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云南省瑞丽市151例外籍HIV感染者和艾滋病患者高危行为状况分析
瑞丽市地处云南省西南部中缅边境,国境线长169.8 km。2011年1月至2012年6月,从瑞丽边检站出入境外籍人员1435万人次[1]。瑞丽市自1990年发现首例缅甸籍HIV感染者后,发现的缅甸籍HIV感染者和艾滋病患者数呈逐年上升趋势[2-3]。毒品使用[4-6],跨境婚姻[7],吸毒人员HIV、丙型肝炎病毒及梅毒螺旋体感染[8]等多种因素交织影响。为了解入境外籍HIV感染者和艾滋病患者在中国境内的高危行为,云南省CDC 于2013年在瑞丽市开展了调查,现将结果报告如下。
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中国地区丙型肝炎病毒的NS5A基因序列及干扰素敏感决定区特征分析
丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)NS5A基因编码的ISDR、PKRBD和V3等区域氨基酸序列的变异与HCV对干扰素-α( interferon-α,IFN-α)治疗的不同反应性有关[1-6],了解NS5A基因的序列特征及干扰素敏感决定区(IFN Sensitivity Determining Region,ISDR)的氨基酸序列有助于进一步研究中国地区HCV的致病性及HCV相关肝炎的药物治疗与预后.笔者选取了美国国立生物技术信息中心数据库(NCBI)中发表的中国地区HCV多聚蛋白的核苷酸和氨基酸序列及NS5A蛋白的部分氨基酸片段,对NS5A基因序列及ISDR氨基酸序列进行多序列比对、聚类分析、相似性分析及氨基酸变异位点分析,分析中国地区HCV的NS5A基因序列及ISDR特征,现将结果报道如下.
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针刺损伤和职业性体液接触的预防与治疗进展
职业性体液接触指在医疗过程中无意间接触到患者的体液,特别是血液和(或)含有血液的体液[1].该种接触(或称暴露)存在接触者感染血源性病原体的危险.目前,至少有20种病原体可以通过该种途径传染给接触者,其中以乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)及人类免疫缺陷病毒(HIV)为常见[2].医务工作者及所有能够接触到患者体液的人均是高危人群.现将这方面的进展综述如下,希望能对广大医务工作者有所帮助.
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积极防治艾滋病合并乙型肝炎和丙型肝炎病毒感染
目前,我国慢性乙型肝炎病毒 (HBV) 携带者约1.2亿,丙型肝炎病毒 (HCV) 感染者约3 800万[1],人类免疫缺陷病毒 (HIV) 感染者估计约为84万[2].由于HIV与HBV、HCV具有相同的传播途径,因此,在我国,HIV与HBV或HCV合并感染较为常见,HIV感染者的抗-HCV阳性率为57%[3],其中静脉注射毒品者的抗-HCV阳性率高达43%~100%[3-8].国外文献报道,HIV感染者中HBV和HCV感染率分别为6%~13%[9]和30%~35%[10].
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云南省德宏傣族景颇族自治州中国与缅甸籍吸毒人员的丙型肝炎病毒基因型分析
目的 分析云南省德宏傣族景颇族自治州(德宏州)中国和缅甸籍吸毒人员的丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布特征.方法 于2015年1-9月间,选取德宏州内各戒毒所和美沙酮门诊吸毒人员为研究对象,共7 545名,对其进行问卷调查并采集血浆样本.其中HCV抗体阳性的样本为752份,采用随机数字表法抽取血浆量为200μl以上的样本共139份(中国籍和缅甸籍样本分别75和64份)进行核酸提取和HCV核酸扩增、测序,采用MEGA 6.06软件建立系统进化树,并对不同的基因亚型进行分组后计算样本间的平均基因离散率.采用Fisher确切概率法比较不同特征研究对象HCV亚型分布情况,采用方差分析比较CE1和NS5B区不同亚型基因离散率差异.结果 64份缅甸籍样本扩增成功43份(67%),其中CE1和NS5B区分别成功扩增31和38份;75份中国籍样本扩增成功52份(69%),其中CE1和NS5B区分别成功扩增43和45份.成功扩增的样本中,中国籍和缅甸籍的吸毒人员HCV基因亚型均以3b和6n为主,中国籍中分别占27%(14份)和37%(19份),缅甸籍中分别占28%(12份)和33%(14份);其他亚型中(6u、3a、1a、1b型),中国籍样本分别占14%(7份)、19%(10份)、2%(1份)、2%(1份),缅甸籍样本分别占16%(7份)、5%(2份)、16%(7份)、2%(1份),1a亚型缅甸籍高于中国籍(P=0.015),3a亚型中国籍高于缅甸籍(P=0.031).CE1区1a、1b、3a、3b、6n和6u亚型的基因离散率分别为0.048±0.007、0.091±0.013、0.074±0.008、0.061±0.006、0.136±0.009、0.031±0.005 (F=516.26,P<0.001),NS5B区1a、1b、3a、3b、6n和6u亚型的基因离散率分别为0.032±0.006、0.065±0.012、0.058±0.008、0.041 ±0.005、0.059±0.008、0.045±0.006(F=45.11,P<0.001).结论 德宏州吸毒人员中HCV存在6种亚型,6n和3b为主要亚型,1a和3a亚型的分布存在国籍差异,1b和6n亚型在该人群中具有较长的流行时间.
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丙型肝炎病毒西安株2a型包膜蛋白E区部分cDNA的分析
丙型肝炎病毒(HCV)包膜蛋白区(E区)基因是HCV基因组中变异大的部位,不同分离株的核苷酸差异可达40%左右[1]。作者对陕西省HCV地方株的全部E1,部分E2/ NSI区进行了序列测定,并与已发表的多个株做同源性比较。 1.材料和方法:HCV血清取自西京医院丙型肝炎患者,血清经5′非编码区通用引物RT-PCR确认HCV RNA阳性,引物参照HC-J6设计[2]。序列分别为:R1(+)GTGGGTAA-GGTCATCGAT(695~712),R2(+)GCCGACCTCATGGGGTAC-(731~748),R3(-)ACCTAGTGCCAACTGCCATTGGT(1 586~1 603),R4(-)GTTGATGTGCCAACTGCC(1 592~1 609)。 用异硫氢酸胍-冷酚法一步提取HCV RNA,反转录成cDNA,用R1/R4,R2/R3进行套式PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳鉴定,产物纯化、回收,与PGEM-T载体连接,克隆并测序。 2.结果:将所分离毒株的核苷酸序列和推导的氨基酸序列分别与已报道的HC-J6,HC-J1,BEBE1,HC-J8,HCV-H,HCV-HB,HCV-T的相应序列进行比较。从表1可见,在核苷酸水平上分离株E区与HC-J6相应序列的同源性为78.2%,与其他几株的同源性相对要低一些,与中国河北株HCV-HB的同源性低;在氨基酸水平上分离株E区与HC-J6相应序列的同源性为75.7%,与其他株的同源性低,与中国河北株HCV-HB的同源性低。 3.讨论:HCV 核酸存在广泛的异质性,其中E区不断发生变异,可能是使病毒在体内持续存在的原因,其变异亦可能与疾病程度、对干扰与治疗的抵抗、引起慢性化及肝细胞癌等有一定相关,赵小宁等[3]已经用RT-PCR法从1例陕西地区丙型肝炎患者血清中扩增并克隆和测定了5′NCR,C区的基因序列,分析同源性为2a型,本次研究用同一份血清,测定了全部E1区,部分E2/NSI区共878 bp的核苷酸序列,将所得序列与已报道的几株HCV序列比较后发现,我们的分离株同HC-J6的同源性大,同属于2a亚型。我国已有完整克隆的河北株、北京株和台湾株,但都属于HCV-1b型,本次对2a型的实验克隆对全面了解HCV基因组的结构及其变异,对HCV的基础及临床研究都具有重要意义。
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丙型肝炎防治指南
丙型肝炎是一种主要经血液传播的疾病,丙型肝炎病毒(HCV)慢性感染可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化,部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌(HCC),对患者的健康和生命危害极大,已成为严重的社会和公共卫生问题.在卫生部和中华医学会有关领导的支持下,中华医学会肝病学分会和传染病与寄生虫病学分会组织国内有关专家,按照循证医学的原则,并参照国内外新研究成果,制订了我国丙型肝炎防治指南.
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126 丙型肝炎病毒对针体的附着性及棉球的消毒效果
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针灸治疗对丙型肝炎病毒量的影响:针刺手法与血中Th1、Th2细胞的关系
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原卟啉二钠体外对丙型肝炎病毒复制子的抑制作用
目的:探讨原卟啉二钠(PPN)体外对丙型肝炎病毒(HCV)的抑制作用.方法:用不同浓度PPN和利巴韦林处理HCV复制子细胞模型,MTT法检测药物的细胞毒性作用;荧光定量PCR检测HCV RNA.结果:PPN和利巴韦林浓度在1 mg·mL-1以下时,MTT法比色A值比较,实验组与对照组间差异均无显著性,无明显细胞毒性;PPN在1 mg·mL-1时对HCV RNA的抑制率为73.44%,差异有显著性(P<0.05),利巴韦林在1 mg·mL-1时对HCV RNA的抑制率为40.78%,差异无显著性,二者抑制HCV RNA的EC50分别为0.23 mg·mL-1和1.19 mg·mL-1.结论:PPN和利巴韦林浓度在1 mg·mL-1以下时对HCV Replicon细胞生长无毒性作用;PPN具有明显的体外抑制在HCV复制的作用,抑制作用强于利巴韦林.
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论丙型病毒性肝炎治当从伏气入手
丙型病毒性肝炎(Virus Hepatitis,C,简称HC)由丙型肝炎病毒(HCV)所引起,其主要感染途径为经血液传播,潜伏期长短不一,一般在2~6周,临床可表现为全身倦怠、恶心呕吐、黄疸、食欲不振等.
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丙肝合剂对不同基因型丙型肝炎病毒复制子基因表达的影响
目的 通过体外实验探讨丙肝合剂抑制不同基因型丙型肝炎病毒(HCV)复制子基因表达的机制.方法建立不同基因型HCV复制子细胞模型,按基因型不同分为HCV 1b组、HCV 2a组和J6/JFH1组,不同浓度丙肝合剂干预负载复制子的Huh7.5.1细胞48 h后,收集细胞裂解液,进行荧光素酶活性测定,MTT法检测细胞毒性.选择IFN-2α和DMSO分别作为阳性对照和阴性对照以排除实验误差.结果 3组荧光素酶活性呈剂量依赖性下降,3组比较差异有统计学意义(P<0.05).多重比较显示,HCV 2a组荧光素酶活性显著低于HCV 1b组和J6/JFH1组(P<0.05).MTT实验结果显示,丙肝合剂浓度达到0.2 g/mL时,细胞存活率超过99%.结论丙肝合剂能部分抑制不同基因型HCV结构基因的转录,对HCV 2a复制子抑制作用强,丙肝合剂达到有效抑制作用的浓度为0.1 g/mL.
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抗-HCV、HCVRNA 及肝功能联合检测在丙型肝炎病毒感染检测中的临床应用
丙型肝炎是比较严重的病毒性肝炎之一,WHO 估计全球有1.7 亿人感染丙型肝炎病毒.在我国健康人群中抗HCV 阳性率为0.7-3.1%,约3800 万人.急性丙型肝炎容易慢性化,慢性丙型肝炎不经积极有效治疗易发展为肝硬化和肝癌.因此,早期正确诊断显得龙为必要[1].目前丙型肝炎病毒(HCV)感染的检测包括血清学检测和核酸检测,前者包括HCV 抗体(抗-HCV)、核心抗原检测,后者包括定性/定量RNA 检测和基因型/ 亚型检测[2].目前,临床上习惯以检测抗-HCV 抗体来判断患者是否为丙肝患者,但抗-HCV 产生后可长期存在,对诊断和治疗效果的评价并无太在意义[3].丙型肝炎病毒所导致肝脏损伤情况主要靠肝功能各项检测指标.
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聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎疗效的预测
丙型肝炎呈世界性流行,有逐年增加趋势,目前全球感染率为3%,我国一般人群抗HCV阳性率为3.2%[1].丙型肝炎病毒感染后50%~85%可发展为慢性丙型肝炎,其中部分病例可发展为肝硬化和肝细胞癌.近年来,聚乙二醇干扰素(PEG IFN)联合利巴韦林已被用于慢性丙型肝炎的景点治疗,其病毒应答、生物化学和组织学的应答显著高于普通干扰裂[2],早期病毒应答率也高于普通干扰素[3].临床治疗过程中病毒学应答的早晚是预测疗效具价值的指标,也是决定疗程重要的参考因素[4-8].本研究对50例慢性丙型肝炎患者聚乙二醇干扰素α联合利巴韦林治疗4周后血清HCV RNA水平与48周疗效及治疗结束后24周进行观察.
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丙型肝炎病毒感染可诱发心血管疾病
在人群中,丙型肝炎病毒(HCV)感染,代谢性疾病和心血管疾病常同时患有,且在疾病谱中占很大比重。这究竟只是偶然的巧合,还是真正存在某种直接或间接的致病机制,使HCV感染患者更容易患心血管代谢疾病?为确立HCV感染和心血管代谢疾病间的关系,意大利巴勒莫大学胃肠病科的Petta等研究者总结近年HCV感染与心血管疾病的研究进展,于2013年12月2日的《Gut》杂志上在线发表综述。不仅对观察性研究中两者间关系进行归纳分析,而且更重要的是提出HCV导致心血管病变的可能病理生理机制,为更好地研究HCV感染与心血管疾病提供了极具价值的线索依据。 Petta等回顾历年多项研究,围绕HCV感染与心血管疾病,主要从三方面论述:①来源于病例对照研究的结果:HCV感染与颈动脉粥样硬化;HCV感染与冠状动脉粥样硬化;HCV感染与心肌功能障碍。②来源于前瞻性队列研究的结果。③联系HCV感染与心血管病变的可能机制。Petta等对各项研究进行了强度水平的判定,分为“无关”,“有关”,并对临床试验中发现HCV清除后心血管疾病发病率和(或)死亡率明显改善的研究给予“关联强,有因果关系提示”的评定,以更好揭示出HCV感染与心血管疾病相关联的强度。
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以丙型肝炎病毒体内感染裸鼠模型筛选20种常用清热解毒类中药
目的:用HCV体内感染裸鼠模型筛选20种常用清热解毒类中药,以寻找有效的抗HCV药物.方法:模型鼠用药3个月,用透射电子显微镜观察裸鼠脾内移植的人胎肝细胞中是否仍有HCV样颗粒,用定量RT-PCR技术检测用药前后血清HCVRNA含量.结果:(1)各中药组,用药3个月在裸鼠脾脏内移植的人胎肝细胞中均可找到HCV样颗粒.(2)仅龙胆草、黄芩、山豆根、栀子、苦参5味中药组,用药3个月后血清HCVRNA含量明显下降,其他中药组,用药3个月前后血清HCVRNA含量无明显下降.结论:该20种中药均无直接清除HCV的作用,但龙胆草、黄芩、山豆根、栀子及苦参5味中药可明显抑制HCVRNA的复制.
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中医药治疗慢性丙型肝炎的现状和展望
丙型肝炎是一种流行较为广泛的病毒性疾病,据统计,全球约有1.7亿人口感染了丙型肝炎病毒(1aepatitis C virus,HCV),占全世界人口的3%左右(世界卫生组织,1999年).
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丙型肝炎病毒高变区1模拟表位的交叉反应性分析
研究丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)高变区1(Hypervariable region 1,HVR1)抗原表位的交叉反应性,获取高反应性的抗原表位.设计并合成5种HVR1模拟表位基因,构建编码HVR1模拟表位的表达载体,表达并纯化表位蛋白.ELISA法检测表位蛋白与35份HCV抗体阳性血清的交叉反应性.包装HCV假病毒(HCV pseudotype particles,HCVpp),评价表位蛋白免疫BALB/c鼠血清在假病毒感染Huh7.5细胞中的作用.结果表明,表达纯化的5种表位蛋白(P1、P2、P5、P6、P8)均可与HCV抗体阳性血清反应,阳性反应率分别为54.3%(P1)、62.9%(P2)、80%(P5)、68.6%(P6)、54.3%(P8).表位蛋白P6、P8免疫BALB/c鼠血清对HCV假病毒感染Huh7.5细胞具明显的抑制作用.结果提示,选取的HVR1模拟表位在HCV感染免疫与疫苗研制中可能具有潜在的价值.
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表达HCV包膜蛋白的两种重组腺相关病毒疫苗的制备及免疫原性分析
重组腺相关病毒载体(rAAV)可在动物体内高水平地持久表达外源基因,本研究采用两种rAAV载体(rAAV1与rAAV2)构建了表达丙型肝炎病毒中周分离株包膜糖蛋白(E1E2)的载体疫苗并以之免疫小鼠,分别采用免疫荧光证实其表达与总抗体,用HCV假病毒系统检测其中和抗体水平,用ELISpot分析其细胞免疫应答,结果表明:rAAV1-E1E2重组载体疫苗单针免疫激发的体液应答明显高于rAAV2-E1E2,rAAV1-E1E2单针注射后3个月可在肌肉组织中检出E2蛋白表达及特异性T细胞应答.上述结果提示HCV重组腺相关病毒载体疫苗单针免疫可引起明显持久的体液与细胞免疫应答.
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三种丙型肝炎包膜感染性假病毒颗粒的制备及初步应用研究
本研究构建携带HCV代表株H77(1a)、中国HeBei株(1b)以及JFH-1株(2a)丙型肝炎病毒完整的E1-E2包膜糖蛋白基因的表达质粒,间接免疫荧光法及Western blot验证了其在细胞膜(293细胞)上的正确表达.三种包膜质粒分别与慢病毒包装质粒pHR'CMV△8.2及携带EGFP报告基因的自灭活(Self-Inactivating,SIN)转移质粒pCS-CG共转染293FT细胞,产生三种不同基因型的丙型肝炎包膜感染性假型(pseudotyped)病毒颗粒,免疫荧光与Western blot分析验证了E1/E2包膜糖蛋白在假病毒颗粒上的表达与掺人,利用p24 ELISA法及感染性实验对HCV假病毒进行滴定.从上清中获得的HCV假病毒可以在体外感染肝癌细胞系Huh7及Huh7-CD81(且后者上的感染效率约为前者上的2~3倍);利用针对HCV E2蛋白的具有广谱交叉中和活性的单克隆抗体AP33建立了基于上述假病毒颗粒的丙肝病毒体外中和抗体滴定方法,并应用于丙型肝炎患者体内的中和抗体水平的研究.本研究成功包装了包括中国流行株在内的3种不同基因型的HCV包膜感染性假病毒颗粒并建立了基于假病毒颗粒的HCV体外中和抗体检测方法,为研究HCV感染早期特性及特异抗病毒药物的体外筛选提供了有效模型,并可用于HCV感染者体内及HCV基因工程疫苗免疫后中和抗体水平的分析.