采用胶原晶格法观察ETA和ETB受体激动剂ET-1及选择性ETB受体协同剂IRI-1620对肝星状细胞收缩的影响.采用Fura-2/AM钙荧光指示剂测定HSC细胞内Ca2+浓度,并观察ETB对其影响.结果 选择性内皮素B受体协同剂IRL-1620在1 μmol/L浓度时即能明显抑制较低浓度的ET-1引起的肝星状细胞的收缩同时导致HSC细胞内Ca2+浓度的下降(P<0.05).结论 ETB被激动后可以抑制HSC的收缩,这种效应与ETB降低HSC细胞内Ca2+浓度有关.
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内皮素家族及其受体与恶性黑素瘤
内皮素受体B作为一种重要的内皮素家族受体,在恶性黑素瘤中与其配体内皮素-1和内皮素-3结合而被激活.目前研究表明,在绝大多数的恶性黑素瘤中内皮素受体B的表达上调并且其激活介导的一系列生物学效应在恶性黑素瘤的发生、发展和转移等过程中起重要的作用,内皮素受体B已被公认为是一种重要的恶性黑素瘤进展标志物.对内皮素受体B介导的信号转导路径下游具体分子机制的深入理解,将为进一步研究恶性黑素瘤的发病机制、治疗带来新的契机和希望.
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一种人内皮素受体B受体-配体结合检测体系的建立
为寻找ETBR特异性激动剂/拮抗剂,需建立一种灵敏度高、操作简单的受体-配体结合检测体系.从人肺腺癌细胞系A549中克隆人ETBR基因,将其连接至pTag-liteTM-SNAP质粒内,成功构建真核表达载体pTag-hteTM-SNAP-ETBR,并将其转染至CHO-K1细胞内,加入SNAP-tag荧光底物后,通过荧光显微镜检测发现SNAP-ETBR融合蛋白在细胞中有效表达,使得运用Tag-lite技术进行受体-配体结合检测并发现ETBR激动剂/拮抗剂得以实现,为后期研究奠定基础.
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脑胶质瘤组织中EDNRB基因甲基化状态及其蛋白表达的意义
目的探讨人脑胶质组织中EDNRB基因的甲基化状态及其蛋白表达的关系。方法采用巢式PCR、亚硫酸氢盐测序PCR( BSP)及免疫组织化学技术方法，检测50例脑胶质瘤组织标本中EDNRB基因启动子区甲基化状态，分析其甲基化水平、蛋白表达和临床资料之间的相关性。结果脑胶质瘤组织中 EDNRB 基因启动子区甲基化率为38%(19/50)，其中低级别组(Ⅰ级~Ⅱ级)中EDNRB基因甲基化率为26.5%(9/34)，高级别组(Ⅲ级~Ⅳ级)EDNRB基因甲基化率为62.5%(10/16)，两组比较差异有统计学意义(P<0．05)。而其中甲基化蛋白表达阳性率为36．8%(7/19)，未甲基化的蛋白表达阳性率为71%(22/31)。结论组织中的EDNRB基因启动子区CpG岛高甲基化与胶质瘤的发病有关，与胶质瘤的病理级别关系密切，而与患者年龄、性别、肿瘤分型无关；基因甲基化率抑制其蛋白表达。
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内皮素-3对A375人类恶性黑素瘤细胞株骨桥蛋白基因表达的影响
目的 研究内皮素-3(ET-3)对A375人类恶性黑素瘤细胞株骨桥蛋白(OPN)基因表达的影响.方法 体外培养A375细胞株,分别设立对照组,ET-3不同浓度(1、10、100 nmol/L)实验组和ET-3同一浓度(100 nmol/L)不同时间(6、12、18、24、30、36 h)实验组.采用RT-PCR和Western blot结合吸光度分析技术检测骨桥蛋白基因表达情况.结果 不同浓度的ET-3能显著上调A375细胞株骨桥蛋白基因表达,与对照组比较差异有统计学意义,并且这种上调效应呈剂量依赖性,不同浓度干预组组间比较差异有统计学意义.在100 nmol/L ET-3浓度条件下,随着培养时间的延长,OPN的表达逐渐增加,24 h达到高峰,随后缓慢下降,RT-PCR结果 吸光度分析显示各时间段实验组与对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.05),6、12、18、24 h实验组组间比较除6 h和12 h组间差异无统计学意义外,其余各组组间差异均有统计学意义,24、30、36 h实验组组间比较差异有统计学意义.Western blot吸光度分析显示各时间段实验组与对照组比较差异有统计学意义,6、12、18、24 h实验组组间以及24、30、36 h实验组组问比较差异有统计学意义.结论 ET-3能时间和剂量依赖性地上调A375细胞株骨桥蛋白基因的表达.
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兔症状性脑血管痉挛期基底动脉ETRA,ETRB和eNOS基因表达的变化
目的：：通过检测兔症状性脑血管痉挛模型基底动脉内皮素受体(ETRA,ETRB)和 eNOS mRNA的表达及其变化,探讨ETRA,ETRB和 eNOS在症状性脑血管痉挛(DCVS)引发脑血管损伤机制中的作用。方法：采用 Endo 法建立兔 DCVS模型,将双侧颈总动脉结扎2周后存活的32只兔随机分为两组,即枕大池注生理盐水组(C 组,8只)和注自体血组(D组,24只),后者以枕大池注自体血后观察的时间点分为3个亚组,即枕大池注自体血后第4天组(D4组)、第7天组(D7组)、第14天组(D14组),各亚组 8只。评估各组神经功能、基底动脉痉挛程度及形态学变化,采用 RT-PCR 法测基底动脉中 ETRA,ETRB 和eNOS mRNA表达变化。结果：(1)神经功能评估、基底动脉痉挛的形态学变化及痉挛程度均较好的拟合 DCVS 的发生和变化。(2)C组兔脑基底动脉可见 ETRA,ETRB和 eNOS mRNA表达；与C组比较,ETRA mRNA在 D4组、D7组、D14组均有升高(P>0.05)；与C组比较,ETRB mRNA在D4组即有升高(P<0.05),D7组达高峰(P<0.01)；与C组比较,D7组 eNOS mRNA的表达减少更为明显(P<0.05)。结论：本实验建立的兔DCVS模型能较满意地模拟临床 SAH 后脑基底动脉的病理变化,兔基底动脉血管壁 ETRA,ETRB,eNOS mRNA表达的变化及其演变时程与痉挛血管病理改变程度密切相关。
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低温低氧对新生鼠肺组织内皮素受体表达的影响
目的:研究低温低氧因素对新生鼠肺组织内皮素受体A mRNA(endothelin receptor A mRNA,ETA mRNA)和内皮素受体B mRNA(endothelin receptor B mRNA,ETB mRNA)表达的影响,并探讨两种受体在肺出血发生过程中的作用.方法:日龄5~7 d的Wistar新生鼠,随机分为正常组(C)、低氧组(H1)、低温组(H2)和低温低氧组(H3).C组置室温空气中,H1组给予低氧干预(FiO25%~6%)6 h,H2组置低温环境中[温度(10±1) ℃]6 h,H3组置低温低氧环境中6 h(干预条件同上).各组开胸取肺,观察大体改变,切片HE染色观察病理学改变,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法检测肺组织中ETA mRNA、ETB mRNA的表达情况.结果:与C组比较,ETA mRNA在H1组、H2组、H3组表达增强(H1、H2组P<0.05,H3组P<0.01);ETB mRNA在H1组、H2组、H3组表达也增强(与C组比较,H1、H3组P<0.01,H2组P<0.05).结论:在低温和(或)低氧下,ETA通过表达增强加重了内皮素-1(ET-1)的损伤作用,而ETB通过表达增强减轻ET-1的损伤作用,两者分别通过损伤和保护机制参与了肺出血的发生.
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先天性巨结肠症EDN-3及EDNRB基因结构的PCR-SSCP分析
目的检测中国散发先天性巨结肠症是否有EDNRB基因和EDN-3基因突变,以探讨EDNRB及EDN-3与HD发生的关系.方法 34例中国散发先天性巨结肠症.提取手术组织标本基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增EDNRB基因第3、4、6外显子和EDN-3基因第1、2外显子,单链构象多态(SSCP)分析上述外显子是否有突变.结果 13例短段型先天性巨结肠症中,2例有EDNRB基因突变,1例有EDN-3基因突变.普通型及长段型未见EDNRB基因和EDN-3基因突变.结论中国散发先天性巨结肠症短段型有EDNRB基因和EDN-3基因突变,提示EDNRB基因、EDN-3基因与先天性巨结肠症的发生有关.
