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急性髓系白血病中医证型与ID4基因启动子区甲基化相关性研究
目的 研究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者骨髓细胞中ID4基因启动子区甲基化状态与中医证型的关系,探讨ID4基因甲基化与AML发生、发展的关系.方法 选取35例2010年2-12月山东中医药大学附属医院血液科住院或门诊AML患者作为试验组,另选取10名山东中医药大学附属医院健康体检中心体检健康者作为对照组,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MS-PCR)检测两组ID4基因启动子区甲基化状态并进行组间及中医证型间比较,分析中医证型与基因启动子区甲基化相关性.结果 AML患者ID4基因启动子区甲基化为27例(77.1％),与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).各证型患者ID4基因启动子区甲基化阳性率由低到高依次为气阴两虚证＜瘀血痰结证＜毒热炽盛证,差异均有统计学意义(P＜0.05).ID4基因启动子区甲基化阳性患者外周血白细胞数、骨髓原始细胞比例高于阴性患者,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 毒热炽盛证、瘀血痰结证患者更易出现ID4基因甲基化,ID4基因启动子区甲基化阳性表达从分子水平验证了AML初期中医邪实内存的本质,也一定程度上反映了AML恶性程度.
关键词： 急性髓系白血病 ID4基因 DNA甲基化 中医分型 甲基化特异性聚合酶链反应 -
肺癌患者PTEN基因启动子高甲基化的检测
目的 探讨肺癌患者组织、外周血浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)启动子异常基因化状况及其在肺癌诊断中的价值.方法 用甲基化特异性PCR方法检测组织、血浆及BALF中的PTEN基因启动子区CpG岛甲基化.结果 45例肺癌患者中,PTEN基因启动子异常甲基化率组织为26.67%(12/45)、血浆为15.56%(7/45),BALF为22.22%(10/45);而非肺癌组织、正常对照血浆、非肺癌患者BALF中未检出甲基化;血浆、BALF中甲基化改变与肿瘤组织甲基化状况显著相关(P<0.01).结论 血浆、BALF中PTEN基因异常甲基化改变的检测在肺癌的早期特异诊断等方面有一定的价值.
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4株乳腺癌细胞中内皮素受体B基因的甲基化状态及对MCF-7细胞增殖的影响
目的 探讨内皮素受体B(EDNRB)基因在4株乳腺癌细胞中的表达、甲基化状态以及恢复EDNRB表达对MCF-7细胞增殖的影响.方法 采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)和亚硫酸盐测序法(BSP)分析4株乳腺癌细胞中EDNRB的甲基化状态;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测EDNRB mRNA的表达水平;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验检测EDNRB表达恢复对MCF-7细胞增殖的影响.结果 EDNRB在乳腺癌细胞MCF-7和ZR-75-1中表达缺失,并呈高甲基化状态;而在EDNRB表达高的MDA-MB-231细胞中其启动子呈低甲基化,表明乳腺癌细胞中EDNRB基因启动子甲基化状态与其表达成负相关.5-氮杂胞苷(5-Aza-CR)能够反转EDNRB基因的表达,EDNRB表达恢复后MCF-7细胞的增殖受到抑制.结论 EDNRB基因启动子区CpG岛频繁甲基化可能在乳腺癌发生发展中发挥重要作用,EDNRB有望成为乳腺癌早期诊断的新的分子标志物.
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LRP15基因启动子区甲基化与其表达的关系
为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(TSA)诱导CpG岛去甲基化及组蛋白乙酰化,观察启动子区CpG岛甲基化与基因表达的关系.结果显示:白血病细胞系K562中LRP15基因启动子区呈高甲基化状态,并抑制了该基因的表达.单独应用或联合TSA应用CdR均可去除该基因启动子区的高甲基化状态,并诱导该基因的表达.这表明LRP15基因的表达受到启动子区甲基化的调控;该基因在K562细胞系中不表达与其启动子区高甲基化及组蛋白去乙酰化密切相关.结论:甲基转移酶抑制剂与去乙酰化酶抑制剂在白血病治疗中可能具有一定的价值.
关键词： LRp15基因 启动子 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应 -
CDH11基因在肾细胞癌中的甲基化状态及其临床意义研究
目的：检测CDH11基因启动子在肾癌中的甲基化情况，并分析甲基化与临床病理特征的关系。方法通过甲基化特异性PCR（MSP）检测CDH11基因在5株肾细胞癌细胞系、1株正常肾细胞系、46例肾细胞癌组织、23例癌旁肾组织，以及10例非肾实质肿瘤正常肾组织中的甲基化状态。将甲基化情况与患者临床资料联系，进行统计学分析。结果 CDH11在5株肾癌细胞系中，有3株出现甲基化，甲基化率为60%；在人正常肾细胞系中未检测到甲基化。CDH11在肾癌组织中的甲基化率为45.7%（21/46），显著高于癌旁肾组织（26.1%，6/23）及非肾实质肿瘤正常肾组织（0，0/10），差异具有统计学意义（P＜0.05）。肾细胞癌各分期间及各分级间，癌组织中CDH11基因甲基化检出率无统计学意义（P＞0.05）；左侧肾癌与右侧肾癌相比，癌组织 CDH11基因甲基化率差异无统计学意义（P＞0.05）；男性肾癌患者与女性肾癌患者相比，肾癌组织中CDH1基因甲基化率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论肾细胞癌组织中CDH11基因甲基化率显著高于癌旁正常肾组织及非肾实质肿瘤正常肾组织，且癌组织中 CDH11基因甲基化率与临床病理资料如肿瘤分期及分级无显著相关性，提示CDH11基因甲基化是肾细胞癌发生中的早期频发事件，可能是肾细胞癌独特的基因甲基化谱成员之一，并在肾细胞癌的早期诊断上发挥作用。
关键词： 癌 肾细胞 甲基化 CDH11 甲基化特异性聚合酶链反应 -
p16基因高甲基化在胃癌发展中的作用
目的:通过检测胃癌、癌前病变和正常对照组中p16基因启动子区CpG岛甲基化水平及其表达,并结合临床病理资料,分析他们在胃癌发生、发展中的作用.方法:用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测41例胃癌组织、40例癌前病变组织和38例正常对照组织中p16基因启动子5'CpG岛甲基化;应用免疫组化检测基因的蛋白表达.结果:胃癌组织中p16基因甲基化阳性率为56.1%(23/41),癌前病变组织中为17.5%(7/40),而正常对照组织中为2.6%(1/38),前组与后两组之间的差异有显著性(P＜0.05).胃癌组织中p16基因表达阳性率为51.2%,癌前病变组织中为90.0%,正常对照组织中为100.0%,前组与后两组之间的差异有显著性(P＜0.05).低分化型胃癌组织中的p16基因甲基化阳性率明显高于高分化型(81.3% vs 40.0%,P＜0.05).有淋巴结转移的胃癌组织中,p16基因甲基化阳性率与无转移组的差异有显著性(81.0%vs 30.0%,P＜0.05).浸润深达浆膜层的胃癌组织中,甲基化阳性率与未达浆膜层组无统计学差异(60.0% vs 52.4%,P＞0.05).胃癌组织中p16基因甲基化阳性组的蛋白表达阳性率显著低于甲基化阴性组(26.1% vs 83.3%,P＜0.01).结论:胃癌组织中存在有p16基因启动子5℃pG岛高甲基化,并导致其基因表达率显著低于正常对照及癌前病变组织.p16基因的高甲基化与胃癌分化程度、淋巴结转移相关.p16基因甲基化的发生,从正常、癌前病变到胃癌有逐渐增加的趋势,提示其基因CpG岛高甲基化有可能作为诊断早期胃癌的一项较为敏感的指标.
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胃癌组织RASSF1基因启动子区甲基化的意义
目的:探讨抑癌基因RASSF1A启动子在胃癌组织及胃良性病变中甲基化的发生情况及与临床特征的关系.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSPCR)方法检测32例胃癌组织及32例相应的癌旁组织,以及46例胃良性病变中RASSF1A基因甲基化发生情况.结果:在32例胃癌DNA标本中,RASSF1A基因甲基化发生率为62.5%(20/32).而在32例癌旁组织中,只有1例存在甲基化,占3.1%(1/32),二者之间比较差异有统计学意义(P＜0.05).在胃良性病变,浅表性胃炎和萎缩性胃炎中甲基化发生频率分别为3.3%和37.5%.RASSF1A基因甲基化发生率与胃癌分化程度、肿瘤大小及淋巴结转移之间无显著相关性.结论:RASSF1A基因启动子区甲基化在胃癌的发生发展中起重要作用.
关键词： 胃癌 RASSF1A 抑癌基因 甲基化特异性聚合酶链反应 -
caveolin-1、Dnmt1基因与胃癌发生发展的关系及其临床意义
目的: 研究正常胃黏膜及胃癌组织中c a v e o l i n-1、Dnmt1蛋白的表达, 并探讨caveolin-1、Dnmt1基因与胃癌发生发展的关系及其临床意义.方法: 采取甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR, MSP)检测不同分化程度的60例胃癌组织(其中包括新鲜组织50例、石蜡包埋组织10例)和14例正常胃组织中caveolin-1基因启动子区域甲基化状态;同时用SP免疫组织化学法、原位杂交法检测caveolin-1蛋白、Dnmt1蛋白及mRNA的表达.结果: 14例正常胃组织中, 未检测到caveolin-1基因甲基化;在60例胃癌组织中, 检测到44例胃癌组织中存在甲基化, 甲基化发生率为73.33%, 两组间差异具有统计学意义( P<0.005). caveolin-1基因甲基化的发生与患者年龄有关. 60例胃癌标本中, caveolin-1蛋白阳性表达率仅为30%(18/60), Dnmt1蛋白阳性表达率为63.3%(38/60), Dnmt1基因mRNA阳性表达率为53.3%(32/60).结论: 在胃癌组织中, caveolin-1基因可能在Dnmt1基因的作用下发生甲基化, 丧失其活性, 进而导致胃癌的发生、发展.
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全血RUNX3启动子甲基化对胃癌早期诊断的意义
目的: 探讨全血RUNX3启动子甲基化对胃癌早期诊断的意义.方法: 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法, 检测80例胃癌患者的癌组织及其对应的癌旁组织及全血中RUNX3启动子甲基化情况.结果: 胃癌组织标本中RUNX3基因启动子甲基化率为45%, 癌旁组织中甲基化率为0%,全血中甲基化率为40%. 胃癌组织、全血中RUNX3基因启动子甲基化, 差异无统计学意义( P>0.05). 全血标本中RUNX3启动子甲基化表达情况与分化程度、是否有淋巴结转移密切相关, 与年龄、性别、肿瘤部位浸润深度无关.结论: 全血RUNX3启动子区甲基化对胃癌早期诊断有重要指导意义, 与胃癌的发生、发展密切相关.
关键词： 全血 胃癌 RUNX3 DNA甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应 -
人胃癌Runx3基因CpG岛甲基化的关键位点和演进
目的:研究人胃癌Runx3基因CpG岛甲基化的关键位点和演进.方法:应用MSP法和Western blot法分别检测26例人胃癌和相应的癌旁正常组织标本Runx3基因CpG岛从5'区向转录起始点方向连续6个位点的甲基化状态和Runx3蛋白的表达.结果:根据MSP的结果计算出上述连续6个位点的甲基化阳性率,结果随着向转录起始点方向的演进,各位点甲基化的阳性率逐渐降低,胃癌组和癌旁组从第3位点开始出现差异,至第5和第6位点差异显著(P＜0.05);按照胃癌分化程度分组,低分化组与高分化组在3-6位点差异显著(P＜0.05).胃癌组与癌旁组Runx3蛋白表达水平(0.499±0.106 vs 0.721±0.080)以及低分化组与高分化组(0.437±0.053 vs 0.617±0.073)Runx3蛋白表达水平均存在显著差异(P＜0.01).结论:人胃癌Runx3基因CpG岛的甲基化从5'区向转录起始点方向演进,甲基化的演进与肿瘤的分化程度有关;转录起始点部位可能为Runx3基因甲基化的关键位点.
关键词： RUNX3 胃癌 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应 免疫印迹法 -
儿童神经母细胞瘤ZO-1基因甲基化状态临床意义分析
目的:探讨紧密连接蛋白(zonula occludens protein-1,ZO-1)基因启动子区甲基化状态在儿童神经母细胞瘤检测中的临床意义.方法:将2002-01-15-2012-12-15河北医科大学第四医院儿科35例确诊为神经母细胞瘤(Ⅳ期)患儿的骨髓标本作为研究组,20例非血液肿瘤患凡骨髓作为对照组.采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specificPCR,MS-PCR)方法动态检测研究组与对照组骨髓中ZO-1基因启动子区甲基化状态.逆转录聚合酶链反应(reversetranscription PCR,RT-PCR)法检测两组ZO 1基因mRNA的表达情况,同时用ZO-1基因经MS-PCR扩增后的甲基化条带进行凝胶成像系统荧光强度半定量分析后的荧光强度(integrated option density,IOD)积分值,观察研究组化疗过程中IOD的动态变化.结果:M&PCR检测结果显示,研究组治疗前32例出现ZO-1基因甲基化条带,阳性率为91.4％(32/35),对照组20例,均呈非甲基化状态,)x2=15.11,P＜0.01;动态观察研究组31例ZO-1基因甲基化阳性率,治疗前为90.3％(28/31),化疗早期为80.6％(25/31),化疗后期为71.0％(22/31).临床完全缓解3例,仍有2例可检出.治疗前与化疗早期、后期比较差异均无统计学意义,x2 =0.4,P=0.819.RT PCR检测结果显示,研究组治疗前35例提取总RNA,3例见到ZO-1基因表达,阳性率为8.6％ (3/35),对照组20例均有表达,阳性率为100.0％ (20/20),x2=16.616,P＜0.001.动态观察研究组31例ZO-1基因表达阳性率,治疗前为9.7％(3/31),化疗早期为19.4％(6/31),化疗后期为29.0％(9/31).临床完全缓解3例,2例未见到ZO-1基因表达.治疗前与化疗早期、化疗后期比较差异均无统计学意义,x2 =2.53,P=0.500.性别(t=0.530,P=0.25)、年龄(r=0.080,P=0.25)与IOD值线性无关.外周血白细胞总数与IOD值线性无关,r=0.093,P=0.25.骨髓中瘤细胞数与IOD值线性相关,且呈正相关,r=0.669,P=0.036 5.结论:ZO-1基因在儿童神经母细胞瘤中呈特异性高甲基化状态,导致该基因表达沉默,动态观察甲基化消失不明显,这与肿瘤恶性程度、发生、发展及转归密切相关,可能是预后不良因素之一.
关键词： 儿童 zo-1基因 甲基化特异性聚合酶链反应 甲基化 神经母细胞瘤 -
膀胱癌HPSE基因启动子区低甲基化与临床病理特征相关性的研究
目的:探讨乙酰肝素酶(HPSE)基因启动子区甲基化与膀胱癌临床病理特征的相关性.方法:运用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测27例膀胱癌标本及15例正常膀胱组织中HPSE基因启动子甲基化状态,并分析HPSE基因甲基化状态与不同临床病理特征的关系.结果:59.26％(16/27)膀胱癌组织HPSE基因启动子区发生低甲基化改变,另外2例甚至为完全去甲基化改变 ;而仅有3例(20.o0％)正常膀胱组织HPSE基因启动子区发生低甲基化,x2=5.999,P=0.014.在17例伴淋巴结转移的患者中,发生HPSE基因低甲基化改变15例(88.23％),而在10例无淋巴结转移的患者中,发生HPSE基因低甲基化改变1例(10.00％).HPSE低甲基化阳性率随淋巴转移而增高,x2=12.887,P=0.004.不同性别、年龄、瘤体大小、病理分级和临床分期与HPSE基因低甲基化无明显相关性,P＞0.05.结论:HPSE基因启动子区低甲基化为频发事件,提示与膀胱癌患者的不良预后相关,可作为膀胱癌判断预后的生物学标志.
关键词： 膀胱肿瘤 基因 HPSE 低甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应 -
胃癌组织runt相关转录因子3基因表达与其甲基化状态的关系
目的 探讨胃癌组织中DNA甲基化调控机制对runt 相关转录因子3(Runx3)基因表达的影响.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测70例胃癌组织及其配对的正常胃黏膜组织中Runx3 mRNA表达,Westen blot法检测Runx3蛋白表达,甲基化特异性PCR(MSP)法检测Runx3基因启动子的甲基化状态;应用RT-PCR法检测 DNA甲基转移酶1(Dnmt1)mRNA表达,分析Runx3基因甲基化与Dnmt1 mRNA表达之间的相关性. 结果胃癌组织中Runx3 mRNA表达(0.5740±0.3580)明显低于其配对的正常胃黏膜组织(1.7250±0.4080, P<0.05),胃癌组织Runx3蛋白表达亦明显低于其配对的正常胃黏膜组织(P<0.05).在Runx3 mRNA表达下调的56例胃癌组织中,有28例(50.0%)呈启动子高甲基化状态.胃癌组织中,Runx3甲基化阳性者的Dnmt1 mRNA表达量明显高于Runx3甲基化阴性者(P<0.05),Runx3基因启动子甲基化与Dnmt1转录表达呈正相关(r＝0.64,P<0.05).结论 Runx3基因启动子高甲基化是其基因表达下调的原因之一,可能参与胃癌的发生发展;Dnmt1高表达可能影响Runx3启动子区域甲基化改变.
关键词： 胃肿瘤 DNA甲基化 RUNX3 DNMT1 甲基化特异性聚合酶链反应 -
胆管癌p53-bax线粒体凋亡通路的甲基化研究
目的 探讨胆管癌p53-bax线粒体凋亡通路中多个基因的甲基化状态及其在胆管癌发生过程中的意义.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP),对胆管癌组织和癌旁组织中的p14ARF、DAPK和TMS1/ASC基因启动子的甲基化状态进行检测,并对胆管癌组织中p53基因外显子5～8进行DNA序列分析.结果 36例胆管癌组织标本中,有24例(66.7%)至少存在1个抑癌基因的甲基化,其中p14ARF、DAPK和TMS1/ASC基因甲基化的比率分别为25.0%、30.6%和36.1%;癌旁组织中,有5例(13.9%)存在抑癌基因的甲基化,其中TMS1/ASC 3例(8.3%),DAPK 2例(5.6%).36例胆管癌组织标本中,有22例(61.1%)存在p53基因的突变.p53突变伴1个以上抑癌基因甲基化者共14例,占38.9%,其发生率与胆管癌的病理类型、分化程度和浸润深度有关(P<0.05).结论 p53-bax线粒体凋亡通路中,DNA甲基化是胆管癌中常见的分子事件.癌旁组织中,DAPK和TMS1/ASC基因的甲基化率虽然较低,但可能有早期诊断意义.p53突变伴抑癌基因的甲基化与胆管癌的病理生物学行为有关,并趋向于较高的恶性程度.
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结肠癌患者CDH13基因启动子甲基化状态
目的 分析结肠癌患者CDH13基因启动子甲基化情况.方法 留取32例结肠癌患者的手术标本(观察组)及12例非结肠癌患者正常结肠组织(对照组),应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法分析CDH13基因启动子甲基化情况.结果 观察组CDH13基因启动子甲基化总发生率为59.4％(19/32),显著高于对照组的8.3％(1/12)(P=0.002).结论 结肠癌中存在着较高比例的CDH13基因启动子甲基化,提示CDH13在结肠癌的发生中起着重要作用.
关键词： 结肠肿瘤 CDH13 甲基化特异性聚合酶链反应 -
肺癌患者CDH13基因启动子甲基化状态研究
目的 应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测非小细胞肺癌(NSCLC) CDH13基因启动子甲基化情况.方法 留取44例非小细胞肺癌患者手术标本及12例非肺癌患者正常肺组织,MSP分析CDH 13基因启动子甲基化情况.结果 44例非小细胞肺癌中CDH 13基因启动子甲基化阳性率为54.5%(24/44),12例正常肺组织中未检测到此基因的甲基化(0/12).CDH13基因甲基化与患者性别及吸烟与否无关;肿瘤分期越晚甲基化的发生率越高.结论 原发性非小细胞肺癌中存在着较高比例的CDH13启动子甲基化,提示CDH13在非小细胞肺癌的发生中起着重要作用.
关键词： 肺癌 CDH13 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应 -
GSTP1和RASSF1A在前列腺癌组织中的甲基化检测及其表达研究
目的：研究前列腺癌和前列腺增生组织中GSTP1和RASSF1A基因的甲基化差异及其蛋白表达情况，探讨GSTP1和RASSF1A基因甲基化作为前列腺癌早期诊断的价值，并揭示该基因甲基化与前列腺癌的发生发展的关系。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法检测GSTP1和RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化状态，并运用免疫组化SP染色法检测前列腺癌组织中GSTP1和RASSF1A基因的蛋白表达情况。结果：前列腺癌组织中GSTP1和RASSF1A基因甲基化检出率均明显高于前列腺增生组织，差异均有统计学意义（GSTP1：76.00%vs3.33%，P<0.001；RASSF1A：68.00%vs16.67%，P<0.001）。在前列腺癌中，GSTP1和RASSF1A蛋白阳性表达均明显低于前列腺增生组织，差异均有统计学意义（GSTP1：20.00%vs76.67%， P<0.001；RASSF1A：38.00%vs90.00%，P<0.001）。结论：GSTP1和RASSF1A基因异常甲基化可导致靶基因的蛋白表达降低，促进前列腺癌的发生发展。因此，GSTP1和RASSF1A基因在前列腺癌的发生、发展中起到重要作用，检测GSTP1和RASSF1A基因的甲基化有望成为前列腺癌早期诊断的分子标志物。
关键词： 前列腺癌 GSTP1 RASSF1A 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应 -
乳腺癌组织中C-erbB2基因启动子区CpG岛甲基化分析
目的 了解乳腺癌组织中致癌基因C-erbB2启动子区CpG岛的甲基化状态.方法 收集经病理确诊的39例乳腺癌患者甲醛固定的癌组织及相应的癌旁组织各39份;采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)检测C-erbB2基因启动子区CpG岛的甲基化状态.结果 乳腺癌组织中C-erbB2基因启动子区CpG岛的甲基化率(51.3%)低于癌旁组织中存在的甲基化率(74.4%),二者之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 所检测标本显示乳腺癌组织与癌旁组织间C-erbB2基因启动子区CpG岛甲基化率差异有统计学意义,提示C-erbB2的低甲基化可能是C-erbB2蛋白高表达和乳腺癌发生的原因之一.
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MS-MLPA方法在Prader-Willi综合征及Angelman综合征基因诊断中的应用
目的 检测甲基化特异性的多莆连接依赖的探针扩增(MS-MLPA)方法的敏感性和可靠性,以寻求一种简单、重复性好、精确度高的用于Prader-Willi综合征(PWS)和Angeiman综合征(As)的基因诊断方法.方法 DNA提取试剂盒提取基因组DNA,然后,用DNA纯化试剂盒进行纯化.用MS-MLPA试剂盒Me028对临床诊断的2例PWS和4例AS患儿进行基因检测分析.扩增的PCR产物用测序仪ABI 310进行基因型分析,终所得数据用GeneMarker软件进行分析.MS-MLPA的检测结果用甲基化特异性聚合酶链反应进行验证.结果 4例AS中3例源于母源染色体15q11～q13缺失,1例源于父源染色体15q11～q13单亲二倍体或印记中心缺陷;2例PWS中1例源于父源染色体15q11-q13缺失,1例尚不能明确原因.结论 MS-MLPA是一种简单、高效、准确、可靠的基因检测方法.
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人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区甲基化状态的研究
目的:探讨6种人食管鳞癌细胞株KYSE150,KYSE510,TE13,EC9706,CaEs17和EC109中RIZ1基因启动子区的甲基化状态；观察特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR对存在甲基化的细胞株RIZ1基因的转录调控作用及其对该细胞生长增殖的影响.方法:甲基化特异PCR(MSP)法检测6种人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区的甲基化状态；实时定量PCR法检测5-Aza-CdR处理前后RIZ1基因启动子区CpG岛高度甲基化的人食管鳞癌细胞株TE13中RIZ1 mRNA表达量的变化；MTT 法检测5-Aza-CdR对TE13细胞生长增殖的影响.结果:(1)6种人食管鳞癌细胞株中TE13,CaEs17,EC109三株细胞RIZ1基因启动子区存在甲基化；(2)5-Aza-CdR处理细胞株TE13后,RIZ1 mRNA表达量上调；(3)5-Aza-CdR能抑制TE13的生长增殖,并随时间的延长和浓度的增加抑制作用变明显.结论:启动子区CpG岛高度甲基化是人食管鳞癌细胞株TE13 RIZ1基因表达沉默的重要原因；5-Aza-CdR能使TE13 RIZ1 mRNA表达上调；并能抑制TE13细胞的生长增殖,并呈时间和浓度依赖性.
