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  • 应用蛋白质组学方法研究动脉粥样硬化闭塞症发病机制

    作者:赵振;赵海光;刘光;陆信武;黄英;蒋米尔

    目的 运用比较蛋白质组学的方法筛选人动脉粥样硬化闭塞症(ASO)差异蛋白质,探讨ASO发病机制.方法 选取8例ASO患者的股动脉作为ASO组,其中男性6例,女性2例,平均年龄68.6岁;对照组为无病变股动脉5例,其中男性3例,女性2例,平均年龄44.2岁.提取组织蛋白质,行双向凝胶电泳分离、质谱分析及数据库查询,获得差异蛋白信息.利用免疫组化和Western blot进一步验证其中的差异蛋白.结果 两组蛋白质表达存在明显差异,筛选出差异2倍以上的蛋白质点53个,27个上调,26个下调,质谱鉴定了25个差异点,代表13种蛋白质,主要涉及平滑肌细胞增殖迁移、氧化应激、炎症等;验证其中的热休克蛋白27(HSP27),结果与质谱鉴定一致.结论 蛋白质组学筛选ASO差异蛋白质是可行的,筛选出的差异蛋白质可能参与了ASO的发病机制.其中,差异蛋白HSP27可能有重要作用.

  • 趋化因子CCL2对血小板p38MAPK-HSP27通路的影响

    作者:曹禹;张效林;刘丹;田孝祥;李毅;闫承慧;韩雅玲

    目的 探讨CC趋化因子配体2(CCL2)在残余血小板高反应中的作用及其调控血小板的可能机制.方法 纳入ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者40例,采用VerifyNow法检测P2Y12反应单元(PRU),根据检测结果将40例患者分为残余血小板高反应组(高反应组,n=24)和残余血小板正常反应组(正常反应组,n=16).ELISA检测两组患者血浆中CCL2的表达,Western blotting检测血小板中CCL2和CCR2的表达,ARY003B蛋白芯片筛选经外源性CCL2刺激后血小板中磷酸化水平发生变化的激酶.Western blotting验证经CCL2刺激,或经CCR2拮抗剂(RS 102895)、p38MAPK信号通路抑制剂(SB 203580)预处理后血小板中p38MAPK和HSP27的磷酸化变化.结果 高反应组血浆中CCL2浓度、血小板中CCL2和CCR2表达均明显高于正常反应组.经外源性CCL2刺激后,芯片筛选发现p38α、HSP27的磷酸化水平增高.在CCL2刺激前,应用RS 102895或SB 203580预处理血小板,Western blotting检测显示p38MAPK和HSP27的磷酸化水平下降.结论 CCL2以自分泌/旁分泌的方式参与残余血小板高反应,CCL2可能通过p38MAPK-HSP27通路调控血小板.

  • 热休克蛋白27介导多发性骨髓瘤U266细胞对硼替佐米的耐药

    作者:尚晋;陈志忠;王志红;魏天南;吴文冰;陈为民

    目的:研究多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞中热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)表达水平,并探讨其与硼替佐米(bortezomib,BTZ)耐药的相关性.方法:分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测22例MM患者(12例为初治患者,10例为含硼替佐米方案治疗后复发患者)骨髓瘤细胞(CD38 +/CD138+浆细胞)中HSP27 mRNA和蛋白表达水平.建立对硼替佐米耐药的U266/BTZ细胞株,CCK-8法检测不同浓度的BTZ、多柔比星和依托泊苷对亲本U266细胞和耐药U266/BTZ细胞增殖活力的影响,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测U266和U266/BTZ细胞中HSP27 mRNA和蛋白的表达水平.采用siRNA干扰技术沉默U266/BTZ细胞中HSP27基因的表达水平,FCM法检测沉默HSP27基因表达对BTZ诱导U266/BTZ细胞凋亡的影响.采用BTZ单药或联合p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activate protein kinase,MAPK)信号通路抑制剂SB203580处理U266细胞,蛋白质印迹法检测细胞中HSP27、磷酸化-HSP27 (phospho-HSP27,p-HSP27)、p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白的表达水平.后,构建重组慢病毒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro/HSP27并将其感染U266细胞使HSP27基因过表达,采用荧光底物法检测不同浓度的BTZ对U266细胞中20S蛋白酶体活性的影响.结果:复发MM患者骨髓瘤细胞中HSP27 mRNA和蛋白的表达水平明显高于初治MM患者(P值均<0.01).成功构建对BTZ耐药的骨髓瘤细胞株,与亲本U266细胞相比,BTZ、多柔比星和依托泊苷对耐药U266/BTZ细胞的半数抑制浓度(half-maximal inhibitory concentration,IC50)均明显提高(P值均<0.01),U266/BTZ细胞中HSP27 mRNA和蛋白表达水平均明显上调(P值均< 0.01).沉默HSP27基因表达可显著提高BTZ诱导的U266/BTZ细胞的凋亡率.BTZ单药处理可上调U266细胞中HSP27、p-HSP27和p-p38 MAPK蛋白的表达水平;与BTZ单药组相比,SB203580联合BTZ组U266细胞中HSP27、p-HSP27和p-p38 MAPK蛋白的表达水平均明显下调(P值均<0.01).HSP27基因过表达可显著减弱BTZ对U266细胞中20S蛋白酶体活性的抑制作用(P值均<0.01).结论:HSP27表达与MM细胞对BTZ耐药密切相关,这可能与BTZ暴露活化p38 MAPK信号通路上调HSP27表达,从而反馈性减弱BTZ对蛋白酶体活性的抑制有关.

  • 天疱疮发病机制的研究进展

    作者:潘乔林;张怡;高方铭;叶兴东

    天疱疮是自身免疫引起表皮棘层细胞松解导致的慢性复发性表皮内大疱性皮肤病,典型表现为红斑基础上的疱壁松弛性水疱、糜烂、尼氏征阳性.依据天疱疮的临床表现,分为寻常型、增殖型、落叶型和红斑型天疱疮.天疱疮主要的发病机制是患者存在针对角质形成细胞桥粒芯(糖)蛋白的自身抗体,但棘层松解的详细机制尚不清.近年来,随着对蛋白组学、免疫学和分子生物学技术的发展以及天疱疮发病机制研究的不断深入,发现天疱疮的发病机制中除传统的桥粒芯(糖)蛋白自身抗体外,非桥粒芯(糖)蛋白抗体因素也参与了棘层松解的形成,为天疱疮提供了新的潜在治疗靶位.

  • 胆总管结扎预适应减轻小鼠肾脏缺血再灌注损伤

    作者:王盼梁;董洋;张明;张建军

    目的 探讨胆总管结扎预适应减轻小鼠肾脏缺血再灌注损伤的可能机制.方法 C57BL/6小鼠分为3组进行实验.胆总管结扎预适应组(CBDL组)结扎胆总管(d0),2d后(d2)再通,再过2d后(d4)行左肾缺血再灌注手术;假手术组仅结扎胆囊管(d0),d4再行左肾缺血再灌注手术;对照组不进行任何处理.监测血胆红素总量(TBil)的变化情况.肾脏缺脏再灌注后24 h(dS)检测各组小鼠血清肌酐(Cr).蛋白质印迹法检测CBDL组和假手术组肾脏热休克蛋白27 (HSP-27)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达情况.结果 CBDL组胆总管结扎2d后,TBil达到高,再通2d后,TBil基本降至正常水平.CBDL组Cr低于假手术组(P<0.05).CBDL组HSP-27和eNOS的表达量高于假手术组(P<0.05).结论 胆道结扎预适应能明显减轻小鼠肾脏缺血再灌注损伤,其机制可能与引起肾脏局部HSP-27和eNOS高表达有关.

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