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白血病相关基因zo-1参与白血病发病过程及其机制的初步研究
本研究探讨新的白血病相关基因zo-1在白血病细胞中的作用及其初步机制.应用甲基化PCR方法验证THP-1等白血病细胞中基因zo-1甲基化与白血病的关系,用甲基化PCR及RT-PCR方法验证THP-1等白血病细胞系中基因zo-1甲基化与基因表达的关系.选择基因zo-1高表达的THP-1细胞,用脂质体Oligofectamine将针对基因zo-1的小干扰RNA转染THP-1细胞,RT-PCR方法验证抑制效率,Annexin V和PI观察细胞凋亡率,PI检测细胞周期,CCK-8检测细胞增殖.结果表明:急性白血病人中基因zo-1呈高甲基化状态,健康人群中基因zo-1不发生甲基化.基因zo-1未甲基化的THP-1细胞系高表达基因zo-1;基因zo-1高甲基化的Molt4及HL-60细胞系中不表达基因zo-1.脂质体Oligofectamine转染针对zo-1的小干扰RNA成功地抑制了THP-1细胞基因zo-1的表达,而不影响THP-1细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡.结论:基因zo-1为白血病相关基因,急性白血病中基因zo-1高甲基化,基因zo-1的甲基化状态调控基因zo-1表达.THP-1细胞中基因zo-1表达缺失不影响细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡.
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骨髓增生异常综合征患者ZO-1基因甲基化状态检测的临床意义
本研究探讨紧密连接蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断中基因标志作用的临床意义.采用甲基化特异性-PCR(MS-PCR)方法分析30例健康人骨髓标本及85例MDS患者骨髓标本的ZO-1基因启动子区甲基化状况.结果显示:ZO-1基因在30例健康人标本中均呈完全非甲基化状态;MDS患者骨髓中ZO-1基因甲基化阳性率(56.5%)明显高于健康人,二者差异有统计学意义(P＜0.05).MDS各亚型病人骨髓ZO-1基因启动子区甲基化阳性率均高于健康人,其差异也具有统计学意义(P＜0.05).MDS亚型RA、RAS、RAEB、RCMD间ZO-1基因甲基化阳性率差别无统计学意义(p＞0.05).结论:与健康人相比,MDS病人骨髓中ZO-1基因启动子区呈高甲基化状态并具有特异性.MDS是一种常见的克隆增殖性血液系统疾病,在临床诊断中有时很难与其他疾病相鉴别,而ZO-1基因甲基化模式的改变与MDS的发生密切相关,因此ZO-1基因作为有价值的诊断标志具有重要的临床意义,它可能是一个潜在的血液系统恶性疾病的相关基因.
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ZO-1基因甲基化在MDS进展中的意义
目的:探讨ZO-1基因甲基化在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)向急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)转化中的临床意义,为MDS患者的预后评估进一步提供理论依据.方法:采用甲基化特异性PCR (methylation specific PCR,MS-PCR)方法检测ZO-1基因在正常对照者骨髓标本(normal control,NC)、MDS、AML患者骨髓标本中的甲基化状态.运用亚硫酸氢盐侧序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)方法检测1例MDS系列标本ZO-1基因在其MDS-RA、MDS-RAEB、AML阶段的甲基化状态.结果:ZO-1基因在NC、MDS、AML患者标本中的甲基化阳性率存在明显差异(P=0.000),在NC组未发现甲基化阳性,在AML组阳性率高(65.0％).MDS/AML患者ZO-1基因甲基化阳性组髓系原始细胞比例更高(P=0.000).1例MDS患者系列标本显示,随着疾病进展,在MDS-RA、MDS-RAEB、AML阶段中,甲基化位点阳性频率存在明显差异(P=0.000),在AML阶段阳性频率高(64.65％).结论:ZO-1基因启动子区高甲基化发生于MDS/AML患者中,随着恶性克隆增生,ZO-1基因甲基化阳性率及甲基化位点阳性频率越来越高,在一定程度上预示着MDS疾病进展,进一步提示ZO-1基因甲基化水平可成为监测MDS患者急性白血病转化的新指标.
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急性白血病ZO-1基因启动子区甲基化状态分析及其临床意义
目的 探讨紧密连接蛋白-1(Zonula occludens-1,ZO-1)基因启动子区甲基化状态在人急性白血病(AL)发生、发展中的作用及作为通用性基因标志物的临床意义.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测白血病细胞系HL60、Molt4、NK92和40例非恶性血液病以及81例AL骨髓ZO-1基因启动子区的甲基化状态.结果 ZO-1基因启动子区在白血病细胞系中呈完全甲基化状态;而在40例非恶性血液病标本中均为非甲基化;81例AL标本中甲基化阳性率为60.49%(49/81),其中难治复发组为92.86%(13/14),高于初诊未治疗组65.85%(27/41)及完全缓解组34.62%(9/26);急性髓细胞白血病组61.54%(32/52)与急性淋巴细胞白血病组58.62%(17/29)比较差异无统计学意义.结论 首次证明ZO-1基因启动子区高甲基化状态在人AL中具有较高的特异性,与疾病发生、发展密切相关,可作为一个新的白血病通用分子标志.
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儿童神经母细胞瘤ZO-1基因甲基化状态临床意义分析
目的:探讨紧密连接蛋白(zonula occludens protein-1,ZO-1)基因启动子区甲基化状态在儿童神经母细胞瘤检测中的临床意义.方法:将2002-01-15-2012-12-15河北医科大学第四医院儿科35例确诊为神经母细胞瘤(Ⅳ期)患儿的骨髓标本作为研究组,20例非血液肿瘤患凡骨髓作为对照组.采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specificPCR,MS-PCR)方法动态检测研究组与对照组骨髓中ZO-1基因启动子区甲基化状态.逆转录聚合酶链反应(reversetranscription PCR,RT-PCR)法检测两组ZO 1基因mRNA的表达情况,同时用ZO-1基因经MS-PCR扩增后的甲基化条带进行凝胶成像系统荧光强度半定量分析后的荧光强度(integrated option density,IOD)积分值,观察研究组化疗过程中IOD的动态变化.结果:M&PCR检测结果显示,研究组治疗前32例出现ZO-1基因甲基化条带,阳性率为91.4％(32/35),对照组20例,均呈非甲基化状态,)x2=15.11,P＜0.01;动态观察研究组31例ZO-1基因甲基化阳性率,治疗前为90.3％(28/31),化疗早期为80.6％(25/31),化疗后期为71.0％(22/31).临床完全缓解3例,仍有2例可检出.治疗前与化疗早期、后期比较差异均无统计学意义,x2 =0.4,P=0.819.RT PCR检测结果显示,研究组治疗前35例提取总RNA,3例见到ZO-1基因表达,阳性率为8.6％ (3/35),对照组20例均有表达,阳性率为100.0％ (20/20),x2=16.616,P＜0.001.动态观察研究组31例ZO-1基因表达阳性率,治疗前为9.7％(3/31),化疗早期为19.4％(6/31),化疗后期为29.0％(9/31).临床完全缓解3例,2例未见到ZO-1基因表达.治疗前与化疗早期、化疗后期比较差异均无统计学意义,x2 =2.53,P=0.500.性别(t=0.530,P=0.25)、年龄(r=0.080,P=0.25)与IOD值线性无关.外周血白细胞总数与IOD值线性无关,r=0.093,P=0.25.骨髓中瘤细胞数与IOD值线性相关,且呈正相关,r=0.669,P=0.036 5.结论:ZO-1基因在儿童神经母细胞瘤中呈特异性高甲基化状态,导致该基因表达沉默,动态观察甲基化消失不明显,这与肿瘤恶性程度、发生、发展及转归密切相关,可能是预后不良因素之一.
关键词： 儿童 zo-1基因 甲基化特异性聚合酶链反应 甲基化 神经母细胞瘤 -
慢性粒细胞白血病ZO-1基因启动子区甲基化状态分析及临床意义探讨
目的 通过对慢性期及急变期慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓标本中人紧密连接蛋白1(ZO-1)基因启动子区甲基化状态的分析,初步探讨其在CML病情发展变化中的临床意义.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测5例CML慢性期和10例CML急变期患者骨髓标本中ZO-1基因启动子区的甲基化状态.结果 在5例CML-CP患者中ZO-1基因启动子区呈非甲基化状态;在7例CML-BP患者中ZO-1基因启动子区呈高甲基化状态,甲基化阳性率为70%(7/10);1例CML患者其慢性期骨髓标本ZO-1基因启动子区呈非甲基化状态,而急变期则呈甲基化状态,经治疗恢复到慢性期时,则又表现为非甲基化状态.结论 ZO-1基因启动子区甲基化状态可能与CML病情发展变化密切相关,可能是一个提示CML急变的分子标志物.
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ZO-1基因甲基化状态在非霍奇金淋巴瘤骨髓检测中的临床意义
目的 探讨紧密连接蛋白-1(ZO-1)基因启动子区甲基化状态在非霍奇金淋巴瘤(NHL)检测中的临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR方法(MS-PCR)分析10例非血液系统肿瘤者骨髓及45例NHL患者骨髓标本的ZO-1基因启动子区甲基化状况.结果 ZO-1基因在10例良性血液病及正常人中呈完全非甲基化状态,在39例初治、复发、未完全缓解的淋巴瘤患者中甲基化阳性率53.85%(P<0.05).在39例初治或复发或未达到完全缓解的NHL患者中28例Ⅲ、Ⅳ期的NHL患者ZO-1基因甲基化阳性率64.29%,11例Ⅰ、Ⅱ期的NHL患者ZO-1基因甲基化阳性率27.27%(P<0.05).初治、复发患者28例中甲基化阳性16例(57.14%),经治疗达到部分缓解的11例患者中甲基化阳性5例(45.45%),临床缓解的6例患者均为完全非甲基化.结论 ZO-1基因启动子区高甲基化与疾病分期及缓解明显相关,它可以作为判断NHL进展和评价预后的辅助指标,并以此指导临床治疗.
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儿童非霍奇金淋巴瘤ZO-1基因甲基化状态分析及临床意义
目的：探讨紧密连接蛋白（ZO-1）基因启动子区甲基化状态在儿童非霍奇金淋巴瘤（NHL）Ⅳ期检测中的临床意义，以进一步寻找病因及早期诊断方法。方法将55例确诊为NHLⅣ期（T细胞型40例， B细胞型15例）患儿的骨髓标本作为病例组，20例非血液肿瘤患儿骨髓标本作为对照组。采用甲基化特异性PCR法（MS-PCR）检测病例组与对照组骨髓中ZO-1基因启动子区甲基化状态，并检测光密度积分值（IOD）。逆转录PCR法（RT-PCR）检测病例组与对照组ZO-1基因mRNA的表达情况。结果 MS-PCR检测结果显示病例组治疗前39例出现ZO-1基因甲基化条带，阳性率为70.9%（39/55），对照组20例均呈非甲基化状态；治疗过程中，行动态观察NHL患儿47例，其中T细胞型32例，B细胞型15例，治疗前ZO-1基因甲基化阳性率分别为72%和67%，两者差异无统计学意义（P>0.05）。T细胞型与B细胞型NHL患儿治疗前与化疗早期、中期比较差异均无统计学意义（P>0.05），而与化疗后期比较差异均有统计学意义（P<0.05）。RT-PCR检测结果显示病例组中ZO-1甲基化阳性病例均无mRNA表达，对照组患儿均表达ZO-1 mRNA。外周血白细胞总数与ZO-1基因IOD值无直线相关关系（r=0.093，P=0.575）；骨髓中恶性肿瘤细胞数与ZO-1基因IOD值呈正相关关系（r=0.669，P<0.001）。结论 ZO-1基因在儿童NHL中呈特异性高甲基化状态，其程度与骨髓中恶性肿瘤细胞数呈正相关。ZO-1基因可能成为新的分子标志，为临床早期诊断、疗效判断、预后评价、微小残留检测提供新的指标。
