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LRP15基因启动子区甲基化与其表达的关系
为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(TSA)诱导CpG岛去甲基化及组蛋白乙酰化,观察启动子区CpG岛甲基化与基因表达的关系.结果显示:白血病细胞系K562中LRP15基因启动子区呈高甲基化状态,并抑制了该基因的表达.单独应用或联合TSA应用CdR均可去除该基因启动子区的高甲基化状态,并诱导该基因的表达.这表明LRP15基因的表达受到启动子区甲基化的调控;该基因在K562细胞系中不表达与其启动子区高甲基化及组蛋白去乙酰化密切相关.结论:甲基转移酶抑制剂与去乙酰化酶抑制剂在白血病治疗中可能具有一定的价值.
关键词： LRp15基因 启动子 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应 -
急性白血病LRP15基因启动子区甲基化及其表达分析
为了探讨LRP15基因在急性白血病(AL)患者中的表达情况及其与启动子区CpG岛甲基化的关系,采用甲基化特异PCR(MSP)方法检测AL患者LRP15基因启动子区甲基化状态,并用RT-PCR方法检测该基因在这些患者中的表达情况.结果发现,LRP15基因在缓解与非缓解状态白血病患者中的表达分别为47.6%和16.7%,其启动子区甲基化比例分别为38.1%和72.2%.LRP15基因的表达与其启动子区甲基化之间无相关(P=0.0087).结论:AL患者LRP15基因启动子区的甲基化不完全是导致LRP15基因表达沉默的原因.
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LRP15基因的表达谱分析及其在白血病细胞中的表达
为检测LRP15基因在肿瘤细胞以及处于不同发育阶段造血细胞的表达状况,探讨其在肿瘤发生、发展以及在白血病分型预后中可能具有的作用,利用NCBI提供的SAGE文库及NCI提供的正常组织及肿瘤细胞基因表达数据库,分析比较了LRP15基因在多种肿瘤组织、细胞系和正常组织中的表达谱;采用RT-PCR方法检测了该基因在正常血细胞及原代白血病细胞中的表达状况.结果显示,LRP15在人类多种正常组织及肿瘤细胞中有表达;在幼稚细胞中表达阳性率高于成熟细胞(P＜0.01),在急性髓细胞白血病中M1、M2和M3表达的阳性率高于其它亚型(P＜0.01);难治组LRP15表达的阳性率有高于初治组的趋势.结论,LRP15基因与急性白血病及其它多种肿瘤的发生、发展密切相关,对急性白血病的临床分型具有重要的意义,可能对判断急性白血病的预后具有一定价值.
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新基因LRP15参与紫外线诱导的DNA损伤的修复作用
目的探讨LRP15基因在K562细胞中对紫外线诱导的DNA损伤的修复作用,以进一步研究该基因的功能.方法利用真核表达质粒pcDNA3.1构建LRP15基因开放阅读框架(ORF)序列的正义及反义重组质粒;两种质粒经阳性脂质体介导法分别转染K562细胞,G418筛选阳性克隆;采用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术观察两组细胞对紫外线诱导的DNA损伤的修复作用的差异.结果PCR鉴定证实,正义及反义重组质粒中LRP15基因ORF序列均按预定方向正确插入;SCGE实验表明,经紫外线照射后两组细胞的DNA基础损伤无明显差异(P=0.156).但经45及90 min修复后实验组细胞的DNA迁移长度明显小于对照细胞(P＜0.001).结论成功构建LRP15基因的正义及反义真核表达质粒;LRP15基因对紫外线诱导的DNA损伤具有修复作用,可能是一个DNA修复基因.
